張 健,劉少偉,張 毅,王共明,趙云蘋,劉京熙,井月欣,劉 芳

(1.華東理工大學(xué),生物工程學(xué)院,生物反應(yīng)器國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 200237;.中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院,上海 200233;3.山東省海洋資源與環(huán)境研究院,山東煙臺 264006)

仿刺參精酶解工藝條件優(yōu)化及體外抗氧化

張 健1,2,3,劉少偉1,*,張 毅2,王共明3,趙云蘋3,劉京熙3,井月欣3,劉 芳3

(1.華東理工大學(xué),生物工程學(xué)院,生物反應(yīng)器國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 200237;.中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院,上海 200233;3.山東省海洋資源與環(huán)境研究院,山東煙臺 264006)

本研究以仿刺參精(Apostichopusjaponicusspermary,ASJS)為材料,以水解度為指標(biāo)優(yōu)化了酶解工藝條件,并考察了酶解產(chǎn)物的體外抗氧化效果。實(shí)驗(yàn)選用木瓜蛋白酶(PAP)、復(fù)合蛋白酶(PRO)和風(fēng)味蛋白酶(FLA)作為實(shí)驗(yàn)用酶,以雙縮脲法結(jié)合三氯乙酸法測定水解度,通過單因素與正交實(shí)驗(yàn),優(yōu)化了單酶酶解工藝條件,并與雙酶及三酶復(fù)配水解進(jìn)行了比較實(shí)驗(yàn),最后對不同的水解產(chǎn)物進(jìn)行了體外抗氧化活性測定。結(jié)果表明:單酶最佳酶解工藝條件為PAP:酶添加量3.0%、溫度70 ℃及反應(yīng)時間4 h;PRO:酶添加量3.0%、溫度45 ℃及反應(yīng)時間4 h;FLA為:酶添加量2.0%、溫度45 ℃及反應(yīng)時間4 h。在最佳酶解工藝條件下PAP水解度為32.14%,PRO為31.09%,FLA為11.89%。雙酶及三酶的復(fù)配水解工藝檢測到的水解度均低于單PAP及單PRO。不同水解產(chǎn)物清除羥自由基和超氧陰離子自由基能力結(jié)果為,在樣品濃度為5 mg/mL和10 mg/mL時,ASJS的PAP酶解產(chǎn)物好于PRO、FLA、雙酶、三酶復(fù)配,同時也好于仿刺參卵及體壁PAP酶解產(chǎn)物。綜上可知,ASJS的PAP水解產(chǎn)物顯示出較好的體外抗氧化活性,可以進(jìn)一步開發(fā)利用。

仿刺參精,酶解,正交優(yōu)化,抗氧化

海參營養(yǎng)成分豐富,是高蛋白低脂肪的營養(yǎng)滋補(bǔ)品[1],含有膠原蛋白、多糖、多肽、皂苷、脂肪酸等多種活性成分,其中如海參多糖具有抗腫瘤、抗凝血及降血脂等活性[2-4],海參皂苷具有抗真菌、抗腫瘤及提高免疫等活性[5-6],海參肽具有抗疲勞、抗氧化及鎮(zhèn)痛等活性[7-8]。

海參加工過程中通常產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物,如海參腸道、海參卵和海參精等,已有研究表明,這些加工副產(chǎn)物同樣含有豐富的營養(yǎng)成分[9-10],其中海參精是海參的雄性生殖腺組織,營養(yǎng)成分豐富,是高蛋白低脂肪的營養(yǎng)品,其蛋白質(zhì)和氨基酸含量很高,不飽和脂肪酸及礦物元素含量也很豐富[11]。開展海參副產(chǎn)物的加工利用研究,將促進(jìn)開發(fā)新的海參制品,節(jié)約資源,繁榮市場,企業(yè)增效。

仿刺參精作為海參加工過程的副產(chǎn)物,營養(yǎng)價值很高,但是開發(fā)利用程度較低,以此為原料的研究結(jié)果也較少,本實(shí)驗(yàn)以新鮮ASJS為研究對象,從幾種常用中性蛋白酶中優(yōu)化出最佳酶解工藝條件,并對多種水解產(chǎn)物的抗氧化活性進(jìn)行了比較研究,為開發(fā)制備新型抗氧化活性物質(zhì)提供了素材。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

