薛森武,劉賢俠，王 忠，王建梅，李學(xué)新，楊永軍，江發(fā)云

(1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子 832003；2.新疆第八師142團(tuán)雙鏘牧業(yè)有限責(zé)任公司，石河子 832029；3.新疆第八師142團(tuán)畜牧中心，石河子 832029)

荷斯坦青年牛黃體直徑對(duì)移植受胎率的影響

薛森武1,劉賢俠1，王 忠2，王建梅1，李學(xué)新2，楊永軍3，江發(fā)云2

(1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子 832003；2.新疆第八師142團(tuán)雙鏘牧業(yè)有限責(zé)任公司，石河子 832029；3.新疆第八師142團(tuán)畜牧中心，石河子 832029)

【目的】為了獲得更多的純種和牛，【方法】采用臨床觀察、直腸檢查和B超檢查篩選出114頭荷斯坦牛作為受體牛，采用CIDR埋栓做同期發(fā)情，在發(fā)情后第7天用B型超聲儀對(duì)受體牛黃體直徑進(jìn)行測(cè)量，對(duì)符合條件的受體牛進(jìn)行胚胎移植，將不同黃體直徑(corpus lutum diameter,CLD)分為3個(gè)組，分別為1≤CLD≤1.5、1.52.5。在移植后第23天用B超做妊娠診斷，以便研究黃體直徑對(duì)移植受胎率的影響?！窘Y(jié)果】表明，選擇114頭牛做同期發(fā)情，發(fā)情率為96.5%(110/114)；黃體直徑1≤CLD≤1.5組、1.52.5組受胎率分別是44.44%(4/9)、45.95%(17/37)和42.11%(8/19)，各組之間差異均不顯著(P>0.05)。【結(jié)論】說(shuō)明黃體大小與胚胎移植受胎率沒(méi)有直接相關(guān)性。

荷斯坦青年牛；黃體直徑；移植受胎率

孕酮是維持妊娠所必須的激素[1]，黃體分泌的孕酮是母體建立和維持妊娠所必需的物質(zhì)，是決定子宮生理狀態(tài)的主要甾類(lèi)激素之一[2]。受體牛卵巢上黃體質(zhì)量的判定是提高受胎率的重要因素之一[3]。蔡周山等[3]用直腸檢查法對(duì)卵巢上黃體進(jìn)行檢查并劃分等級(jí)，結(jié)果顯示，A級(jí)黃體與B級(jí)黃體的受胎率差異不顯著。吳眩等[4]用直腸檢查法對(duì)受體牛進(jìn)行檢查，結(jié)果表明，不同黃體位置對(duì)受胎率影響差異不顯著。李庭芳[5]對(duì)塔城市奶牛胚胎移植時(shí)，用直腸檢查法對(duì)受體牛的黃體進(jìn)行檢查，黃體發(fā)育達(dá)到移植要求(1cm以上)進(jìn)行移植。畢江華 等[6]用直腸檢查法，選擇黃體發(fā)育良好的受體牛進(jìn)行胚胎移植。王建軍等[7]在對(duì)安格斯牛胚胎移植時(shí)用直腸檢查卵巢的發(fā)育情況及卵巢上黃體大小，判定黃體的位置并進(jìn)行分級(jí)，將質(zhì)量好的胚胎移植給黃體質(zhì)量好的牛[8]。韓志強(qiáng)等[9]于2012年用便攜式獸用線陣探頭超聲儀與直腸檢查受體牛發(fā)情后第7d黃體結(jié)果對(duì)比,結(jié)果表明：應(yīng)用B超檢測(cè)合格黃體，胚胎移植受胎率是92.3%，直腸檢查組是57.3%。差異顯著。黃體質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到受體牛移植受胎率的高低,許多研究結(jié)果證明質(zhì)量好的黃體對(duì)受體牛的移植受胎率有影響，但是大都通過(guò)直腸檢查法對(duì)受體牛卵巢上的黃體進(jìn)行檢查，國(guó)內(nèi)通過(guò)B超對(duì)受體牛卵巢上的黃體進(jìn)行檢查研究胚胎移植受胎率的報(bào)道較少，而不同大小黃體直徑再分組研究對(duì)移植受胎率的影響未見(jiàn)報(bào)道。本研究的目的是通過(guò)B型超聲儀對(duì)受體牛黃體直徑進(jìn)行測(cè)量，并分組統(tǒng)計(jì)分析不同大小黃體直徑對(duì)移植受胎率的影響。

