鄧桂明,蔣司晨,肖小芹*,成紹武,賀艷萍,陳 鎮(zhèn)，歐陽(yáng)林旗,向 彪，舒圓月

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

咳喘穴位敷貼對(duì)哮喘大鼠肺組織JAK1、STAT6表達(dá)的影響

鄧桂明1,蔣司晨1,肖小芹2*,成紹武2,賀艷萍2,陳 鎮(zhèn)1，歐陽(yáng)林旗1,向 彪1，舒圓月2

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的 觀察咳喘穴位敷貼對(duì)慢性支氣管哮喘大鼠肺組織JAK1、STAT6表達(dá)的影響。方法 將40只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘模型組、咳喘穴位敷貼組、地塞米松組，每組10只。除對(duì)照組外，其余各組采用卵清蛋白致敏并激發(fā)的方法制備慢性支氣管哮喘大鼠模型。造模成功后，咳喘穴位敷貼組大鼠相應(yīng)穴位貼敷咳喘穴位敷貼進(jìn)行干預(yù)治療，地塞米松組大鼠腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液0.5 mg/（kg·d）。治療14 d后取大鼠肺組織，HE染色觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)、Real time PCR檢測(cè)肺組織JAK1和STAT6蛋白及mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 與對(duì)照組相比，哮喘模型組大鼠肺組織可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道內(nèi)有大量分泌物，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂；與哮喘模型組相比，咳喘穴位敷貼組和地塞米松組大鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少、氣道分泌物減少、肺泡排列規(guī)則。與對(duì)照組相比，哮喘模型組大鼠氣道上皮 JAK1、STAT6蛋白和mRNA表達(dá)明顯升高（P<0.01）；與哮喘模型組相比，咳喘穴位敷貼組和地塞米松組大鼠氣道上皮JAK1、STAT6蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.05或P<0.01），JAK1、STAT6 mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.01）。結(jié)論 咳喘穴位敷貼能夠改善支氣管哮喘大鼠支氣管及肺組織炎癥，其機(jī)制可能與降低JAK1、STAT6 mRNA和蛋白表達(dá)有關(guān)。

哮喘；穴位敷貼；JAK1；STAT6；大椎；肺俞；膈俞；腎俞

哮喘，是最常見(jiàn)的慢性疾病之一，目前其發(fā)病率和死亡率仍呈逐年上升趨勢(shì)[1]。哮喘是由多種細(xì)胞（如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等）和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病[2]，其具體發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，目前仍不完全清楚。研究認(rèn)為，哮喘的發(fā)生主要與輔助T淋巴細(xì)胞（Th）的兩種亞型比例失衡，即Th1/Th2免疫調(diào)節(jié)失衡及其參與的細(xì)胞因子分泌異常有關(guān)[3]。JAK（Janus kinase）/STAT（signal transducer and activator of transcription）信號(hào)通路是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)通路，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、免疫等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]。有研究表明，Ⅱ型輔助性T淋巴細(xì)胞亞群（Th2）合成的細(xì)胞因子及其下游的JAK/STAT信號(hào)通路在哮喘中發(fā)揮關(guān)鍵作用[5]。中醫(yī)認(rèn)為哮喘病位主要在肺，與肝腎脾密切相關(guān)，臨床治療主要采用補(bǔ)肺祛邪、平喘固本的方法[6-9]。本研究觀察咳喘穴位敷貼對(duì)支氣管哮喘大鼠 JAK/ STAT信號(hào)通路的影響，初步探討咳喘穴位敷貼治療支氣管哮喘的機(jī)制，為咳喘穴位敷貼臨床應(yīng)用提供現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠40只，雄性，體質(zhì)量（160±10）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2015-0003。飼養(yǎng)條件：自然光照，室溫20～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，自由攝食與飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

咳喘穴位敷貼散由白芥子、麻黃、丁香、肉桂、甘遂、延胡索等組成，所有處方藥材均購(gòu)自湖南新匯制藥股份有限公司，地塞米松磷酸鈉注射液（1 mL∶5 mg，國(guó)藥準(zhǔn)字H41020036，國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司）。

1.3 主要試劑

雞卵清蛋白（美國(guó)Sigma公司）；兔抗大鼠JAK1多克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；兔抗大鼠STAT6多克隆抗體 （博士德生物工程有限公司）；第二代通用型二步法檢測(cè)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；DAB顯色劑(博士德生物工程有限公司)；Trizol RNA提取液、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒（大連Takara公司）。

