鄭 穎，王 寧，周 哲，李志博，任建軍

? 臨床研究 ?

性病門診378例女性宮頸分泌物的HPV基因型分析

鄭 穎，王 寧，周 哲，李志博，任建軍

目的 檢測和分析性病門診女性患者宮頸分泌物中人乳頭瘤病毒(HPV)的基因型別。方法 收集我院性病門診就診的女性患者378例，按患者有無高危接觸和宮頸口有無尖銳濕疣癥狀劃分為3組，即有接觸有癥狀組（161例）、有接觸無癥狀組（117例）和無接觸無癥狀組（100例）。取3組患者脫落細(xì)胞，采用反向分子雜交法進(jìn)行HPV基因分型檢測。結(jié)果 性病門診378例女性宮頸分泌物HPV陽性率為56.61%(214/378)，有接觸有癥狀組、有接觸無癥狀組和無接觸無癥狀組的陽性率分別為98.75%（159/161）、40.17%（47/117）和8.00%（8/100），3組分別檢出22種、14種和5種HPV基因型別，檢出的主要型別是HPV6、11、16、58、56、18、33、68。有接觸有癥狀組和有接觸無癥狀組單一感染和復(fù)合感染的感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），在多重復(fù)合感染中，以二重和三重感染為主，最多發(fā)現(xiàn)八重感染。有接觸有癥狀組低危型121例次（76.10%），高危型99例次（62.26%），有接觸無癥狀組低危型35人次（74.46%），高危型26例次（55.32%），兩組感染率較高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 HPV6、11、16、58、56、18、33、68是性病門診女性患者宮頸感染HPV的主要型別，健康體檢者中亦能查出，臨床應(yīng)加強(qiáng)對性病門診女性就診者宮頸HPV基因的檢測，及對HPV陽性患者進(jìn)行定期的跟蹤隨訪，尤其是高危型和復(fù)合感染患者。

性病門診；分泌物，宮頸；人乳頭瘤病毒；基因分型

鄭 穎

[J Pract Dermatol, 2017, 10(1):19-21]

人乳頭瘤病毒(human papilloma viruses, HPV)是一種高度異質(zhì)性、小DNA雙鏈病毒。根據(jù)基因組的同源性可將其分為多種型別，目前已有270多種HPV型別被鑒定，其中42種基因型與生殖道疾病有關(guān)[1]，30種型別在子宮頸癌中被發(fā)現(xiàn)[2]。依據(jù)不同型別HPV致癌危險性將其分為低危型和高危型兩大類，低危型可引起尖銳濕疣及低度子宮頸上皮內(nèi)瘤等；高危型可引起尖銳濕疣、外生殖器癌、宮頸癌及高度子宮頸上皮內(nèi)瘤，其與宮頸癌關(guān)系密切[3]。性病門診女性患者有的因發(fā)現(xiàn)疣狀增生物而檢查治療，也有因高危接觸后害怕傳染而要求檢查，這兩類患者性行為活躍程度較高或接觸危險因素較多，其宮頸感染HPV的機(jī)率較大，也有要求正常體檢的健康者，這類患者宮頸感染HPV的概率多大呢？為了解其HPV感染情況和感染特點，特對我院性病門診就診的378例女性患者利用反向分子雜交法檢測23種HPV亞型，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例 2013年9月—2016年5月本院性病門診首次就診的女性患者378例，年齡17～63歲，平均年齡（28.32±7.50）歲。根據(jù)患者有無高危接觸和宮頸口有無尖銳濕疣癥狀劃分3組，即有接觸有癥狀組（161例）、有接觸無癥狀組（117例）和無接觸無癥狀組（100例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：有流行病學(xué)接觸史，臨床上可見宮頸口有疣狀增生物的患者納入有接觸有癥狀組；有流行病學(xué)接觸史，但臨床無尖銳濕疣的癥狀，則納入有接觸無癥狀組；無流行病學(xué)接觸史和無尖銳濕疣的癥狀患者納入無接觸無癥狀組。排除標(biāo)準(zhǔn)：均排除梅毒、艾滋病、生殖道沙眼衣原體和淋病。

1.1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]患者有流行病學(xué)接觸史，臨床一般無自覺癥狀，皮損可表現(xiàn)為局部細(xì)小丘疹，針頭至綠豆大小，亦可為乳頭狀、雞冠狀或團(tuán)塊狀贅生物，可單發(fā)或多發(fā)，顏色多為粉紅至深紅色，有一定的脆性。實驗室檢查主要有核酸檢測。