鮮仿刺參生殖腺 煙臺華康海洋食品有限公司;木瓜蛋白酶(PAP) 南寧龐博生物工程有限公司;風(fēng)味蛋白酶(FLA)與復(fù)合蛋白酶(PRO) 丹麥諾維信公司;抗氧化(清除羥自由基及超氧陰離子)測定試劑盒 南京建成生物工程研究所;牛血清清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液 生工生物工程上海股份有限公司;其他試劑 均為國產(chǎn)分析純。

Kjeltec 2300型全自動凱氏定氮儀 丹麥Foss公司;AR1140電子天平 美國Ohaus公司;高速離心機(jī) 德國Eppendorf有限公司;TU-1810DASPC分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司;恒溫水浴鍋 常州中捷實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司;JMF-365膠體磨 煙臺星火輕工機(jī)械設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 酶解工藝流程 新鮮仿刺參→顯微鑒定分出ASJS→清洗瀝干→勻漿→加蛋白酶酶解→滅酶→高速離心→取上清液待測

1.2.2 指標(biāo)測定

1.2.2.1 總蛋白質(zhì)含量測定 凱氏定氮法[12]。

1.2.2.2 可溶性蛋白的測定 使用雙縮脲法,具體操作如下:配制0、2、4、6、8、10、12、14 mg/mL的牛血清清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,將標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL與雙縮脲試劑4 mL混勻反應(yīng),在室溫(20～25 ℃)下靜置30 min,在540 nm下測定吸光度,繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線;樣品中可溶性蛋白含量的測定參照上述步驟操作,通過回歸方程計(jì)算求得樣品中可溶性蛋白含量[13]。

1.2.2.3 水解度的測定 使用三氯乙酸(TCA)法。取酶解液5 mL與TCA(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)5 mL充分混勻,靜置10 min,然后以10000 r/min離心10 min,以雙縮脲法測定上清液中可溶性蛋白含量,以凱氏定氮法測ASJS中總蛋白含量[14]。按照下式計(jì)算水解度(%)。

式中:N1為反應(yīng)后ASJS酶解液中可溶性蛋白含量(mg/mL);N2為反應(yīng)前ASJS中可溶性蛋白含量(mg/mL);N0為ASJS中總蛋白含量(mg/mL)[15]。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 選擇PAP、PRO和FLA三種最適pH為中性范圍的蛋白酶,分別對三種酶的溫度、酶添加量和反應(yīng)時間3個因素進(jìn)行考察。根據(jù)文獻(xiàn)并結(jié)合酶制劑說明書制定三種酶的單因素實(shí)驗(yàn)條件為:溫度:40、50、60、70、80 ℃;酶添加量:0.5%、1%、2%、3%、5%;反應(yīng)時間:1、3、5、7、9 h[16-17],不變的條件為PAP:溫度70 ℃,PRO和FLA溫度:50 ℃,酶添加量均為:3%,反應(yīng)時間均為5 h。

1.2.4 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 經(jīng)過單因素實(shí)驗(yàn)后,繼續(xù)考察溫度、酶添加量和反應(yīng)時間對水解度的影響,采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,得出三種蛋白酶各自最優(yōu)的水解工藝。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用L9(34)正交表,PAP因素水平表如表1所示,PRO和FLA因素水平表如表2所示。

表1 正交因素水平表

表2 正交因素水平表

1.2.5 多酶復(fù)配的比較實(shí)驗(yàn) 通常蛋白酶因?yàn)槊盖形稽c(diǎn)及作用方式的不同,具有不同的水解效果。參照前期的研究[18],對ASJS雙酶及三酶復(fù)配進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。雙酶復(fù)配實(shí)驗(yàn)采用PAP、PRO及FLA兩兩復(fù)配同時加入的方式進(jìn)行。三酶水解方式為先用雙酶(PAP與PRO)在溫度70 ℃,酶添加量各1%條件下水解4 h,煮沸滅活后,間隔2 h再添加FLA繼續(xù)水解,FLA水解條件為:溫度45 ℃,酶添加量1%,反應(yīng)時間1 h,酶滅活后測定其水解度。最后比較單酶、雙酶及三酶復(fù)配的水解實(shí)驗(yàn)效果[18]。

