李俊輝　羅燕秋　鐘雅詩　黃怡　黃榮蓮　王慶恒　鄧岳文

摘要：【目的】探討近交對馬氏珠母貝生長性狀、遺傳結(jié)構(gòu)及礦化基因表達(dá)的影響，闡明近交引起子一代性狀退化的遺傳原理，為貝類品種培育提供參考依據(jù)?！痉椒ā恳詢蓚€(gè)黃殼色全同胞家系（M和N）為親本，按照因子設(shè)計(jì)構(gòu)建4個(gè)家系組合（F1：M1♀×M1♂；F2：M1♀×N1♂；F3：N1♀×M1♂；F4：N1♀×N1♂），比較4個(gè)家系成貝生長性狀差異，利用9對SSR引物分析其遺傳多樣性，并以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測家系間礦化基因nacrein、pearlin和pif177的表達(dá)差異。【結(jié)果】4個(gè)家系間的平均殼長、平均殼高、平均殼寬、平均體重和平均殼重存在明顯差異，且近交家系（F1和F4）的平均殼長、平均殼高、平均殼寬、平均體重和平均殼重均小于雜交家系（F2和F3），其生長性狀退化率（ID）為11.7%～29.4%。家系F1、F2、F3和F4的平均觀測雜合度分別為0.2525、0.3116、0.3178和0.2752，平均期望雜合度分別為0.3451、0.3822、0.4005和0.3549，平均多態(tài)信息含量（PIC）分別為0.4591、0.5389、0.4878和0.4810。雜交家系（F2和F3）礦化基因nacrein、pearlin和pif177的相對表達(dá)量均高于近交家系（F1和F4），且4個(gè)家系的生長性狀平均值與3個(gè)礦化基因的相對表達(dá)量存在明顯正相關(guān)?！窘Y(jié)論】近交能導(dǎo)致馬氏珠母貝生長性狀、遺傳多樣性及礦化基因表達(dá)量明顯降低，因此制定馬氏珠母貝育種方案時(shí)應(yīng)構(gòu)建合理的交配組合系統(tǒng)，防止因近交導(dǎo)致性狀退化與遺傳多樣性指標(biāo)降低而影響育種進(jìn)程。

關(guān)鍵詞： 馬氏珠母貝；近交；生長性狀；遺傳多樣性；礦化基因

中圖分類號： S968.316 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2017）01-0132-07

Abstract：【Objective】The effects of inbreeding on growth traits， genetic diversity and biomineraliazation gene expression were evaluated with an aim to clarify genetics principle of trait degradation in first filial generation caused by inbreeding and provide valuable information for breeding shellfish varieties. 【Method】Two yellow colored full-sib families（M and N） were taken as parents， four family combinations（F1， M1♀×M1♂； F2， M1♀×N1♂； F3， N1♀× M1♂； F4， N1♀×N1♂）were constructed based on factorial design. Growth traits of the shells at adult stage from the four families were compared. Genetic diversity of the four families were analyzed by nine pairs of SSR primers. The expression differences among nacrein， pearlin and pif177 genes were evaluated by real-time PCR. 【Result】There were significant differences on mean shell length， mean shell height， mean shell width， mean total weight and mean shell weight among the four families（P<0.05）. Mean shell length， mean shell height， mean shell width， mean total weight and mean shell weight of inbreeding families（F1 and F4） were smaller than those of hybrid families（F2 and F3）， growth trait degradation rate（ID） was 11.7%-29.4%. The observed heterozygosity values of F1， F2， F3 and F4 were 0.2525， 0.3116， 0.3178 and 0.2752， while the expected heterozygosity values of F1， F2， F3 and F4 were 0.3451， 0.3822， 0.4005 and 0.3549. Average polymorphism information content（PIC） of F1， F2， F3 and F4 were 0.4591， 0.5389， 0.4878 and 0.4810. The expressions of biomineraliazation genes nacrein， pearlin and pif177 in hybrid families（F2 and F3） were higherer than those in inbreeding families（F1 and F4）. There was positive correlation between mean growth traits and relative expressions of the three biomineraliazation genes.【Conclusion】Inbreeding can lead to decrease in growth traits， genetic diversity and gene expression in P. fuctada martensii. Therefore， rational mating combination system should be established when formulating P. fuctada martensii breeding plan. In this way， traits degradation and genetics diversity indexes decreasing caused by inbreeding can be prevented， and breeding process is not to be infected.

