李桂芬　何毅　覃斯華　黃金艷　柳唐鏡　洪日新　李天艷　樊學(xué)軍　韋正光　李文信

摘要：【目的】改良多倍體西瓜染色體標(biāo)本制片技術(shù)，比較多倍體西瓜常規(guī)核型分析與熒光核型分析結(jié)果，為西瓜細(xì)胞遺傳學(xué)研究及輔助構(gòu)建西瓜物理遺傳圖譜提供參考依據(jù)?！痉椒ā恳远啾扼w西瓜為材料，以傳統(tǒng)染色體制片方法去壁—低滲火焰干燥法為基礎(chǔ)，去掉其前低滲和后低滲兩個(gè)步驟，合并其再固定與火焰涂片兩個(gè)步驟，用吉姆薩染色劑和熒光染料DAPI分別對(duì)多倍體西瓜染色體進(jìn)行常規(guī)染色和熒光染色，并進(jìn)行核型分析?！窘Y(jié)果】使用改良型酶解去壁火焰干燥法進(jìn)行多倍體西瓜染色體制片，比傳統(tǒng)去壁—低滲火焰干燥法簡(jiǎn)化了用KCl溶液前低滲、后低滲及用卡諾固定液再固定3個(gè)步驟，可縮短制片時(shí)間1.0～2.0 h，提高制片效率，獲得的染色體樣本數(shù)目齊全、分散良好、形態(tài)清晰。用DAPI染色比用吉姆薩染色更容易檢測(cè)到細(xì)胞中期分裂相，每張玻片可縮短檢測(cè)時(shí)間0.5～1.5 h；染色體的著絲點(diǎn)、長(zhǎng)臂及短臂形態(tài)更清晰。【結(jié)論】采用改良染色體制片方法可提高多倍體西瓜染色體的制片效率，對(duì)該制片進(jìn)行熒光核型分析比常規(guī)核型分析更準(zhǔn)確，效率更高。

關(guān)鍵詞： 多倍體西瓜；染色體制片；熒光染色；核型分析

中圖分類(lèi)號(hào)： S651 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2017）04-0663-06

Abstract：【Objective】Technique of chromosome preparation for polyploid watermelon was improved，conventional karyotype and fluorescence karyotype for polyploid watermelons were compared in order to provide reference for research on genetics of watermelon and establishment of physical genetic map of watermelon. 【Method】Polyploid watermelons were used as materials in the study. Based on traditional chromosome preparation technique， namely wall degradation-hypotonic flaming-drying method， pre-hypotonic and after-hypotonic were deleted， and re-fixation and flame smear were combined into one procedure. Giemsa stain and DAPI fluorescence stain were used to stain， and carried out conventional karyotype analysis and fluorescence karyotype analysis respectively. 【Result】The optimized enzymolysis flaming-drying method was used to prepare chromosome of polyploid watermelons. Compared with the traditional technique， the optimized one simplified three procedures which were pre-hypotonic and after-hypotonic of KCL solution and re-fixation by Carnoy fixative. Thus the time was 1.0-2.0 h shorter. Production efficiency was improved， and samples with complete amount， good dispersion and clear configuration were obtained. Slides stained with DAPI could shorten the detection time for 0.5-1.5 h each slide， and were more easily to be detected metaphases with more clear centromere，long arm and short arm of chromosome than stained with Giemsa. 【Conclusion】The modified method can improve the efficiency of chromosome preparation of polyploid watermelon. Fluorescent karyotype analysis is more accurate and efficient than conventional karyotype analysis.

