沈曉璞 李秀典 李 冀

(1 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱,150040; 2 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,哈爾濱,150001)

穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠相關(guān)炎性因子的影響

沈曉璞1,2李秀典2李 冀1

(1 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱,150040; 2 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,哈爾濱,150001)

目的:觀察穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠心肌酶指標(biāo)CK-MB、cTnI以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平、白介素-6(IL-6)的影響,探討穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠相關(guān)炎性因子的影響。方法:將70只SD大鼠隨機(jī)分成隨機(jī)分7組,每組10只,分別為假手術(shù)組、模型組、預(yù)處理組、穩(wěn)心丹1∶1∶1組、穩(wěn)心丹1∶2∶1組、穩(wěn)心丹1∶1∶2組、穩(wěn)心丹2∶1∶1組。灌胃14 d后,以結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)后再?gòu)?fù)灌建立心肌缺血再灌注模型。全自動(dòng)生化儀測(cè)定CK-MB含量,ELISA法檢測(cè)cTnI、TNF-α、IL-6含量。結(jié)果:模型組大鼠血清中CK-MB、cTnI含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的心肌酶指標(biāo)都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組CK-MB下降最明顯;模型組大鼠血清中TNF-α、IL-6含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的TNF-α、IL-6含量都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組TNF-α、IL-6下降最明顯。結(jié)論:穩(wěn)心丹可降低MIRI大鼠血清CK-MB、cTnI以及TNF-α、IL-6含量而產(chǎn)生抗炎作用。

穩(wěn)心丹;心肌缺血再灌注;TNF-α、IL-6

冠狀動(dòng)脈缺血性心臟病是一種十分常見(jiàn)的心血管疾病,其中以急性心肌梗死(AMI)為原因的死亡率高達(dá)50%。因此,對(duì)冠心病的有效防治,特別是對(duì)AMI的治療,儼然成為心血管界的研究熱點(diǎn)。醫(yī)療界目前公認(rèn)的治療AMI最有效的原則是盡早恢復(fù)血液復(fù)灌。但大量研究表明,在發(fā)生心肌急性缺血再灌注時(shí),不僅不能恢復(fù)心肌組織正常的生理功能,反而會(huì)加重心肌損傷的程度,產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的損傷,這種現(xiàn)象被稱為心肌缺血再灌注損傷(Myocardial Ischemia-reperfusion Injury,MIRI),嚴(yán)重影響患者的預(yù)后[1]。因此,如何有效預(yù)防及減輕缺血后再灌注損傷,對(duì)臨床工作有非常重要的意義。臨床上治療心肌缺血的中藥、西藥種類繁多,尤其是中藥在心肌缺血再灌注損傷的糾正及治療方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

