趙 欣,騫 宇

(重慶第二師范學(xué)院 重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心;重慶市功能性食品工程技術(shù)研究中心; 功能性食品研發(fā)重慶市工程實(shí)驗(yàn)室;生物與化學(xué)工程系,重慶 400067)

苦丁茶粗多酚對DSS誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防作用

趙 欣,騫 宇*

(重慶第二師范學(xué)院 重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心;重慶市功能性食品工程技術(shù)研究中心; 功能性食品研發(fā)重慶市工程實(shí)驗(yàn)室;生物與化學(xué)工程系,重慶 400067)

目的:通過DSS(葡聚糖硫酸鈉)誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎(UC)動物模型對苦丁茶粗多酚(KTCP)的UC預(yù)防效果進(jìn)行了研究。方法:使用試劑盒檢測小鼠的血清指標(biāo),同時(shí)使用RT-PCR技術(shù)檢測小鼠結(jié)腸組織的mRNA表達(dá)。結(jié)果:動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示KTCP能控制UC造成的小鼠體重下降和疾病活動指數(shù)(Disease activity index,DAI)增高;同時(shí),KTCP還可以使UC造成結(jié)腸長度縮短和結(jié)腸重量/結(jié)腸長度比值降低得到有效的控制。解剖小鼠后對小鼠的血清和組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察到KTCP可以提高血清中SOD(超氧化物歧化酶)含量、降低細(xì)胞因子IL-6(白介素-6)、IL-12(白介素-12)和TNF-α(腫瘤壞死因子-α)的水平;KTCP還可以降低結(jié)腸組織中MPO(髓過氧化物酶)、MDA(丙二醛)的含量、提高GSH(谷胱甘肽)的含量。RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相對于對照組KTCP可以下調(diào)結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和CXCR2的mRNA表達(dá)。同時(shí),高濃度的KTCP使小鼠的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)更接近于正常組小鼠,顯示出更好的效果。結(jié)論:KTCP具有較好的潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防作用。

苦丁茶,多酚,潰瘍性結(jié)腸炎,趨化因子受體,表達(dá)

苦丁茶作為一種傳統(tǒng)的純天然保健飲料,是冬青科植物大葉冬青的葉制備而成的一種飲品,與綠茶、紅茶等傳統(tǒng)茶葉相比,在口感、成分、生理活性作用上都有一定的差異[1]。苦丁茶包含超過200種成分,其中包括苦丁皂甙、氨基酸、維生素C、多酚、黃酮、蛋白質(zhì)等生理活性物質(zhì)[2]。綠茶等傳統(tǒng)茶葉含有20%～35%茶飲料中的茶多酚,有研究表明苦丁茶也含有超過20%的多酚類物質(zhì)[3]。

結(jié)腸炎是發(fā)生在結(jié)腸的炎癥性病變,包括潰瘍性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、偽膜性結(jié)腸炎,其中潰瘍性結(jié)腸炎作為非特異性炎癥性疾病在結(jié)腸炎中發(fā)病率最高,在我國潰瘍性結(jié)腸炎在人群中的發(fā)病率已經(jīng)超過10/10萬[4]。潰瘍性結(jié)腸炎有導(dǎo)致結(jié)腸癌的可能,有調(diào)查顯示，在歐美國家患潰瘍性結(jié)腸炎10年以上者,引發(fā)結(jié)腸癌的危險(xiǎn)性提高,患病25年者危險(xiǎn)性達(dá)到9%[5]。因?yàn)闈冃越Y(jié)腸炎的引發(fā)原因尚不清楚,調(diào)整攝入食物的種類可能是一種有效的手段。

