李小玉，楊建林

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

膜蛋白新機(jī)制參與的體誘導(dǎo)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素〔1〕

李小玉，楊建林

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

目的：通過(guò)研究膜蛋白改變與碳青霉烯類抗生素耐藥，闡述膜蛋白參與的耐藥機(jī)制，更好地為臨床選擇抗生素提供合理建議，同時(shí)為新藥開發(fā)提供參考。方法：采用瓊脂紙片擴(kuò)散法(K-B法)及瓊脂稀釋法從76 株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選出8 株僅對(duì)多黏菌素敏感、1 株全敏感臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗(yàn)檢測(cè)其外排泵表型。結(jié)果：外排泵抑制劑(PAβN)抑制試驗(yàn)顯示受試8 株菌中4 株亞胺培南最低抑制濃度(MIC)值下降≤1/4，而美羅培南MIC值下降至1/4及以下。耐藥菌株和敏感菌株差異膜蛋白組學(xué)鑒定出肌肉(Car)，外膜蛋白(OmpA)和推測(cè)分子量為41 ku外排泵膜蛋白。結(jié)論：本次試驗(yàn)中膜孔蛋白CarO表達(dá)缺失可能參與鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯抗生素耐藥，外排泵過(guò)度表達(dá)可能參與細(xì)菌對(duì)美羅培南的耐藥。

膜蛋白改變；碳青霉烯類；抗生素；耐藥機(jī)制

鮑曼尼氏不動(dòng)桿菌(Ab)為一特別容易產(chǎn)生抗藥性傾向的菌種，再加上抗生素的廣泛使用，更易演變成多重抗藥性的菌種，近年來(lái)急速躍升為院內(nèi)感染最重要的致病菌之一。鮑曼不動(dòng)桿菌的抗藥性分類，依據(jù)研究報(bào)告指出多重抗藥性是指對(duì)三種以上不同種類(class)的抗生素具抗藥性；泛抗藥性(eXDR)是指對(duì)所有的抗生素除了1～2種不同class以外其他的抗生素都產(chǎn)生抗藥性，而全抗藥性(PDR)則是指對(duì)所有測(cè)試的抗生素都具抗藥性[1]。由于A.baumannii對(duì)多種抗生素容易產(chǎn)生抗藥性，近來(lái)發(fā)表的論文更指出對(duì)目前臨床上具有全抗藥性的鮑曼不動(dòng)桿菌的菌株已有逐年增加的趨勢(shì)[2]。采用瓊脂

〔1〕本課題為贛州市指導(dǎo)性科技計(jì)劃任務(wù)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：GZ2015ZSF333)

紙片擴(kuò)散法(K-B法)及瓊脂稀釋法從76 株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選出8 株僅對(duì)多黏菌素敏感者進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2014年12月—2016年2月收集76 株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選出8 株僅對(duì)多黏菌素敏感、1株全敏感臨床株。

1.2 試驗(yàn)方法 用瓊脂紙片擴(kuò)散法及瓊脂稀釋法從76株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選出8株僅對(duì)多黏菌素敏感、1株全敏感臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗(yàn)檢測(cè)其外排泵表型。重點(diǎn)篩選泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌蛋白質(zhì)組中表達(dá)上調(diào)或下調(diào)及缺失的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。經(jīng)脫色、酶解后得到肽段混合物用全自動(dòng)化光觸發(fā)光猝天(LTQ)多級(jí)一維線性離子阱液質(zhì)聯(lián)用儀工作站分析。

2 結(jié) 果

2.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

8 株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)美羅培南和亞胺培南均耐藥。對(duì)亞胺培南、美羅培南的最低抑制濃度(MIC)值分別達(dá)8->128 mg/L、16->128 mg/L，對(duì)其他12 種抗生素均耐藥，僅多粘菌素敏感。

2.2 外排泵表型篩查結(jié)果

8 株鮑曼不動(dòng)桿菌泵抑制劑協(xié)同試驗(yàn)結(jié)果顯示亞胺培南MIC值下降均≤4倍，美羅培南的MIC值下降≥4 倍者有4 株，見(jiàn)表1。

表1 泵抑制劑PAβN對(duì)8 株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌抑制結(jié)果 mg/L