Key words： Pinctada fuctada martensii； inbreeding； growth trait； genetic diversity； biomineraliazation gene

0 引言

【研究意義】馬氏珠母貝（Pinctada fuctada martensii）是我國南方重要的海水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖貝類，主要用于生產(chǎn)6.0～8.0 mm的有核珍珠（王大鵬等，2011）。20世紀(jì)50年代馬氏珠母貝人工育苗獲得成功，珍珠產(chǎn)業(yè)在21世紀(jì)初達(dá)到發(fā)展高峰，年產(chǎn)珍珠20 t左右。然而，近年來馬氏珠母貝珍珠產(chǎn)量與質(zhì)量均呈明顯的下滑趨勢，其主要原因在于養(yǎng)殖群體性狀退化及養(yǎng)殖海區(qū)環(huán)境污染。馬氏珠母貝的成貝親本懷卵量高，一般育苗過程中會從養(yǎng)殖群體選取少量親本進(jìn)行繁殖（鄧岳文等，2008），因加速近親配子結(jié)合機(jī)會而導(dǎo)致養(yǎng)殖群體出現(xiàn)貝體變小、性早熟、珍珠質(zhì)分泌能力弱等性狀退化現(xiàn)象。因此，有必要通過構(gòu)建近交與雜交組合，分析近交對馬氏珠母貝的影響，為其品種培育提供參考依據(jù)。【前人研究進(jìn)展】近交與雜交一直是遺傳育種領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。雜交是將沒有親緣關(guān)系的個(gè)體、群體或物種進(jìn)行交配組合，其雜交子一代群體生長、成活率等性狀超過雙親性狀均值的現(xiàn)象稱為雜種優(yōu)勢。雜交育種主要是利用雜交子一代的雜種優(yōu)勢，張國范和劉曉（2006）通過地理群體定向雜交獲得的大連1號皺紋盤鮑就是一個(gè)典型的案例，其雜交子一代的成活率顯著高于親本群體。與雜交相對應(yīng)，近交是指具有親緣關(guān)系個(gè)體間的交配，近交育種的目的是培育純系，然后利用雜交優(yōu)勢。在育種材料培育過程中，近交通常導(dǎo)致其子代生理機(jī)能或繁殖能力性狀下降，稱為近交衰退現(xiàn)象（Deng et al.，2005）。在貝類中，已有文獻(xiàn)報(bào)道近交能降低其子代生長性狀和成活率，包括美洲牡蠣（Crassostrea virginica）（Mallet and Haley，1983）、長牡蠣（Crassostrea gigas）（Beattie et al.，1987；Evans et al.，2004；張景曉等，2014）、歐洲大扇貝（Pecten maximus）（Beaumont and Budd，1983）、紫扇貝（Argopecten purpuratus）（Concha et al.，2011）、海灣扇貝（A. irradians）（張國范等，2003；鄭懷平等，2004；Zheng et al.，2008）、墨西哥灣扇貝（A. irradians concentricus）（Liu et al.，2011）、蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）（傅強(qiáng)等，2015）、皺紋盤鮑（Haliotis discus hannai）（Deng et al.， 2005； Kobayashi and Kijima，2010）、菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）（梁健等，2013）。但有關(guān)近交對貝類遺傳多樣性與基因表達(dá)影響的報(bào)道相對較少（Launey and Hedgecock，2001；王宇，2011；傅強(qiáng)，2014；張嘉麗等，2015；張景曉，2015）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】基于本課題組的前期研究基礎(chǔ)，初步觀測到近交能導(dǎo)致馬氏珠母貝生長性狀退化，但引起性狀退化的遺傳解釋尚未清楚?！緮M解決的關(guān)鍵問題】利用親緣關(guān)系清晰的育種材料，構(gòu)建近交與雜交家系，從生長性狀、遺傳結(jié)構(gòu)與基因表達(dá)3個(gè)層面探討近交對馬氏珠母貝的影響，旨在闡明近交引起子一代性狀退化的遺傳原理，為貝類品種培育提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