Key words： polyploid watermelon； chromosome preparation； fluorescence stain； karyotype analysis

0 引言

【研究意義】多倍體西瓜一般包括三倍體無(wú)籽西瓜和四倍體西瓜，具有比二倍體西瓜適應(yīng)性廣、抗逆性強(qiáng)、含糖量高、無(wú)籽、耐貯運(yùn)和產(chǎn)量高等優(yōu)勢(shì)（譚素英等，1994；劉文革等，2009）。多倍體西瓜染色體制片技術(shù)和核型分析是西瓜細(xì)胞學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容，但傳統(tǒng)染色體制片技術(shù)常用的壓片法制片很難獲得數(shù)目齊全、分散良好、形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰的染色體樣本，由此獲得的核型分析數(shù)據(jù)也不夠準(zhǔn)確，而改良型酶解去壁火焰干燥法能克服這些缺點(diǎn)。因此，進(jìn)行多倍體西瓜染色體制片技術(shù)改良及常規(guī)和熒光核型分析，對(duì)西瓜的倍性鑒定和倍性育種均具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】多年來(lái)，由于西瓜染色體較小、細(xì)胞質(zhì)濃厚，致使染色體制片難度大，尤其是多倍體西瓜染色體制片難度更大，效果不佳（肖光輝等，1997；張志忠和呂柳新，2009）。不同倍性水平的鑒定方法有染色體直接計(jì)數(shù)法和間接鑒定法，間接鑒定法包括細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定法（譚素英等，1994）、高溫和低溫脅迫法（郭啟高等，2000）、流式細(xì)胞測(cè)定法（施先鋒等，2010）和植物形態(tài)學(xué)鑒定法（袁建民等，2013），但間接檢測(cè)西瓜倍性方法的直觀性和準(zhǔn)確性均比染色體直接計(jì)數(shù)法差（劉文革等，2009）。直接觀察西瓜體細(xì)胞染色體不僅可統(tǒng)計(jì)染色體的數(shù)目，還可觀察到各染色體的形態(tài)并進(jìn)行核型分析。目前針對(duì)多倍體西瓜制片方法及核型分析的研究較少，主要是采用壓片法（趙虎基等，2000；徐道娜等，2007；江姣等，2012；袁建民等，2013）制作二倍體西瓜的染色體標(biāo)本并進(jìn)行核型分析，而對(duì)于西瓜這種小染色體作物，壓片法很難獲得數(shù)目完整、形態(tài)清晰、分散良好的染色體中期分裂相，由此進(jìn)行的核型分析也不夠準(zhǔn)確。國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用熒光染料DAPI（4'-6-二脒基-2-苯基吲哚）已成功構(gòu)建了蕹菜（刁英等，2005）等植物的染色體模式圖，揭示了染色體上AT富含的區(qū)域并識(shí)別特定染色體（Belonogova and Karamysheva，2006；謝莉等，2008）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】截至目前，鮮見(jiàn)針對(duì)西瓜細(xì)胞學(xué)研究和熒光核型分析的報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以多倍體西瓜為材料，采用改良型酶解去壁火焰干燥法進(jìn)行染色體制片，用吉姆薩染料和熒光染料DAPI分別染色，對(duì)比常規(guī)核型分析和熒光核型分析的優(yōu)缺點(diǎn)，為西瓜倍性鑒定和倍性育種提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

二倍體、三倍體和四倍體西瓜種子由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所提供，取其根尖作染色體制片材料。染色體光學(xué)和熒光顯微鏡有奧林巴斯BX53（日本奧林巴斯株式公社）、尼康相差熒光顯微鏡80i（日本尼康公司）、徠卡熒光顯微鏡DM2500（德國(guó)徠卡公司）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 染色體制片 將陳瑞陽(yáng)等（1979）的去壁—低滲火焰干燥法染色體制片技術(shù)加以改良，簡(jiǎn)化為改良型酶解去壁火焰干燥法進(jìn)行染色體制片。

1. 2. 2 熒光染色 將用改良型酶解去壁低滲火焰干燥法制片獲得的染色體樣本玻片晾干，用0.1 μg/mL DAPI在室溫下染色10 min，滴加20 μL丙三醇至載玻片上，蓋上1.5 cm×1.5 cm蓋玻片，用指甲油封邊。