3 討 論

關(guān)于感染不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter spp.)時(shí)產(chǎn)生的毒性，特點(diǎn)包括：第一，由鼠李糖(L-rhamnose)，D-葡萄糖(D-glucose)，葡萄糖醛酸(D-glucuronic acid)，和D-甘露糖(D-mannose)形成的多醣體莢膜，可能提供了菌株表面更多的親水性；第二，出現(xiàn)線毛和莢膜多醣體，具有黏附在人類上皮細(xì)胞的特性；第三，產(chǎn)生酵素破壞組織的脂質(zhì)；第四，出現(xiàn)脂質(zhì)A和細(xì)胞壁的黏多糖成分等潛在毒性角色；第五，黏液會(huì)在混合感染時(shí)增強(qiáng)它的毒性，有研究指出黏液與對(duì)抗嗜中性球的細(xì)胞毒性相關(guān)，且會(huì)抑制嗜中性球移形進(jìn)入老鼠的腹膜液；第六，細(xì)菌在人體中獲得成長(zhǎng)所必須的鐵離子的能力也是一個(gè)重要的毒性決定因子，且某些Acinetobacter spp.已顯示能產(chǎn)生嗜鐵載體(如aerobactin)和與鐵反應(yīng)的外膜接受蛋白[3]。細(xì)菌抗藥性可由偵測(cè)其表現(xiàn)型和基因型的方法進(jìn)行，一般臨床微生物實(shí)驗(yàn)室最常用的方法有兩種：定性型的抗生素紙生擴(kuò)散測(cè)試，測(cè)量抑制環(huán)的大小；另一個(gè)是定量型的肉湯或培養(yǎng)基稀釋方法，測(cè)量抗生素的最低抑菌濃度[4]。而基因型的測(cè)試是偵測(cè)細(xì)菌是否具有抗藥機(jī)制，如抗藥基因，或藥物作用目標(biāo)的基因突變。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室所采用表現(xiàn)型的測(cè)試方法及感受性的判斷是依據(jù)臨床檢驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所(CLSI)所設(shè)定的準(zhǔn)則，來(lái)決定受測(cè)試菌株對(duì)不同抗生素的敏感性，包含感受性、中間性及抗藥性等。其目的是用來(lái)判斷要使用何種抗生素才能達(dá)到最佳的治療效果[5-6]。臨床上最常使用的方法為抗生素紙錠擴(kuò)散法及最低抑制濃度試驗(yàn)，在診斷實(shí)驗(yàn)室中，對(duì)于確認(rèn)微生物對(duì)于抗生素的抗藥性非常重要，也能用來(lái)監(jiān)測(cè)新的抗生素的活性[7-8]。本組資料顯示，8 株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)美羅培南和亞胺培南均耐藥。對(duì)亞胺培南、美羅培南的MIC值分別達(dá)8->128 mg/L、16->128 mg/L，對(duì)其他12 種抗生素均耐藥，僅對(duì)多黏菌素敏感。另外，8 株鮑曼不動(dòng)桿菌泵抑制劑協(xié)同試驗(yàn)結(jié)果顯示亞胺培南MIC值下降均≤4倍，美羅培南的MIC值下降≥4 倍者有4 株。

總之，本次試驗(yàn)中膜孔蛋白CarO表達(dá)缺失可能參與鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯抗生素耐藥，外排泵過(guò)度表達(dá)可能參與細(xì)菌對(duì)美羅培南的耐藥。

[1]高吟，黃新祥，顧國(guó)平，等.耐碳青霉烯類鮑氏不動(dòng)桿菌基因群檢測(cè)研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，16(2)：3 601-3 603.

[2]張鵬，李淑蕓，杜云波，等.替加環(huán)素治療耐碳青霉烯鮑曼不動(dòng)桿菌感染的臨床療效[J].中國(guó)感染控制雜志，2016，29(6)：380-383.

[3]屈濤，瑪依拉·阿布都熱依木，黨楠.鮑曼不動(dòng)桿菌抗生素的耐藥性與感染治療對(duì)策分析[J].中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2016，21(5)：254.

[4]馬全萍，張倩，孫玉國(guó)，等.鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床分布及耐藥變化趨勢(shì)[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，23(5)：4 412-4 413.

[5]林云萬(wàn)，梁穎茹，賀征，等.某院ICU多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性和碳青霉烯酶耐藥基因分析[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，28(11)：1 313-1 315.

[6]MARCHAND L，DAMIER-PIOLLE L，COURVALIN P.Expression of the RND-type efflux pump AdeABC in Acinetobacter baumannii is regulated by the AdeRS two-component system[J].Antimicrob Agents Chemother，2004，48(9)：3 298-3 304.

[7]MAK J K，KIM M J，PHAM J，et al.Antibiotic resistance determinants in nosocomial strains of multidrug-resistant Acinetobacter baumannii[J].J Antimicrob Chemother，2009，63(1)：47-54.

[8]YU Y S，ZHOU H，YANG Q，et al.Widespread occurrence of aminoglycoside resistance due to ArmA methylase in imipenem-resistant Acinetobacter baumannii isolates in China[J].J Antimicrob Chemother，2007，18(2)：82-83.

(本文編輯：張榮梅)

謝建生(1984— )，男，江西省贛州市人，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。

1671-8631(2017)05-0366-03

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2016-08-30