中醫(yī)學(xué)中并沒(méi)有心肌缺血再灌注這一病名,但其臨床癥狀與“胸痹”“心痛”等一類病證表現(xiàn)相似。穩(wěn)心丹以尖葉假龍膽、丹參、當(dāng)歸配伍而成,為火邪熱結(jié),心血瘀阻病機(jī)所致胸痹心痛而設(shè)。尖葉假龍膽味苦,性涼。有清熱利濕,利膽退黃之功效,鄂侖春族常用尖葉假龍膽代茶飲防治心血管疾病,確有療效[2]。丹參苦,微寒。入心、心包、肝經(jīng),有袪瘀止痛,活血調(diào)經(jīng),涼血消癰,養(yǎng)血安神,清心除煩之功效,臨床應(yīng)用較多,效果顯著。當(dāng)歸味甘,性溫,入心、肝、脾經(jīng),有補(bǔ)血和血,調(diào)經(jīng)止痛,潤(rùn)燥滑腸之功效。章春艷等[3]發(fā)現(xiàn)丹參多酚酸鹽對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型大鼠有心肌保護(hù)作用，丹參酮ⅡA對(duì)缺血再灌注損傷的心肌具有保護(hù)作用。韓乃巍等[4]研究發(fā)現(xiàn)丹參可以通過(guò)增加血清中磷酸肌酸激酶、乳酸脫氫酶的活性,對(duì)受損心肌起保護(hù)作用。諸藥配伍,共奏清心除煩、活血化瘀之功效。已有的研究表明穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠有明顯的心肌保護(hù)作用,其機(jī)制可能與抗細(xì)胞凋亡有關(guān)[5]。李冀等[6]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,尖葉假龍膽可使血清中TXB2的含量減低,升高6-酮-PGF1α的含量,從而對(duì)MIRI大鼠的心肌細(xì)胞起保護(hù)作用。呂麗娟等[7]研究顯示尖葉假龍膽有效成分能夠?qū)θ毖募〖?xì)胞起保護(hù)作用。武海軍等[8]實(shí)驗(yàn)研究表明,尖葉假龍膽中的有效成分維菊葉龍膽酮(Bellidifolin)可以減慢大鼠心率,延長(zhǎng)P波時(shí)間,延長(zhǎng)Q-T間期和QRS時(shí)限,縮短P-R間期。提示尖葉假龍膽可以抵抗心律失常的發(fā)生。翟亞?wèn)|[9]通過(guò)研究尖葉假龍膽對(duì)離體心肌缺血再灌注損傷模型大鼠干預(yù)作用發(fā)現(xiàn),尖葉假龍膽對(duì)缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。其證明尖葉假龍膽能夠明顯減低血清中肌酸激酶同工酶、乳酸脫氫酶的含量以及心肌中丙二醛的含量;提高±dp/dtmax、RPP;提高谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氨酶、MDH、ATP的濃度,緩解水腫。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)穩(wěn)心丹對(duì)MIRI模型大鼠心肌酶指標(biāo)CK-MB、cTnI以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平、白介素-6(IL-6)的影響,從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度初步探討其治療心肌缺血再灌注的作用機(jī)制及最佳配伍比例。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)SD大鼠70只(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供),雌雄各半,體重180～220 g、動(dòng)物許可證號(hào)為:SCXK(黑)2015004。

1.1.2 藥物 穩(wěn)心丹藥物由尖葉假龍膽、丹參、當(dāng)歸按一定比例配伍而成。本實(shí)驗(yàn)用尖葉假龍膽選購(gòu)于內(nèi)蒙古根河市,經(jīng)鑒定為龍膽科假龍膽屬尖葉假龍膽干燥全草;丹參,當(dāng)歸由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥局提供。將尖葉假龍膽、丹參、當(dāng)歸按照各組配伍比例(1∶1∶1、1∶2∶1、1∶1∶2、2∶1∶1)用75%乙醇(乙醇體積為生藥材20倍量的體積)浸泡10 h,加熱回流提取2次,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓干燥,回收乙醇,濃縮,至含生藥量1 g/mL的濃縮液,進(jìn)行配制,各組灌胃給予穩(wěn)心丹總生藥量為6 g/kg(大鼠模型的給藥量根據(jù)臨床成人劑量按體表面積折算而成)。

