肖凱+張雷+韓慶通+戴勝軍

[摘要]應(yīng)用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜及高效制備薄層等方法對盔狀黃芩中的二萜單體進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)對其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，發(fā)現(xiàn)并鑒定了14個新克羅烷型二萜，分別為半枝蓮堿D（1），scutolide A（2），scutol-ide K（3），scutebata J（4），scutebata I（5），6-乙酰氧基河南半枝蓮堿A（6），半枝蓮素C（7），scutolide E（8），barbatine C（9），半枝蓮堿Y（10），半枝蓮堿B（11），scutestrigillosin A（12），scutebata O（13），scutolide B（14）?；衔?～14均為首次從盔狀黃芩中發(fā)現(xiàn)。

[關(guān)鍵詞]唇形科；黃芩屬；盔狀黃芩；新克羅烷型二萜

盔狀黃芩為唇形科黃芩屬植物盔狀黃芩的干燥全草，為多年生草本植物，國內(nèi)主產(chǎn)于陜西、內(nèi)蒙古、新疆等地，國外主要分布于歐洲各國、蒙古、日本等國家。盔狀黃芩性寒、味苦，歸肺膽、脾胃、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、活血止痛、利尿消腫等功效，臨床主要用于治療淋癥、肝炎、瘧疾等疾病。

預(yù)實(shí)驗(yàn)中，課題組應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT），對盔狀黃芩95%乙醇提取物的細(xì)胞毒活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其95%乙醇提取物對肺癌A549、淋巴癌P288及乳腺癌MCF-7細(xì)胞株有顯著的生長抑制作用。文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，研究人員對盔狀黃芩中抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)的研究主要集中于黃酮、苷類、酚類等化合物。通過TLC，HPLC.MS等方法發(fā)現(xiàn)，盔狀黃芩95%乙醇提取物含有二萜化合物，為此，通過多種色譜分離技術(shù)，對盔狀黃芩95%乙醇提取物中的二萜化合物進(jìn)行了研究，共發(fā)現(xiàn)14個新克羅烷型二萜單體。根據(jù)理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)，對其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確定，包括：6個二萜（化合物2～5，7～8），8個二萜生物堿（化合物1，6，9～14），化合物1～14均為首次從盔狀黃芩中發(fā)現(xiàn)。

1材料

XT4微型熔點(diǎn)測定儀（溫度未校正），Perkin.ElreeF 241型旋光儀，Autospec-ultima ETOF型質(zhì)譜儀，AVANCE IIITM 500型核磁共振儀（TMS內(nèi)標(biāo)）；聚酰胺（30～60目）購自上海今瑞化工產(chǎn)品有限公司，Sephadex LH-20為北京金歐亞進(jìn)口分裝產(chǎn)品，薄層色譜硅膠（、柱色譜硅膠（200～300目）及高效制備薄層硅膠板（HPTLC，20cmX20cm）均為青島海洋化工廠產(chǎn)品?？鵂铧S芩全草采自新疆烏魯木齊，由煙臺大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室李桂生博士鑒定，標(biāo)本（YPl3065）保存于煙臺大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本室。

2提取和分離

取干燥的盔狀黃芩全草40.0kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次1h。提取液合并、減壓濃縮，得總浸膏2.8kg。將浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇反復(fù)萃取，萃取液分別合并、減壓濃縮，得氯仿部位305.7g。氯仿部位首先使用聚酰胺柱色譜，分別用去離子水、45%乙醇洗脫，45%乙醇洗脫液減壓濃縮，得浸膏109.8g；浸膏通過硅膠柱色譜（10cmx120cm），環(huán)己烷.丙酮梯度洗脫（90：10～50：50），分為20個組分。組分7（9.0g），8（13.0g）先后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（氯仿.甲醇洗脫，1：4）、高效制備薄層（20cmx20cm，氯仿-丙酮展開，92：8）分離得化合物1（232mg），2（65mg）；組分11（14.1g）先后經(jīng)過SephadexLH-20柱色譜（氯仿.甲醇洗脫，1：4）、高效制備薄層色譜（氯仿.丙酮展開，9：1）分離得到化合物3（68mg），9（132mg）；組分15（10.2g），16（13.1g）先后通過Sephadex LH-20柱色譜（氯仿.甲醇洗脫，1：4）、高效制備薄層色譜（氯仿.丙酮展開，82：18）分離得到化合物4（31mg），5（113mg），6（70mg），7（43mg），8（110mg），10（64mg），11（58mg），12（44mg），13（60mg），14（10mg）。

3結(jié)構(gòu)鑒定

4討論

預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示，盔狀黃芩95%乙醇提取物對肺癌A549、淋巴癌P288及乳腺癌MCF-7細(xì)胞株有顯著的生長抑制作用。從盔狀黃芩的95%乙醇提取物中分離鑒定了14個新克羅烷型二萜化合物，均為首次從該植物中獲得。根據(jù)之前的文獻(xiàn)報道，實(shí)驗(yàn)得到的新克羅烷型二萜對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制活性，結(jié)合預(yù)試驗(yàn)中該植物95%乙醇提取物具有的的抗腫瘤活性，對新克羅烷型二萜作為盔狀黃芩的抗腫瘤藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了初步探明，為進(jìn)一步開發(fā)利用盔狀黃芩提供了科學(xué)依據(jù)。