1.2.6 體外抗氧化活性研究 經(jīng)過ASJS酶解工藝條件優(yōu)化后,使用一定的酶添加量,在各自最適宜溫度下反應(yīng)一定的時間,制備出多種ASJS水解產(chǎn)物。同時,采用與ASJS的PAP酶解相同步驟,對仿刺參卵和體壁進(jìn)行水解,制備出仿刺參卵PAP水解產(chǎn)物和體壁PAP水解產(chǎn)物,制備采用的水解條件統(tǒng)一為酶添加量3%、時間5 h及各自最適溫度,共制備出9種不同的水解產(chǎn)物。對這幾種水解產(chǎn)物進(jìn)行體外抗氧化(清除羥自由基和超氧陰離子)活性的測定。

1.2.6.1 清除羥自由基能力測定 使用羥自由基測定試劑盒,根據(jù)試劑盒操作說明測定不同水解產(chǎn)物清除羥自由基能力。

1.2.6.2 清除超氧陰離子自由基測定 使用清除超氧陰離子自由基測試盒,根據(jù)試劑盒操作說明測定不同水解產(chǎn)物清除超氧陰離子自由基能力。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel 2007軟件整理數(shù)據(jù),SPSS 22. 0軟件進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 可溶性蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照雙縮脲法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作步驟,繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。由圖可以看出,經(jīng)線性回歸分析,雙縮脲法測量牛血清清蛋白時,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)含量在0～12 mg/mL時,線性關(guān)系最好,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0459x+0.0108(R2=0.9996)。

圖1 雙縮脲法標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of bovine serum albumin

2.2 ASJS酶解單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 不同溫度下ASJS水解度結(jié)果 由圖2可知,隨著溫度由低到高,使用PAP組的水解度逐漸升高,當(dāng)溫度上升到70 ℃時,水解度達(dá)到30%左右。溫度繼續(xù)升高,水解度依然有所提高,推測原因在于PAP的適宜溫度范圍在10～85 ℃,在70～80 ℃仍存在一定的水解活力;另外推測,較高的反應(yīng)溫度可能激活了ASJS材料自身含有的自溶酶,進(jìn)一步對精蛋白進(jìn)行了水解,使得測定的水解度呈現(xiàn)出升高的現(xiàn)象,這與之前的相關(guān)研究結(jié)果類似[19]。綜合考慮加熱成本,水解度等因素后,確定進(jìn)一步對PAP反應(yīng)溫度在70 ℃左右進(jìn)行考察。

PRO是一種桿菌蛋白酶復(fù)合體,低添加量時也可以產(chǎn)生沒有苦味的水解液,FLA是一種蛋白酶/肽酶復(fù)合物,在酶活力方面具有內(nèi)切和外切兩種作用;不同溫度對PRO與FLA水解度的作用結(jié)果基本一致,均是隨著溫度逐漸提高,水解度出現(xiàn)先升高后下降結(jié)果,在80 ℃時出現(xiàn)回升情況,推測也是高溫下自溶酶作用的結(jié)果[19]。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,且參考各自最適溫度范圍,確定對PRO與FLA反應(yīng)溫度在50 ℃左右進(jìn)一步優(yōu)化。

圖2 不同溫度下ASJS水解度結(jié)果Fig.2 Results of hydrolysis degrees of ASJS under different temperatures

2.2.2 不同酶添加量下ASJS水解度結(jié)果 由圖3可以看出,當(dāng)PAP酶添加量由0.5%增加到3%時,水解度隨著酶添加量增加逐漸增加,當(dāng)酶添加量由3%到5%時,水解度增加很小?？紤]到較高的酶添加量會提高綜合加工成本,故確定對PAP的酶添加量繼續(xù)在3%左右進(jìn)行考察。