1.1.3 試劑與儀器 肌酸激酶同工酶MB測(cè)定試劑盒:中生北控生物科技股份有限公司;大鼠心肌肌鈣蛋白I(cTnI)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒:南京建成生物工程研究所;TTC(氯化三苯基四氮唑):美國(guó)Sigma公司;氨基甲酸乙酯(烏拉坦):上海化學(xué)試劑公司;鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒:南京建成生物工程研究所;大鼠白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒:南京建成生物工程研究所;大鼠白細(xì)胞介素-6(IL-6)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒:南京建成生物工程研究所;大鼠白細(xì)胞介素-10(IL-10)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒:南京建成生物工程研究所;HX-200動(dòng)物呼吸機(jī):成都泰盟科技有限公司;AL204型電子分析天平:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海亞榮生化儀器廠;KDL40型低速離心機(jī):科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司;Glamour 2000型全自動(dòng)生化儀:美國(guó)M.D.儀器公司;MedLab型多道生物信號(hào)分析系統(tǒng):成都泰盟科技有限公司;電子恒溫水浴鍋:DK98-1;精密天平:瑞士賽多利斯;HH-501型恒溫水浴鍋:華普達(dá)公司;BL-420S生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):成都泰盟科技有限公司;TECAN Infinte M200 PRO多功能酶標(biāo)儀:瑞士TECAN公司。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將70只SD大鼠隨機(jī)分7組,每組10只,分別為假手術(shù)組、模型組、預(yù)處理組、穩(wěn)心丹1∶1∶1組、穩(wěn)心丹1∶2∶1組、穩(wěn)心丹1∶1∶2組、穩(wěn)心丹2∶1∶1組。大鼠術(shù)前12 h禁食,自由飲水。末次灌胃給藥2 h后給予腹腔注射25%烏拉坦麻醉,于手術(shù)臺(tái)上仰臥固定,連接BL420S生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),開(kāi)始記錄心電圖。消毒頸部及胸部皮膚,快速在頸部分離皮膚肌肉,將氣管暴露,剪一T型切口,實(shí)行氣管插管術(shù),連接小動(dòng)物呼吸機(jī)以進(jìn)行輔助呼吸(參數(shù)設(shè)置:潮氣量15 mL/kg、呼吸比2∶1,呼吸頻率50次/min)。于胸骨左側(cè)心臟搏動(dòng)處稍偏左剪開(kāi)2 cm左右縱切口,分離肌肉組織,剪斷第3～5根肋骨,打開(kāi)心包膜,使心臟暴露,于左心耳下緣及肺動(dòng)脈圓錐間進(jìn)針,用3/0號(hào)無(wú)創(chuàng)縫合針穿過(guò)冠狀動(dòng)脈左前降支心肌表層約0.2 cm后穿出,打一手術(shù)方結(jié),迅速將心臟置回原位,閉合胸腔,用生理鹽水沾濕的無(wú)茵紗布將手術(shù)區(qū)覆蓋,止血鉗閉合術(shù)區(qū)皮膚,以防氣胸。觀察心電圖,若出現(xiàn)ST段弓背上抬或壓低證明心肌缺血成功,30 min后松開(kāi)結(jié)扎線,再灌注復(fù)流60 min,觀測(cè)心電圖,出現(xiàn)上抬的ST段下降50%以上或高聳的T波下降表示造模成功。預(yù)處理組采用左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎4次,缺血5 min/次,復(fù)流5 min/次的方法,之后操作與模型組相同;假手術(shù)組只打開(kāi)胸腔,在相同位置處穿線,不結(jié)扎。剔除造模未成功、死亡的大鼠。實(shí)驗(yàn)各組選取8只進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

1.2.2 給藥方法 穩(wěn)心丹配伍比例組按總生藥量6 g/kg提前連續(xù)灌胃給藥14 d;模型組給予等體積的生理鹽水,提前連續(xù)灌胃14 d;假手術(shù)組給予等體積的生理鹽水,提前連續(xù)灌胃14 d;預(yù)處理組給予等體積的生理鹽水,提前連續(xù)灌胃14 d。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 MIRI模型大鼠CK-MB的測(cè)定 造模成功后,腹主動(dòng)脈采血,靜置1 h,用低速離心機(jī)離心,設(shè)定轉(zhuǎn)速3 500 r/min,進(jìn)行離心10 min,取上層血清,待測(cè)。檢測(cè)步驟:空白管與樣品管分別混合均勻,在37 ℃環(huán)境下溫育10 min?？瞻坠苡糜谶M(jìn)行校準(zhǔn)調(diào)零,上Gimour 2000型全自動(dòng)生化儀,測(cè)定肌酸激酶同工酶CK-MB的含量。見(jiàn)表1。