1 材料方法

1.1 供試奶牛

在新疆第八師142團(tuán)雙鏘牧業(yè)有限責(zé)任公司奶牛場(chǎng)，該場(chǎng)無(wú)結(jié)核病和布病。選擇供移植的受體牛全部為荷斯坦青年牛，體高128 cm以上，體重350 kg以上，經(jīng)直腸檢查和B超檢查選取性周期正常、無(wú)生殖器官疾病，年齡14～16月齡。移植胚胎是引進(jìn)的日本黑和牛A級(jí)65枚胚胎。

1.2 儀器和藥品

儀器：HS-101V型便攜式獸用線陣B超儀，配備3.5/5.0MHz線陣探頭，日本HONDA電子有限公司生產(chǎn)(HONDA ELECTRONICS CO.,LTD)。通過(guò)USB借口用U盤(pán)轉(zhuǎn)存圖像于電腦。

器械：胚胎移植槍、細(xì)管剪、塑料外套，均由日本FHK公司生產(chǎn)。解凍杯由艾格威公司生產(chǎn)。

藥品：CIDR(CUE-MATE)，新西蘭生產(chǎn)；維生素ADE注射液，蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20151012；氯前列醇鈉注射液，蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20151105。

1.3 方法

1.3.1 受體牛選擇 根據(jù)新疆維吾爾自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)牛胚胎移植技術(shù)操作規(guī)程[10]和家畜胚胎移植技術(shù)培訓(xùn)講義[11]的標(biāo)準(zhǔn)選取受體牛，受體牛全部舍飼。主要飼喂苜蓿干草、玉米青貯和精料補(bǔ)充料。

1.3.2 同期發(fā)情 維生素ADE注射液每頭牛肌肉注射10 mL，陰道清洗消毒后放置栓CIDR，第一次處理當(dāng)天記為0 d，在埋栓第9 d撤栓同時(shí)受體牛注射氯前列醇鈉注射液4 mL(0.4 mg)/頭，觀察爬跨結(jié)合涂蠟筆判斷是否發(fā)情。

1.3.3 黃體直徑的檢查 ①準(zhǔn)確記錄發(fā)情時(shí)間，具體到當(dāng)天的小時(shí)分鐘，發(fā)情當(dāng)天記為0 d，在發(fā)情后第7 d，準(zhǔn)確到小時(shí)分鐘。②臨床應(yīng)用B超檢查黃體直徑大小，具體方法如下：

將奶牛驅(qū)趕至保定通道里。將B超探頭置于裝有醫(yī)用超聲耦合劑的避孕套內(nèi)。戴上長(zhǎng)臂手套抹石蠟油于長(zhǎng)臂手套的手指前端，將直腸內(nèi)的糞便掏干凈，找到兩側(cè)卵巢并判斷黃體的位置。將超聲探頭送入直腸，用拇指、食指和中指觸摸到卵巢，將卵巢進(jìn)行固定，然后協(xié)調(diào)配合用手把卵巢固定探頭之下，緩緩的移動(dòng)探頭或轉(zhuǎn)動(dòng)卵巢，對(duì)卵巢進(jìn)行不同切面掃查。當(dāng)顯示出黃體的最大直徑切面圖像后，按下凍結(jié)鍵。用B超儀內(nèi)置電子標(biāo)尺對(duì)黃體的直徑測(cè)量，并保存典型圖像，備用[12]。

1.3.4 移植 對(duì)黃體直徑≥1 cm以上的青年牛進(jìn)行有黃體側(cè)子宮角胚胎移植，用解凍杯35℃、15 s解凍胚胎，所有移植過(guò)程均為一人操作。

1.3.5 移植牛受胎判定標(biāo)準(zhǔn) 移植當(dāng)天記為0 d，移植后24 d(相當(dāng)于牛發(fā)情配種后第30 d)用便攜式B超進(jìn)行子宮探查，觀察到子宮擴(kuò)張，有胎水和胎兒的斷面圖像，則判斷為懷孕受胎。子宮不擴(kuò)張，沒(méi)有懷孕的圖像特征，則為不受胎。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃體直徑對(duì)受胎率的影響