圖3 不同酶添加量下ASJS水解度結(jié)果Fig.3 Results of hydrolysis degrees of ASJS by different enzyme dosages

PRO與FLA水解度均是隨酶添加量增加而升高,而當(dāng)酶添加量由3.0%到5.0%時,水解度增加變緩,綜合考慮降低成本的需要,故選擇PRO與FLA酶添加量均為3.0%左右進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。

2.2.3 不同反應(yīng)時間下ASJS水解度結(jié)果 由圖4可知,在5 h內(nèi)PAP水解度隨著反應(yīng)時間增加而逐漸升高,在5～9 h時,水解度升高趨勢變的較緩慢,考慮到長時間水解會增加生產(chǎn)成本和造成微生物滋生,故選擇對PAP的反應(yīng)時間考察圍繞5 h的時間點(diǎn)展開。

圖4 不同反應(yīng)時間下ASJS水解度結(jié)果Fig.4 Results of hydrolysis degrees of ASJS under different time

不同反應(yīng)時間對PRO與FLA的水解度作用趨勢基本相同,均是在5 h以內(nèi)水解度隨著反應(yīng)時間增加而逐漸升高,而在5 h之后增加程度減緩,故確定PRO與FLA的反應(yīng)時間也在5 h左右進(jìn)行優(yōu)化。

2.3 ASJS正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果

2.3.1 PAP正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果之上,對溫度、酶添加量和反應(yīng)時間這3個因素進(jìn)行進(jìn)一步考察優(yōu)化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果和顯著性分析結(jié)果如表3、表4所示。

由正交實(shí)驗(yàn)表直觀分析可得出A3B2C1組合較好,對PAP水解度的影響三種因素主次順序?yàn)?酶添加量>溫度>反應(yīng)時間,即酶添加量對實(shí)驗(yàn)的影響最大,溫度次之,反應(yīng)時間最小。由表4可得出酶添加量對水解度具有顯著影響,溫度和反應(yīng)時間兩個因素的影響均不顯著。相關(guān)研究指出在正交實(shí)驗(yàn)中應(yīng)嚴(yán)格控制具有顯著影響的因素,而對于不顯著因素,通常根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中操作性及經(jīng)濟(jì)成本等具體情況選擇優(yōu)水平[20]。經(jīng)綜合考慮后選擇反應(yīng)時間較短且水解度與A3B2C1相差很小的A2B2C3組合為最優(yōu)組合,ASJS的PAP酶解優(yōu)化工藝條件為:溫度70 ℃、酶添加量3.0%、反應(yīng)時間4 h。在此條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn),測得水解度為32.14%。

表3 PAP酶解正交實(shí)驗(yàn)

表4 PAP酶解顯著性分析結(jié)果

注：顯著性差異用*標(biāo)注;置信水平為0.95，表6、表8同。2.3.2 PRO正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果之上,采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對溫度、酶添加量和反應(yīng)時間這3個因素進(jìn)行進(jìn)一步考察優(yōu)化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果和顯著性分析如表5、表6所示。

由正交實(shí)驗(yàn)表直觀分析可得出A1B2C1組合較好,對PRO水解度產(chǎn)生影響的三種因素主次順序?yàn)槊柑砑恿?溫度>反應(yīng)時間,即酶添加量對實(shí)驗(yàn)的影響最大,溫度次之,反應(yīng)時間最小。由表6可得出酶添加量和溫度對水解度具有顯著影響,而反應(yīng)時間的影響不顯著。經(jīng)綜合考慮后選擇較短反應(yīng)時間的A1B2C3組合為最優(yōu)組合,ASJS的PRO最優(yōu)酶解工藝條件為:溫度45 ℃、酶添加量3.0%、反應(yīng)時間4 h。在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),實(shí)際測得水解度為31.09%。

表5 PRO酶解正交實(shí)驗(yàn)