2 方法

2.1 咳喘穴位敷貼散的制備

將本處方藥材干燥，藥物按處方比例混合后打粉，過(guò)6號(hào)篩，密封袋密封備用。于市場(chǎng)上選購(gòu)老姜，熬成姜汁，濃縮至1 g/mL藥液，冷藏備用。使用時(shí)取咳喘穴位敷貼散粉末加姜汁調(diào)成糊狀，制成1 cm×1 cm，厚度0.3 cm大小的藥餅，用敷貼膠布固定于穴位上。

2.2 哮喘模型建立及分組

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，40只大鼠隨機(jī)取10只為對(duì)照組，其余30只大鼠按文獻(xiàn)記載方法復(fù)制支氣管哮喘大鼠模型[10]，于實(shí)驗(yàn)第1、8天腹腔注射1 mL致敏劑（由卵清蛋白10 mg、AL（OH）3100 mg混于1 mL生理鹽水制成），第15天起開始用2%卵清蛋白生理鹽水溶液霧化激發(fā)致敏，隔天1次，每次20 min，至第56天霧化結(jié)束，共21次。以大鼠出現(xiàn)煩躁，咳嗽、呼吸急促、點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)、站立不穩(wěn)繼而疲倦，伏臥不動(dòng)提示造模成功。最后一次霧化結(jié)束后給實(shí)驗(yàn)大鼠稱質(zhì)量并標(biāo)號(hào)，隨機(jī)分為哮喘模型組、咳喘穴位敷貼組、地塞米松組，每組10只。

2.3 藥物干預(yù)及樣本收集

霧化結(jié)束第2天起，咳喘穴位敷貼組大鼠給予咳喘穴位敷貼散治療，治療選穴為大椎、肺俞（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙），腧穴定位參考李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[11]。醫(yī)用膠布固定，每天治療1次，每次4 h，共治療14 d。地塞米松組大鼠腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液0.5 mg/kg，對(duì)照組及哮喘模型組不給予任何治療。第70天，在末次給藥24 h內(nèi)，給大鼠稱質(zhì)量，用10%水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉，取左肺，于4%多聚甲醛中固定，用于組織形態(tài)學(xué)分析和免疫組織化學(xué)分析；取右肺迅速放入-196℃液氮中保存，用于提取肺組織總RNA。

2.4 指標(biāo)觀察及檢測(cè)

2.4.1 大鼠行為學(xué) 觀察大鼠造模過(guò)程中行為學(xué)變化。

2.4.2 組織學(xué)染色 將肺組織置于4%多聚甲醛溶液中固定48 h，之后移至0.02%疊氮化鈉溶液中4℃保存。進(jìn)行組織學(xué)染色前，將肺組織取出，切成0.2cm厚的組織塊，常規(guī)脫水，石蠟包埋后，切片（4 μm），脫蠟，抗原修復(fù)。完成上述步驟后，進(jìn)行以下染色：進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變。

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠肺組織氣道上皮中JAK1、STAT6蛋白表達(dá)，方法步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。氣道上皮有棕黃色顆粒且著色明顯高于背景者為陽(yáng)性。光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果，分析每張切片肺組織氣道上皮JAK1、STAT6蛋白表達(dá)強(qiáng)度，每張切片隨機(jī)取4個(gè)支氣管視野，用圖像分析系統(tǒng)檢測(cè) JAK1、STAT6蛋白的平均光密度（medial optical density，MOD）值。

2.4.3 Real time PCR檢測(cè)JAK1、STAT6 mRNA的表達(dá) 提取肺組織總RNA，測(cè)RNA濃度，按TaKaRa公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書，采用一步法將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，根據(jù)基因表達(dá)情況將cDNA稀釋適當(dāng)倍數(shù)后按照試劑盒說(shuō)明書，以2 μL cDNA為模板，配好體系后混合，用熒光定量實(shí)時(shí)PCR儀進(jìn)行PCR反應(yīng)擴(kuò)增基因片段，以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參。反應(yīng)條件：95°C預(yù)變性30 s，95°C變性5 s，60°C退火及延伸31 s，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，運(yùn)行熔解曲線程序，分析產(chǎn)物特異性。用7 300 System SDS Software軟件分析數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)各組2-ΔΔCt值，計(jì)算相應(yīng)RQ值，比較各組 mRNA的表達(dá)水平。JAK1及STAT6的引物序列如表1。