產(chǎn)科學(xué)教材[1]中提到牛的黃體形狀大致呈圓形，有一部分突出于卵巢表面，與卵巢本身有明顯的界限。排卵后3～5 d其直徑1 cm,質(zhì)地柔軟，10 d發(fā)育至最大，可達(dá)2～2.5.。本研究借鑒前人研究進(jìn)行分組[7,12]，黃體直徑分為三個(gè)組，分別為1≤CLD≤1.5、1.52.5。統(tǒng)計(jì)分析表明，以上各組之間差異均不顯著(P>0.05)。

表1 黃體大小與移植受胎率的關(guān)系

注：CLD為黃體直徑。

圖1 有腔黃體，A-D的CLD分別是 35 mm、31 mm 、22 mm、20 mm

2.2 受體牛發(fā)情后第7天的黃體聲像圖

荷斯坦青年牛在發(fā)情后第7天黃體聲像圖：有腔黃體聲圖像特征是黃體組織回聲均勻呈現(xiàn)中等強(qiáng)度的回聲，與卵巢基質(zhì)界限明顯，輪廓清晰。黃體直徑不同，部分牛黃體有腔并且類(lèi)似輪胎狀態(tài)或橢圓形(圖1)，部分牛黃體的腔很小或接近無(wú)。無(wú)腔黃體為實(shí)質(zhì)性黃體聲圖像特征是較均勻較強(qiáng)回聲，與卵巢基質(zhì)界限明顯，為橢圓形或近似圓形(圖2)，輪廓清晰。

2.3 受體牛懷孕30 d的聲像圖

移植后23 d(懷孕30 d)受體牛的子宮擴(kuò)張，似圓筒狀，有液性暗區(qū)，回聲均勻，由于掃查方向不同，胎兒切面圖像不同，胎兒在子宮內(nèi)出現(xiàn)回聲增強(qiáng)的光團(tuán)、斑塊，成團(tuán)狀結(jié)構(gòu)(圖3-A)，有時(shí)可掃查到胎膜，呈現(xiàn)環(huán)狀線，內(nèi)部為羊水的暗區(qū)和胎兒的不同切面的回聲圖像(圖3-B)，這些可明顯與子宮壁區(qū)分。未孕牛探查縱切面彎曲類(lèi)似羊角狀(圖3-C)，子宮橫切面類(lèi)似兩個(gè)不同的不規(guī)則圓餅狀(圖3-D)，回聲都不均勻，大體輪廓清晰，兩者都不出現(xiàn)子宮不擴(kuò)張，液體暗區(qū)、胎兒的斷面、子葉等懷孕圖像。

2.4 部分已產(chǎn)和牛圖片

圖2 實(shí)質(zhì)性黃體，A-D的CLD分別是30 mm、30 mm、25 mm、20 mm

圖3 A-B是移植后23天的妊娠聲像圖，C-D是未孕子宮聲像圖

圖4 和牛犢牛(深棕色) 圖5 和牛犢牛(黑色)

