郭曉英，孫 旭，馬曉昱，劉云云，陳 瑤

胃舒康顆粒是海軍青島第二療養(yǎng)院經(jīng)多年臨床研究研制的由丹參、黃芪、黃連、紅花和當歸等組成的純中藥制劑，具有行氣活血、溫中祛寒的作用，用于萎縮性胃炎，疣狀性胃炎，胃黏膜脫垂，胃十二指腸球部潰瘍恢復期等慢性胃病的治療，療效確切。為了進一步完善該品種的質(zhì)量標準，配合醫(yī)療機構(gòu)制劑標準提高，筆者對該制劑的質(zhì)量標準進行修訂，采用TLC法對處方中黃芪、原兒茶醛、黃連、紅花、川芎和當歸等進行了定性鑒別，建立HPLC法測定丹參素鈉含量的方法。結(jié)果表明本法結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，能有效控制該制劑質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 薄層層析硅膠G、硅膠G254、硅膠H（青島海洋化工集團）；ZF－6型三用紫外分析儀；METTLER AE240電子天平；Agilent 1100高效液相色譜儀；AS－B超聲波清洗儀；HG－B電熱恒溫干燥箱；HH－8電熱恒溫水浴鍋。

1.2 試藥 對照品黃芪甲苷 （批號110781－201314）、原兒茶醛 （批號 110810－201007，純度98.2%）和丹參素鈉 （批號110855－201311，純度98.1%），對照藥材黃連（批號 120913－201310）、紅花 （批號 120907－201111）、 川芎 （批號 120918－201110）和當歸（批號 120927－201315），上述對照品和對照藥材均購自中國食品藥品檢定所；胃舒康顆粒（批號 20130401、20130902、20140101）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 黃芪的鑒別［1，2］取本品12 g，置索氏提取器中，加甲醇50 ml提取6 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加0.15 mol/L氫氧化鈉溶液飽和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用0.15 mol/L氫氧化鈉溶液洗滌3次，10 ml/次，棄去氫氧化鈉液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg溶液，作為對照品溶液。再取不含黃芪的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述3種溶液各5 μl，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（65∶35∶10）10 ℃以下放置分層的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果：供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的斑點，結(jié)果見圖1A；置紫外燈（365 nm）下檢視，供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置上呈現(xiàn)相同的熒光斑點。結(jié)果見圖1B。

圖1 黃芪鑒別

2.1.2 原兒茶醛的鑒別［1，2］取本品12 g，加水25 ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加無水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。再取不含原兒茶醛的陰性樣品，供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5 μl，點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯－甲酸（8∶6∶1.2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光（254 nm）下檢視，供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置上呈現(xiàn)相同的熒光斑點。結(jié)果見圖2。

圖2 原兒茶醛的鑒別

2.1.3 黃連的鑒別［1，2］取本品 12 g，加甲醇 20 ml，超聲處理，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材0.5 g，加甲醇10 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為對照品溶液。再取不含黃連的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法 （《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5 μl，點于同一硅膠G254薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－異丙醇－水 （6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）為展開劑（同時在展開箱中放入一小燒杯與展開劑等體積的濃氨試液飽和15 min），展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。供試品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點。結(jié)果見圖3。

圖3 黃連的鑒別

2.1.4 紅花的鑒別［1，2］取本品 12 g，加 80%丙酮溶液 30 ml，密塞，振搖 15 min，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取紅花對照藥材0.5 g，加80%丙酮溶液5 ml，按供試品溶液項下方法制成對照藥材溶液。再取不含紅花的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法 （《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5～10 μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇（7∶2∶3∶0.4）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的斑點。結(jié)果見圖4。

2.1.5 川芎、當歸的鑒別［1，2］取本品 12 g，加濃氨試液 2 ml，乙醇 50 ml，搖勻，靜置 30 min，超聲處理15min，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另分別取川芎、當歸對照藥材各0.5 g，各加濃氨試液2 ml，乙醇25 ml，按供試品溶液項下方法制成對照藥材溶液。再取不含川芎、當歸的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的熒光斑點，結(jié)果見圖5。

圖4 紅花的鑒別

圖5 川芎、當歸的鑒別

2.2 丹參素鈉的含量測定［2－4］

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－1%醋酸溶液 （2∶98）為流動相；檢測波長280 nm；柱溫為25℃；流速1.0 ml/min；丹參素鈉峰保留時間為12.848 min，分離度為2.21，理論板數(shù)為2322。陰性對照、對照品以及供試品的HPLC色譜圖見圖6A，6B和6C。

圖6陰性對照、對照品以及供試品的HPLC色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備 取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成濃度為1.017 mg/ml的對照品溶液 （對照品儲備液），精密量取1 ml置25 ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得濃度為40.69 μg/ml的對照品溶液。

正確的監(jiān)測分析方法是獲得準確結(jié)果的關(guān)鍵因素之一。每一種監(jiān)測分析方法的靈敏度和準確度要能滿足要求，方法成熟，抗干擾能力強，操作簡便。在常規(guī)監(jiān)測中，分光光度法用得較多，可測定多種金屬和非金屬離子或化合物；原子吸收法主要用于多種微量、痕量金屬元素的測定；容量法主要用于DO、COD、BOD5等的測定。審核時主要關(guān)注一些新監(jiān)測標準和方法有沒有進行及時更新。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取胃舒康顆粒6 g，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇30 ml，超聲處理30 min，放冷，濾過，取續(xù)濾液5 ml至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 陰性對照品溶液的制備 取缺制丹參的樣品，按“2.2.3”項下方法制備成陰性對照品溶液。