表1 JAK1及STAT6的引物序列

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)“±s”表示，當(dāng)方差齊性時(shí)組間比較采用單因素方差分析；當(dāng)方差不齊時(shí)用非參數(shù)檢驗(yàn)（Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)），以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠行為學(xué)變化

對(duì)照組大鼠精神狀況良好，毛發(fā)有光澤，呼吸平穩(wěn)，大小便正常，無(wú)喘息、咳嗽、呼吸困難等哮喘發(fā)作表現(xiàn)。其余組大鼠在造模過(guò)程中出現(xiàn)喘息、咳嗽、煩躁不安、點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)、前肢縮抬、腹式呼吸痙攣、大小便失禁等哮喘發(fā)作表現(xiàn)，隨著卵清蛋白激發(fā)次數(shù)增多，大鼠體質(zhì)量下降、毛發(fā)暗淡無(wú)光澤，激發(fā)后期大鼠越發(fā)疲倦、活動(dòng)減少，繼而伏臥不動(dòng)。

3.2 大鼠支氣管及肺組織病理學(xué)變化

肺組織切片HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組大鼠肺組織及支氣管周圍無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管內(nèi)分泌物少，管壁正常，肺泡形態(tài)規(guī)則；哮喘模型組大鼠肺組織出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道內(nèi)有大量分泌物、肺泡間隔增厚、肺泡腔縮小，甚至可見(jiàn)纖毛上皮細(xì)胞脫落及杯狀細(xì)胞增生現(xiàn)象。與哮喘模型組相比，咳喘穴位敷貼組和地塞米松組大鼠支氣管及肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少、管腔分泌物減少，肺泡排列相對(duì)規(guī)則（圖1），提示咳喘穴位敷貼和地塞米松能夠改善支氣管哮喘大鼠支氣管及肺組織炎癥。

圖1 大鼠肺組織及支氣管病理學(xué)變化（HE×100）

3.3 大鼠肺組織JAK1、STAT6蛋白表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，哮喘模型組大鼠肺組織氣道上皮JAK1、STAT6蛋白陽(yáng)性顆粒明顯增多，JAK1、STAT6蛋白MOD值明顯升高（P<0.01）；與哮喘模型組相比，咳喘穴位敷貼組和地塞米松組氣道上皮JAK1、STAT6蛋白陽(yáng)性顆粒明顯減少，JAK1、STAT6蛋白MOD值明顯降低（P<0.05，P<0.01）。說(shuō)明咳喘穴位敷貼、地塞米松可明顯降低哮喘大鼠肺組織氣道上皮JAK1、STAT6蛋白的表達(dá)。見(jiàn)于表2，圖2-3。

表2 大鼠氣道上皮JAK1和STAT6蛋白的平均光密度（MOD）值 （±s）

表2 大鼠氣道上皮JAK1和STAT6蛋白的平均光密度（MOD）值 （±s）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與哮喘模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

組別對(duì)照組哮喘模型組咳喘穴位敷貼組地塞米松組n 8 8 8 8 JAK1值0.31±0.88 0.49±0.66** 0.41±0.66#0.33±0.55##SAT6蛋白0.37±0.88 0.58±0.96** 0.42±0.13##0.38±0.93##

圖2 大鼠氣道上皮JAK1蛋白表達(dá)（IHC，×40）

圖3 大鼠氣道上皮STAT6蛋白表達(dá)（IHC，×40）

3.4 大鼠肺組織JAK1、STAT6 mRNA表達(dá)

Real time PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，哮喘模型組大鼠肺組織JAK1、STAT6 mRNA表達(dá)水平升高（P<0.01）；與哮喘模型組相比，咳喘穴位敷貼組和地塞米松組大鼠肺組織JAK1、STAT6mRNA表達(dá)水平降低（P<0.01），見(jiàn)表3。

表3 大鼠肺組織JAK1、STAT6 mRNA表達(dá)量 （RQ值，±s，n=8）

表3 大鼠肺組織JAK1、STAT6 mRNA表達(dá)量 （RQ值，±s，n=8）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與哮喘模型組比較，##P<0.01。

組別對(duì)照組哮喘模型組咳喘穴位敷貼組JAK1 0.26±0.96 1.66±0.96** 0.89±0.68##STAT6 0.32±0.66 0.58±0.52* 0.42±0.95#地塞米松組0.37±0.22##*#0.38±0.75##