表1 CK-MB待測(cè)樣品配比劑量(mL)

注:波長(zhǎng):340 nm,溫度:37 ℃,比色杯光徑:1 cm。

1.2.3.2 MIRI模型大鼠cTnI的測(cè)定 造模成功后,腹主動(dòng)脈采血,靜置1 h,用低速離心機(jī)離心,設(shè)定轉(zhuǎn)速3 500 r/min,進(jìn)行離心10 min,取上層血清,待測(cè)。cTnI含量檢測(cè)步驟:1)按比例稀釋原倍標(biāo)準(zhǔn)品。見(jiàn)表2。2)加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品與空白孔均做復(fù)孔?？瞻卓字患尤腼@色劑A&B與終止液,其余操作與各孔均相同;標(biāo)準(zhǔn)品孔滴入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品、50 μL鏈霉素-HRP;樣品孔滴入40 μL樣品、10 μL抗cTnI抗體與50 μL鏈霉親和素-HRP,表面覆蓋封板膜,輕混震蕩搖勻,靜置于37 ℃水浴中1 h;洗板5次;先后滴入顯色劑A、B各50 μL,混勻,37 ℃環(huán)境下閉光放置10 min;滴入終止液50 μL;空白孔調(diào)零操作,設(shè)定波長(zhǎng)為450 nm,10 min內(nèi)讀OD值;計(jì)算出cTnI濃度。

表2 cTnI待測(cè)樣品配比劑量

1.2.3.3 MIRI模型大鼠TNF-α的測(cè)定 造模成功后,腹主動(dòng)脈采血,置于試管架中靜置1 h,用KDL-40型低速離心機(jī)離心,轉(zhuǎn)數(shù)設(shè)定為3 500 r/min,離心10 min,取上層血清,待測(cè)。操作程序:1)將原倍標(biāo)準(zhǔn)品按比例進(jìn)行稀釋。見(jiàn)表3。2)加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品與空白孔均做復(fù)孔?？瞻卓字患尤腼@色劑A&B與終止液,其余操作與各孔均相同;標(biāo)準(zhǔn)品孔滴入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品、50 μL鏈霉素-HRP;樣品孔滴入40 μL樣品、10 μL抗TNF-α抗體與50 μL鏈霉親和素-HRP,表面覆蓋封板膜,輕混震蕩搖勻,靜置于37 ℃水浴中1 h;洗板5次;先后滴入顯色劑A、B各50 μL,混勻,37 ℃環(huán)境下閉光放置10 min;滴入終止液50 μL;空白孔調(diào)零操作,設(shè)定波長(zhǎng)為450 nm,10 min內(nèi)讀OD值;計(jì)算出TNF-α濃度。

表3 TNF-α待測(cè)樣品配比劑量

1.2.3.4 MIRI模型大鼠IL-6的測(cè)定 造模成功后,腹主動(dòng)脈采血,置于試管架中靜置1 h,用KDL-40型低速離心機(jī)離心,轉(zhuǎn)數(shù)設(shè)定為3 500 r/min,離心10 min,取上層血清,待測(cè)。操作程序:1)將原倍標(biāo)準(zhǔn)品按比例進(jìn)行稀釋。見(jiàn)表4。2)加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品與空白孔均做復(fù)孔?？瞻卓字患尤腼@色劑A&B與終止液,其余操作與各孔均相同;標(biāo)準(zhǔn)品孔滴入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品、50 μL鏈霉素-HRP;樣品孔滴入40 μL樣品、10 μL抗IL-6抗體與50 μL鏈霉親和素-HRP,表面覆蓋封板膜,輕混震蕩搖勻,靜置于37 ℃水浴中1 h;洗板5次;先后滴入顯色劑A、B各50 μL,混勻,37 ℃環(huán)境下閉光放置10 min;滴入終止液50 μL;空白孔調(diào)零操作,設(shè)定波長(zhǎng)為450 nm,10 min內(nèi)讀OD值;計(jì)算出IL-6濃度。