茶多酚物質(zhì)多存在于包括綠茶、紅茶和烏龍茶等多種傳統(tǒng)茶葉中,有多種生理活性作用,包括抗氧化、提高免疫力、抗炎和抗癌效果等[6-8]。有研究表明苦丁茶中多酚類物質(zhì)包括羥基酪醇葡萄糖苷、綠原酸、4,5-O-二咖啡酰奎尼酸、3,5-O-二咖啡酰奎尼酸和3,4-O-二咖啡?？崴岬染G原酸及其衍生物[9],與傳統(tǒng)綠茶、紅茶中含兒茶素類化合物等多酚物質(zhì)有明顯差異,因此苦丁茶的生理活性作用也可能與綠茶等傳統(tǒng)茶葉有一定差異。部分研究對苦丁茶多酚物質(zhì)的基礎(chǔ)生活活性作用進(jìn)行了研究,證實(shí)苦丁茶多酚具有一定的抗氧化功效[10-11]。同時(shí)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證明,多種食品的多酚提取物對結(jié)腸炎有一定的生理活性作用[12-13]。因此,本研究利用實(shí)驗(yàn)動物模型觀察苦丁茶多酚物質(zhì)對化學(xué)誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防效果,并通過包括分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手段對作用機(jī)制進(jìn)行初步分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果將有助于推動苦丁茶多酚物質(zhì)功能性作用的研究,積累一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

苦丁茶 安國市祁珍養(yǎng)生食品有限公司出產(chǎn)野生苦丁茶,由重慶食品工業(yè)研究所馮璨高級工程師鑒定為真品。

DSS(葡聚糖硫酸鈉) 美國MPBIO公司;MPO、GSH、MDA、SOD測定試劑盒 南京建成生物工程研究所;IL-6、IL-12、TNF-α血清細(xì)胞因子測定試劑盒 美國BioLegend公司;CycleTESTTM PLUS DNA染色試劑盒 德國Becton Dickinson公司;Trizol試劑、oligodT18、RNase、dNTP 和MLV 美國Invitrogen公司;RT-PCR引物TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、CXCR2 天根生化科技有限公司;Folin-Ciocalteu 試劑、綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品 美國Sigma公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純；雄性6周齡SPF級C57BL/6J小鼠64只(體重20～25 g) 重慶醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心,動物許可證號:SCXK(渝)2012-0001。

Biomate3S紫外可見光分光光度儀、A200PCR儀、LUX多功能性酶標(biāo)儀 美國Thermo Fisher Scientific公司;Tancon2500PCR凝膠成像儀 上海天能科技有限公司;ICEN-24R高速冷凍離心機(jī) 杭州奧盛儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 苦丁茶多酚物質(zhì)的提取 按文獻(xiàn)[14]方法,稱取50 g打碎成粉的苦丁茶樣品,加入50 mL的45%(體積比)的乙醇溶液,90 ℃下浸提30 min,重復(fù)1次浸提后合并2次浸提液后調(diào)節(jié)提取液的pH至6.0,然后加入80 mL的AlCl3(3 g)和ZnCl2(6 g)混合沉淀劑進(jìn)行沉淀,接著對混合液進(jìn)行離心分離(3000 r/min、10 min),將100 mL鹽酸(12%,體積比)加入收集到的沉淀中轉(zhuǎn)溶,分離出上清液,分別2次加入100 mL乙酸乙酯進(jìn)行萃取。最后對萃取液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到苦丁茶粗多酚提取物(KTCP)。

1.2.2 苦丁茶多酚物質(zhì)的測定 將綠原酸溶于蒸餾水中配制成綠原酸原液,然后稀釋綠原酸原液得到不同濃度的綠原酸溶液,按Folin-Ciocalteu比色法在1 mL不同濃度的綠原酸溶液中加入3 mL的Folin-Ciocalteu顯色劑和4.5 mL的飽和Na2CO3溶液后定容至25 mL。去顯色后的溶液在747 nm處測定吸光度值,以吸光度值為X軸坐標(biāo),綠原酸溶液濃度為Y軸坐標(biāo)繪制綠原酸標(biāo)準(zhǔn)濃度。將KTCP溶解于蒸餾水中采用以上的方法測定吸光度值后對照標(biāo)準(zhǔn)曲線求得苦丁茶粗多酚的含量[3]。

