李倩，顧珉

蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，江蘇蘇州215000

淺析4家藥企潔凈室環(huán)境檢出菌

李倩，顧珉

蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，江蘇蘇州215000

目的收集4家藥企潔凈室環(huán)境中24株微生物并進行初步鑒定，旨在了解潔凈室微生物污染趨勢。方法4家藥企采用平皿法收集潔凈室環(huán)境中的微生物，通過Vitek2-compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)鑒定收集到的環(huán)境菌并進行分析。結(jié)果共檢出8種革蘭氏陽性球菌、3種革蘭氏陽性芽孢桿菌、2種革蘭氏陰性桿菌。其中革蘭氏陽性菌占檢出菌的87.5%，革蘭氏陰性菌占檢出菌的12.5%、革蘭氏陽性球菌占檢出菌的75.0%、革蘭氏芽孢桿菌占檢出菌的12.5%、革蘭氏陰性桿菌占檢出菌的12.5%。結(jié)論4家藥企潔凈室收集的24株環(huán)境微生物主要檢出菌類為革蘭氏陽性球菌，各潔凈室需采取相應(yīng)的消毒措施對其控制。

Vitek2-compact；潔凈室；細菌鑒定

隨著新版GMP的實行，藥企越來越重視生產(chǎn)車間的環(huán)境監(jiān)測。不僅要控制空氣中的懸浮氣溶膠粒子，還需監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境中活的微生物。該實驗收集4家藥企潔凈室環(huán)境中24株微生物并進行初步鑒定，旨在了解潔凈室微生物污染趨勢，并采取相應(yīng)措施對污染微生物進行控制。

1 試驗部分

1.1 樣本

2016年1月—12月間4家藥企潔凈室共收集24株環(huán)境菌送檢，送檢樣本編號為1#～24#。

1.2 培養(yǎng)基

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）

1.3 試劑及試驗耗材

革蘭氏染色試劑、Vitek2-compact配套滅菌生理鹽水、一次性接種環(huán)、一次性接種棉簽、GP（革蘭陽性）鑒定卡、GN（革蘭陰性）鑒定卡、BCL（芽孢桿菌）鑒定卡

1.4 儀器

生物安全柜（型號：Esco LA2-4A1）、生化培養(yǎng)箱（型號：LRH-50）、麥氏濁度比濁儀、生物顯微鏡（型號：BX53）、Vitek2-compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)、高壓蒸汽滅菌器（型號：MLS-3781L-PC）。

2 試驗步驟

2.1 待鑒定菌株分離純化

將24株送檢樣本分別劃線轉(zhuǎn)種至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）平板，置32℃培養(yǎng)24 h，得到單菌落。

2.2 革蘭氏染色及鏡檢

從24株樣本轉(zhuǎn)種的TSA平板挑取單菌落進行革蘭氏染色，將已染色的玻片，放在顯微鏡下觀察，記錄所得結(jié)果。

2.3 采用Vitek2-compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)鑒定

根據(jù)鏡檢結(jié)果，另挑取上述24株樣本菌落適量，將革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌用滅菌生理鹽水制成比濁度約0.5～0.6之間的菌懸液，將革蘭氏陽性芽孢桿菌用滅菌生理鹽水制成比濁度約2.0的菌懸液，并選擇對應(yīng)的鑒定卡片將制備的菌懸液放入鑒定儀器樣品架上機檢測。

3 鑒定結(jié)果分析

從表1可以看出，大多數(shù)鑒定結(jié)果都在90.00%以上，說明檢測可信度較好，只有一株菌的鑒定結(jié)果為85.00%，說明檢測可信度可以接受。24株環(huán)境菌中共檢出8種革蘭氏陽性球菌、3種革蘭氏陽性芽孢桿菌、2種革蘭氏陰性桿菌。檢出頻率最高的是沃氏葡萄球菌，其次是藤黃/里拉微球菌。

從圖1和圖2可以看出革蘭氏陽性菌占檢出菌的87.50%，革蘭氏陰性菌占檢出菌的12.50%；革蘭氏陽性球菌占檢出菌的75.00%、革蘭氏芽孢桿菌占檢出菌的12.50%、革蘭氏陰性桿菌占檢出菌的12.50%。

4 對策

從上述菌型分析結(jié)果可得出，這4家藥企潔凈室環(huán)境菌檢出率最高的是革蘭氏陽性球菌，而居其首位的是沃氏葡萄球菌和藤黃/里拉微球菌，這兩種菌均為潔凈室環(huán)境的主要菌群，沃氏葡萄球菌是葡萄球菌屬的一種，主要存在于環(huán)境、人與動物的皮膚及粘膜上，顯微鏡下呈葡萄串狀。藤黃/里拉微球菌主要分布在空氣、土壤、水、動植物體表。這兩種菌極有可能為潔凈室人員帶入，應(yīng)做好進出人員的防護，還必須加強潔凈室環(huán)境滅菌消毒的管理與監(jiān)控。

