安婷婷 李玲娜 王鶴
摘要[目的]從麒麟菜中提取溴酚化合物。[方法]以海洋紅藻類麒麟菜為原料,采用50%甲醇、50%乙醇、50%丙酮超聲提取和95%乙醇、60%乙醇和50%乙醇浸提的方法,最后評價提取物和分離后組分的體外降血糖活性。[結(jié)果]50%乙醇浸提的效率最高,且提取物的降血糖活性高達73%,且氯仿∶甲醇=100∶0組分活性最高,達70%。[結(jié)論]為進一步開發(fā)海南經(jīng)濟藻類及新的降血糖藥物提供了依據(jù)。
關(guān)鍵詞海洋紅藻;麒麟菜;溴酚化合物;降血糖活性
中圖分類號S-3文獻標識碼
A文章編號0517-6611(2017)32-0138-02
Extraction and Hypoglycemic Activity of Bromophenols Compounds from Eucheuma muricatum
AN Tingting,LI Lingna,WANG He(Pharmaceutical Institute of Hainan Province,Haikou,Hainan 570311)
Abstract[Objective] The aim was to extract bromine phenolic compounds from Eucheuma muricatum.[Method] The marine red alga Eucheuma was taken as raw materials,and 50% methanol,50% ethanol and 50% acetone ultrasonic extraction and 95% ethanol,60% ethanol and 50% ethanol leaching method were used.Finally,the in vitro hypoglycemic activities of final evaluation extracts and isolated group were evaluated.[Result] The efficiency of ethanol extraction was the highest in 50% ethanol extracts,and the blood glucose activity of the extracts was 73%,and the activity of chloroformmethanol (100∶0) was the highest,reaching 70%.[Conclusion] The results provide theoretical basis for further development of Hainan economic algae and new hypoglycemic agent.
Key wordsRed algae;Eucheuma muricatum;Bromophenols;Hypoglycemic activity
海藻溴酚化合物為海洋生物特有的鹵代化合物,大多具有新穎的化學結(jié)構(gòu)及獨特的生物活性,是新藥寶貴的化合物來源。國內(nèi)外學者現(xiàn)已從紅藻門的松節(jié)藻、多管藻等中分離出具有降血糖、抗炎[1]、抗腫瘤[2-4]等活性的溴酚化合物。目前,國內(nèi)外學者已將海藻溴酚化合物作為治療糖尿病、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤等重大疾病的藥物,并已獲得了發(fā)明專利或新藥批件[5-6]。海南省熱帶紅藻資源非常豐富,如紫菜、江蘺、海蘿、鷓鴣菜、海人草、麒麟菜等,很多在民間藥用廣泛。筆者從麒麟菜中提取了具有降血糖作用的溴酚化合物,探究了最佳提取方法,并評價了其體外降血糖活性。
1材料與方法
1.1材料UV-2401PC型紫外分光光度計;SK450HP型超聲微波清洗儀; SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(河南鄭州江成科工貿(mào)有限公司);TGL-16MC型臺式高速冷凍離心機;OS-100型軌道式振蕩儀;98-1-C型數(shù)顯控溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(浙江杭州億捷科技有限公司);低溫冷卻液循環(huán)泵(浙江杭州億捷科技有限公司)。
1.2方法
1.2.1麒麟菜方法的優(yōu)選。
