李冰蕾，占 城

生殖支原體感染與女性黏液膿性宮頸炎相關(guān)性研究

李冰蕾，占 城

李冰蕾

目的建立生殖支原體Taqman MGB熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)方法，檢測(cè)宮頸炎患者生殖支原體感染情況，以期發(fā)現(xiàn)生殖支原體感染與女性黏液膿性宮頸炎之間的相關(guān)性。方法參照國(guó)內(nèi)、外文獻(xiàn)建立Taqman MGB熒光PCR檢測(cè)技術(shù)；采集大連市皮膚病醫(yī)院性病門診有黏液膿性宮頸炎的女性患者生殖道分泌物標(biāo)本74例、體檢中心對(duì)照組標(biāo)本63例，應(yīng)用上述檢測(cè)方法檢測(cè)標(biāo)本中的生殖支原體。結(jié)果Taqman探針熒光PCR法敏感性和特異性均較好。黏液膿性宮頸炎患者生殖支原體陽(yáng)性率為24.3%，對(duì)照組未檢測(cè)出生殖支原體；除不孕以外其他幾項(xiàng)調(diào)查內(nèi)容包括尿道炎癥狀、非婚性接觸史、復(fù)發(fā)性宮頸炎以及治療史均與生殖支原體感染有關(guān)聯(lián)（P＜0.001），其陽(yáng)性率分別為17.6%、52.9%、42.5%、100%。結(jié)論Taqman MGB 熒光PCR法是目前較為適用的生殖支原體檢測(cè)方法。生殖支原體感染可能是黏液膿性宮頸炎的致病因素；生殖支原體的檢測(cè)在指導(dǎo)復(fù)發(fā)性宮頸炎的治療中有較為重要的意義。

宮頸炎, 黏液膿性；支原體，生殖；聚合酶鏈反應(yīng)

[J Pract Dermatol, 2017, 10(2):83-84]

黏液膿性宮頸炎（mucopurulent cervicitis，MPC）是指臨床表現(xiàn)為肉眼可見(jiàn)的宮頸管內(nèi)黃色黏液性分泌物、或?qū)m頸管內(nèi)分泌物鏡檢多形核白細(xì)胞≥10個(gè)／1 000倍視野的宮頸炎。目前已知MPC的病原體主要為淋球菌和沙眼衣原體，除外這兩種病原體仍有近50%的MPC病因不明[1]。2010年美國(guó)疾病控制中心（Centers for Disease Control，CDC）在宮頸炎的診治指南中強(qiáng)調(diào)生殖支原體(Mycoplasma genitalium, Mg)的致病作用，而2015年新版指南中再次指出Mg感染可能會(huì)引起宮頸炎，尤其是在持續(xù)性或復(fù)發(fā)性宮頸炎中要被高度懷疑。且有研究[2]發(fā)現(xiàn)慢性Mg感染會(huì)促進(jìn)促炎性因子白細(xì)胞介素（IL）-1, IL-6以及 IL-8的分泌，而治愈Mg感染的同時(shí)炎癥也會(huì)隨之消除。本研究探索了多種Mg檢測(cè)方法，其中包括分離培養(yǎng)法、血清學(xué)方法以及核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAAT）等，其敏感性及特異性各異。分離培養(yǎng)法固然是確定Mg感染的金標(biāo)準(zhǔn)，然而實(shí)際操作中Mg培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、生長(zhǎng)條件苛刻，培養(yǎng)過(guò)程中極易出現(xiàn)菌株死亡或被污染的情況，目前全球僅少數(shù)實(shí)驗(yàn)室能夠從臨床標(biāo)本中培養(yǎng)出Mg，因此該法不適合臨床應(yīng)用。血清學(xué)檢測(cè)法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、間接免疫熒光法、共焦點(diǎn)免疫分析法等，但是由于Mg與肺炎支原體（Mycoplasma pneumonia，MP）有廣泛的交叉反應(yīng)易出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果，需要找到對(duì)Mg高度特異的抗原才可推廣應(yīng)用。現(xiàn)今實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)用較多的傳統(tǒng)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）由于需要電泳等復(fù)雜步驟，而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)過(guò)程中極易被污染而出現(xiàn)假陽(yáng)性的問(wèn)題。本研究應(yīng)用的Taqman探針熒光PCR法具有高度的特異性和可靠性，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，是更適合推廣應(yīng)用的檢測(cè)技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Taqman MGB熒光PCR檢測(cè)法對(duì)性病門診確診的MPC患者和正常人對(duì)照組同時(shí)進(jìn)行Mg的檢測(cè)，分析Mg的感染率和在MPC致病中的作用，研究Mg感染與MPC的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