4 討論

哮喘是一種常見(jiàn)的慢性氣道炎癥性疾病，其發(fā)病原因包括遺傳因素和激發(fā)因素。氣道慢性炎癥導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性，在天氣變化、運(yùn)動(dòng)、勞累等情況下通常出現(xiàn)可逆性氣流受限，并引起反復(fù)發(fā)作性的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀[12]。哮喘模型大鼠肺組織病理改變形式主要是慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，表現(xiàn)為肺泡內(nèi)、支氣管壁及管周有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、支氣管黏膜水腫、分泌物增多等[13]，本研究采用卵清蛋白致敏并激發(fā)的方法制備大鼠慢性哮喘模型，根據(jù)大鼠的行為學(xué)改變和肺組織病理改變證明造模成功。

本研究采用的咳喘穴位敷貼為湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床應(yīng)用二十余年的醫(yī)院制劑，主要由白芥子、麻黃、丁香、肉桂、甘遂、延胡索等藥組成，全方具有祛風(fēng)散寒，宣肺平喘，化痰止咳之功。長(zhǎng)期用于預(yù)防及治療支氣管哮喘及慢性支氣管炎等呼吸系統(tǒng)疾病。本研究肺組織病理檢查結(jié)果顯示咳喘穴位敷貼可改善大鼠肺組織和支氣管慢性炎癥。

Th淋巴細(xì)胞是慢性氣道炎癥反應(yīng)中的重要調(diào)節(jié)細(xì)胞，可分為Th1和Th2細(xì)胞兩個(gè)亞群。目前關(guān)于哮喘的機(jī)制研究認(rèn)為Th1/Th2可能是慢性氣道炎癥的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的核心。在Th1占優(yōu)勢(shì)時(shí)，炎癥局限；當(dāng)Th2占優(yōu)勢(shì)時(shí)，肺組織炎性浸潤(rùn)擴(kuò)散[3,12]。既往研究表明，在支氣管哮喘發(fā)病過(guò)程中，Th1型細(xì)胞減弱，Th2型細(xì)胞效應(yīng)增強(qiáng)[14-15]。JAK/STAT信號(hào)通路由酪氨酸激酶JAK家族及轉(zhuǎn)錄因子STAT家族構(gòu)成，是細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要途徑之一，不僅參與炎癥反應(yīng)，同時(shí)也與細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等密切相關(guān)。STAT家族是JAKs下游的一類靶蛋白[16-18]。羅卿等[19]的研究證實(shí)，JAK1的表達(dá)與Th2型細(xì)胞合成的炎癥介質(zhì)II-4的濃度呈正相關(guān)，證明JAK調(diào)控IL-4表達(dá)增加，可能與哮喘的炎癥反應(yīng)有關(guān)。有研究表明，支氣管黏膜中的Th2型細(xì)胞合成的炎癥介質(zhì)（尤其是IL-4和IL-13）作為上游刺激因子激活JAK/STAT6通路后可誘導(dǎo)STAT6磷酸化，參與杯狀細(xì)胞化生，導(dǎo)致黏液過(guò)量分泌，同時(shí)使血清中IgE含量增加，其中IgE含量與哮喘嚴(yán)重程度相關(guān)[20]。也有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，STAT6信號(hào)通路能夠影響Th2細(xì)胞的功能效應(yīng)，當(dāng)STAT6通路激活后，檢測(cè)到小鼠BALF中的IL-4、IL-5、IL-13水平明顯升高，而這些因子的升高正體現(xiàn)Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答[21-23]。本研究也發(fā)現(xiàn)，相比于對(duì)照組，慢性支氣管哮喘模型大鼠氣道上皮JAK1、STAT6的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，提示JAK/STAT信號(hào)通路在哮喘的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