1. 2. 3 染色體檢測(cè)及圖像處理 用熒光顯微鏡奧林巴斯BX53、尼康相差熒光顯微鏡80i、徠卡熒光顯微鏡DM2500進(jìn)行染色體光學(xué)和熒光檢測(cè)并拍照，用Photoshp進(jìn)行染色體圖片調(diào)整、染色體分離和排列，用Digimizer測(cè)量染色體短臂和長(zhǎng)臂的長(zhǎng)度。

1. 2. 4 核型分析 每種西瓜材料觀察50個(gè)以上中期分裂相并進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)，選取5個(gè)分散良好的中期分裂相，用光學(xué)和熒光顯微鏡在100倍油鏡下拍照。根據(jù)李懋學(xué)和陳瑞陽(yáng)（1985）的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行體細(xì)胞染色體中期核型分析，著絲粒位置參照Levan等（1964）的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行命名；核型不對(duì)稱(chēng)性按Stebbins（1971）的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類(lèi)。

2 結(jié)果與分析

2. 1 多倍體西瓜染色體制片技術(shù)的改良

載玻片前處理：將載玻片用洗衣粉煮沸30 min以上，濕布擦洗表面，放入重鉻酸鉀洗液浸泡2 d以上，進(jìn)一步清洗載玻片上的雜質(zhì)，撈出載玻片用去離子水漂洗去除鉻酸洗液，放入4 ℃去離子水中保存。

催芽取根：用清水常溫浸泡西瓜種子6～8 h，用濕布包裹放入恒溫箱中，33 ℃催芽24 h，待胚根長(zhǎng)1～5 cm時(shí)用鑷子夾取根尖分生區(qū)約5 mm。

根尖預(yù)處理：將夾取的根尖浸入0.002 mol/L 8-羥基喹啉中，室溫避光處理 3～4 h，雙蒸水洗滌2～3次。

固定：用現(xiàn)配的固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）固定4 h。

酶解：酶解前將根尖置于去離子水中浸泡20 min去除殘留固定液，同時(shí)切除分生區(qū)外的根區(qū)，留下長(zhǎng)約1 mm的白色分生區(qū)（白點(diǎn)），再移至盛有3%纖維素酶和2%果膠酶混合液的1.5 mL離心管中，將離心管放入33 ℃水浴鍋中酶解4～5 h，用去離子水小心清洗根尖2～3次，去除殘留酶液。

涂片：用滴管小心吸取一個(gè)或幾個(gè)酶解后的根尖，置于干凈的載玻片上，滴加幾滴卡諾固定液驅(qū)散玻片上的水分，用帶齒的長(zhǎng)嘴眼科鑷子快速反復(fù)夾擠根尖約5 s，使分生區(qū)細(xì)胞均勻分布在載玻片中央，用鑷子去除表皮細(xì)胞等雜質(zhì)，固定液未干前再滴加1滴卡諾固定液，輕吹固定液進(jìn)一步分散載玻片上的細(xì)胞漿，然后將載玻片置于酒精燈火焰上方來(lái)回烘烤約3 s，待載玻片上卡諾固定液燃燒，將載玻片移開(kāi)火焰，放入玻片盒中風(fēng)干。

染色和鏡檢：①常規(guī)染色用10%吉姆薩染液染色5～10 min，風(fēng)干載玻片后即可用普通光學(xué)顯微鏡100～400倍鏡檢；②熒光染色用0.1 μg/mL DAPI室溫染色10 min，晾干載玻片后滴加20 μL丙三醇，蓋上1.5 cm×1.5 cm蓋玻片，用指甲油封邊，最終獲得不同倍性西瓜染色體標(biāo)本，用熒光顯微鏡紫外激發(fā)通道鏡檢。