1.2.1.1浸提法。稱取10.0 g麒麟菜粉末3份,置于250 mL三角錐形瓶中,分別加入100 mL 95%乙醇、 80%乙醇、 50%乙醇,室溫下避光浸提3 d,提取3次。取3次浸提液進行抽濾,將濾液轉(zhuǎn)移至500 mL圓底燒瓶中,加沸石5粒,于65 ℃下減壓濃縮至干,向燒瓶中加入25 mL純化水,超聲30 min使其溶解,將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL棕色容量瓶中,加純化水定容,避光密封保存,備用。
1.2.1.2超聲提取法。
稱取10.0 g麒麟菜粉末3份,置于250 mL三角錐形瓶中,分別加入100 mL 50%甲醇、50%乙醇、 50%丙酮,超聲提取30 min,抽濾,濾渣加入100 mL 50%甲醇,超生提取30 min,抽濾,合并濾液于500 mL圓底燒瓶中,加入5粒沸石,75 ℃減壓濃縮至干,加入25 mL純化水,超聲30 min使其溶解,將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL棕色容量瓶中,加純化水定容,避光密封保存,備用。
1.2.2不同提取方法中酚類物質(zhì)的含量測定。
1.2.2.1標準曲線的繪制。取數(shù)支50 mL容量瓶,分別加入20 mL純化水,再分別加入0、0.04、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.80 mg/mL間苯三酚標準液1.0 mL,按最佳試驗條件于713 nm波長處測定吸光度。
1.2.2.2樣品的測定。取數(shù)支50 mL容量瓶,分別加入20.0 mL純化水、1.0 mL麒麟菜樣品3份、3.0 mL 飽和Na2CO3溶液、5.0 mL Folin-Denis試劑,顯色70 min,在713 nm波長處測定吸光度。
1.2.3分離前酶活性測定。
取1 mL萃取液于5 mL容量瓶中,N2吹干,加入少量純化水溶解,定容,備用。
反應(yīng)體系參照賢景春等[7]方法,優(yōu)化后如下:0.5 mL 0.1 mmol/L磷酸鉀緩沖液(pH 6.8),再加入
100 μL 10 mg/L α-D葡萄糖吡喃苷、0.5 mL樣品溶液,混勻,37 ℃保持20 min,加入0.5 mL 2.5 mmol/L PNPG,混勻后37 ℃保持20 min,再加入1 mL 0.2 mol/L Na2CO3溶液終止反應(yīng)。于405 nm波長處測定吸光值,重復3次,取平均值。同時設(shè)空白組和背景組。
1.2.4溴酚化合物的分離。
稱取87 g柱層析用硅膠(200~300目)于500 mL燒杯中,加入250 mL氯仿,攪拌均勻,浸泡10 min,使硅膠充分飽和,將硅膠沿玻璃棒緩緩加入到層析柱中,排氣泡,靜置30 min,打開閥門,放出氯仿。將乙酸乙酯萃取物與在氯仿中增加甲醇梯度洗脫(0~100%)成6個組分,分別標記為A1(氯仿∶甲醇=100∶0)、A2(氯仿∶甲醇=60∶40)、A3(氯仿∶甲醇=40∶60)、A4(氯仿∶甲醇=60∶40)、A5(氯仿∶甲醇=20∶80)、A6(氯仿∶甲醇=0∶100)。分別收集各組分洗脫液于錐形瓶中,將洗脫液轉(zhuǎn)移至100 mL雞心瓶中,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上30 ℃減壓濃縮至干。向雞心瓶內(nèi)加入少量純化水,超聲溶解,多次洗滌,將洗液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,定容,低溫避光冷藏,備用。
1.2.5分離后酶活性。以A1~A6為樣品,步驟同“1.2.3”,于405 nm波長處測定吸光度,計算酶活性抑制率。
酶活性抑制率=A空白-(A樣品-A背景)A空白×100%
式中,A空白為不加待測樣品反應(yīng)后的吸光值;A樣品為加入待測樣品反應(yīng)后的吸光值;
A背景為只加待測樣品反應(yīng)后的吸光值。
2結(jié)果與分析
2.1標準曲線線性回歸方程為y=1.470 5x-0.003 8,R2=0.999。6組樣品的結(jié)果見表1,50%丙酮超聲提取和50%乙醇超聲提取的提取效率相近,50%乙醇浸提的效率最高,故以50%乙醇浸提作為溴酚化合物的最佳提取方法。
參考文獻
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