參照性傳播疾病 (STD）宮頸炎診斷指南，從2014年12月—2015年12月在大連市皮膚病醫(yī)院女性科門診就診的患者中篩選出符合條件的患者共74例，對(duì)照組為體檢中心健康體檢者共63例。入選標(biāo)準(zhǔn)：患者組：①年齡19～55歲；②臨床有MPC癥狀，即宮頸口有黏液膿性分泌物或者宮頸脆性增加易出血等，或無(wú)明顯癥狀但所取拭子涂片革蘭染色多形核白細(xì)胞（PMNL）≥10個(gè)/1 000倍視野；③拭子淋球菌涂片鏡檢及培養(yǎng)均陰性，沙眼衣原體抗原檢測(cè)陰性。對(duì)照組：①年齡19～55歲；②現(xiàn)在無(wú)黏液膿性宮頸炎臨床癥狀；③拭子淋球菌涂片鏡檢及培養(yǎng)均陰性，沙眼衣原體抗原檢測(cè)陰性。兩組研究對(duì)象征得知情同意后均由研究員填寫問(wèn)卷調(diào)查表。

1.2 方法

1.2.1 取材 對(duì)于符合條件的入組人員由醫(yī)生收集宮頸拭子，除需常規(guī)檢查淋球菌及沙眼衣原體的拭子外，再取一支拭子深入宮頸口并旋轉(zhuǎn)2圈，稍作停留后取出，置于裝有1 ml 0.9% NaCl溶液的1.5 ml微量離心管中，-70℃凍存。

1.2.2 試驗(yàn)方法 凍存標(biāo)本室溫解凍，應(yīng)用Taqman MGB熒光PCR檢測(cè)法對(duì)收集標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果由實(shí)驗(yàn)員整理，結(jié)合患者資料進(jìn)行分析整合，采用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 調(diào)查人群特征

患者組74例患者中既往有非婚性接觸史者52例，對(duì)照組有2例；有尿急、尿痛等尿道炎癥狀25例，對(duì)照組為4例；74例患者中既往有異位妊娠史病者5例；有宮頸炎病史或?qū)m頸炎癥狀持續(xù)超過(guò)2周者40例，對(duì)照組有12例曾經(jīng)有過(guò)宮頸炎病史，但現(xiàn)在無(wú)臨床癥狀；既往半年內(nèi)應(yīng)用抗生素治療過(guò)生殖道感染性疾病的患者組和對(duì)照組各10例和2例。

2.2 Mg檢測(cè)結(jié)果

患者組Mg陽(yáng)性率為24.3%，對(duì)照組未檢測(cè)出Mg。Mg陽(yáng)性與Mg陰性的患者在異位妊娠方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），分析可能是由于所取例數(shù)較少有關(guān)，其他幾項(xiàng)調(diào)查因素中包括尿道炎癥狀、非婚性接觸史、復(fù)發(fā)性持續(xù)性宮頸炎病史以及治療史均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其Mg陽(yáng)性率分別為17.6%、52.9%、42.5%、100%。

