汪玉萍 李傳響

高效液相色譜法測(cè)定銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量

汪玉萍 李傳響

目的建立銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行連翹苷的含量測(cè)定, 色譜柱為SHIMADZU VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm ), 流動(dòng)相：水—乙腈—甲醇(60∶30∶10), 在277 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。結(jié)果在0.1～0.5 mg/ml濃度范圍內(nèi)連翹苷呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998), 平均回收率為100.2%,RSD=1.12%(n=5)。結(jié)論本含量測(cè)定快速準(zhǔn)確, 可用于本制劑的質(zhì)量控制。

銀翹解毒顆粒 ；連翹苷；高效液相色譜法

銀翹解毒顆粒為臨床常用中成藥, 為解表劑, 具有辛涼解表、清熱解毒之功效。主治風(fēng)熱感冒, 癥見(jiàn)發(fā)熱頭痛, 咳嗽口干, 咽喉疼痛。經(jīng)分析其處方組成, 作者認(rèn)為連翹苷也是藥效的重要成分之一, 為更好地控制該品種的質(zhì)量, 應(yīng)對(duì)其含量進(jìn)行質(zhì)量控制, 而現(xiàn)版藥典未對(duì)其進(jìn)行含量控制［1］,為此作者研究其含量測(cè)定的方法, 報(bào)告如下。

1 儀器與試劑

LC—20AT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；LC solution色譜工作站。連翹苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所, 批號(hào)：110821-201213, 含量：95.3%)；銀翹解毒顆粒(規(guī)格：15 g/袋, 160203;160721;160815)；試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2. 1 處方組成金銀花、連翹、薄荷、荊芥、淡豆豉、牛蒡子(炒)、桔梗、淡竹葉、甘草。

2. 2 含量測(cè)定經(jīng)處方分析, 本方中金銀花、連翹為主要藥材, 綠原酸與連翹苷是該制劑兩個(gè)主要成分。連翹苷本文實(shí)驗(yàn)條件下與樣品中其他成分間分離很好, 在277 nm有最大吸收［2］, 重現(xiàn)性好, 見(jiàn)圖1～3?，F(xiàn)行版藥品標(biāo)準(zhǔn)［1］只確定了綠原酸的含量測(cè)定, 不能夠全面控制該制劑質(zhì)量, 作者增加連翹苷作為質(zhì)控指標(biāo)之一, 應(yīng)用HPLC法全面有效控制銀翹解毒顆粒的質(zhì)量。

圖1 連翹苷紫外吸收?qǐng)D譜

圖2 連翹苷對(duì)照品色譜圖

圖3 銀翹解毒顆粒樣品色譜圖

2. 3 系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn) 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS柱(150 mm× 4.6 mm, 5μm )；水—乙腈—甲醇(60∶30∶10), 檢測(cè)波長(zhǎng)：277 nm；流速：1 ml/min, 柱溫：30℃；進(jìn)樣量20μl。

2. 4 配制對(duì)照品溶液 精取連翹苷對(duì)照品約10 mg置于10 ml容量瓶中, 用甲醇溶解并稀釋至刻度制成1 mg /ml的對(duì)照品溶液［4］。

2. 5 制備供試品溶液 加氯仿分3次水浴回流萃取［1］20 min銀翹解毒顆粒20 g加水溶解過(guò)濾后的濾液, 合并氯仿液, 水浴蒸干, 用1 ml甲醇溶解得供試品溶液。

2. 6 制備陰性對(duì)照溶液 依照處方比例, 自制不含連翹的陰性對(duì)照樣品, 按2.3項(xiàng)下要求同法制備。

2. 7 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線精密吸取2.4項(xiàng)下溶液1、2、3、4、5 ml, 分置10 ml容量瓶中, 用甲醇稀釋至刻度, 制成不同濃度的溶液, 分別6次進(jìn)樣20 μl, 以平均色譜峰面積(A)與連翹苷濃度(C)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得回歸方程為C=7.1638×10-7+ 6.0212×10-4,r=0.9998, 表明結(jié)果呈線性關(guān)系。

2. 8 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.4項(xiàng)下對(duì)照品溶液, 按2.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量, 測(cè)定5次峰面積, 結(jié)果RSD=1.12%。

2. 9 回收率實(shí)驗(yàn) 將已知含量的供試品樣品2 ml和1 ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液混合均勻, 按上述條件測(cè)定其中連翹苷的含量,結(jié)果平均回收率為100.2%,RSD=1.1%(n=5)。見(jiàn)表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)(n=5)

2. 10 樣品測(cè)定按上述方法, 測(cè)定3批樣品(規(guī)格15 g/袋, 160203；160721；160815)連翹苷的含量分別為6.2103、6.1376、6.2201 mg。

3 討論

3. 1 經(jīng)不同流動(dòng)相, 如氯仿—甲醇(70∶30)、水—乙腈(85∶15)、水—乙腈—甲醇(60∶30∶10)等多種流動(dòng)相反復(fù)試驗(yàn), 結(jié)果以水—乙腈—甲醇(60∶30∶10)為流動(dòng)相, 以VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)為分離柱的情況下, 分離的效果最佳。

3. 2 參考有關(guān)文獻(xiàn)資料［3-5］, 采用本法測(cè)定銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量, 穩(wěn)定可靠, 重現(xiàn)性好, 可作為本制劑質(zhì)控方法的重要補(bǔ)充。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì) . 中華人民共和國(guó)藥典(一部). 北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2015:附錄48.

［2］ 李芳美, 林朝展, 甄松峰, 等. RP-HPLC法測(cè)定抗病毒口服液中芒果苷和連翹苷的含量. 中藥新藥與臨床藥理, 2009, 20(1):47-49.

［3］ 孫曉佳, 紀(jì)宏宇, 蘭恭贊, 等. HPLC法測(cè)定乳癖消顆粒中連翹苷的含量. 中國(guó)藥師, 2016, 19(1):184-186.

［4］ 孟和, 朱艷紅, 吳學(xué)軍. HPLC法測(cè)定保和丸中連翹苷的含量.中國(guó)藥事, 2013, 27(3):312-314.

［5］ 陳國(guó)輝. 高效液相色譜法測(cè)定雙黃連口服液中連翹苷含量. 海峽藥學(xué), 2015, 27(10):70-71.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.08.099

2017-03-03］

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