表4 IL-6待測(cè)樣品配比劑量

2 結(jié)果

2.1 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI模型大鼠CK-MB的影響 由表5、圖1可見(jiàn),模型組大鼠血清中CK-MB含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的心肌酶指標(biāo)都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組CK-MB下降最明顯;在各配伍比例組中,其余各組與1∶2∶1組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);綜上可見(jiàn),說(shuō)明1∶2∶1組對(duì)心肌酶CK-MB的作用效果最好,能夠顯著降低MIRI大鼠血清中CK-MB含量,而且優(yōu)于預(yù)處理組及其他穩(wěn)心丹配伍比例組。

表5 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中CK-MB活性的影響

注:與假手術(shù)組比較,**P<0.01；與模型組比較,△△P<0.01；與1∶2∶1組比較,▲▲P<0.01。

圖1 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中CK-MB活性的影響

2.2 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI模型大鼠cTnI的影響 由表6、圖2可見(jiàn),模型組大鼠血清中cTnI含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的心肌酶指標(biāo)都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組cTnI下降最明顯;在各配伍比例組中,其余各組與1∶2∶1組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);綜上可見(jiàn),說(shuō)明1∶2∶1組對(duì)cTnI的作用效果最好,能夠顯著降低MIRI大鼠血清中cTnI含量,而且優(yōu)于預(yù)處理組及其他穩(wěn)心丹配伍比例組。

表6 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中cTnI含量的影響

注:與假手術(shù)組比較,**P<0.01；與模型組比較,△△P<0.01；與1∶2∶1組比較,▲▲P<0.01。

圖2 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中cTnI含量的影響

2.3 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI模型大鼠TNF-α的影響 由表7、圖3可見(jiàn),模型組大鼠血清中TNF-α含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的TNF-α含量都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組TNF-α下降最明顯;在各配伍比例組中,其余各組與1∶2∶1組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);綜上可見(jiàn),說(shuō)明1∶2∶1組對(duì)TNF-α的作用效果最好,能夠顯著降低MIRI大鼠血清中TNF-α含量,而且優(yōu)于預(yù)處理組及其他穩(wěn)心丹配伍比例組。

表7 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中TNF-α含量的影響

注:與假手術(shù)組比較,**P<0.01；與模型組比較,△△P<0.01；與1∶2∶1組比較,▲▲P<0.01。

圖3 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中TNF-α含量的影響

2.4 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI模型大鼠IL-6的影響 由表4、圖4可見(jiàn),模型組大鼠血清中IL-6含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的IL-6含量都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組IL-6下降最明顯;在各配伍比例組中,其余各組與1∶2∶1組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);綜上可見(jiàn),說(shuō)明1∶2∶1組對(duì)IL-6的作用效果最好,能夠顯著降低MIRI大鼠血清中IL-6含量,而且優(yōu)于預(yù)處理組及其他穩(wěn)心丹配伍比例組。

表8 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中IL-6含量的影響

注:與假手術(shù)組比較,**P<0.01；與模型組比較,△△P<0.01；與1∶2∶1組比較,▲▲P<0.01。

圖4 穩(wěn)心丹對(duì)MIRI大鼠血清中IL-6活性的影響

3 討論

近年來(lái),缺血心肌再灌注治療技術(shù)得到廣泛應(yīng)用,挽救了大量的冠心病患者的生命,但其引起的心肌損傷是影響其療效的一大弊端。伴隨對(duì)MIRI機(jī)制的深入研究,人們不斷尋找防治心肌缺血再灌注損傷的方法,中醫(yī)藥在這方面也逐漸開(kāi)展了一些臨床和實(shí)驗(yàn)研究,并取得一定進(jìn)展。