3 討論

M.genitalium是近年來(lái)性傳播疾病中的新星，隨著PCR技術(shù)的不斷改進(jìn)，其致病性在越來(lái)越多的疾病中被認(rèn)識(shí)。2009年歐洲非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU）治療指南已明確認(rèn)定Mg是NGU的病因之一。2010年美國(guó)疾病預(yù)防控制中心（CDC）在宮頸炎的診治指南中也強(qiáng)調(diào)Mg的致病作用，此外與Mg相關(guān)的疾病還包括盆腔炎性疾?。╬elvic inf ammatory disease，PID）、產(chǎn)科并發(fā)癥、前列腺炎、附睪炎以及包皮龜頭炎等。近年來(lái)還有研究發(fā)現(xiàn)Mg感染可能還與腫瘤及HIV的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

應(yīng)用Taqman MGB熒光PCR檢測(cè)法對(duì)性病門診確診的MPC患者和正常人對(duì)照組同時(shí)進(jìn)行Mg的檢測(cè)，結(jié)果顯示MPC人群中Mg感染率為24.3%，而正常人群未檢測(cè)出Mg，兩組數(shù)據(jù)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明Mg或許是MPC的致病病原體，提示在臨床診斷中醫(yī)生應(yīng)該考慮到Mg的可能性，加強(qiáng)對(duì)其的檢測(cè)。美國(guó)CDC公布的數(shù)據(jù)稱宮頸炎患者M(jìn)g感染率在10%～30%，本研究的數(shù)據(jù)與之相符。其木格等[1]在其研究中發(fā)現(xiàn)，MPC人群中Mg的檢出率為11.06%。馬黎民[3]的研究顯示，MPC人群的Mg感染率為14.06%。本文的數(shù)據(jù)略高于同類研究，分析可能是由于檢測(cè)方法靈敏度更高或者樣本量較小，也或許是研究人群所在地區(qū)不同造成的結(jié)果。

在復(fù)發(fā)性宮頸炎中Mg陽(yáng)性率更高，這與Mg感染的NGU多與持續(xù)性或復(fù)發(fā)性NGU相類似。而在應(yīng)用過(guò)抗生素治療的10例患者中，全部出現(xiàn)了陽(yáng)性結(jié)果?，F(xiàn)在臨床上對(duì)于MPC的治療首選為阿奇霉素1 g頓服，但是對(duì)于治療Mg陽(yáng)性的患者其治愈率僅為85%，最近的數(shù)據(jù)則更低為40%[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，在一些地區(qū)Mg感染者中約50%感染的為阿奇霉素耐藥菌株[5]，且在應(yīng)用阿奇霉素治療后更易導(dǎo)致耐藥菌株的出現(xiàn)[6]。有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)于Mg感染患者阿奇霉素長(zhǎng)療程治療要優(yōu)于單劑量頓服[6]，而在治療失敗的情況下莫西沙星是較為有效的藥物，其有效率達(dá)到100%[7]。這表明臨床上急需一種快捷、有效的檢測(cè)手段，對(duì)于復(fù)發(fā)性MPC患者尤其是治療失敗的患者及時(shí)進(jìn)行Mg的檢測(cè)，以便醫(yī)生能夠選擇最佳治療方案。Manhart等[8]在其研究中也指出，對(duì)于持續(xù)性復(fù)發(fā)性宮頸炎患者應(yīng)該進(jìn)行Mg的檢測(cè)，并且檢測(cè)盡量在用藥之前，以防止耐藥菌株的出現(xiàn)。筆者認(rèn)為黏液膿性宮頸炎與Mg感染存在相關(guān)性；Mg的檢測(cè)在指導(dǎo)復(fù)發(fā)性持續(xù)性宮頸炎的治療中有更為重要的意義。

[1] 其木格, 蔣法興, 王千秋, 等. 生殖支原體與黏液膿性宮頸炎相關(guān)性的研究 [J]. 中華皮膚科雜志, 2008, 41(5):292-295.

