路滟　林凌云　周錚　譚京廣　曹彬　許曦　謝旭　梅樹江

【摘要】 目的 探討主要組織相容性復合體（MHC）抗原加工遞呈相關(guān)基因HLA-DOA和HLA-DOB多態(tài)性與丙型肝炎病毒（HCV）易感性的關(guān)系。方法 選取994例靜脈注射吸毒人群， 均進行檢測血清中抗-HCV， 將抗-HCV陰性者493例作為抗-HCV陰性組， 抗-HCV陽性者501例作為抗-HCV陽性組。分析HLA-DOA和HLA-DOB基因SNPs與HCV感染易感性的關(guān)系以及環(huán)境-基因的交互作用。結(jié)果 研究對象中年齡最小12歲， 最大64歲， 抗-HCV陽性組平均年齡（36.0±7.5）歲， 抗-HCV陰性組平均年齡（34.0±7.9）歲；抗-HCV陽性組年齡略高于抗-HCV陰性組， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。兩組性別構(gòu)成比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.155>0.05）；非深圳戶籍人口抗-HCV陽性率（51.8%）略高于深圳戶籍（40.0%）， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。兩組在文化程度上均以初中及以下為主， 但在構(gòu)成上比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）， 抗-HCV陰性組的高中及以上學歷構(gòu)成（24.3%）高于抗-HCV陽性組（17.0%）?？?HCV陽性組谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的水平顯著高于抗-HCV陰性組（P<0.01）。在吸毒人群中， HLA-DOA rs3128935 T→C和HLA-DOB rs2071469 A→G突變的改變均能顯著降低個體感染HCV的風險， 在調(diào)整了年齡、性別、戶籍和文化程度以后， 攜帶突變等位基因純合子的個體發(fā)生HCV感染的可能性降低一半， OR值分別為0.32和0.50， P<0.01。結(jié)論 HLA-DOA rs3128935和HLA-DOB rs2071469突變的改變均能顯著降低吸毒人群感染HCV的風險。

【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒；遺傳多態(tài)性；抗原加工遞呈；感染結(jié)局；中國人群

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.32.001

【Abstract】 Objective To investigate relationship between major histocompatibility complex （MHC） antigen processing machinery related HLA-DOA and HLA-DOB polymorphism and hepatitis C virus （HCV） infection susceptibility. Methods A total of 994 intravenous drug abuse people all received serum anti-HCV detection. 493 cases with negative anti-HCV were taken as negative anti-HCV group， and 501 cases with positive anti-HCV cases as positive anti-HCV group. Analysis was made on relationship between SNPs of HLA-DOA， HLA-DOB and HCV infection susceptibility， and reciprocal action of environment-gene. Results The youngest case aged 12 years old and the eldest case aged 64 years old， with mean age as （36.0±7.5） years old in positive anti-HCV group and （34.0±7.9） years old in negative anti-HCV group. Age in the positive anti-HCV group was slightly higher than the negative anti-HCV group， and the difference had statistical significance （P<0.01）. There was no statistically significant difference of gender composition between the two groups （P=0.155>0.05）. Migrant population without registered Shenzhen residence had higher positive anti-HCV rate （51.8%） than drug abuse population with registered Shenzhen residence （40.0%）， and the difference had statistical significance （P<0.05）. Both groups had main educational level under junior high school， while their difference of composition had statistical significance （P<0.05）. The negative anti-HCV group had higher proportion of educational level above senior high school （24.3%） than the positive anti-HCV group （17.0%）. The positive anti-HCV group had much higher alanine transaminase and aspartate aminotransferase levels than negative anti-HCV group （P<0.05）. Changes of HLA-DOA rs3128935 T→C and HLA-DOB rs2071469 A→G mutation remarkably reduce individual HCV infection risk in drug abuse population. Regulation of age， gender， census register and education level led to half reduced possibility of HCV infection in mutation isoallele homozygote individual， along with OR value as 0.32 and 0.50 （P<0.01）. Conclusion Changes of HLA-DOA rs3128935 and HLA-DOB rs2071469 mutation can remarkably reduce HCV infection risk in drug abuse population.