心臟內(nèi)存在大量酶類物質(zhì)以維持其正常生理功能,心肌缺氧缺血時(shí),心肌內(nèi)含有的酶大量釋放,血清中心肌酶濃度升高。在不同的病程階段,心肌酶含量與病程長(zhǎng)短及嚴(yán)重程度相關(guān),因此,檢測(cè)血液中心肌酶的濃度,并觀察其變化對(duì)診斷具有較大意義。CK-MB是肌酸激酶CK的同工酶中的一種,其特異性和敏感性均較高,檢測(cè)其活性可用于診斷急性心肌梗死,是確定有無(wú)心肌壞死的一項(xiàng)重要指標(biāo)。通過(guò)與心肌肌鈣蛋白I(cTnI)同時(shí)檢測(cè),可幫助診斷疾病的發(fā)生。

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是由結(jié)構(gòu)和功能不同的3種亞單位(Tn C、Tn T、TnI)組成的蛋白復(fù)合物,主要參與心肌細(xì)胞收縮中Ca2+的激活調(diào)節(jié)過(guò)程。心肌細(xì)胞缺氧缺血過(guò)程中,肌鈣蛋白大量分泌,是一種特異性極強(qiáng)、靈敏度極高、發(fā)病后出現(xiàn)較早的用于心肌損傷診斷的血清標(biāo)志物。在臨床中與血清CK-MB聯(lián)合應(yīng)用診斷,具有較高的臨床參考價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)中,穩(wěn)心丹各配伍比例組CK-MB、cTnI的含量較模型組明顯下降,其中穩(wěn)心丹1∶2∶1組效果最為顯著。說(shuō)明用穩(wěn)心丹各配伍比例組進(jìn)行干預(yù)心肌缺血再灌注損傷可降低CK-MB、cTnI的釋放,對(duì)心肌具有保護(hù)作用。

TNF-α是一類與炎性反應(yīng)具有緊密聯(lián)系的具有多種生物學(xué)效應(yīng)的活性細(xì)胞因子,有2種存在形式:TNF-α和TNF-β,均具有著炎性反應(yīng)活性。在發(fā)生炎性反應(yīng)的過(guò)程中,TNF-α的表達(dá)量明顯提高,炎性因子的大量釋放是導(dǎo)致機(jī)體組織受損的主要原因之一,作為主要的炎性因子,TNF-α具有極其廣泛的生物學(xué)效應(yīng),可以誘導(dǎo)其他多種炎性因子表達(dá)上調(diào)[10],且主要在心血管疾病中起作用。其主要生物學(xué)功能包含抗腫瘤、抗病毒、抗纖維化,抗氧化,影響細(xì)胞凋亡,調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)與分化,誘發(fā)炎性反應(yīng)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等。應(yīng)激狀態(tài)下,TNF-α在心肌細(xì)胞中持續(xù)大量表達(dá),通過(guò)多種途徑影響心肌功能,激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng),造成對(duì)心肌細(xì)胞的炎性損傷[11-12]。