2.2.5 標準曲線的繪制 取“2.2.2”項下丹參素鈉對照品貯備液適量，用50%甲醇稀釋，得系列標準溶液。含丹參素鈉分別為 10.17、20.35、40.69、81.38、162.77 μg/ml，分別取 20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。 以峰面積值為縱坐標（Y），濃度（μg/ml）為橫坐標 （X）繪制標準曲線。計算得回歸方程，Y=13.671X+5.8542，R2=0.9998。實驗結(jié)果表明丹參素鈉在10.17～162.77 μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取“2.2.5”項下40.69 μg/ml對照品溶液 20 μl，按“2.2.1”項下色譜條件重復進樣6次，記錄峰面積值，計算RSD （n=6）為0.15%。說明儀器的精密度良好。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗 取胃舒康顆粒 （批號20130401），按“2.2.3”項下方法分別制備 6份供試品溶液，分別進樣20 μl，記錄丹參素鈉峰面積值，計算RSD（n=6）為0.13%，表明方法重復性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取胃舒康顆粒 （批號20130401），按“2.2.3”項下方法配制供試品溶液，分別于 0、2、4、6、8、12 h 進樣 20 μl，按“2.2.1”項下色譜條件，測定丹參素鈉的峰面積，計算RSD為0.37%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 胃舒康顆粒中丹參素鈉加樣回收率試驗測定結(jié)果

2.2.10 樣品含量測定 按“2.2.1”項下色譜條件，精密吸取“2.2.2”、“2.2.3”項下溶液各 20 μl，照 2015年版《中國藥典》四部通則0512，進樣胃舒康顆粒樣品（批號 20130401、20130902、20140101），每批樣品測定2份，以外標法計算各個樣品中丹參素鈉的含量，結(jié)果詳見表2。

表2 胃舒康顆粒中丹參素鈉含量測定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 TLC鑒別 該文通過試驗制定了黃芪、黃連、原兒茶醛、紅花、川芎和當歸的TLC鑒別方法，該方法特征斑點明顯，色譜分離清晰，可作為胃舒康顆粒中黃芪、黃連、原兒茶醛、紅花、川芎和當歸［1，3，4］的專屬性鑒別。

3.2 樣品溶液的制備 該實驗在前處理過程中進行了不同提取溶劑的比較［2，5－11］，如酸處理－乙酸乙酯萃取或50%甲醇回流提取，結(jié)果表明采用顆粒直接加50%甲醇超聲30 min提取制備丹參素鈉含量測定樣品溶液，可有效提取所含丹參素鈉；該方法簡便、可靠、重現(xiàn)性好，縮短了檢驗流程，避免了回流提取萃取分離的繁瑣操作，節(jié)省了人力物力。

3.3 流動相選擇 該實驗亦比較了不同比例流動相對峰型、分離度的影響，如甲醇－1%HAc（2∶98），甲醇－1%HAc（4∶96），甲醇－1%HAc（6∶94），最終確定流動相為甲醇－1%HAc（2∶98）時丹參素鈉峰型及分離度較好。

該實驗建立的含量測定方法，經(jīng)方法學研究結(jié)果表明簡便、可行、快捷，專屬性強，準確度、靈敏度及重現(xiàn)性好，可用于胃舒康顆粒的質(zhì)量控制。

參考文獻

［1］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典2015年版：一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：629，636，484，977，1297，1181，106.

［2］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典2015年版：四部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57－61.

［3］孔 菲，丁 瑩，梁 雪，等.川芎、當歸的薄層層析鑒別［J］.中醫(yī)藥學報，2013，41（2）：56－57.

［4］高鴻彬，王志君，胡葉帥，等.丹脈寧片質(zhì)量標準研究［J］.藥學服務(wù)與研究，2016，16（4）：312－316.

［5］李艷麗，張 虹，陳湘玲，等.高效液相色譜法測定止眩通脈膠囊中丹參素鈉的含量［J］. 山西醫(yī)科大學學報，2012，11（11）：823－834.

［6］胡曉琴，李 進，陳 濤，等.HPLC法測定新生脈散片中丹參素鈉的含量［J］. 天津中醫(yī)藥，2012，4（2）：181－183.

［7］章一菡，宋洪杰，蔡 溱，等.金貓解毒顆粒中丹參素鈉的含量測定［J］. 藥學服務(wù)與研究，2014，14（4）：249，253，263.

［8］張熙潔，王 玉，侯林中，等.寬心口服液中丹參素和原兒茶醛的含量測定［J］. 中國藥學雜志，2011，46（19）：1530－1531.

［9］屈 蓉，仇雅靜，葉 慧，等.高效液相色譜法測定心可舒片中丹參素鈉和原兒茶醛的含量［J］. 中國藥業(yè)，2012，21（19）：23－24.

［10］周修森，方永凱.HPLC法測定柴丹舒利膠囊中丹參素的含量［J］. 中國科技，2012，25（10）：25－27.

［11］李海燕，李振國，宋漢敏，等.HPLC測定冠心生脈口服液中丹參素鈉的含量［J］. 中國實驗方劑學雜志，2010，16（12）：78－79.