戰(zhàn)慧敏 趙慧玲 譚 麗 陳子晨 張 博 曾 蕊 魏丹蕾

(北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京,100029)

刺絡(luò)瀉血對(duì)高脂血癥模型大鼠血脂、NO及ET-1影響的研究

戰(zhàn)慧敏 趙慧玲 譚 麗 陳子晨 張 博 曾 蕊 魏丹蕾

(北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京,100029)

目的:觀察刺絡(luò)瀉血療法對(duì)高脂血癥大鼠一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)及血脂的影響,探討刺絡(luò)瀉血療法對(duì)高脂血癥模型大鼠調(diào)脂的作用及機(jī)制。方法:將32只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組,每組8只即空白對(duì)照組、模型組、刺血觀察組、藥物觀察組,除空白對(duì)照組外,其他組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)建立高脂血癥模型。造模成功后空白對(duì)照組不進(jìn)行任何干預(yù);模型組只進(jìn)行抓取及按壓;刺血觀察組在大鼠后肢淺靜脈進(jìn)行刺血干預(yù),0.3～0.5 mL/次,2次/周,治療4周;藥物觀察組給予辛伐他丁2 mg/(kg·d)灌胃干預(yù),治療4周。觀察大鼠的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)水平。結(jié)果:與空白組比較,模型組大鼠血清TC、TG、HDL-C、ET-1含量均顯著上升,NO含量顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清TC、TG、HDL-C、ET-1含量均降低,NO含量均上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);各組大鼠血清HDL-C含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但模型組較空白組有下降趨勢(shì),刺血組及藥物組較模型組均有上升趨勢(shì)。結(jié)論:刺絡(luò)瀉血療法可以糾正脂質(zhì)代謝異常,并通過抑制ET-1含量的增加而維持血管內(nèi)皮細(xì)胞平衡,從而減輕和延緩內(nèi)皮細(xì)胞損傷。

刺絡(luò)瀉血;高脂血癥;血脂;一氧化氮;內(nèi)皮素-1;大鼠

高脂血癥(Hyperlipidemia,HLP)是腦卒中、冠心病、心肌梗死和動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一[1]。世界衛(wèi)生組織的報(bào)告也指出,膽固醇水平的升高是全球五大主要致死原因之一[2],我國(guó)在2002年60歲以上人群的患病率分已經(jīng)達(dá)到23.4%[3],HLP的發(fā)病率也會(huì)隨著老年人口的增長(zhǎng)而不斷升高。因此對(duì)HLP的防治研究已成為目前醫(yī)學(xué)界一項(xiàng)重要的研究課題,積極尋求安全、有效的調(diào)脂方法具有重要的臨床意義。刺血療法是一種使用安全、操作簡(jiǎn)便且不良反應(yīng)小的傳統(tǒng)中醫(yī)療法,有研究表明刺血療法能降低血液黏滯度,刺激血管引起血管平滑肌細(xì)胞復(fù)雜的信號(hào)傳導(dǎo)變化,產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞間及血管中部和整體的調(diào)節(jié)反應(yīng)[4]。我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)采用高脂飼料喂養(yǎng)建立HLP模型大鼠,觀察刺血對(duì)大鼠的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)的影響。探討刺血療法治療HLP的相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠32只,體重(200±20)g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供,許可證號(hào):SCXK(京)2012—0001。飼養(yǎng)于室溫22 ℃,相對(duì)濕度45%清潔條件下,自由進(jìn)食及飲水,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.1.2 試劑與儀器 高脂飼料(82.5%基礎(chǔ)飼料,10%豬油,5%蛋黃粉,2%膽固醇,0.5%膽酸鈉)由科奧協(xié)力有限公司生產(chǎn);10%水合氯醛(北京中醫(yī)藥大學(xué)生理教研室配制);辛伐他汀(杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):20130068);小號(hào)三棱針(華佗牌);一次性注射針頭(上海金塔醫(yī)用器材有限公司);TC、TG、HDL-C、LDL-C、NO、ET-1試劑盒(北京環(huán)宇金科生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司);離心機(jī)(eppendorf公司高速冷凍離心機(jī)5810R)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)法,利用隨機(jī)數(shù)字表將32只SD大鼠隨機(jī)分為4組,每組8只,即A空白組、B模型組、C刺血組、D藥物組?？瞻捉M喂以普通飼料,其余3組采用喂養(yǎng)特制高脂飼料法誘發(fā)大鼠HLP模型,依據(jù)每周測(cè)定的大鼠體重設(shè)定1周飼料劑量,均分為每日量飼養(yǎng),每日的飼養(yǎng)量為70 g/kg,至8周末。