【Key words】 Hepatitis C virus； Genetic polymorphism； Antigen processing machinery； Infection outcome； Chinese population

丙型肝炎（簡稱丙肝）是由HCV（hepatitis C virus）感染引起的一種肝臟疾病， 主要經(jīng)血液傳播， 人類對HCV普遍易感。丙肝在普通人群中的感染率約為3.2%， 在吸毒人群中可達18.30%～66.97%， 靜脈注射吸毒人群更是高達75%[1， 2]。宿主在HCV感染后不同的臨床發(fā)展過程， 除了與病毒株的性質(zhì)相關(guān)， 也與宿主自身的遺傳背景相關(guān)。人類白細胞抗原（human leucocyte antigen， HLA）是人類的主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex， MHC）， 宿主對HCV的細胞免疫反應很大程度上取決于人類HLA基因系統(tǒng)所編碼的HLA分子對病毒表位的加工和遞呈[3]。因此， HLA基因的多態(tài)性改變可能會影響HCV的感染和轉(zhuǎn)歸。HLA-DO屬于HLAⅡ類基因， DO分子是HLA-DM分子功能的負向調(diào)節(jié)蛋白， 從而影響外源性抗原的加工遞呈過程[4]。本研究運用分子流行病學檢測手段進行病例-對照研究， 比較抗-HCV陽性者和抗-HCV陰性者中HLA-DO基因多態(tài)性的分布差異， 探討HLA-DO基因多態(tài)性與HCV感染易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取的994例吸毒人員來自于“十一五”和“十二五”國家科技重大專項：“深圳市艾滋病、病毒性肝炎社區(qū)綜合防治研究”項目建立的吸毒人群隊列、深圳市司法局第一強制隔離戒毒所的戒毒人員以及深圳市美沙酮門診受治者， 本研究采用分子流行病學研究的病例對照設計。所有納入對象均進行檢測血清中抗-HCV， 將抗-HCV陰性者493例作為抗-HCV陰性組， 抗-HCV陽性者501例作為抗-HCV陽性組。采用專門設計的“藥物濫用監(jiān)測調(diào)查表”對吸毒人員進行調(diào)查， 在知情同意的基礎上由專業(yè)人員經(jīng)過培訓后對調(diào)查對象進行逐項詢問填寫， 內(nèi)容包括社會人口學資料、吸毒史等。

1. 2 實驗室檢測 經(jīng)知情同意后， 采集研究對象空腹靜脈血5 ml， 分離上層血清、中間層白細胞和下層紅細胞， 分別置1.5 ml 離心管中， -20℃冷凍保存?？?HCV檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）。診斷試劑由北京萬泰生物藥業(yè)有限公司提供， 均嚴格按照試劑盒說明書操作與判斷結(jié)果。檢測儀器使用芬蘭雷勃Multiskan MK3 中文酶標儀， 洗板機為Bio-Tek 公司ELx50 型號。基用蛋白酶K和酚-氯仿處理白細胞， 提取基因組DNA。采用TaqMan探針方法， 使用ABI Prism?7900HT型熒光定量PCR儀對HLA-DOA、HLA-DOB基因多態(tài)位點進行基因分型。

1. 3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗；影響因素Logistic回歸分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組研究對象的一般社會人口學特征比較 研究對象中年齡最小12歲， 最大64歲， 抗-HCV陽性組平均年齡（36.0±7.5）歲， 抗-HCV陰性組平均年齡（34.0±7.9）歲；抗-HCV陽性組年齡略高于抗-HCV陰性組， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。兩組性別構(gòu)成比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.155>0.05）；非深圳戶籍人口抗-HCV陽性率（51.8%）略高于深圳戶籍（40.0%）， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。兩組在文化程度上均以初中及以下為主， 但在構(gòu)成上比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）， 抗-HCV陰性組的高中及以上學歷構(gòu)成（24.3%）高于抗-HCV陽性組（17.0%）?？?HCV陽性組谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的水平顯著高于抗-HCV陰性組（P<0.01）。見表1。