從馬氏珠母貝黃殼色群體選擇親本構(gòu)建全同胞家系，按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行苗種培育與海區(qū)養(yǎng)殖；然后又從兩個(gè)全同胞家系（M和N）選取親本，按照因子設(shè)計(jì)構(gòu)建如下組合：近交家系F1（M1♀×M1♂）、雜交家系F2（M1♀×N1♂）、雜交家系F3（N1♀× M1♂）和近交家系F4（N1♀×N1♂）。

1. 2 生長性狀測量與取樣

貝齡達(dá)1.5齡時(shí)從每個(gè)家系取樣50個(gè)貝體，測量其殼長、殼高、殼寬、體重與殼重。從每個(gè)家系取樣30個(gè)貝體，剪取閉殼肌，以75%酒精固定，用于遺傳多樣性分析；從每個(gè)家系取樣10個(gè)貝體，剪取閉殼肌，置于滅菌抗凍管內(nèi)，立即加入液氮保存，用于礦化基因表達(dá)量分析。

1. 3 遺傳多樣性分析

樣品DNA提取采用生工生物工程（上海）股份有限公司的Universal Genomic DNA Mini-Isolation Kit，參照試劑盒說明進(jìn)行操作。選用本課題組開發(fā)的9對SSR引物（表1）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序參照張嘉麗等（2015）的方法。PCR反應(yīng)體系15.0 μL，包括：DNA 2.0 μL，10×PCR Buffer（10 mmol/L）1.5 μL，dNTPs（4 mmol/L）1.0 μL，MgCl2（2.5 mmol/L）1.5 μL，Taq DNA聚合酶（2.5 μ/mol）1.0 μL，引物1.0 μL，ddH2O 7.0 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃ 42 s，相應(yīng)退火溫度下退火50 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。

1. 4 礦化基因表達(dá)量分析

利用Trizol法提取樣品總RNA，超微量分光光度計(jì)測定A260/A280，檢測RNA的純度和產(chǎn)量，并以1%瓊脂糖凝膠檢測RNA樣品完整性。取1.0 μg總RNA，用M-MLVRTase cDNA Synthesis Kit（Invitrogen）反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。依據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物的設(shè)計(jì)原則，運(yùn)用Primer 5.0分別設(shè)計(jì)針對礦化基因nacrein、pearlin和pif177的實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物（表2）。以β-actin基因?yàn)閮?nèi)參基因，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測各家系間nacrein、pearlin和pif177基因的表達(dá)差異，擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃ 15 s；60 ℃ 1 min，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。按照2-△△Ct 計(jì)算礦化基因相對表達(dá)量。

1. 5 數(shù)據(jù)分析

參考Deng等（2005）的方法計(jì)算馬氏珠母貝生長性狀近交退化率（ID）：

ID（%）=（M1-M0）/M0×100

式中，M1為雜交家系性狀平均值，M0為近交家系性狀平均值。

同時(shí)，利用Popgene 32計(jì)算等位基因頻率、等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、觀察雜合度及期望雜合度；根據(jù)各位點(diǎn)的等位基因頻率，通過PIC-CALC計(jì)算每個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)信息含量（PIC）。利用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)各家系生長性狀和礦化基因表達(dá)量的差異，并以LSD比較均值差異。

2 結(jié)果與分析

2. 1 生長性狀比較結(jié)果

由表3可看出，4個(gè)家系間的平均殼長、平均殼高、平均殼寬、平均體重和平均殼重存在明顯差異，且近交家系（F1和F4）的平均殼長、平均殼高、平均殼寬、平均體重和平均殼重均小于雜交家系（F2和F3）。其中，家系F4的平均殼長、平均殼高、平均殼寬、平均體重和平均殼重最低，均顯著低于其他3個(gè)家系（P<0.05，下同）。4個(gè)家系的生長性狀退化率為11.7%～29.4%。