1.1.3 試劑和儀器 HPV基因分型檢測試劑盒（深圳亞能生物技術(shù)有限公司），可檢測23種HPV基因亞型，包括18種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83)及5種低危型(HPV6、11、42、43、81)。TL988實時熒光定量PCR儀（西安天隆科技有限公司）和FYY-3型分子雜交儀（江蘇興化市分析儀器廠）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 用無菌棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦拭干凈，有接觸有癥狀組，更換棉拭子后擦拭增生物表面，其他兩組則將棉拭子緊貼子宮頸口，稍微用力轉(zhuǎn)動2周，將脫落細(xì)胞置細(xì)胞保存管中立即送檢，后置-20℃保存，1周內(nèi)檢測完畢。

1.2.2 試驗方法 嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，試驗過程做好質(zhì)量控制。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 利用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，卡方檢驗，P＜0.05時為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 性病門診378例患者宮頸分泌物HPV檢測結(jié)果

性病門診378例女性患者宮頸分泌物HPV檢測陽性率為56.61%(214/378)，其中有接觸有癥狀組陽性率98.75%（159/161），檢測出22種HPV基因型，主要有 HPV6（44.72%）、11（29.19%）、16（15.53%）、58（8.69%）、56（7.45%）、18（6.83%）、33（6.83%）、68（6.83%）。有接觸無癥狀組陽性率為40.17%（47/117），共檢測出14種HPV基因型，主要有 HPV 6（17.09%）、11（13.68%）、52（6.84%）、53（5.13%）、16（4.27%）、51（3.42%）、18（2.56%）。無接觸無癥狀組陽性率為8.00%（8/100），共檢測出5種HPV基因型，主要有 HPV 6（4.00%）、11（3.00%）、33（1.00%）、16（2.00%）、81（1.00%）。

2.2 性病門診378例患者宮頸分泌物HPV基因型特點

性病門診378例患者宮頸分泌物HPV基因型特點分析見表1。有接觸有癥狀組和有接觸無癥狀組單一感染和復(fù)合感染的感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），在復(fù)合感染中，均以二重和三重感染為主，最多發(fā)現(xiàn)八重感染。有接觸有癥狀組低危型121例次（76.10%），高危型99例次（62.26%）；有接觸無癥狀組低危型35例次（74.46%），高危型26例次（55.32%），兩組感染率較高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

預(yù)防和消除女性HPV感染，是宮頸癌防治重點，自2006年6月美國食品藥品管理局（FDA）正式批準(zhǔn)HPV疫苗上市后，世界各國紛紛采取應(yīng)用疫苗來預(yù)防宮頸癌，并逐漸成為共識[5]。目前全球已有100多個國家獲準(zhǔn)使用宮頸癌預(yù)防性疫苗，主要為二價和四價疫苗（HPV16、18型和6、11、16、18型）[6]。本組研究結(jié)果顯示，性病門診女性宮頸HPV感染情況復(fù)雜多樣，性病門診女性宮頸HPV總感染率56.61%(214／378)，高于文獻(xiàn)報道[7]。3組感染HPV基因型別不全相同，有接觸有癥狀組的主要型別為HPV6（44.72%）、11（29.19%）、16（15.53%）、58（8.69%）、56（7.45%）、18（6.83%）、33（6.83%）、68（6.83%），與文獻(xiàn)報道的基因類型大致相同[8,9]，與現(xiàn)有的疫苗市場比較不全相同，這有利于我國HPV疫苗研究和藥物研發(fā)。有資料表明，約有75.00%的性活躍人群在其一生中感染過HPV[10]，本組有接觸無癥狀組和無接觸無癥狀組亦存在一定HPV感染，且有一定比率的高危型HPV患者，說明此部分患者同樣應(yīng)受到臨床醫(yī)生的關(guān)注，應(yīng)擴(kuò)大HPV的檢測人群和加強(qiáng)疫苗預(yù)防工作，同時應(yīng)加強(qiáng)對性活躍女性感染HPV危害性的宣傳教育。

表1 性病門診378例患者宮頸分泌物HPV基因型檢測分析 [例（%）]

