劉憶華 成善原 李麗 李婷 鄭安斌

·論著·

外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞在胰腺癌患者中的表達(dá)及臨床病理診斷意義

劉憶華 成善原 李麗 李婷 鄭安斌

目的 探討外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)在胰腺癌患者中的表達(dá)及臨床病理診斷意義。方法 選取2013年6月至2015年12月期間收治的87例胰腺癌患者，采取免疫磁珠負(fù)性富集和免疫熒光鑒定的方法對(duì)入選患者的外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，并在患者經(jīng)治療后進(jìn)行定期隨訪以采集患者的臨床資料。結(jié)果 對(duì)入選患者外周血CTCs的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示87例胰腺癌患者中CTCs在外周血中的檢出率為63.2%(55/87)，其中檢測(cè)到的個(gè)數(shù)為0～212個(gè)，平均有1.97個(gè)/ml。通過(guò)對(duì)病理因素和CTCs的影響分析，顯示腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及侵犯被膜等均和CTCs存在著極大的相關(guān)性(P<0.05)；并且在CTCs和患者預(yù)后的關(guān)系分析中，顯示入選患者中一年生存率為22.3%中位生存時(shí)間為142.3d，CTCs檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者以及術(shù)后檢測(cè)CTCs數(shù)目上升者多預(yù)后不良。結(jié)論CTCs是臨床上胰腺癌患者預(yù)后判斷的重要指標(biāo)之一，對(duì)胰腺癌患者的臨床病理診斷存在非常重要的意義。

外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞；胰腺癌；臨床病理；診斷意義；預(yù)后

外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)是臨床上惡性腫瘤患者的常規(guī)檢測(cè)手段之一，在臨床上得以廣泛的推廣和運(yùn)用[1]。胰腺癌則是臨床上較為常見(jiàn)并且預(yù)后最差的惡性腫瘤之一，其病死率和五年生存率均居高不下[2]。為了臨床上能夠及時(shí)對(duì)胰腺癌患者的病情發(fā)展及預(yù)后作出準(zhǔn)確評(píng)估，從而對(duì)患者制定和實(shí)施科學(xué)有效的個(gè)體化治療方案，我院選取胰腺癌患者展開(kāi)相關(guān)研究，探討CTCs在胰腺癌患者中的表達(dá)及臨床病理診斷意義，報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院于2013年6月至2015年12月期間收治的87例胰腺癌患者，采集入選患者的年齡、性別、體征、主要癥狀、影像檢查等資料以及主要實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等。其中男42例，女45例；年齡 42～72歲，平均年齡(58.2±6.1)歲。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均確診為胰腺癌；②所有患者均無(wú)除胰腺癌外其他惡性腫瘤疾??；③所有患者均知情同意并自愿參與本次研究。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①有既往腫瘤病史；②有嚴(yán)重心、肝、腎等功能不全；③因各種原因無(wú)法配合本次試驗(yàn)進(jìn)行的患者。

1.3 患者外周血液的采集 臨床根據(jù)患者的個(gè)體差異結(jié)合其實(shí)際診療情況制定不同的采血計(jì)劃：對(duì)于住院患者均于術(shù)前1d采集清晨靜脈血7.5ml，術(shù)后1周則采集術(shù)后靜脈血7.5ml；而對(duì)于門(mén)診患者則采集清晨空腹外周靜脈血7.5ml。此外對(duì)患者術(shù)中則采集門(mén)靜脈血或腸系膜靜脈血7.5ml[3]。

1.4 儀器與試劑 研究中所用的白細(xì)胞共同抗原體等多種白細(xì)胞表面抗原免疫磁珠均采購(gòu)于德國(guó)MiltenyiBiotec公司；而牛血清蛋白則采購(gòu)于Sigma-Aldrich公司；磁珠分離器采購(gòu)于Promega公司；BioPhoto光學(xué)顯微鏡采購(gòu)于Olympus公司；細(xì)胞核熒光染料DAPI則采購(gòu)于北京中山金橋生物公司。

1.5 研究方法 采取免疫磁珠負(fù)性富集和免疫熒光鑒定的方法對(duì)入選患者的CTCs進(jìn)行檢測(cè)，并在患者經(jīng)治療后進(jìn)行定期隨訪以采集患者的臨床資料[4]。

2 結(jié)果

2.1 外周血CTCs的檢測(cè) 根據(jù)我院對(duì)入選患者外周血CTCs的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示87例胰腺癌患者中CTCs在外周血中的檢出率為63.2%(55/87)，其中檢測(cè)到的個(gè)數(shù)為0～212個(gè)，平均有1.97 個(gè)/ml。其中判斷標(biāo)準(zhǔn)為抗CD45-Alexa594染色陰性，抗CK8/18/19-Alexa 488染色陽(yáng)性，DAPI染色陽(yáng)性，且細(xì)胞呈橢圓形或圓形，形態(tài)大于絕大部分白細(xì)胞，同時(shí)細(xì)胞核較大等[5]。見(jiàn)表1。

2.2 病理因素對(duì)CTCs的影響 根據(jù)我院對(duì)所有患者的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及侵犯被膜等均和CTCs存在相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 外周血CTCs的檢測(cè)情況