2. 2 不同倍性西瓜的核型分析

采用改良型酶解去壁火焰干燥法獲得的不同倍性西瓜染色體標(biāo)本，其染色體數(shù)目完整，分散均勻，形態(tài)清晰，著絲點(diǎn)、長(zhǎng)臂和短臂均易識(shí)別（圖1），說(shuō)明該改良型染色體制片方法雖簡(jiǎn)化了前低滲、后低滲和再固定3個(gè)步驟，但不影響染色體制片的成功率，可節(jié)約制片時(shí)間1.5～3.0 h，因此提高了染色體制片效率。

對(duì)比常規(guī)染色與熒光染色效果（圖1-D～F）發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于常規(guī)染色，經(jīng)熒光染色后不同倍性西瓜染色體制片背景更干凈，反差明顯，染色體著絲點(diǎn)和端部的輪廓更清晰，因此更容易識(shí)別和測(cè)量，核型分析數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。其中，三倍體西瓜染色體熒光帶型尤為清晰，熒光亮度柔和（圖1-E）；二倍體和四倍體西瓜染色體存在一定的散射熒光（圖1-D、圖1-F）。不同倍性西瓜的DAPI帶型染色面積均較大，陰性帶與陽(yáng)性帶差異不明顯，未顯現(xiàn)出明顯的熒光帶型。

比較常規(guī)核型分析與熒光核型分析數(shù)據(jù)（表1）發(fā)現(xiàn)，不同倍性西瓜的熒光核型與常規(guī)核型差異不明顯，除三倍體西瓜熒光核型包含1組近中部著絲點(diǎn)染色體（sm）外，其他材料的核型均由中部著絲點(diǎn)（m）染色體組成，二倍體西瓜核型公式為2n=2x=22m，三倍體西瓜核型公式為2n=3x=33m或2n=3x=30m+3sm，四倍體西瓜核型公式為2n=4x=44m。不同倍性西瓜最長(zhǎng)與最短染色體的比值為1.24～1.55，小于2.00，臂比值大于2.00的染色體比率為0。按照Stebbin核型分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)判斷，本研究所有試驗(yàn)材料的核型均屬于1A型，為基本對(duì)稱(chēng)型，說(shuō)明西瓜的系統(tǒng)進(jìn)化演化程度較低，導(dǎo)致其遺傳背景狹窄。

2. 3 常規(guī)核型分析與熒光核型分析的效果比較

常規(guī)核型分析是指以常規(guī)染色劑進(jìn)行染色后再進(jìn)行核型分析。常規(guī)染色劑包括吉姆薩、醋酸洋紅、卡寶品紅和石碳酸品紅等染色劑。其中，吉姆薩染色法是在制片后對(duì)載玻片進(jìn)行染色，先以磷酸鹽溶液預(yù)染10～30 min，再以10%～20%的工作液染色5～10 min；而醋酸洋紅、卡寶品紅或石碳酸品紅染色法是在壓片前對(duì)解離后的根尖、莖尖等制片材料進(jìn)行整體染色，然后以45%冰醋酸進(jìn)行分色、壓片，最后用光學(xué)顯微鏡鏡檢。常規(guī)染色法的優(yōu)點(diǎn)：染料價(jià)格低廉，染色效果持久。其缺點(diǎn)是：核型分析數(shù)據(jù)不夠準(zhǔn)確；染色液配制有一定難度，染色時(shí)間較長(zhǎng)，易在制片過(guò)程中產(chǎn)生雜質(zhì)染色，導(dǎo)致鏡檢時(shí)視野雜亂，鏡檢效率低，每檢測(cè)一張玻片平均耗時(shí)1.0～2.0 h；染色體的著絲點(diǎn)和端部輪廓不夠清晰，導(dǎo)致核型分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性較低。