陳曉紅等[24]研究表明，布地奈德可能通過(guò)下調(diào)肺組織JAK1和STAT6的表達(dá)，抑制IL-4、IL-13的升高，從而抑制了依賴于JAKl/STAT6通路的氣道重塑。孫洋等[25]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)肺平喘湯可有效改善支氣管哮喘大鼠Th1/Th2細(xì)胞因子失衡，降低JAK1、STAT6表達(dá)從而進(jìn)一步抑制Th2型免疫而達(dá)到緩解支氣管哮喘的目的。在我們前期的研究中發(fā)現(xiàn)，咳喘穴位敷貼能夠調(diào)節(jié)哮喘大鼠Th1/Th2免疫平衡，改善炎癥反應(yīng)[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，與哮喘模型組大鼠相比，咳喘穴位敷貼組大鼠JAK1、STAT6 mRNA和蛋白均顯著下調(diào)。綜上所述，推測(cè)咳喘穴位敷貼對(duì)哮喘大鼠的治療作用機(jī)制可能與JAK/STAT信號(hào)通路有關(guān)?？却ㄎ环筚N可能是通過(guò)下調(diào)JAK1/ STA6而降低Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答，從而改善Th1/Th2免疫平衡，進(jìn)而緩解哮喘癥狀。但咳喘穴位敷貼的具體治療作用機(jī)制是否是以此過(guò)程進(jìn)行仍有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

[1]Pocket Guide for Asthma Management and Prevention.Global Initiative for Asthma(GINA)[J].2011.Availahle from http:// www.ginasthma.

[2]葛均波,徐永健.內(nèi)科學(xué)[M].第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:28.

[3]Deo SS,Mistry KJ,Kakade AM,et al.Role played by Th2 type cytokines in IgE mediated allergy and asthma[J].Lung India,2010,27(2):66-71.

[4]王俊巖,張 林,賈連群，等.滋陰熄風(fēng)方對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎臟JAK/STAT信號(hào)通路的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2016,39(1): 30-34.

[5]Suzuki S,Watanabe S,Sato M,et al.Effects of a Janus kinase inhibitor,pyridone 6,on airway responses in a murine model of asthma[J].Biochem Biophys Res Commun,2011，404(1):261-267.

[6]付 鈺,張 昶,王寶凱，等.針刺從肺腸論治對(duì)支氣管哮喘患者中醫(yī)癥狀的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,36(4):272-276.

[7]張文瑞,楊 爽,王盛隆，等.支氣管哮喘中醫(yī)證候及治療研究[J].吉林中醫(yī)藥,2015,35(5):463-466.

[8]劉建秋,夏廣彬,李竹英.支氣管哮喘緩解期的中醫(yī)藥治療[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(4):570-571.

[9]謝晟潔,徐鳳勵(lì),張 峻.金匱腎氣湯聯(lián)合冬病夏治穴位貼敷治療支氣管哮喘緩解期[J].吉林中醫(yī)藥,2015,35(1):37-39.

[10]李 輝,吳振字,張 云，等.消喘膏穴位貼敷對(duì)卵蛋白誘發(fā)哮喘大鼠Thl/Th2的調(diào)節(jié)作用 [J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,35(9): 623-625.

[11]李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2007:325-326.

[12]喬 明.穴位貼敷對(duì)哮喘大鼠肺組織中T-bet、GATA-3 mRNA表達(dá)的影響[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué),2014.

[13]蘇莉莉,張先欣,伊洪莉,等.輕、中度持續(xù)性哮喘患者氣道黏膜病理變化及與嗜中性粒細(xì)胞的關(guān)系[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,45 (7):692-696.

[14]甘 兵,鐘 聲,張洪浩,等.白三烯受體拮抗劑對(duì)支氣管哮喘患者Th1/Th2平衡及肺功能的影響[J].臨床肺科雜志,2012,17(4):717-718.

[15]李 惠,鄒立華,陳小丹,等.參麥注射液對(duì)支氣管哮喘患者Th1/ Th2免疫平衡的影響研究[J].臨床肺科雜志,2012,17(5):797-799. [16]田燕歌,李 亞,李建生,等.調(diào)補(bǔ)肺腎法對(duì)COPD大鼠JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響及遠(yuǎn)后效應(yīng)[J].中國(guó)中藥雜志,2013,38(1):75-79.

[17]Kiu H,Nicholson SE.Biology and significance of the JAK/STAT signaling Pathways[J].Growth Factors,2012,30(2):88-106.

[18]許光蘭,趙 媚,李 嬌,等.JAK/STAT信號(hào)通路在慢性呼吸系統(tǒng)疾病中的研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志,2016,43（7）:1549-1553.

[19]羅 卿,譚小武,何振華,等.支氣管哮喘豚鼠肺組織中蛋白酪氨酸激酶JAK1及白細(xì)胞介素-4的表達(dá)[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2008,24 (16):2757-2758.