2. 2 遺傳多樣性比較結(jié)果

從Popgen 32處理的數(shù)據(jù)（表4）來看，本研究選用的9個(gè)微衛(wèi)星引物在4個(gè)家系中均呈多態(tài)性，每個(gè)SSR位點(diǎn)均可檢測到2～3個(gè)等位基因。家系F1、F2、F3和F4的平均有效等位基因數(shù)分別為1.5938、1.6034、1.5022和1.5698。

從表5可知，4個(gè)家系的平均觀測雜合度分別為0.2525、0.3116、0.3178和0.2752，平均期望雜合度分別為0.3451、0.3822、0.4005和0.3549，平均PIC分別為0.4591、0.5389、0.4878和0.4810。

2. 3 礦化基因相對表達(dá)量比較結(jié)果

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測家系礦化基因nacrein、pearlin和pif177的表達(dá)差異，結(jié)果表明，雜交家系F2和F3礦化基因nacrein、pearlin和pif177的相對表達(dá)量均高于近交家系F1和F4（表6）。其中，以家系F4礦化基因nacrein、pearlin和pif177的相對表達(dá)量最低，均顯著低于其他3個(gè)家系。

利用SPSS 17.0計(jì)算4個(gè)家系的生長性狀平均值與3個(gè)礦化基因相對表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果表明，4個(gè)家系的生長性狀平均值與3個(gè)礦化基因的相對表達(dá)量存在明顯正相關(guān)（表7）。其中，平均殼長、平均殼高、平均體重與pearlin和pif177基因相對表達(dá)量呈顯著正相關(guān)，平均殼重與nacrein和pif177基因相對表達(dá)量呈顯著正相關(guān)，平均殼寬與pearlin基因相對表達(dá)量呈顯著正相關(guān)。

3 討論

3. 1 近交對馬氏珠母貝雜交一代生長性狀的影響

育種過程中常利用近交培育純系，但近交易導(dǎo)致繁殖力和生理機(jī)能相關(guān)性狀的表型值降低。張國范等（2003）通過構(gòu)建海灣扇貝近交家系和雜交家系，并對比兩個(gè)家系的生長性狀，結(jié)果表明，與雜交家系相比，近交家系生長緩慢，幼蟲階段與成體階段近交退化率分別為25.9%和12.7%。鄭懷平等（2004）通過對比海灣扇貝雜交與近交家系的生長性狀和成活率，結(jié)果表明，與雜交家系相比，自交家系在幼蟲期與養(yǎng)成期的生長性狀退化率分別為35.34%和21.17%，成活率分別降低25.23%和49.44%。梁健等（2013）以菲律賓蛤仔橙色全同胞家系為材料進(jìn)行近交，結(jié)果表明，橙色家系生長的近交衰退率為5.38%～26.57%。本研究結(jié)果表明，馬氏珠母貝近交家系的生長性狀明顯小于雜交家系，成體階段的生長性狀退化率為11.7%～29.4%，與上述其他貝類的研究結(jié)果一致。

母本效應(yīng)來源于細(xì)胞質(zhì)遺傳、母本營養(yǎng)、母性病原物與抗體的傳遞及母子間或同胞間習(xí)性的模仿等，其中，由營養(yǎng)物質(zhì)引起的母本效應(yīng)對貝類早期幼體生長、成活率及變態(tài)均存在明顯影響（Jones et al.，1996；Deng et al.，2005）。也有研究表明，母本效應(yīng)對貝類稚貝或成貝生長均可能存在影響（Liu et al.，2005；桑士田等，2012）。本研究通過雙因子設(shè)計(jì)構(gòu)建了4個(gè)家系組合，近交家系F1與雜交家系F2具有相同母本，但二者間的生長性狀差異不明顯，可能與母本效應(yīng)對生長性狀的影響有關(guān)。