2.3CTCs和患者預(yù)后的關(guān)系比較 對(duì)組織學(xué)明確診斷的54例患者進(jìn)行1～15個(gè)月的隨訪，結(jié)果顯示入選患者中1年生存率為25.9%(14/54)，中位生存時(shí)間為142.3d。根據(jù)CTCs情況對(duì)患者生存情況進(jìn)行分組研究，以術(shù)前是否發(fā)現(xiàn)有CTCs以及術(shù)前后CTCs改變情況為分組標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表3。

3 討論

胰腺癌是臨床上較為常見(jiàn)的一種消化道惡性腫瘤，同時(shí)也是目前預(yù)后最差的惡性腫瘤之一[6]。根據(jù)有關(guān)資料報(bào)道，臨床上有90%的胰腺癌起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌[7]。由于其惡性程度高，臨床上胰腺癌患者的診療也極為困難，5年生存率不及1%[8]。其致病機(jī)制至今尚未明確，據(jù)有關(guān)調(diào)查資料顯示多與飲酒、吸煙、高蛋白飲食、遺傳因素、過(guò)量飲用咖啡以及環(huán)境污染等因素有關(guān)[9,10]。并且女性絕經(jīng)前發(fā)病率遠(yuǎn)低于男性，絕經(jīng)后發(fā)病率則與男性相當(dāng)；糖尿病人群中胰腺癌發(fā)病率也遠(yuǎn)高于普通人群[11]。臨床上胰腺癌在早期不易確診，治愈率低且手術(shù)病死率較高[12]。隨著胰腺癌的部位、有無(wú)轉(zhuǎn)移、病程早晚、鄰近器官是否累積等情況的不同，其臨床表現(xiàn)也有所不同[13]。通常以上腹部疼痛為主要癥狀，少數(shù)患者以左右下腹或全腹疼痛為主訴，其次黃疸亦是胰腺癌的重要癥狀之一，同時(shí)還包括消瘦、乏力、腹部包塊、惡心嘔吐等消化道癥狀、癥狀性糖尿病、腹水、血栓性靜脈炎以及精神癥狀等[14,15]。目前對(duì)于胰腺癌患者的根本治療原則仍然是以手術(shù)治療為主，同時(shí)結(jié)合化療和放療等進(jìn)行綜合治療[16]。但是至今為止胰腺癌的臨床治療預(yù)后仍然不容樂(lè)觀，病死率居高不下[17]。我院為了探討CTCs在胰腺癌患者中的表達(dá)及臨床病理診斷意義，選取了87例胰腺癌患者參與了本次研究。

表2 病理因素對(duì)CTCs的影響 例

表3 CTCs和患者預(yù)后的關(guān)系比較

臨床上是指進(jìn)入了人體外周血液的各類腫瘤細(xì)胞，由于實(shí)體腫瘤病灶的脫落，大部分循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入外周血后出現(xiàn)凋亡或被吞噬，但是還有少數(shù)能夠逃逸并且發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶，大大增加了惡性腫瘤患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)[18]。因此，對(duì)于惡性腫瘤患者的CTCs檢測(cè)對(duì)患者預(yù)后判斷及療效評(píng)價(jià)和個(gè)體化治療均存在極為重要的指導(dǎo)作用。同時(shí)，與腫瘤組織樣本相比血壓樣更容易獲取并且可以反復(fù)采集，具有較好的臨床實(shí)用性，是臨床常規(guī)監(jiān)測(cè)中比較理想的標(biāo)本獲得途徑[19]。本次研究采取免疫磁珠負(fù)性富集和免疫熒光鑒定的方法對(duì)入選患者的CTCs進(jìn)行檢測(cè)，并在患者經(jīng)治療后進(jìn)行定期隨訪以采集患者的臨床資料。根據(jù)我院對(duì)入選患者外周血CTCs的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示87例胰腺癌患者中CTCs在外周血中的檢出率為63.2%(55/87)，其中檢測(cè)到的個(gè)數(shù)為0～212個(gè)，平均有1.97個(gè)/ml。通過(guò)對(duì)病理因素和CTCs的影響分析，顯示腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及侵犯被膜等均和CTCs有相關(guān)性(P<0.05)；并且在CTCs和患者預(yù)后的關(guān)系分析中，顯示入選患者中1年生存率為25.9%中位生存時(shí)間為142.3d，提示了CTCs對(duì)患者的預(yù)后有極大的指示作用，CTCs檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者以及術(shù)后檢測(cè)CTCs數(shù)目上升者多預(yù)后不良。并且隨著胰腺癌患者進(jìn)入中晚期，其外周血CTCs數(shù)目也隨之增多，更容易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)的情況[20]。

綜上所述，CTCs是臨床上胰腺癌患者預(yù)后判斷的重要指標(biāo)之一，對(duì)胰腺癌患者的臨床病理診斷存在非常重要的意義。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.10.017

435200 湖北省陽(yáng)新縣人民醫(yī)院病理科(劉憶華、成善原、李麗、李婷)，消化內(nèi)科(鄭安斌)

鄭安斌，435200 湖北省陽(yáng)新縣人民醫(yī)院消化內(nèi)科；

E-mail:3235750657@qq.com

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1002-7386(2017)10-1502-03

2016-11-16)