[20]O′Shea JJ,Plenge R.JAK and STAT signaling molecules in immunoregulation and immune‐mediated disease[J].Immunity, 2012,36(4):542-550.

[21]Kurowska-Stolarska M,Kewin P,Murphy G,et al.IL-33 induces antigen-specific IL-5+T cells and promotes allergic induced airway inflammation independent of IL-4[J].J Immunol, 2008,181:4780-4790.

[22]Goswami R,Jabeen R,Yagi R,et al.STAT6-dependentregulation of Th9 development[J].J Immunol,2012,188:968-975.

[23]Szanto A,Balint BL,Nagy ZS,et al.STAT6 transcription factor is a facilitator of the nuclear receptor PPARγ-regulated gene expression in macrophages and dendritic cells[J].Immunity 2010,33:699-712.

[24]陳曉紅,鐘南山,張衛(wèi)東,等.布地奈德對(duì)哮喘小鼠氣道重塑及JAK1/ STAT6表達(dá)的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2007,87(23),1627-1632.

[25]孫 洋,閔冬雨.補(bǔ)肺平喘湯對(duì)支氣管哮喘大鼠Th1/Th2失衡及JAK/STAT信號(hào)通路影響[J].吉林中醫(yī)藥,2016,36（10）:1039-1041.

[26]肖小芹,賀艷萍,鄧桂明,等.咳喘穴位敷貼對(duì)哮喘大鼠Th1/Th2免疫平衡的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2016,36（5）:6-9,45.

（本文編輯 匡靜之）

Influence of Kechuan Acupoint Application on the Expression of JAK1 and STAT6 in Lung Tissue of Asthmatic Rats

DENG Guiming1,JIANG Sichen1,XIAO Xiaoqin2*,CHENG Shaowu2,HE Yanping2,CHEN Zhen1, Ouyang Linqi1,XIANG Biao1,SHU Yuanyue2
(1.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;2.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

Objective To observe the influence of Kechuan acupoint application therapy on the expression of JAK1, STAT6 in the lung tissue of asthmatic rats.Methods The 40 male SD rats were randomly divided into control group,asthma model group,acupoint application group and dexamethasone group,10 rats in each group.Except the control group, bronchial asthma model rats in other groups were sensitized and stimulated by ovalbumin.After succesfully building the asthma model rats,was established,the rats were treated by Kechuan acupoint application.The rats in dexamethasone group were intraperitoneally injected with dexamethasone 0.5 mg/（kg·d）.The lung tissues were taken after treatment of 14 d.At the end of therapy,the histopathological change in lung tissues was detected by HE staining.The protein expression of JAK1 and STAT6 were analyzed by immunohistochemical staining.The mRNA expression of JAK1 and STAT6 were determined by real time PCR.Results Compared with control group,the lung tissue of asthmatic model group showed a lot of inflammatory cells infiltration,increased airway secretions and disorder alveolar structure.Compared with the asthma model group,the lung tissueof Kechuan acupoint acupoint group and dexamethasone group showed decreased inflammatory cells infiltration,less airway secretions and regular alveolar structure.Compared with control group,the protein and mRNA expression of JAK1 and STAT6 in rats of asthma model group increased significantly(P<0.01，P<0.01).Compared with asthma model group,the protein expression of JAK1 and STAT6(P<0.05 or P<0.01)in rats of Kechuan acupoint application group and dexamethasone group decreased,the mRNA expression of JAK1 and STAT6 mRNA down-regulated (P<0.01).Conclusion Kechuan acupoint application could imporve bronchial and lung tissue inflammation in asthmatic rats,the mechanism may be related to decreasing mRNA and protein expression of JAK1 and STAT6.

asthma;acupoint application;JAK1;STAT6；Dazhui point；Feishu point；pisvrts shenshu point

R244.9；R56

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.05.014

2016-11-29

湖南省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目（13A067）；湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（201443）。

鄧桂明，女，博士(后)，副主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥學(xué)研究。

*肖小芹,男，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師,E-mail:705500732@qq.com。

本文引用：鄧桂明,蔣司晨,肖小芹,成紹武,賀艷萍,陳 鎮(zhèn)，歐陽(yáng)林旗,向 彪，舒圓月.咳喘穴位敷貼對(duì)哮喘大鼠肺組織JAK1、STAT6表達(dá)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,37(5):514-518.