3. 2 近交對馬氏珠母貝雜交一代遺傳多樣性的影響

Botstein等（1980）根據(jù)PIC確定多態(tài)位點(diǎn)的豐度，當(dāng)PIC>0.50時(shí)為高度多態(tài)性位點(diǎn)，0.25近交能導(dǎo)致適合度性狀退化，目前主要有顯性假說和超顯性假說解釋遺傳退化機(jī)制。但兩種學(xué)說均認(rèn)為，近交通過增加純合位點(diǎn)比例、降低雜合位點(diǎn)比例而造成近交衰退。已有研究表明，近交能降低水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖群體基因頻率變化和稀有基因缺失，遺傳多樣性指標(biāo)降低（李思發(fā)等，2005；劉宇飛等，2007；張嘉麗等，2015；張景曉，2015）。李思發(fā)等（2005）以RAPD分析團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephal）近交群體的遺傳結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)近交群體（全同胞交配組合）的多態(tài)位點(diǎn)和有效基因均低于對照群體。劉宇飛等（2007）利用20對SSR標(biāo)記分析劍尾魚（Xiphophorus helleri）RW-H近親交配家系15代的遺傳多樣性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)20個(gè)位點(diǎn)中有17個(gè)位點(diǎn)呈單態(tài)位點(diǎn)。張嘉麗等（2015）利用SSR標(biāo)記比較馬氏珠母貝近交與雜交家系的遺傳結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，近交家系觀測雜合度與期望雜合度指標(biāo)均低于雜交家系。張景曉（2015）利用9對AFLP引物分析長牡蠣家系遺傳多樣性，結(jié)果表明，9對引物在對照、F1（F=0.250）和F2（F=0.375）3個(gè)家系中擴(kuò)增出的位點(diǎn)總數(shù)分別為215、204和200個(gè)，平均每對引物擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為7.4、6.4和6.1個(gè)，對應(yīng)的家系平均多態(tài)位點(diǎn)比例依次為31.16%、28.43%和27.5%。本研究中，近交家系的觀測雜合度和期望雜合度指標(biāo)均低于雜交家系，進(jìn)一步說明近交能導(dǎo)致馬氏珠母貝遺傳多樣性降低。

3. 3 近交對馬氏珠母貝雜交一代礦化基因表達(dá)的影響

生物礦化是指生物體（從細(xì)胞到整個(gè)有機(jī)體）介入礦物質(zhì)生成的過程，包括復(fù)雜的生物事件和化學(xué)事件（黃榮蓮，2016）。珍珠貝的生長也是一個(gè)礦化過程，多個(gè)礦化基因及相關(guān)蛋白參與該過程，包括nacrein、pearlin、MSI60、pif177和n19等基因（Zhao et al.，2012）。馬氏珠母貝的生長性狀與礦化基因表達(dá)量存在相關(guān)性。Zhang和He（2011）報(bào)道，家系F2大、中、小規(guī)格個(gè)體的貝殼基質(zhì)蛋白基因aspein、prismalin-14、n16和nacrein表達(dá)量與殼高、殼重呈顯著正相關(guān)。陳偉耀（2014）研究表明，nacrein、MSI60、pif177和n19礦化基因與馬氏珠母貝珠層厚度呈明顯正相關(guān)。楊創(chuàng)業(yè)等（2015）通過比較投喂不同餌料對馬氏珠母貝生長與礦化基因的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)投喂混合餌料組具有較高的殼寬與殼高增長率，并證實(shí)生長率與nacrein、pif177礦化基因表達(dá)量呈正相關(guān)。上述研究結(jié)果均表明，礦化基因表達(dá)量與馬氏珠母貝生長性狀存在正相關(guān)。