表1 24株環(huán)境菌Vitek2-compact鑒定結(jié)果

4.1 消毒劑消毒

消毒劑分非氧化型和氧化型，非氧化型消毒劑如季銨鹽類化合物一般不具備殺滅芽孢的能力，其殺菌譜較窄，對綠膿桿菌等革蘭陰性菌作用也較差，對細菌芽孢基本無效[1]。而氧化型消毒劑如過氧乙酸、二氧化氯、次氯酸鹽等可在不同程度上殺滅芽孢[2]。有文獻報道國外現(xiàn)普遍采用戊二醛噴灑，且加入陽離子表面活性劑（如季銨鹽）能明顯增強戊二醛對細菌芽孢的滅殺作用[3]。檢出革蘭氏陽性芽孢桿菌的藥企潔凈室需引起重視，根據(jù)潔凈室檢出菌選擇合理的殺孢子劑。藥企潔凈室的日常消毒劑的種類必須多余一種，可減少微生物出現(xiàn)耐藥性的風(fēng)險。各藥企潔凈室需根據(jù)消毒劑的殺菌譜、功效等選擇合理的潔凈室消毒劑。

4.2 空氣消毒

4.2.1 紫外線照射法紫外線在波長250～270 um時殺菌作用最強，可殺滅各種微生物包括細菌繁殖體、細菌芽孢、真菌等[4]。但各藥企潔凈室的紫外燈燈管吊裝高度、照射時間、日照射次數(shù)、季度檢測紫外燈輻射強度、使用的環(huán)境溫濕度等都必須符合要求。

圖1 24株環(huán)境菌污染趨勢分析圖

圖2 24株環(huán)境菌菌型分析統(tǒng)計圖

4.2.2 臭氧消毒法臭氧可殺滅細菌繁殖體、真菌等。在密閉的空間內(nèi)、無人狀態(tài)下，采用20 mg/m3濃度的臭氧作用30min，對自然菌的殺滅率達到90.0%以上[5]。

4.2.3 過氧化氫干霧滅菌比傳統(tǒng)甲醛熏蒸更有優(yōu)勢，體現(xiàn)在無毒、無色、無味、log4-log6的光譜高效滅菌效果，整體滅菌只需3～4 h，表面空間均無殘留，不需清潔處理等。過氧化氫干霧消毒效果優(yōu)于臭氧消毒，體現(xiàn)在臭氧很難達到殺滅孢子的效果，一般只能殺活菌，而過氧化氫殺菌效力廣譜高效，可同時殺滅200種微生物，30 min對黑色枯草芽孢、嗜熱脂肪芽孢桿菌的殺滅率穩(wěn)定[6]。

4.3 化學(xué)與物理方法聯(lián)用消毒

常采用的物理因子有熱力、紫外線、微波、超聲波、電離輻射。將這些物理因子與化學(xué)消毒劑聯(lián)用，也可使用兩種或兩種以上化合物組成復(fù)方消毒劑，也可獲得更好的殺菌效果[7]。

5 結(jié)語

通過對4家藥企潔凈室收集的24株環(huán)境微生物分析鑒定得出潔凈室中主要檢出菌類為革蘭氏陽性球菌，各潔凈室需采取相應(yīng)的消毒措施來控制其檢出的環(huán)境菌。在日常生產(chǎn)及檢驗時收集潔凈室環(huán)境微生物對企業(yè)潔凈室的微生物的質(zhì)控和微生物數(shù)據(jù)庫的建立具有重要意義，并有助于評價潔凈室清潔或消毒規(guī)程的制定。

[1]魏秋華.抗菌劑的研究進展[J].中國消毒學(xué)雜志，2003，20（1）：31-35.

[2]黃俠.新型過氧乙酸殺芽孢劑在制藥潔凈室中的應(yīng)用[J].中國藥事，2015，29(4)：446-449.

[3]張?zhí)鞂?，肖遠志，王延輝，等.復(fù)方戊二醛與鄰苯二甲醛消毒劑對細菌芽孢殺滅效果的研究[J].中國消毒學(xué)雜志，2016，33（4）：301-304.

[4]祖?zhèn)?，班海群，沈瑾，?手術(shù)室空氣消毒方法與效果的研究現(xiàn)狀[J].中國消毒學(xué)雜志，2014，31（3）：277-280.

[5]WS/T367-2012醫(yī)療機構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)[S].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2012：23-36.

[6]宋大海.過氧化氫（干霧）滅菌及其在藥廠的應(yīng)用[J].機電信息，2015（20）：44-49.

[7]王芳.不同消毒因子協(xié)同殺菌作用研究進展[J].中國消毒學(xué)雜志，2000，17（3）：155-158.

R117

A

1672-5654（2017）04（a）-0056-03

2017-01-05）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.10.056

李倩(1985-)，女，江蘇鹽城人，碩士，主管藥師，主要從事藥品、保健品、化妝品的微生物檢測及潔凈室檢測工作。