1.2.3 動物實(shí)驗(yàn) C57BL/6J小鼠適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)一周后將體重為(25±2) g的C57BL/6J小鼠分為5組,分別是正常組、對照組、苦丁茶多酚低濃度組和苦丁茶多酚高濃度組,每組16只。正常組小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中不進(jìn)行樣品處理,維持正常飼養(yǎng);對照組小鼠在前14 d內(nèi)不進(jìn)行樣品處理,維持正常飼養(yǎng),從15 d開始小鼠飲水更換為含有DSS(3%,質(zhì)量分?jǐn)?shù))的飲水;苦丁茶多酚低濃度組高濃度小鼠實(shí)驗(yàn)開始后每天按25和50 mg/kg苦丁茶多酚對小鼠實(shí)施灌胃一次,苦丁茶多酚灌胃實(shí)施14 d后小鼠飲水更換為含有DSS(3%)的飲水,整個(gè)實(shí)驗(yàn)在第22 d對全部小鼠進(jìn)行斷頸處死,采用動脈取血收集血漿,并收集小鼠結(jié)腸部分,對結(jié)腸的重量和長度進(jìn)行測量[14]。同時(shí)對DAI進(jìn)行測定,

1.2.4 小鼠結(jié)腸組織中MPO、GSH、MDA含量的測定 在洗凈的小鼠結(jié)腸中加入9倍質(zhì)量的生理鹽水,采用超聲粉碎將結(jié)腸組織勻漿,然后按試劑盒說明書對小鼠結(jié)腸組織中MPO、GSH、MDA的含量進(jìn)行測定。

1.2.5 小鼠血清中SOD含量的測定 解剖小鼠后將收集到的小鼠血漿放置1 h后進(jìn)行離心分離(4000 r/min、10 min),取上層血清按試劑盒說明書對小鼠血清中的SOD含量進(jìn)行測定。

1.2.6 小鼠血清炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的測定 取小鼠血清采用ELISA法按試劑盒說明書測定小鼠血清中的IL-6、IL-12和TNF-α細(xì)胞因子含量。

1.2.7 RT-PCR法測定結(jié)腸組織相關(guān)表達(dá) 取小鼠的結(jié)腸組織粉碎后用RNAzol提取結(jié)腸組織的總RNA,然后將總RNA濃度稀釋到1 μg/μL。取2 μL稀釋后的總RNA提取液,在其中依次加入1 μL的oligodT18、RNase、dNTP、MLV酶和10 μL的5×buffer,在條件37 ℃ 120 min,99 ℃ 4 min,4 ℃ 3 min合成cDNA。然后以反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法擴(kuò)增TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和CXCR2的mRNA表達(dá),同時(shí)以持家基因GAPDH作為內(nèi)參照按同樣條件進(jìn)行擴(kuò)增。最后用含溴化乙錠瓊脂(1%濃度)電泳檢查PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,并用Image1.44軟件進(jìn)行半定量分析[15]。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次后將三次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果取平均值,然后使用SAS9.1統(tǒng)計(jì)軟件采用one-way ANOVA方法分析各組數(shù)據(jù)在p<0.05 水平上相互是否具有顯著差異。

圖2 苦丁茶粗多酚對小鼠體重(A)、DAI(B)、結(jié)腸長度(C)和結(jié)腸重量/結(jié)腸長度比值(D)的影響(DSS誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎開始)Fig.2 The Influence of KTCP(Kuding tea crude polyphenol)on mice body(A),DAI(B),colon length(C) and colon weight/colon length(D)of mice(from DSS induced ulcerative colitis)注:不同字母表示各組數(shù)據(jù)平均值顯著性差異(p<0.05),圖3～圖5和表1、表2同。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦丁茶粗多酚中的多酚物質(zhì)含量

通過對綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品吸光度的測定繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=217.4X-1.611(R2=0.998,Y為綠原酸含量,X為吸光度值)(圖1),對照綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出KTCP中多酚物質(zhì)的含量達(dá)到63.1%(綠原酸計(jì))。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明KTCP中的多酚物質(zhì)含量較高,后續(xù)動物實(shí)驗(yàn)中起到關(guān)鍵作用的物質(zhì)是苦丁茶多酚類物質(zhì)。