近交除了能導(dǎo)致生長性狀與遺傳多樣性的降低外，還可導(dǎo)致基因表達(dá)量變化。傅強(qiáng)（2014）研究報(bào)道，蝦夷扇貝自交家系的下調(diào)基因顯著富集在與生長顯著相關(guān)的EGF家族基因。Shi和He（2014）利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)篩選馬氏珠母貝家系內(nèi)大、小規(guī)格個(gè)體基因差異，并選取34個(gè)差異基因進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)其中19個(gè)基因表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄組結(jié)果一致。本研究通過比較馬氏珠母貝近交與雜交家系礦化基因nacrein、pearlin和pif177的表達(dá)量，結(jié)果表明，近交家系礦化基因的相對表達(dá)量明顯低于雜交家系，與近交家系生長緩慢相吻合，即礦化基因也可作為生長性狀評價(jià)指標(biāo)。

4 結(jié)論

近交能導(dǎo)致馬氏珠母貝生長性狀、遺傳多樣性及礦化基因表達(dá)量明顯降低，因此制定馬氏珠母貝育種方案時(shí)應(yīng)構(gòu)建合理的交配組合系統(tǒng)，防止因近交導(dǎo)致性狀退化與遺傳多樣性指標(biāo)降低而影響育種進(jìn)程。

參考文獻(xiàn)：

陳偉耀. 2014. 馬氏珠母貝育珠和生長性狀與相關(guān)基因的關(guān)聯(lián)分析[D]. 湛江：廣東海洋大學(xué).

Chen W Y. 2014. Correlation analysis of pearl production and growth traits with related genes from Pinctada martensii[D]. Zhanjiang：Guangdong Ocean University.

鄧岳文，符韶，杜曉東，王慶恒. 2008. 馬氏珠母貝選系F2早期選擇反應(yīng)和現(xiàn)實(shí)遺傳力估計(jì)[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，28（4）：26-29.

Deng Y W，F(xiàn)u S，Du X D，Wang Q H. 2008. Response to selection and realized heritability for early growth in the second-generation selected line of pearl oyster Pinctada martensii[J]. Journal of Guangdong Ocean University，28（4）：26-29.

傅強(qiáng)，王師，趙亮，張璐，包振民. 2015. 不同近交系數(shù)的蝦夷扇貝近交衰退研究[J]. 中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，45（11）：43-48.

Fu Q，Wang S，Zhao L，Zhang L，Bao Z M. 2015. Analysis of inbreeding depression in Patinopecten yessoensis based on different inbreeding coefficient[J]. Periodical of Ocean University of China，45（11）：43-48.

傅強(qiáng). 2014. 蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）近交衰退的生物學(xué)效應(yīng)及遺傳機(jī)理研究[D]. 青島：中國海洋大學(xué).

Fu Q. 2014. Biological effects and genetic mechanism of inbreeding depression in Japanese scallop（Patinopecten yessoensis）[D]. Qingdao：Ocean University of China.

黃榮蓮. 2016. 珍珠貝貝殼蛋白組學(xué)及脅迫環(huán)境下的應(yīng)激調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[D]. 北京：中國科學(xué)院.

Huang R L. 2016. The shell proteomics and stress network of biomineralization in pearl oyster（Pinctada fucata martensii）[D]. Beijing：Chinese Academy of Sciences.

李思發(fā)，楊懷宇，鄒曙明. 2005. 快速近交對團(tuán)頭魴遺傳結(jié)構(gòu)的影響和近交效應(yīng)的估算[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，29（2）：161-165.

Li S F，Yang H Y，Zou S M. 2005. Effects on genetic structure from quick inbreeding and estimation of inbreeding response in cultured populations of Megalobrama amblycephala[J]. Journal of Fisheries of China，29（2）：161-165.

梁健，閆喜武，霍忠明，趙力強(qiáng)，吳云霞，楊鳳. 2013. 近交對蛤仔（Ruditapes philippinarum）橙色家系生長及存活的影響[J]. 海洋與湖沼，44（3）：717-721.

Liang J，Yan X W，Huo Z M，Zhao L Q，Wu Y X，Yang F. 2013. Inbreeding and its impact on growth and survival of the orange family manila clam Ruditapes Philippinarum[J]. Oceanologia et Limnologia Sinica，44（3）：717-721.