1.2.2 干預(yù)方法 第5周起開始干預(yù)治療,空白組、模型組不給于任何治療,只抓取按壓;刺血組取雙側(cè)足三里、豐隆穴(參考實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[5])刺血,總計(jì)出血量0.5 mL,2次/周;藥物組給予辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃治療。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè)與方法 第8周末,全部大鼠禁食、禁水12 h,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,腹主動(dòng)脈取血5 mL,靜置1 h后,4 ℃,3 000 r/min離心15 min,取分離的上層血清,送檢血脂4項(xiàng)(TC、TG、HDL-C、LDL-C);采用ELISA法測(cè)定一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)含量,嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血脂4項(xiàng)指標(biāo)比較 與空白組比較,模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量顯著上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01);與空白組比較,模型組大鼠血清HDL-C含量有下降趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清HDL-C含量均有上升趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本實(shí)驗(yàn)的造模方法可能對(duì)HDL-C作用不明顯。見表1。

2.2 各組大鼠血清NO、ET-1比較 與空白組比較,模型組大鼠血清NO含量顯著降低,ET-1含量顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較,刺血組及藥物組大鼠血清NO含量均上升,ET-1含量均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。見表2。

表1 各組大鼠血清血脂4項(xiàng)含量比較

注:與正常對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

圖1 各組大鼠血清血脂4項(xiàng)含量比較

表2 各組大鼠血清NO、ET-1含量比較

注:與正常對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01。

圖2 各組大鼠血清NO含量比較

圖3 各組大鼠血清ET-1含量比較

3 結(jié)論

HLP,即脂質(zhì)代謝紊亂,是指由于脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常使血漿中一種或幾種脂質(zhì)高于正常水平的病癥。可直接引起一些嚴(yán)重危害人體健康的疾病,同時(shí)也是老齡化社會(huì)中危害老年人身心健康的嚴(yán)重全身性代謝性紊亂疾病。

中國(guó)古代醫(yī)籍中并沒有“高脂血癥”這一病名記載。HLP是一個(gè)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)概念,根據(jù)HLP的臨床表現(xiàn),其應(yīng)當(dāng)歸屬于“脂”“膏”范疇,病因責(zé)之于“痰濁”“瘀血”,肝失疏泄,脾失健運(yùn),痰濕偏盛,是該病的基本病機(jī)[6],因此與肝、脾、腎功能失調(diào)關(guān)系密切。《素問·血?dú)庑沃尽吩?“凡治病必先去其血,乃去其所苦,伺之所欲,然后瀉有余,補(bǔ)不足。”刺血治療HLP是在總結(jié)前人運(yùn)用針灸治療HLP的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上產(chǎn)生的,且現(xiàn)代研究表明刺血療法治療HLP有顯著療效[7]。本實(shí)驗(yàn)基于臨床經(jīng)驗(yàn)及文獻(xiàn)分析,選取足三里及豐隆穴為治療HLP的主要穴位。足三里穴是足陽明胃經(jīng)合穴,是“四總穴”之一。《千金要方》記載:“胸中瘀血稽滿,脅膈痛不能久立,膝痞寒,三里主之?！蓖瑫r(shí)足三里為下合穴,可以調(diào)六腑功能,有調(diào)理中焦、疏通經(jīng)絡(luò)、扶正祛邪的功效。足三里穴對(duì)消化系統(tǒng)有明顯的調(diào)整作用,“肚腹三里留”說明足三里可以調(diào)理胃腸及消化功能;可以糾正血脂代謝異?！，F(xiàn)代研究表明足三里穴能夠提升HDL-C水平[8]。豐隆穴為胃經(jīng)的絡(luò)穴,可以治療脾胃二經(jīng)疾患,在《針灸集成》中指出:“針灸法渚痰飲病取豐隆”。因此豐隆穴具有通調(diào)脾胃,健脾化痰的作用。且是目前臨床及實(shí)驗(yàn)研究治療HLP使用頻次最高的穴位[9]。HLP治療當(dāng)以化痰,祛瘀為主[10],因此本實(shí)驗(yàn)選取足三里和豐隆穴進(jìn)行刺血的治療。