2. 2 HLA-DOA 、HLA-DOB基因多態(tài)性與HCV 感染易感性的關(guān)聯(lián) 在吸毒人群中， HLA-DOA rs3128935 T→C和HLA-DOB rs2071469 A→G突變的改變均能顯著降低個體感染HCV的風險， 在調(diào)整了年齡、性別、戶籍和文化程度以后， 攜帶突變等位基因純合子的個體發(fā)生HCV感染的可能性降低一半， OR值分別為0.32和0.50， P<0.01。見表2。

3 討論

本研究從HapMap中國人群SNPs數(shù)據(jù)庫中篩選出HLA-DOA基因的rs3128935和HLA-DOB rs2071469兩個潛在功能性位點， 采用病例對照研究設計， 探討HLA-DO基因多態(tài)性與吸毒人群HCV感染易感性的關(guān)系。結(jié)果表明， HLA-DOA rs3128935和HLA-DOB rs2071469位點的改變均能顯著降低個體感染HCV的風險， 在調(diào)整了年齡、性別、戶籍和文化程度以后， 攜帶突變等位基因純合子的個體發(fā)生HCV感染的可能性降低一半。

目前， 丙型肝炎發(fā)病機制和慢性化機理尚未研究清楚。但是諸多研究認為HCV感染后不同的臨床結(jié)局不僅取決于病毒株的性質(zhì)， 同時也與宿主對HCV 感染的遺傳易感性有關(guān)。另外， 很多研究表明宿主對HCV的易感性與人類MHC HLA基因多態(tài)性有關(guān)， 但以往對于HLA基因多態(tài)性的相關(guān)研究通常大多是聚焦于HLA Ⅰ類和Ⅱ類經(jīng)典基因的研究上， 而對于HLA非經(jīng)典基因多態(tài)性與疾病特別是HCV感染易感性的關(guān)系研究很少。HLA-DO基因?qū)儆贖LA非經(jīng)典基因， 由于其產(chǎn)物在機體免疫應答的抗原遞呈過程中起到重要作用[4-7]。因此， 作者推測HLA-DO的多態(tài)性很可能與HCV 的易感性有關(guān)。

本次研究結(jié)果顯示， HLA-DOB rs2071469位點的改變與HCV感染易感性顯著相關(guān)。與攜帶A等位基因的個體相比， 攜帶G等位基因的個體， 尤其是吸毒人群， 發(fā)生HCV感染的幾率下降一半。HLA-DOB rs2071469位點位于5UTR， 其改變對蛋白的表達和活性的影響仍舊需要更多的研究來支持。除此之外， 研究還顯示HLA-DOA rs3128935 T→C的改變同樣與HCV感染易感性顯著相關(guān)， 攜帶C等位基因的吸毒人群與攜帶T等位基因的吸毒人群相比， 其感染HCV的風險降低。研究發(fā)現(xiàn)HLA-DOA rs3128935 T→C的改變能影響HCV感染后的轉(zhuǎn)歸。

目前， 關(guān)于DO 分子的功能仍不清楚。已知， 在B細胞中， HLA- DO 作為DM分子的分子伴侶， 負性調(diào)節(jié)外源性抗原內(nèi)吞途徑中HLA- DM分子的作用， 從而負性調(diào)節(jié)抗原的遞呈過程， 減少抗體的產(chǎn)生和免疫復合物的形成[4]。因此， 需要更多功能性的研究來驗證本研究的結(jié)果。

參考文獻

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[收稿日期：2016-10-16]