3 討論

3.1 蔡周山[3]、王建軍[7]等報(bào)道，根據(jù)直腸檢查鑒別西雜母牛做受體黃體直徑A級(jí)是1.5 cm以上，B級(jí)是1～1.5 cm，A級(jí)和B級(jí)移植高產(chǎn)奶牛和安格斯牛胚胎。李庭芳[5]報(bào)道，黃牛、西雜母牛做受體黃體發(fā)育1 cm以上進(jìn)行移植奶牛胚胎。以上研究都是以直腸檢查方法來(lái)確定黃體直徑大小。而本研究是應(yīng)用B超測(cè)量，因直腸檢查主要是觸摸卵巢表面突出黃體部分，由于有些黃體突出卵巢表面不明顯，埋在卵巢中的黃體部分感覺(jué)不到，而B(niǎo)超是切面圖像，可以掃查到表面和內(nèi)部的斷面圖像，并且儀器上有電子尺可測(cè)量，因此黃體直徑的測(cè)量更加準(zhǔn)確。韓志強(qiáng)等[9]報(bào)道，根據(jù)直腸檢查鑒別育成奶牛做受體，黃體直徑A級(jí)是2～3 cm,B級(jí)是1～2 cm，應(yīng)用B 超檢測(cè)合格黃體，胚胎移植受胎率92.3%，顯著高于直腸檢測(cè)組57.3%，但是在用B超鑒定黃體時(shí)，未對(duì)黃體直徑分組進(jìn)行研究，本研究當(dāng)中不同黃體直徑對(duì)受胎率的影響各組之間差異不顯著。孕酮是維持奶牛妊娠的必要條件，奶牛懷孕期間黃體分泌孕酮，孕酮濃度與黃體發(fā)育密切相關(guān)。Kastelic等[13]報(bào)道，在牛的發(fā)情周期中血漿孕酮含量的變化與超聲法檢測(cè)黃體體積和直徑呈正相關(guān)，從而預(yù)示黃體的超聲檢查可作為分析血漿孕酮含量的輔助方法。因此胚胎移植時(shí)受體牛第7天黃體的發(fā)育狀態(tài)與移植受胎率密切相關(guān)。

3.2 孫樹(shù)春等[14]認(rèn)為黃體面積與受胎率差異顯著，妊娠牛與未妊娠牛黃體面積分別是2.46±0.55 cm2、1.74±0.10 cm2。劉賢俠等[15]對(duì)排卵延遲后黃體指標(biāo)進(jìn)行研究，主要測(cè)量了黃體直徑、黃體面積、黃體體積，因此今后在胚胎移植時(shí)需要檢測(cè)受體牛黃體的這些指標(biāo)研究對(duì)移植受胎率的影響，另外，因?yàn)樵谂R床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)部分牛發(fā)情后第7天黃體有腔，黃體面積計(jì)算時(shí)需要把內(nèi)腔的面積減去，這樣才更加準(zhǔn)確，這些今后需要進(jìn)一步深入研究。

(本研究感謝李海軍、阿卜杜克依木·艾力木、蘇拉依曼·肉孜、王海濱、時(shí)利軍、時(shí)利群的大力支持)。

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The Effect of Corpus Luteum Diameter on Conception Rate of Transplantation in Adult Heifer

XUE Sen-wu1, LIU Xian-xia1, WANG Zhong2, WANG Jian-mei1, LI Xue-xin2, YANG Yong-jun3, JIANG Fa-yun2

(1.Collegeofanimalscienceandtechnology,ShiheziUniversity,Shihezi832003;TheXinjiangProductionandConstructionCorpos，theeighthdivision142regimentshuangqianghusbandryLimitedLtd,Shihezi832029;TheXinjiangProductionandConstructionCorpos，theeighthdivision142regimentAnimalhusbandrycenter,Shihezi832029)

In order to obtain more pure Japanese black cattle, 114 heifer as receptors were examined by clinical observation, rectal examination, and B-mode sonography then were placed CIDR (the vaginal suppository) to cause synchronous estrus on receptors. Receptor cow corpus luteum diameter were determined by B-mode ultrasonic apparatus in the seventh day after heat. Eligible receptors were transferred embryos of Japanese black cattle. Corpus lutum diameter (CLD) were divided into 3 groups, 1≤CLD≤1.5, 1.52.5, respectively. Pregnancy diagnosis were implemented by ultrasound scanner in twenty-third day after transplantation in order to study the effect of luteal diameter on conception rate of transplantation. The results showed that the selected heat 114 head of receptors, the estrus rate was 96.5% (110/114); conception rate of corpus luteum diameter (CLD) 1.5 cm or less group, 1.5 < CLD group 2.5 cm or less, CLD > 2.5 cm group was 44.44% (4/9), 45.95% (17/37) and 42.11% (8/19), respectively. The differences between groups were not significant (P>0.05).

adult Heifer; Corpus luteum diameter; conception rate of transplantation

2016-11-30 接收日期:2016-12-10

薛森武(1990-)，男，碩士生，研究方向：獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)；E-mail：1252604711@qq.com。

作者簡(jiǎn)介：劉賢俠(1970-)，男，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事獸醫(yī)外產(chǎn)科學(xué)的教學(xué)和科研工作。

S823.2

A

1001-9111(2017)01-0018-05