圖1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of chlorogenic acid

2.2 苦丁茶粗多酚對結(jié)腸炎癥狀的影響

相對于正常組小鼠,DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的對照組小鼠從DSS誘導(dǎo)開始體重下降,KTCP可以緩解DSS造成的小鼠體重下降,其中高濃度的KTCP(50 mg/kg)比低濃度的KTCP(50 mg/kg)具有更強(qiáng)的體重下降緩解效果(圖2A)。潰瘍性結(jié)腸炎患者常出現(xiàn)體重減輕、腹瀉、出血等癥狀,DAI可以作為評價(jià)潰瘍性結(jié)腸炎的標(biāo)準(zhǔn)[16],DSS小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠也出現(xiàn)相似的癥狀,本實(shí)驗(yàn)中對照組小鼠的體重下降最多,同時(shí)對照組小鼠均出現(xiàn)出血癥狀,KTCP緩解了小鼠體重下降,同時(shí)出現(xiàn)出血癥狀的小鼠數(shù)量也大大下降。DAI指數(shù)顯示KTCP可以大幅度降低DSS造成的潰瘍性結(jié)腸炎癥狀(圖2B),起到預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的作用。結(jié)腸長度和結(jié)腸重量/結(jié)腸長度的比值也是評價(jià)潰瘍性結(jié)腸炎的重要指標(biāo),結(jié)腸長度縮短和結(jié)腸重量/結(jié)腸長度比值的增加都是潰瘍性結(jié)腸炎加重的標(biāo)志[14]。本實(shí)驗(yàn)中正常組小鼠的結(jié)腸長度最長,結(jié)腸重量/結(jié)腸長度比值最短(圖2C);對照組小鼠表現(xiàn)出相反的趨勢;KTCP能使結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長度和結(jié)腸重量/結(jié)腸長度的比值接近于正常組小鼠(圖2D),50 mg/kg KTCP組小鼠的結(jié)腸長度和結(jié)腸重量/結(jié)腸長度的比值更接近于正常組小鼠。

表1 苦丁茶粗多酚對小鼠結(jié)腸組織MPO、GSH、MDA含量的影響

表2 苦丁茶粗多酚對小鼠血清細(xì)胞因子IL-6、IL-12和TNF-α水平的影響

2.3 苦丁茶粗多酚對小鼠結(jié)腸組織MPO、GSH和MDA含量的影響

由表1可知,對照組小鼠結(jié)腸組織中的MPO和MDA含量比其他各組小鼠都高,GSH含量最低;正常組小鼠則表現(xiàn)出相反的趨勢,MPO和MDA含量表現(xiàn)出最低的含量,GSH含量最高。KTCP可以顯著(p<0.05)降低對照組小鼠的MPO、MDA含量和增加GSH含量,50 mg/kg濃度KTCP處理的小鼠的MPO、GSH和MDA含量比25 mg/kg濃度KTCP處理小鼠更接近于正常組小鼠。髓過氧化物酶(MPO)能在中性粒細(xì)胞中大量表達(dá),在單核細(xì)胞和某些類型的巨噬細(xì)胞中的表達(dá)程度較輕,結(jié)腸中大量出現(xiàn)MPO表示中性粒細(xì)胞內(nèi)流進(jìn)入結(jié)腸組織,MPO活性降低是發(fā)炎組織中中性粒細(xì)胞聚集降低的表現(xiàn)[17]。DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的一個(gè)表現(xiàn)就是結(jié)腸組織出現(xiàn)白細(xì)胞浸潤,白細(xì)胞浸潤是活性氧(ROS)和活性氮(RNS)的重要產(chǎn)生原因,ROS和RNS均是造成細(xì)胞損傷的細(xì)胞毒性劑[18]。結(jié)腸中過量的ROS將破壞組織中氧化/抗氧化平衡,從而增加脂質(zhì)過氧化和降低結(jié)腸中GSH的含量,MDA則是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物[19]。因此降低MPO、MDA含量和增加GSH含量均可以起到抑制結(jié)腸炎的作用,本研究中KTCP具有以上的效果,能夠發(fā)揮實(shí)驗(yàn)潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防作用。