劉宇飛，白俊杰，李凱彬，黃志斌，全迎春. 2007. 劍尾魚RW-H近交系20個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的遺傳結(jié)構(gòu)[J]. 中國水產(chǎn)科學(xué)，14（4）：602-607.

Liu Y F，Bai J J，Li K B，Huang Z B，Quan Y C. 2007. Genetic structure of 20 microsatellite loci in RW-H swordtail fish （Xiphophorus helleri） inbred strain[J]. Journal of Fishery Sciences of China，14（4）：602-607.

桑士田，閆喜武，霍忠明，楊鵬，楊鳳，張國范. 2012. 家系內(nèi)大、小兩種規(guī)格菲律賓蛤仔的雙列雜交[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，36（6）：832-837.

Sang S T，Yan X W，Huo Z M，Yang P，Yang F，Zhang G F. 2012. The diallel cross between large and small sizes within family of Manila clam（Ruditapes philippinarum）[J]. Journal of Fisheries of China，36（6）：832-837.

王大鵬，何安尤，曹占旺，甘西. 2011. 北海營盤新馬氏珠母貝養(yǎng)殖區(qū)養(yǎng)殖容量的研究[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，42（12）：1555-1559.

Wang D P，He A Y，Cao Z W，Gan X. 2011. Carrying capacity of Yingpan new Pinctada martensii culture area in Beihai city，Guangxi[J]. Journal of Southern Agriculture，42（12）：1555-1559.

王宇. 2011. 海灣扇貝近交衰退的遺傳分子機(jī)理的研究[D]. 青島：中國科學(xué)院.

Wang Y. 2011. The molecule and genetic analysis of inbreeding depression in Bay scallop（Argopecten irradians）[D]. Qingdao： Chinese Academy of Science.

楊創(chuàng)業(yè)，王慶恒，孫瑞椒，劉興旺，杜曉東，鄧岳文. 2015. 微膠囊飼料對馬氏珠母貝生長性狀和礦化基因表達(dá)的影響[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，34（8）：1681-1687.

Yang C Y，Wang Q H，Sun R J，Liu X W，Du X D，Deng Y W. 2015. Growth rate and expression of mineralization gene of pearl oyster Pinctada martensii fed on microencapsulated diets[J]. Genomics and Applied Biology，34（8）：1681-1687.

張國范，劉述錫，劉曉，郭希明，張福綏. 2003. 海灣扇貝自交家系的建立和自交的生物效應(yīng)[J]. 中國水產(chǎn)科學(xué)，10（6）：441-445.

Zhang G F，Liu S X，Liu X，Guo X M，Zhang F S. 2003. Self-fertilization family establishment and its depression in bay scallop Argopecten irradians[J]. Journal of Fishery Sciences of China，10（6）：441-445.

張國范，劉曉. 2006. 關(guān)于貝類遺傳改良幾個(gè)問題的討論[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，30（1）：130-137.

Zhang G F，Liu X. 2006. Theory and method of genetic improvement in mariculture mollusks：a review[J]. Journal of Fi-

sheries of China，30（1）：130-137.

張嘉麗，羅燕秋，黃怡，鐘雅詩，劉青云，李俊輝，鄧岳文. 2015. 馬氏珠母貝近交與雜交家系的遺傳結(jié)構(gòu)的比較[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，34（4）：723-730.

Zhang J L，Luo Y Q，Huang Y，Zhong Y S，Liu Q Y，Li J H，Deng Y W. 2015. Genetic structure of inbred and hybrid families of pearl oyster Pinctada martensii[J]. Genomics and Applied Biology，34（4）：723-730.

張景曉，李琪，葛建龍，王許波，孔令鋒. 2014. 近交對長牡蠣幼蟲和稚貝生長與存活的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，38（12）：2005-2011.

Zhang J X，Li Q，Ge J L，Wang X B，Kong L F. 2014. Effects of inbreeding on growth and survival of larval and juvenile Pacific oyster（Crassostrea gigas）[J]. Journal of Fisheries of China，38（12）：2005-2011.

張景曉. 2015. 長牡蠣近交家系生物學(xué)特性及遺傳多樣性分析[D]. 青島：中國海洋大學(xué).