熒光核型分析是指以熒光染色劑進(jìn)行染色后再進(jìn)行核型分析。熒光染色法一般使用DAPI或PI滴加到染色體樣本玻片上，室溫染色約10 min，再蓋上蓋玻片，即可用熒光顯微鏡進(jìn)行鏡檢。熒光染色法的優(yōu)點(diǎn)：染色速度快；鏡檢效率高（每檢測(cè)一張玻片平均耗時(shí)僅0.5 h）；分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確；制片過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)無(wú)法染色，鏡檢時(shí)視野內(nèi)只有明亮細(xì)胞分裂相點(diǎn)綴在深色背景上，反差明顯，可快速準(zhǔn)確地搜尋到染色體中期分裂相；經(jīng)熒光染色的染色體，DAPI帶主要出現(xiàn)在染色體的端部和著絲粒位置，少數(shù)帶位于染色體中間位置（Huang et al.，2007），可準(zhǔn)確識(shí)別染色體著絲點(diǎn)和端部輪廓，精準(zhǔn)測(cè)量染色體長(zhǎng)臂、短臂長(zhǎng)度進(jìn)行核型分析。其缺點(diǎn)是：需熒光顯微鏡和熒光染料，因此試驗(yàn)成本較高。此外，由于熒光染料容易猝滅，以高倍鏡觀察細(xì)胞分裂相時(shí)，熒光會(huì)越來(lái)越暗，因此需添加抗熒光衰竭劑封片以延緩熒光衰退。

3 討論

植物染色體制片技術(shù)已相對(duì)成熟，但常規(guī)染色體制片技術(shù)和核型分析仍存在不足之處（李桂芬，2011；李桂芬等，2013）。本研究采用二倍體西瓜為對(duì)照，在陳瑞陽(yáng)等（1979）的去壁—低滲火焰干燥法基礎(chǔ)上，對(duì)三倍體和四倍體西瓜的染色體制片技術(shù)進(jìn)行簡(jiǎn)化，并用熒光染料DAPI和吉姆薩染色劑分別染色，對(duì)比熒光核型分析與常規(guī)核型分析結(jié)果的異同。

西瓜的染色體多數(shù)為中部著絲點(diǎn)染色體，形態(tài)非常相似，同時(shí)各品種間染色體的大小無(wú)明顯區(qū)別（趙虎基等，2000；袁建民等，2013），缺乏染色體標(biāo)志和次級(jí)結(jié)構(gòu)如次縊痕。本研究獲得的二倍體和四倍體西瓜核型與前人的研究結(jié)果（張成福等，1987；趙虎基等，2000；李琦等，2007；袁建民等，2013）基本相同，僅各染色體的相對(duì)長(zhǎng)度和絕對(duì)長(zhǎng)度有所差異，可能與試驗(yàn)方法不同有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，三倍體西瓜核型包含一組sm染色體，可能是雜交組配的父母本基因型差異所致，未見(jiàn)前人有類(lèi)似研究報(bào)道，因此需進(jìn)一步探究核實(shí)。

此外，不同倍性西瓜熒光核型未顯現(xiàn)出明顯的熒光帶型，4種堿基的分布相對(duì)較均勻，AT富含區(qū)或GC富含區(qū)相對(duì)較少，因此很難出現(xiàn)非常清晰且穩(wěn)定的陽(yáng)性帶或陰性帶。同時(shí)，三倍體西瓜熒光帶型較二倍體和四倍體西瓜清晰，可能是使用的熒光染料及檢測(cè)儀器不同所造成（三倍體西瓜染色體用DAPI純?nèi)芤喝旧?，用尼康相差熒光顯微鏡檢測(cè)；二倍體和四倍體西瓜染色體用含封片劑的DAPI雜合溶液染色，用萊卡熒光顯微鏡檢測(cè)）。