2.4 苦丁茶粗多酚對小鼠血清SOD含量的影響

通過對小鼠血清的分析可知(圖3),正常組小鼠的SOD含量最高((66.3±3.2) U/mL),對照組小鼠的SOD含量最低((28.7±0.7) U/mL);相對對照組,KTCP可以顯著提高DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的SOD含量,25和50 mg/kg處理小鼠的SOD含量分別為(42.8±2.2)、(53.6±2.8) U/mL。在正常體細(xì)胞中,SOD保護(hù)自由基引發(fā)的組織損傷,抑制體內(nèi)SOD的降低可以有效地緩解機(jī)體的損傷[20]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出KTCP可以顯著地緩解由于DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎造成的SOD含量下降,起到保護(hù)機(jī)體的作用。

圖3 苦丁茶粗多酚對小鼠血清SOD含量的影響Fig.3 The influence of serum KTCP (Kuding tea crude polyphenol)on SOD of mice

2.5 苦丁茶粗多酚對小鼠血清細(xì)胞因子IL-6、IL-12和TNF-α水平的影響

由表2可知,25和50 mg/kg濃度KTCP處理小鼠血清的IL-6、IL-12和TNF-α細(xì)胞因子水平顯著低于對照組(p<0.05),50 mg/kg濃度KTCP處理小鼠血清的細(xì)胞因子水平僅高于正常組。促炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-12和TNF-α可以增強(qiáng)炎癥癥狀,導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸組織損傷,抑制促炎性細(xì)胞因子的水平可以起到抑制炎癥的作用[21]。KTCP可以起到降低細(xì)胞因子IL-6、IL-12和TNF-α水平的作用從而達(dá)到預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的作用。

2.6 苦丁茶粗多酚對小鼠結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表達(dá)的影響

由圖4可以看出,相對于對照組小鼠結(jié)腸組織,KTCP可以顯著下調(diào)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá),并且50 mg/kg濃度KTCP可以使結(jié)腸炎小鼠的表達(dá)更接近正常組小鼠。TNF-α、IL-1β和IL-6均是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)展中的關(guān)鍵因子,炎癥患者體內(nèi)的TNF-α水平較正常人更高[14];IL-1β能刺激腹瀉和減少抑炎因子進(jìn)入結(jié)腸,從而促進(jìn)潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)展[22];IL-6是受到炎癥刺激后在體內(nèi)產(chǎn)生的因子,可以加劇結(jié)腸炎的程度[23]。通過PT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示,KTCP可以有效地降低結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá),起到預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的作用,并且高濃度的KTCP效果更好。

圖4 苦丁茶粗多酚對小鼠結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表達(dá)的作用(A)及半定量分析(B)Fig.4 Effects of TNF-α,IL-1β and IL-6 mRNA of KTCP(Kuding tea crude polyphenol) on colon tissue of mice(A)and semi-quantitative analysis(B)

2.7 苦丁茶粗多酚對小鼠結(jié)腸組織CXCR2和IL-8 mRNA表達(dá)的影響

結(jié)果顯示，正常組小鼠結(jié)腸組織中的CXCR2和IL-8表達(dá)僅為對照組小鼠的0.7%和4.9%(圖5),25 mg/kg濃度KTCP作用下表達(dá)為對照組小鼠的29.7%和78.5%,50 mg/kg濃度KTCP的作用可以使CXCR2和IL-8的表達(dá)更為接近正常組小鼠,僅為對照組小鼠的16.5%和68.6%。機(jī)體出現(xiàn)炎癥后體內(nèi)的趨化因子受體及配體會出現(xiàn)大量表達(dá)[24],其中趨化因子受體CXCR2是一種非常重要的腸道疾病關(guān)聯(lián)因子,在急性炎癥中,趨化因子通過氨基葡聚糖的作用能夠大量集中在內(nèi)皮細(xì)胞表面,通過與相應(yīng)的趨化因子受體結(jié)合,使內(nèi)皮細(xì)胞大量釋放促炎細(xì)胞因子,加劇炎癥[25]。CXCR2與其配體IL-8結(jié)合后可引起中性粒細(xì)胞的遷移和大量增加,從而加劇組織損傷,使?jié)冃越Y(jié)腸炎加劇[26]。KTCP可以有效的降低CXCR2和IL-8在結(jié)腸中的mRNA表達(dá),從而達(dá)到預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的目的。