表6 PRO顯著性分析表

2.3.3 FLA正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對溫度、酶添加量和反應(yīng)時間這3個因素進(jìn)行優(yōu)化,相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和顯著性分析如表7、表8所示。

由正交實(shí)驗(yàn)表直觀分析得出A1B2C1組合較好,對FLA水解度產(chǎn)生影響的三種因素的主次順序?yàn)闇囟?反應(yīng)時間>酶添加量,即溫度對實(shí)驗(yàn)的影響最大,反應(yīng)時間次之,酶添加量最小。由表8可得出溫度對水解度具有顯著影響,而酶添加量和反應(yīng)時間的影響均不顯著。經(jīng)綜合考慮后選擇較少酶添加量和較短反應(yīng)時間的A1B3C3組合為最優(yōu)組合,ASJS的FLA酶解最優(yōu)工藝條件為:溫度45 ℃、酶添加量2.0%、反應(yīng)時間4 h。在此條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn),測得水解度為11.89%。

表7 FLA正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

表8 FLA顯著性分析表

2.4 多酶復(fù)配的比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果

ASJS的雙酶與三酶的水解比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表9所示。三酶復(fù)配使用的水解度比雙酶、單PAP及單PRO最佳條件下均低,說明多肽的得率降低了。推測在水解反應(yīng)后期可能出現(xiàn)了過度水解現(xiàn)象,即水解液中蛋白質(zhì)及多肽繼續(xù)被分解成小分子肽及氨基酸,由于雙縮脲法只能檢測到蛋白質(zhì)及多肽的原因從而出現(xiàn)這種現(xiàn)象[19]。

表9 多酶復(fù)配水解能力比較

圖5 酶解液清除羥自由基作用Fig.5 Enzymolysis liquid scavenging hydroxyl free radicals注：圖中蛋白酶分別為:1：PAP,2：PRO,3：FLA, 4：PAP與PRO,5：PAP與FLA,6：PRO與FLA, 7：PAP與PRO,再加FLA,8：卵PAP,9：體壁PAP，圖6同。

2.5 清除羥自由基能力測定結(jié)果

由圖5可以看出,各組分濃度在10 mg/mL時清除羥自由基能力均顯著高于5 mg/mL(p<0.01)。在這兩種樣品濃度下,各組分間清除能力強(qiáng)弱趨勢比較一致,在ASJS的三種單酶水解產(chǎn)物中,PAP好于PRO及FLA。雙酶及三酶復(fù)配水解產(chǎn)物中,PAP與FLA復(fù)配水解產(chǎn)物好于另外三種復(fù)配方式,但顯著低于PAP(p<0.05)。另外做為對照的刺參卵PAP水解產(chǎn)物和仿刺參體壁PAP水解產(chǎn)物均顯著低于7種ASJS水解產(chǎn)物,且存在極顯著差異(p<0.01)。綜合比較,ASJS的PAP水解產(chǎn)物的清除羥自由基能力在9種不同的水解產(chǎn)物中最好。

2.6 清除超氧陰離子自由基測定結(jié)果

圖6 酶解液清除超氧陰離子作用Fig.6 Enzymolysis liquid scavenging superoxide anion free radicals

由圖6可以看出,各組分濃度在10 mg/mL時清除超氧陰離子能力均顯著高于5 mg/mL(p<0.01)。在此兩種樣品濃度下,各組分間清除能力強(qiáng)弱比較趨勢相同,在ASJS的三種單酶水解產(chǎn)物中,PAP好于PRO及FLA。雙酶及三酶復(fù)配水解產(chǎn)物中,三酶水解產(chǎn)物好于另外三種雙酶復(fù)配水解方式,略低于PAP,但無顯著差異(p>0.05)。另外做為對照的刺參卵PAP水解產(chǎn)物和仿刺參體壁PAP水解產(chǎn)物均顯著低于ASJS木瓜水解產(chǎn)物(p<0.01)。綜合比較,ASJS的PAP水解產(chǎn)物清除超氧陰離子自由基能力在9種不同的水解產(chǎn)物中最好。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以雙縮脲法結(jié)合三氯乙酸法測定水解度,通過單因素與正交實(shí)驗(yàn),確定了三種蛋白酶的最佳酶解工藝條件,即PAP酶添加量3.0%、溫度70 ℃及反應(yīng)時間4 h;PRO酶添加量3.0%、溫度45 ℃及反應(yīng)時間4 h;FLA酶添加量2.0%、溫度45 ℃及反應(yīng)時間4 h。PAP與PRO表現(xiàn)出較強(qiáng)的水解能力,在優(yōu)化后的條件下PAP水解度為32.14%,PRO為31.09%,FLA為11.89%。通過與雙酶與三酶的水解實(shí)驗(yàn)比較得出,ASJS的單PAP及單PRO水解度較高。