有報(bào)道應(yīng)用Giemsa—C帶技術(shù)可分辨一些西瓜品種的同源染色體（張成福等，1987；鄭素秋，1988），以5S rDNA和45S rDNA為探針的FISH法也可成功鑒別兩個(gè)基因組（李琦等，2007；常珂瑋等，2012；江姣等，2012），但西瓜染色體核型圖具有相似性使其同源染色體的鑒別比較困難，而一些作物的GISH（基因組原位雜交技術(shù)）帶型可同時(shí)呈現(xiàn)FISH帶和Giemsa—C帶，表明可將GISH帶型作為核型分析的細(xì)胞學(xué)標(biāo)志（Marasek-Ciolakowska et al.，2012）。鑒于西瓜染色體核型的高度相似性，常規(guī)核型分析、熒光核型分析均無(wú)法準(zhǔn)確鑒別每條染色體，在后續(xù)工作中，應(yīng)將改良多倍體西瓜染色體制片技術(shù)、熒光核型分析技術(shù)與GISH結(jié)合起來(lái)，通過(guò)基因定位，提供更清晰穩(wěn)定的染色體標(biāo)記來(lái)實(shí)現(xiàn)西瓜染色體的區(qū)分鑒定及揭示在育種過(guò)程中遺傳變異的來(lái)源、染色體的滲入和多倍體的來(lái)源等染色體行為。

4 結(jié)論

以改良型酶解去壁火焰干燥法進(jìn)行多倍體西瓜染色體制片較使用傳統(tǒng)的去壁—火焰干燥法簡(jiǎn)化了用KCl溶液前低滲、后低滲及用卡諾固定液再固定3個(gè)步驟，可縮短制片時(shí)間1.0～2.0 h，提高制片效率，獲得的染色體樣本數(shù)目齊全、分散良好、形態(tài)清晰；用DAPI染色比用吉姆薩染色更容易檢測(cè)到細(xì)胞中期分裂相，每張玻片可縮短檢測(cè)時(shí)間0.5～1.5 h；染色體的著絲點(diǎn)、長(zhǎng)臂、短臂形態(tài)更清晰。因此，采用改良型酶解去壁火焰干燥法可提高多倍體西瓜的染色體制片效率，對(duì)該制片進(jìn)行熒光核型分析比常規(guī)核型分析更準(zhǔn)確，效率更高。

參考文獻(xiàn)：

常珂瑋，沈君君，李宗蕓，韓永華. 2012. 西瓜與近緣種親緣關(guān)系的比較基因組原位雜交分析[J]. 植物科學(xué)學(xué)報(bào)，30（4）：402-406.

Chang K W，Shen J J，Li Z Y，Han Y H. 2012. Genomic homo-

logy between Citrullus lanatus and its close relatives revealed by comparative genomic in situ hybridization[J]. Plant Science Journal，30（4）：402-406.

陳瑞陽(yáng)，宋文芹，李秀蘭. 1979. 植物有絲分裂染色體標(biāo)本制作的新方法[J]. 植物學(xué)報(bào)，21（3）：297-298.

Chen R Y，Song W Q，Li X L. 1979. A new method for prepa-

ring mitotic chromosomes from plant[J]. Acta Botanica Sinica，21（3）：297-298.

刁英，陳思，黃雨蝶，周明全，胡中立. 2005. 蕹菜的DAPI顯帶核型[J]. 氨基酸和生物資源，27（1）：32-34.

Diao Y，Chen S，Huang Y D，Zhou M Q，Hu Z L. 2005. DAPI banded karyotype of Ipomoea aquantica Forsk（I. reptans Poir）[J]. Amino Acids & Biotic Resources，27（1）：32-34.

郭啟高，宋明，楊天秀，梁國(guó)魯. 2000. 西瓜試管苗中四倍體鑒定方法研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，22（3）：261-262.

Guo Q G，Song M，Yang T X，Liang G L. 2000. Study on identification mentihods for tetraploids from tube cultured seedlings of watermelon（Citrullus vulgaris）[J]. Journal of Southwest Agricultural University，22（3）：261-262.

江姣，張海英，郭紹貴，任毅，孫宏賀，宮國(guó)義，許勇，趙泓. 2012. 普通西瓜3個(gè)變種45S rDNA和5S rDNA的染色體定位[J]. 果樹(shù)學(xué)報(bào)，29（5）：764-769.