圖5 苦丁茶粗多酚對小鼠結(jié)腸組織CXCR2和IL-8 mRNA表達(dá)的作用(A)及半定量分析(B)Fig.5 Effects of CXCR2 and IL-8 mRNA of KTCP (Kuding tea crude polyphenol)on colon tissue of mice(A)and semi-quantitative analysis(B)

3 結(jié)論

本研究通過建立DSS化學(xué)誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎動物模型來觀察苦丁茶粗多酚(KTCP)對潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防效果。在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)KTCP可以抑制結(jié)腸炎造成的小鼠體重下降、DAI增高和控制DSS造成的結(jié)腸長度縮短、結(jié)腸重量/結(jié)腸長度比值降低。通過對小鼠血清的實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步表明KTCP可以增加結(jié)腸炎小鼠血清中SOD的含量,降低促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-12和TNF-α的水平。對小鼠結(jié)腸組織的分析也表明,KTCP可以提高結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中GSH的含量、降低MPO、MDA的含量;同時(shí)下調(diào)結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和CXCR2的mRNA表達(dá)。通過以上的作用KTCP可以起到對DSS誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防效果,并且KTCP的作用呈濃度依賴,濃度越高,對潰瘍性結(jié)腸炎的預(yù)防效果越好。

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Preventive effects of Kuding tea crude polyphenols in DSS-induced C57BL/6J mice ulcerative colitis

ZHAO Xin,QIAN Yu*

(Chongqing Collaborative Innovation Center for Functional Food;Chongqing Engineering Research Center of Functional Food;Chongqing Engineering Laboratory for Research and Development of Functional Food; Department of Biological and Chemical Engineering,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China)

Objective:The preventive effects of Kuding tea crude polyphenol(KTCP)on ulcerative colitis were determined through the DSS(Dextran sulfate sodium salt)-induced ulcerative colitis(UC)animal model in this study. Method:Experiment kits were used for the mice serum determination,meanwhile,the mRNA of mice colon tissue were determined by RT-PCR assay. Results:The animal experiment results showed that KTCP could control the UC caused mice body weight reduction and DAI(disease activity index)raise. Meantime,KTCP also could control the UC caused colon length shortening and colon ratio of weight/colon length reduction. After dissection,the serum and tissue of mice were experimentalized,it was observed that KTCP could increase the content of SOD(superoxide dismutase)in serum,decrease the cytokine levels of IL-6(interleukin-6),IL-12(interleukin-12)and TNF-α(tumor necrosis factor alpha). And it was also observed that KTCP could reduce the MPO(myeloperoxidase),MDA(malondialdehyde)contents and raise the GSH(glutathione)content in colon tissues. RT-PCR experiment results showed that KTCP could decrease the TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8 and CXCR2 mRNA in colon tissues compared to the control group mice. Meanwhile high concentration of KTCP could make the experiment index close to the normal group mice,and showed the better activities. Conclusion:As can be seen,KTCP had a good preventive effects of UC.

Kuding tea;polyphenol;ulcerative colitis;chemokine receptor;expression

2016-12-06

趙欣(1981-)，男，博士，教授，研究方向：食品營養(yǎng)和功能性食品，E-mail:zhaoxin@cque.edu.cn。

*通訊作者:騫宇(1976-)，女，博士，副教授，研究方向：食品營養(yǎng)和功能性食品，E-mail:qianyubaby@126.com。

重慶高校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)計(jì)劃自助項(xiàng)目(CXTD201601040);重慶第二師范學(xué)院引進(jìn)高層次人才項(xiàng)目(2013BSRC01)；重慶市工程技術(shù)研究中心建設(shè)項(xiàng)目(cstc2015yfpt_gcjsyjzx0027)。

TS201.4

A

1002-0306(2017)09-0357-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.09.061