體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各組在10 mg/mL時清除羥自由基和超氧陰離子自由基能力均顯著高于5 mg/mL。ASJS的PAP產(chǎn)物好于PRO、FLA、三種雙酶及三酶復(fù)配水解產(chǎn)物,同時好于仿刺參卵和體壁兩種PAP水解產(chǎn)物。綜合比較,ASJS的PAP水解產(chǎn)物的體外抗氧化活性在9種水解產(chǎn)物中最好,可以作為進(jìn)一步制備抗氧化活性物質(zhì)的材料。

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Optimization of enzymolysis technology ofApostichopusjaponicusspermary and antioxidant activitiesinvitroof hydrolysates

ZHANG Jian1,2,3,LIU Shao-wei1,*,ZHANG Yi2,WANG Gong-ming3,ZHAO Yun-ping3,LIU Jing-xi3,JING Yue-xin3,LIU Fang3

(1.College of Biotechnology,The State Key Laboratory of Bioreactor Engineering,East China University of Science and Technology,Shanghai 200237,China;2.Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Science,Shanghai 200233,China;3. Shandong Marine Resource and Environment Research Institute,Yantai 264006,China)

Apostichopusjaponicusspermary(ASJS)was used as material to optimize enzymolysis technology according to the degree of hydrolysis,and antioxidant activities of hydrolysates were also investigated. The hydrolysis enzymes included PAP,PRO and FLA. The biuret method combined with TCA was used to determine degree of hydrolysis. Through single factor test and orthogonal test,the optimized conditions of each enzyme were obtained. And at the same time,the enzymolysis test used sole enzyme compared with two enzymes and three enzymes was carried out. Finally,antioxidant activities of different hydrolysates were determinedinvitro. The results showed that the optimum conditions of enzymolysis technology with sole enzyme were as follows:PAP with the enzyme dosage 3.0%,temperature 70 ℃ and enzymolysis time 4 h,PRO with the enzyme dosage 3.0%,temperature 45 ℃ and enzymolysis time 4 h,FLA with the enzyme dosage 2.0%,temperature 45 ℃ and enzymolysis time 4 h. Under the optimum condition hydrolysis degrees of hydrolysis of PAP,PRO and FLA were 32.14%,31.09% and 11.89%,respectively. The enzymolysis degrees of double enzyme and three enzymes were lower than sole PAP and PRO. The results of scavenging abilities of hydroxyl radical and superoxide anion radicals displayed that with concentrations of 5 mg/mL and 10 mg/mL,the hydrolysate of ASJS hydrolyzed by PAP owned better ability than hydrolysates produced through PRO and FLA,double enzymes,three enzymes,and those from spawn and body wall hydrolyzed by PAP. In conclusion,PAP hydrolysate from ASJS exhibited good antioxidant activities,and it is promising to be utilized and exploited.

Apostichopusjaponicusspermary;enzymolysis;optimization;antioxidant activities

2016-08-17

張健(1980-)，男，博士，副研究員，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)，食品科學(xué)與工程，E-mail：zjsd408@163.com。

*通訊作者:劉少偉(1972-)，男，博士，教授，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)，食品科學(xué)與工程，E-mail：swliu@ecust.edu.cn。

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系刺參產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(SDAIT-22-07)；煙臺市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2014ZH081)。

TS254.1

B

1002-0306(2017)05-0232-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.05.036