Zhang J X. 2015. Biological performances and genetic diversity of inbred families in the Pacific oyster（Crassostrea gigas）[D]. Qingdao：Ocean University of China.

鄭懷平，張國范，劉曉，闕華勇. 2004. 海灣扇貝雜交家系與自交家系生長和存活的比較[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，28（3）：267-272.

Zheng H P，Zhang G F，Liu X，Que H Y. 2004. Comparison of growth and survival between the self-fertilized and hybridized families in Argopecten irradians irradians[J]. Journal of Fisheries of China，28（3）：267-272.

Beattie J H， Perdue J， Hershberger W， Chew K. 1987. Effects of inbreeding on growth in the Pacific oyster（Crassostrea gigas）[J]. Journal of Shellfish Research，6： 25-28.

Beaumont A R， Budd M D. 1983. Effects of self-fertilization and other factors on the early development of the scallop Pecten maximus[J]. Marine Biology， 76： 285-289.

Botstein D，Whiter R L，Skolnick M，Davis R W. 1980. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms[J]. American Journal of Human Genetics，32（3）：314-331.

Concha C，F(xiàn)igueroa E，Winkler F M. 2011. Association between self-fertilization rates and the frequency of malformed larvae in farmed populations of the northern scallop Ar-

gopecten purpuratus（Lamarck，1819）[J]. Latin American Journal of Aquatic Research，39（2）：327-337.

Deng Y W，Liu X，Zhang G F，Guo X M. 2005. Inbreeding depression and maternal effects on early performance of Pacific abalone[J]. North American Journal of Aquaculture， 67（3）：231-236.

Evans F，Matson S，Brake J，Langdon C. 2004. The effects of inbreeding on performance traits of adult Pacific oysters （Crassostrea gigas）[J]. Aquaculture，230（1-4）：89-98.

Jones R，Bates J A，Innes D J，Thompson R J. 1996. Quantitative genetic analysis of growth in larval scallops（Placopecten magellanicus）[J]. Marine Biology，124（4）：671-677.

Kobayashi T，Kijima A. 2010. Effects of inbreeding depression in Pacific abalone Haliotis discus hannai[J]. Journal of Shellfish Research，29（3）：643-649.

Launey S，Hedgecock D. 2001. High genetic load in the Pacific oyster Crassostrea gigas[J]. Genetics，159（1）：255-265.

Liu J Y，Liu Z G，Sun X Z. 2011. The effects of inbreeding on production traits of the southern bay scallop Argopecten irradians concentricus[J]. Journal of Shellfish Research，30（1）：109-113.

Liu X，Deng Y W，Zhang G F. 2005. Growth of eight Pacific abalone families at three temperatures[J]. Acta Oceanologica Sinica， 24（3）：148-153.

Mallet A L，Haley L E. 1983. Growth rate and survival in pure population matings and crosses of the oyster Crassostrea virginica[J]. Canadian Journal of Fishries and Aquatic Sciences，40（7）：948-954.

Shi Y，He M X. 2014. Differential gene expression identified by RNA-Seq and qPCR in two sizes of pearl oyster（Pinctada fucata）[J]. Gene，538（2）：313-322.

Zhang L J，He M X. 2011. Quantitative expression of shell matrix protein genes and their correlations with shell traits in the pearl oyster Pinctada fucata[J]. Aquaculture，314（1-4）：73-79.

Zhao X，Wang Q，Jiao Y，Huang R，Deng Y，Wang H，Du X. 2012. Identification of genes potentially related to biomi-

neralization and immunity by transcriptome analysis of pearl sac in pearl oyster Pinctada martensii[J]. Marine Biotechnology，14（6）：730-739.

Zheng H P，Zhang G F，Guo X M，Liu X. 2008. Inbreeding depression for various traits in two cultured populations of the American bay scallop，Argopecten irradians irradians Lamarck（1819） introduced into China[J]. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology，364（1）：42-47.

（責(zé)任編輯 蘭宗寶）