張黎鳳++錢雯婕++魏紅英++滕大芳

摘要 以紅顏草莓為試材，對草莓匍匐莖莖尖進行組培脫毒壯苗快繁技術與應用研究。結果表明：適宜紅顏草莓誘導分化增殖培養(yǎng)基配方以 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L最好；繼代增殖培養(yǎng)基配方以MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L較適宜；誘導生根培養(yǎng)基配方以1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L較理想，最佳移栽基質(zhì)為營養(yǎng)土∶珍珠巖∶蛭石=1∶1∶1，移植成活率可達95%以上。

關鍵詞 草莓；莖尖；組織培養(yǎng)；快繁

中圖分類號 S668.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）07-0071-01

草莓是薔薇科，草莓屬，多年生草本植物，屬于當今世界七大水果之一，在我國栽培面積僅次于葡萄。草莓品種過去主要用傳統(tǒng)匍匐莖分株繁殖，繁殖速度慢，親本的優(yōu)良性狀無法保持，植株容易積累多種疾病，導致種苗退化，草莓品質(zhì)下降[1-2]。采用草莓組培脫毒進行無性繁殖，可以大量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的無毒苗，提高草莓的品質(zhì)。因此，組織培養(yǎng)作為植物優(yōu)良品種大量繁殖的最有效方式。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試草莓品種為紅顏，選取生長健壯、無病的植株，在新長的匍匐莖頂端剪去5 cm左右作試驗材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體處理。采集健壯的草莓匍匐莖尖，將匍匐莖用水沖洗莖尖，再把莖尖放入3%雙氧水消毒瓶中消毒10 min，倒出雙氧水，再用無菌水沖洗3遍，然后轉(zhuǎn)放到超凈工作臺上進行滅菌處理。具體滅菌流程：先用75%酒精消毒10 s，倒出酒精，用無菌水沖洗3次，然后加入0.1%升汞消毒8 min，最后用無菌水沖洗4～5次。在顯微鏡下用解剖刀剝?nèi)ビ兹~，切取0.5～1.0 mm的莖尖接種到培養(yǎng)基上。培養(yǎng)室溫度為22～26 ℃，光照強度為1 500～2 000 lx，光照12 h/d[3]。

1.2.2 培養(yǎng)基選擇。試驗以MS為基本培養(yǎng)基，其中附加奈乙酸（NAA）、6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）。葡萄糖30 g/L，瓊脂6 g/L。誘導培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+6-BA（0.2、0.5、1.0 mg/L）+NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L）；繼代培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+6-BA（0.5、1.0、1.5 mg/L）+IAA（0.1、0.3、0.5 mg/L）；生根培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+IBA（0.5、1.0、1.5 mg/L）或NAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）。培養(yǎng)基pH值為5.8。使用前需要高壓滅菌，在101.325 kPa下，高壓滅菌20 min。

2 結果與分析

2.1 不同激素水平對草莓誘導的影響

外植體經(jīng)過2周左右的培養(yǎng)后，可慢慢分化出叢生芽。由表1可知，4號和5號培養(yǎng)基的萌發(fā)數(shù)最高，4號培養(yǎng)基的褐化數(shù)最少。隨著NAA的比例增大，褐化數(shù)也逐漸增多，6-BA和NAA有一定的比例，才能促使芽增長。因此，最佳誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

2.2 不同激素水平對草莓繼代培養(yǎng)的影響

經(jīng)過初代培養(yǎng)后產(chǎn)生小芽叢苗，在超凈工作臺上用鑷子、剪刀、培養(yǎng)皿，分隔成3～4株在一起的小芽叢，再將誘導分化出的叢生芽接種于不同激素配比的繼代增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，每瓶3～4株芽叢。由表2可知，當IAA濃度為0.1 mg/L時，增殖芽數(shù)最多，且隨IAA濃度的增加增殖芽數(shù)減少，增殖芽數(shù)最多的是4號培養(yǎng)基。因此，草莓最佳繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L[4-5]。

2.3 不同草莓組培苗生根培養(yǎng)基對草莓生根的影響

將生長良好的無根草莓苗接種于生根培養(yǎng)基30 d后，由表3可知，培養(yǎng)基中加入一定比例的生長激素可以促進生根。當1/2MS培養(yǎng)基上添加IBA和NAA可以增加平均根數(shù)，當IBA濃度為1.0 mg/L時，生根率為90%，平均根長為5 cm；當NAA濃度為0.1 mg/L時，生根率為95%，平均根長為6 cm。因此，草莓最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L。

2.4 試管苗的移栽

當試管苗長有5～6條根時，可慢慢開瓶煉苗，使試管苗逐漸適應移栽環(huán)境。經(jīng)過1周左右的時間煉苗，從瓶中取出試管苗，沖洗掉瓊脂，用多菌靈浸泡后移栽到營養(yǎng)土∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1的基質(zhì)中，并且蓋上塑料薄膜來維持濕度。每周可噴灑營養(yǎng)液1次[6]。移栽結束后，幼苗所生長的環(huán)境需要保持高濕度，濕度應在85%～95%之間，且移植后的環(huán)境溫度應稍高于移植前幼苗生長的環(huán)境溫度。白天可控制在25～26 ℃，夜間不低于14～18 ℃。

3 結論與討論

該試驗結果表明，紅顏草莓誘導分化增殖最適宜培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，繼代增殖最適宜培養(yǎng)基是MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基是1/2MS+IBA 1.0 mg/L或1/2MS+NAA 0.1 mg/L。營養(yǎng)土∶珍珠巖∶蛭石=1∶1∶1的基質(zhì)適宜進行馴化煉苗[7-8]。本試驗發(fā)現(xiàn)的不同激素種類和配比，直接影響紅顏草莓生根的發(fā)生，能較好地誘導出愈傷組織，這將為紅顏草莓的快速繁殖、規(guī)模化生產(chǎn)提供技術支持。

4 參考文獻

[1] 張志宏，肖敏，楊洪一，等.草莓病毒病脫除方法的比較與評價[J].果樹學報，2006，23（5）：720-723.

[2] 何歡樂，陽靜，蔡潤，等.草莓莖尖培養(yǎng)脫毒效果研究[J].北方園藝，2005（5）：79-81.

[3] 劉健，劉向蕾，胡繁榮，等.草莓熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫毒效果研究[J].浙江農(nóng)業(yè)科學，2009（6）：1088-1090.

[4] 陳德海，潘文蘭，楊濤，等.草莓組織培養(yǎng)細胞發(fā)育過程德電鏡觀察[J].廈門大學學報（自然科學版），1999，36（6）：918-920.

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