[2] Dehon PM, Hagensee ME, Sutton KJ, et al. Histological evidence of chronic Mycoplasma genitalium-induced cervicitis in HIV-infected women: a retrospective cohort study [J]. J Infect Dis, 2016, 213(11):1828-1835.

[3] 馬黎民. 支原體感染與女性相關(guān)性疾病的臨床分析 [J]. 中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志, 2012, 35(9):16-17.

[4] Manhart LE, Gillespie CW, Lowens MS, et al. Standard treatmentregimens for nongonococcal urethritis have similar but declining curerates: a randomized controlled trial [J]. Clin Infect Dis, 2013, 56(7):934-942.

[5] Totten PA, Jensen NL, Khosropour CM, et al. Azithromycin anddoxycycline resistance profiles of recent clinical isolates of Mycoplasma genitalium. STI & AIDS World Congress Joint Meeting of the 20th International Society of Sexually Transmitted Disease Research, July 14-17, 2013 [C]. Vienna, Austria, c2013.

[6] Bj?rnelius E, Anagrius C, Bojs G, et al. Antibiotic treatment of symptomatic Mycoplasma genitalium infection in Scandinavia: a controlled clinical trial [J]. Sex Transm Infect, 2008, 84(1):72-76.

[7] Bradshaw CS, Chen MY, Fairley CK. Persistence of Mycoplasma genitalium following azithromycin therapy [J]. PLoS One, 2008, 3: e3618.

[8] Manhart LE, Broad JM, Golden MR. Mycoplasma genitalium: shouldwe treat and how? [J]. Clin Infect Dis, 2011, 53(Suppl 3): S129-142.

Study on the relationship between Mycoplasma genitalium infection and female mucopurulent cervicitis

LI Bing-lei，ZHAN Cheng
Department of Dermatology, Dalian Dermatology Hospital, Dalian 116021, China

ObjectiveTo establish Taqman MGB real time fluorescence-based PCR assay for the detection of Mycoplasma genitalium(M.genitalium), and apply the method to evaluate the infection rate of M.genitalium in STD clinic patients who were suffering from cervicitis in our hospital, so as to find the correlation between M.genitalium infection and mucopurulent cervicitis(MPC).MethodsOne kind of Taqman MGB real time PCR assay was established for the detection of M.genitalium referring to the studies. A total of 74 patients with non-gonococcal, non-chlamydial MPC and 63 healthy female volunteers were recruited in our study. Cervical samples were collected and M.genitalium was detected by Taqman MGB real time PCR assay.ResultsThe results indicated that the Taqman MGB real time PCR had good linear range, great repeatability and High sensitivity, the lowest detectable limit was 5 copies. The positive rates of M.genitalium in the MPC patients was 24.3% while none M.genitalium was found in the control group. Signif cant difference was found in the both two groups(P＜0.001). In addition to infertility, several other factors including urethritis symptoms, sexual contact history, recurrent cervicitis and treatment history were associated with mycoplasma infection(P＜0.001), and the positive rate of M.genitalium was 17.6%, 52.9%, 42.5% and 100% respectively.ConculsionThe Taqman MGB real time f uorescence based PCR is a rapid and sensitive method for the quantitative and qualitative detection of M.genitalium. The prevalence of M.genitalium infection is higher in patients with non-gonococcal, non-chlamydial mucopurulent cervicitis attending STD clinic than that in normal population. Detection of M.genitalium has a great signif cance in guiding the treatment of recurrent cervicitis.

Cervicitis，mucuspurulent；M.genitalium；PCR

R711.74

A

1674-1293(2017)02-0083-02

2016-10-27

2016-12-10）

（本文編輯 耿建麗）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170206

116021大連，大連市皮膚病醫(yī)院（李冰蕾，占城）

李冰蕾，碩士，主要從事皮膚病的臨床診療工作，E-mail: 18741120331@163.com

占城，E-mail: dlpfzhanch@126.com