目前已有大量研究證實(shí),TC的升高與冠心病(CHD)及動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生具有很強(qiáng)的相關(guān)性[11]。TC在血液中的含量每增加1%,CHD的危險(xiǎn)就會(huì)增加2%～3%[12]。TG升高可使LDL-C的升高和HDL-C的降低,而導(dǎo)致AS的發(fā)生,同時(shí)還有不少研究表明,HDL-C升高與CHD發(fā)生率呈負(fù)相關(guān),而LDL-C升高則與CHD的發(fā)生率呈正相關(guān)[13]。因此降低TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C是治療HLP的關(guān)鍵,也是防止AS及心腦血管疾病發(fā)生的有效途徑。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,刺絡(luò)瀉血療法可有效降低HLP大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量及升高HDL-C含量。運(yùn)用足三里穴的調(diào)理胃腸消化功能及豐隆穴的通調(diào)脾胃，健脾化痰的作用,于此二穴刺血,充分發(fā)揮了經(jīng)絡(luò)的調(diào)節(jié)作用。通過疏通經(jīng)絡(luò),調(diào)節(jié)機(jī)體臟腑功能,進(jìn)一步促進(jìn)體內(nèi)脂質(zhì)代謝,下調(diào)血清中TC、TG、LDL-C含量,上調(diào)HDL-C含量;同時(shí)刺絡(luò)瀉血療法能夠發(fā)揮“祛瘀生新”的功用,將體內(nèi)代謝異常的脂質(zhì)隨瀉出的血液自然排出體外,并抑制體內(nèi)脂質(zhì)過分合成,以此來降低血液黏稠度,起到對(duì)血液成分良性調(diào)節(jié)的作用,從而糾正血液中脂質(zhì)代謝的紊亂。且刺血組與辛伐他丁藥物治療組比較無明顯差異,更好的說明刺絡(luò)瀉血療法治療HLP的有效性及實(shí)用性。

NO、ET-1是一種活性物質(zhì),由血管內(nèi)皮分泌釋放。能夠調(diào)節(jié)小血管的舒張和收縮、抑制血小板聚集、炎性反應(yīng)細(xì)胞浸潤(rùn)及炎性反應(yīng)因子的過度表達(dá)[14]。NO為血管舒張因子,ET-1為縮血管物質(zhì),它們相互拮抗但又共同保持血管功能。HLP會(huì)抑制內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOs)的表達(dá)并使之失活,NO合成與釋放減少,同時(shí)ET-1的含量會(huì)明顯增加,導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損[15-17]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,刺絡(luò)瀉血療法能夠提高一氧化氮合酶的活性,促進(jìn)NO的合成與釋放,并將高脂狀態(tài)下血管內(nèi)皮中異常增多的ET-1隨瀉出的血也排出,從而有效調(diào)節(jié)血管的舒張和收縮,維持血管張力,抑制血小板的聚集,減輕和延緩血管內(nèi)皮細(xì)胞受損,降低由HLP所引發(fā)的AS及心腦血管疾病的發(fā)生率。尤其刺血觀察組與辛伐他丁觀察組并無差異,說明刺絡(luò)瀉血療法在保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞方面與辛伐他丁效果相當(dāng)。

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(2016-11-07收稿 責(zé)任編輯：王明)

Effect of Blood-letting Puncture on Blood Lipid, NO and ET-1 in Rats with Hyperlipidemia

Zhan Huimin, Zhao Huiling, Tan Li, Chen Zichen, Zhang Bo, Zeng Rui, Wei Danlei

(SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuinaofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To observe the effect of blood-letting puncture therapy on NO, ET-1 and blood lipid in rats with hyperlipidemia, and explore its therapeutic effect and mechanism in treating hyperlipidemia. Methods:A total of 32 male SD rats were randomly divided into 4 groups, which are control group, model group, blood pricking group and medical group. Except for the control group, the other three groups were made into hyperlipidemia models by high fat diet. After modeling, rats in control group

no treatment. The model group was fixed to receive blood-letting puncture therapy on the superficial vein of the rats hind leg, 0.3-0.5 mL each time, 2 times a week.To observe the levels of TC, TG, HDL-C, LDL-C, NO and ET-1. Results:Comparing to the control group, the level of TC, TG, LDL-C, ET-1 of the model groups significantly increased, and the level of NO content in the model groups significantly decreased with significant difference (P<0.01). Comparing to the control groups, the levels of TC, TG, LDL-C, ET-1 content in the other groups decrease, and the levels of NO content in the blood-letting group and medicine group increased, and the difference is significant (P<0.05，P<0.01). The content of HDL-C in each group do not have significant difference (P>0.05), however, compared to control group, the model group shows a tendency of decrease, while blood-letting group and medicine group has a tendency of increase. Conclusion:Blood-letting puncture therapy can correct lipid metabolism abnormalities. Besides, by inhibiting the increase of ET-1 content and maintain vascular endothelial cell balance, it can reduce and delay endothelial cell injury.

Blood pricking therapy; Hyperlipidemia; NO; ET-1; Rats

戰(zhàn)慧敏(1990.07—),女,碩士,北京中醫(yī)藥大學(xué),研究方向:刺血療法作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)與臨床研究,E-mail:zhanzhanhm2008@163.com

趙慧玲(1957.07—),女,碩士,主任醫(yī)師,教授,北京中醫(yī)藥大學(xué),研究方向:刺血療法作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)與臨床研究,E-mail:zhaohuiling3895@sohu.com

R245.31

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10.3969/j.issn.1673-7202.2017.05.037