白介素家族(Interleukin,IL):白細(xì)胞介素是指由各種白細(xì)胞產(chǎn)生的能夠介導(dǎo)細(xì)胞之間相互作用的細(xì)胞因子。目前醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的白介素有18個(gè),分別以IL-1～18命名。主要與炎性反應(yīng)相關(guān)的包括1、4、6、8、10、13。IL-6作用廣泛,被稱為是白細(xì)胞介素家族中的“核心成員”,具有多種生物活性,參于應(yīng)激反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié),其在炎性反應(yīng)過(guò)程中起主要調(diào)節(jié)作用。IL-6不僅可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)本身,并且廣泛作用于心血管、內(nèi)分泌和神經(jīng)等系統(tǒng)。有研究顯示,IL-6在心肌細(xì)胞中的分泌直接由缺血及再灌注誘導(dǎo)[13]。另有研究證實(shí),IL-6基因表達(dá)的多樣性可以對(duì)機(jī)體炎性反應(yīng)、免疫反應(yīng)程度產(chǎn)生影響,是冠狀動(dòng)脈斑塊炎性反應(yīng)的主要局部和循環(huán)標(biāo)記物,是公認(rèn)的冠心病發(fā)病的重要候選基因之一[14]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示,模型組大鼠血清中TNF-α、IL-6含量明顯升高,與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,各觀察組的TNF-α、IL-6含量都有改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中1∶2∶1組TNF-α、IL-6下降最明顯;在各配伍比例組中,其余各組與1∶2∶1組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);綜上可見(jiàn),說(shuō)明1∶2∶1組對(duì)TNF-α、IL-6的作用效果最好,能夠顯著降低MIRI大鼠血清中TNF-α、IL-6含量,而且優(yōu)于預(yù)處理組及其他穩(wěn)心丹配伍比例組,減輕心肌缺血再灌注的炎性反應(yīng),從而起到保護(hù)心肌的作用。

本實(shí)驗(yàn)研究證明,穩(wěn)心丹1∶2∶1組能明顯抑制心肌缺血再灌注損傷模型大鼠CK-MB、cTnI的釋放,降低炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的含量,從而減輕炎性反應(yīng),對(duì)心肌缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用。其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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(2017-03-17收稿 責(zé)任編輯：王明)

Effect of Wen Xin Dan on Inflammatory Factors of MIRI Rats

Shen Xiaopu1,2, Li Xiudian2, Li Ji1

( 1HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Harbin150040，China; 2TheSecondAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150001,China)

Objective:To observe the effect of Wen Xin Dan on myocardial enzyme indicators, including CK-MB, cTnI and tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) levels, and interleukin 6 (IL-6) of MIRI rats. Besides, to explore its effect on inflammatory factor of MIRI rats. Methods:A total of 70 SD rats were randomly divided into 7 groups with 10 in each. Groups include control group, model group, pretreatment group, Wen Xin Dan1∶1∶1 group, Wen Xin Dan1∶2∶1 group, Wen Xin Dan1∶1∶2 group, Wen Xin Dan2∶1∶1 group. After 14 days lavage, ligate rat′s left anterior descending coronary artery (LAD). Again, lavage the rats to make myocardial ischemia models. Use automatic biochemical instrument to measure CK-MB content and cTnI ELISA method to measure TNF alpha, IL-6 levels. Results:Serum CK-MB, cTnI levels increased significantly in model group with significant difference comparing to those of the control group (P<0.01). Compared to the model group, myocardial enzyme index in each Wen Xin Dan group has changed, and the difference is significant (P<0.01), among which, CK-MB in the 1∶2∶1 group reduced most significantly. Serum TNF alpha, IL-6 levels increased significantly in the model group with significant difference especially compared to those of the control group (P<0.01). Compared with model group, TNF alpha and IL-6 content has changed significantly in all Wen Xin Dan group (P<0.01), among which the 1∶2∶1 group has the largest decrease. Conclusion:Wen Xin Dan can reduce serum CK-MB, cTnI and the content of TNF alpha, IL-6, therefore, it has anti-inflammatory effects.

Wen Xin Dan; Myocardial ischemia reperfusion; TNF alpha; IL-6

黑龍江省中醫(yī)藥科研項(xiàng)目(編號(hào):ZHY16-024);黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)?；?編號(hào):201405)

沈曉璞(1984.11—),女,碩士研究生,主治醫(yī)師,研究方向:中醫(yī)內(nèi)科臨床,E-mail:xs_lnzi@163.com

李冀(1960.11—),男,博士研究生,教授,博士研究生導(dǎo)師,研究方向:方劑配伍規(guī)律及藥物物質(zhì)基礎(chǔ)研究,E-mail:214555842@qq.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.05.043