Jiang J，Zhang H Y，Guo S G，Ren Y，Sun H H，Gong G Y，Xu Y，Zhao H. 2012. Chromosomal polymorphism of ribosomal genes in the genus watermelon[J]. Journal of Fruit Science，29（5）：764-769.

李桂芬. 2011. 枇杷屬植物遠(yuǎn)緣雜交及核型分析研究[D]. 廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué).

Li G F. 2011. A study on karyotype analysis and distant hybri-

dization compatibility of genus Eriobotrya plants[D]. Guang-

zhou：South China Agricultural University.

李桂芬，梁國(guó)魯，林順權(quán). 2013. 枇杷屬植物核型分析及其在系統(tǒng)分類(lèi)中的應(yīng)用[J]. 園藝學(xué)報(bào)，40（8）：1468-1474.

Li G F，Liang G L，Lin S Q. 2013. A study on karyotype analysis of genus Eriobotrya and its application to systematic taxonomy[J]. Acta Horticulturae Sinica，40（8）：1468-1474.

李懋學(xué)，陳瑞陽(yáng). 1985. 關(guān)于植物核型分析的標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題[J]. 武漢植物學(xué)研究，3（4）：297-302.

Li M X， Chen R Y. 1985. A suggest on the standadization of karyotype analysis in plants[J]. Journal of Wuhan Botanical Reseach，3（4）：297-302.

李琦，馬璐，黃婧，李立家. 2007. 西瓜、苦瓜與羅漢果染色體的rDNA定位及其核型分析[J]. 武漢大學(xué)學(xué)報(bào)（理學(xué)版），53（4）：449-456.

Li Q，Ma L，Huang J，Li L J. 2007. Chromosomal localization of ribosomal DNA sites and karyotype analysis in three species of Cucurbitaceae[J]. Journal of Wuhan University（Natural Science Edition），53（4）：449-456.

劉文革，閻志紅，趙勝杰，古勤生，李麗. 2009. 不同染色體倍性西瓜對(duì)枯萎病的抗性研究[J]. 長(zhǎng)江蔬菜，（18）：19-20.

Liu W G，Yan Z H，Zhao S J，Gu Q S，Li L. 2009. Study on resistance to Fusarium wilt in different polyploidy of watermelons[J]. Journal of Changjiang Vegetables，（18）：19-20.

施先鋒，彭金光，李煜華，曾紅霞，杜念華，汪李平. 2010. 西瓜多倍體鑒定方法的研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，（2）：273-275.

Shi X F，Peng J G，Li Y H，Zeng H X，Du N H，Wang L P. 2010. Studies on the methods of identification of polyploid watermelon[J]. Zhejiang Agricultural Sciences，（2）：273-275.

譚素英，黃秀強(qiáng)，劉文革. 1994. 三倍體無(wú)籽西瓜的優(yōu)越性及系列無(wú)籽西瓜新品種[J]. 中國(guó)西瓜甜瓜，（4）：22-23.

Tan S Y，Huang X Q，Liu W G. 1994. The superiority of triploid seedless watermelon and a series of new seedless waterme-

lon varieties[J]. China Watermelon and Melon，（4）：22-23.

肖光輝，肖蘭異，吳德喜，鄭素秋，許勇，陶抵輝，王杏元. 1997. 瓠瓜DNA導(dǎo)入西瓜變異后代的同工酶和染色體分析[J]. 中國(guó)西瓜甜瓜，（3）：8-11.

Xiao G H，Xiao L Y，Wu D X，Zheng S Q，Xu Y，Tao D H，Wang X Y. 1997. Isozyme analysis and chromosome variation of watermelon progeny imported bottle gourd DNA[J]. China Watermelon and Melon，（3）：8-11.