女性HPV感染常與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，現(xiàn)已明確高危型HPV感染是宮頸癌的發(fā)病原因之一[11]，與單純低危型HPV感染相比，高危型以及高危型合并低危型HPV混合感染患者病程較為頑固，更易復(fù)發(fā)[12]。同時是否合并感染亦是風(fēng)險因素，HPV單一型感染使宮頸癌的患病風(fēng)險增加19.9倍，而復(fù)合感染使該風(fēng)險增加到31.8倍[13]。復(fù)合感染型別HPV感染病毒載量高于單一型別HPV感染，癌變相關(guān)風(fēng)險大，致病力較強(qiáng)，病變發(fā)展較快，治療較頑固，復(fù)發(fā)率較高[14]。本研究有尖銳濕疣癥狀組含高危型的患者99例次，占61.49%，復(fù)合感染76例，占47.80%，其癌變風(fēng)險最大。臨床應(yīng)加強(qiáng)對就診者的HPV基因檢測，對HPV陽性患者進(jìn)行定期的跟蹤隨訪，尤其是高危型和復(fù)合感染患者。

檢測HPV各個基因型的感染率不僅是流行病學(xué)調(diào)查的需要，其對判斷尖銳濕疣患者預(yù)后、臨床診療以及疫苗的研發(fā)也有重要的意義[15]。目前HPV的檢測方法不斷出現(xiàn)，大多原理都是通過檢測HPV DNA的存在來確定機(jī)體是否受HPV感染，繼而對高危型別進(jìn)行干預(yù)治療，對女性患者宮頸癌變的治療有重要的臨床意義，已受到人們的高度關(guān)注。本組采用的是反向分子雜交技術(shù)，具有快速、靈敏度高、特異性好且1份標(biāo)本可同時檢測多個HPV基因型別的優(yōu)點。

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HPV genotype analysis of cervical secretions from 378 female patients of venereal outpatient

ZHENG Ying，WANG Ning，ZHOU Zhe，et al

Xi'an North Hospital Aff liated to Xi'an Medical University, Xi'an 710043, China

Objective To explore the human papilloma virus (HPV) genotypes of female cervical secretions in venereal outpatient. Methods Total 378 cases of female patients from STD clinics were recruited. According to the patients with or without high risk exposure and symptoms of condyloma acuminatum, the patients were divided into three groups, namely a group with contact and symptoms (161 cases), a group with contact and without symptoms (117 cases) and a group without contact and symptoms (100 cases). The exfoliated cells were taken and the method of reverse molecular hybridization was adopted to detect the genotype of HPV. Results HPV positive rate of cervical secretions from 378 female cases of venereal outpatient was 56.61% (214/378). Positive rate of the group with contact and symptoms was 98.75% (159/161), and 22 kinds of HPV genotypes were detected, mainly including HPV6 (44.72%), 11(29.19%), 16 (15.53%), 58 (8.69%), 56 (7.45%), 18 (6.83%), 33 (6.83%) and 68 (6.83%). Positive rate of group with contact and without symptoms was 40.17% (47/117), and 14 kinds of HPV genotypes were detected, mainly including HPV6 (17.09%), 11(13.68%), 52 (6.84%), 53 (5.13%), 16 (4.27%), 51(3.42%) and 18 (2.56%). Positive rate of group without contact and symptoms was 8.00% (8/100), and 5 kinds of HPV genotypes were detected, including HPV6 (4.00%), 11(3.00%), 33 (1.00%), 16 (2.00%) and 81(1.00%). Unitary type infection rate and complex infection rate of the group with contact and symptoms and the group with contact and without symptoms had no statistical difference(P＞0.05). In the multiple complex infection, three and double infection were the main ones, and the most of them were found to be eight infections. Lowrisk type of the group with contact and symptoms was 121cases (76.10%), high-risk pattern was 99 cases (62.26%). Low-risk type of the group with contact and without symptoms was 35 cases (74.46%), high-risk pattern was 26 cases (55.32%). The two groups had high positive rate, but there was no statistical difference(P＞0.05). Conclusion HPV6, 58, 56, 11, 16, 18, 33, 68 are primary genotypes of cervicalsecretions from female cervical in venereal outpatient, which also may be found in healthy examination group. Cervical HPV genetic testing should be strengthened for female venereal patients, and regular follow-up may be carried out on HPV positive patients, especially high risk type and the complex infection patients.

Venereal outpatient；Secretions，cervical；Human papilloma viruses；Genotype

R752.53

A

1674-1293(2017)01-0019-03

2016-08-20

2016-11-10）

（本文編輯 耿建麗）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170106

710043，西安醫(yī)學(xué)院附屬西安市北方醫(yī)院（鄭穎，王寧，周哲，李志博，任建軍）

鄭穎，主治醫(yī)生，專業(yè)方向：主要從事皮膚性病專業(yè)，E-mail: 279841313@qq.com

任建軍，E-mail: 445768825@qq.com