謝莉，曾艷華，李冬郁，韓永華. 2008. 栽培高粱、甜高粱和擬高粱前中期染色體DAPI顯帶核型[J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，14（15）：48-50.

Xie L，Zeng Y H，Li D Y，Han Y H. 2008. DAPI banded karyo-

type of prometaphase chromosomes in S. bicolor，S. dochna and S. propinquum[J]. Anhui Agricultural Science Bulletin，14（15）：48-50.

徐道娜，薛志強(qiáng)，李世棟，馬建祥，楊建強(qiáng)，張勇，張顯. 2007. 西瓜染色體壓片技術(shù)改進(jìn)研究[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，16（6）：301-304.

Xu D N，Xue Z Q，Li S D，Ma J X，Yang J Q，Zhang Y， Zhang X. 2007. Study on chromosome pressing technology improve-

ment in watermelon[J]. Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica，16（6）：301-304.

袁建民，黨選民，詹園鳳，李易蓉，但忠，楊長(zhǎng)楷. 2013. 二倍體及同源四倍體小果型西瓜核型分析[J]. 北方園藝，（23）：40-43.

Yuan J M，Dang X M，Zhan Y F，Li Y R，Dan Z，Yang C K. 2013. Karyotype analysis of diplod and autotetraploid mini-watermelon[J]. Northern Horticulture，（23）：40-43.

張成福，馬正譚，魏曉明，郭德棟. 1987. 西瓜粗線(xiàn)期染色體形態(tài)[J]. 北方園藝，（1）：7-10.

Zhang C F，Ma Z T，Wei X M，Guo D D. 1987. Chromosome morphology of watermelon in rough line[J]. Northern Horticulture，（1）：7-10.

張志忠，呂柳新. 2009. 西瓜第一染色體顯微分離及其特異文庫(kù)的構(gòu)建[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，30（12）：1083-1087.

Zhang Z Z，Lü L X. 2009. Microdissection of the first chromosome and construction of its DNA library in watermelon[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，30（12）：1083-1087.

趙虎基，樂(lè)錦華，李紅霞，魏凌基. 2000. 西瓜種染色體核型與品種（系）間親緣關(guān)系研究[J]. 北方園藝，（1）：22-23.

Zhao H J，Yue J H，Li H X，Wei L J. 2000. Studies on karyotype of clanatus and genetic relationships amone varieties[J]. Nor-

thern Horticulture，（1）：22-23.

鄭素秋. 1988. 西瓜三品種染色體Giemsa-C帶帶型和核型觀察初報(bào)[J]. 中國(guó)西瓜甜瓜，（1）：24-26.

Zheng S Q. 1988. A preliminary report on the chromosome Giemsa-C band pattern and karyotype of three watermelon varieties[J]. China Watermelon and Melon，（1）：24-26.

Belonogova N M，Karamysheva T V. 2006. Identification of all pachytene bivalents in the common shrew using DAPI staining of synaptonemal complex spreads[J]. Chromosome Research，14（6）：673-679.

Huang X T，Hu J J，Hu X L，Zhang C，Zhang L L，Wang S，Lu W，Bao Z M. 2007. Cytogenetic characterization of the bay scallop，Argopecten irradians，by multiple staining techniques and fluorescence in situ hybridization[J]. Genes Genetic Systems，82（3）：257-263.

Levan A，F(xiàn)redga K，Sandberg A A. 1964. Nomenclature for centromeric position on chromosomes[J]. Hereditas，52（2）：201-220.

Marasek-Ciolakowska A，He H，Bijman P，Ramanna M S，Arens P，Van Tuyl J M. 2012. Assessment of intergenomic recombination through GISH analysis of F1，BC1 and BC2 progenies of Tulipa gesneriana and T. fosteriana[J]. Plant Systematics and Evolution，298（5）：887-899.

Stebbins G L. 1971. Chromosomal Evolution in Higher Plants[M]. London：Academic Press.

（責(zé)任編輯 思利華）