肖凱+張雷+韓慶通+戴勝軍
[摘要]應(yīng)用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜及高效制備薄層等方法對盔狀黃芩中的二萜單體進(jìn)行分離純化,根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)對其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,發(fā)現(xiàn)并鑒定了14個新克羅烷型二萜,分別為半枝蓮堿D(1),scutolide A(2),scutol-ide K(3),scutebata J(4),scutebata I(5),6-乙酰氧基河南半枝蓮堿A(6),半枝蓮素C(7),scutolide E(8),barbatine C(9),半枝蓮堿Y(10),半枝蓮堿B(11),scutestrigillosin A(12),scutebata O(13),scutolide B(14)?;衔?~14均為首次從盔狀黃芩中發(fā)現(xiàn)。
[關(guān)鍵詞]唇形科;黃芩屬;盔狀黃芩;新克羅烷型二萜
盔狀黃芩為唇形科黃芩屬植物盔狀黃芩的干燥全草,為多年生草本植物,國內(nèi)主產(chǎn)于陜西、內(nèi)蒙古、新疆等地,國外主要分布于歐洲各國、蒙古、日本等國家。盔狀黃芩性寒、味苦,歸肺膽、脾胃、大腸經(jīng),具有清熱解毒、活血止痛、利尿消腫等功效,臨床主要用于治療淋癥、肝炎、瘧疾等疾病。
預(yù)實(shí)驗(yàn)中,課題組應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT),對盔狀黃芩95%乙醇提取物的細(xì)胞毒活性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)其95%乙醇提取物對肺癌A549、淋巴癌P288及乳腺癌MCF-7細(xì)胞株有顯著的生長抑制作用。文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn),研究人員對盔狀黃芩中抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)的研究主要集中于黃酮、苷類、酚類等化合物。通過TLC,HPLC.MS等方法發(fā)現(xiàn),盔狀黃芩95%乙醇提取物含有二萜化合物,為此,通過多種色譜分離技術(shù),對盔狀黃芩95%乙醇提取物中的二萜化合物進(jìn)行了研究,共發(fā)現(xiàn)14個新克羅烷型二萜單體。根據(jù)理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù),對其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確定,包括:6個二萜(化合物2~5,7~8),8個二萜生物堿(化合物1,6,9~14),化合物1~14均為首次從盔狀黃芩中發(fā)現(xiàn)。
1材料
XT4微型熔點(diǎn)測定儀(溫度未校正),Perkin.ElreeF 241型旋光儀,Autospec-ultima ETOF型質(zhì)譜儀,AVANCE IIITM 500型核磁共振儀(TMS內(nèi)標(biāo));聚酰胺(30~60目)購自上海今瑞化工產(chǎn)品有限公司,Sephadex LH-20為北京金歐亞進(jìn)口分裝產(chǎn)品,薄層色譜硅膠(、柱色譜硅膠(200~300目)及高效制備薄層硅膠板(HPTLC,20cmX20cm)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品??鵂铧S芩全草采自新疆烏魯木齊,由煙臺大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室李桂生博士鑒定,標(biāo)本(YPl3065)保存于煙臺大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本室。
2提取和分離
取干燥的盔狀黃芩全草40.0kg,粉碎后用95%乙醇回流提取3次,每次1h。提取液合并、減壓濃縮,得總浸膏2.8kg。將浸膏懸浮于水中,依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇反復(fù)萃取,萃取液分別合并、減壓濃縮,得氯仿部位305.7g。氯仿部位首先使用聚酰胺柱色譜,分別用去離子水、45%乙醇洗脫,45%乙醇洗脫液減壓濃縮,得浸膏109.8g;浸膏通過硅膠柱色譜(10cmx120cm),環(huán)己烷.丙酮梯度洗脫(90:10~50:50),分為20個組分。組分7(9.0g),8(13.0g)先后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(氯仿.甲醇洗脫,1:4)、高效制備薄層(20cmx20cm,氯仿-丙酮展開,92:8)分離得化合物1(232mg),2(65mg);組分11(14.1g)先后經(jīng)過SephadexLH-20柱色譜(氯仿.甲醇洗脫,1:4)、高效制備薄層色譜(氯仿.丙酮展開,9:1)分離得到化合物3(68mg),9(132mg);組分15(10.2g),16(13.1g)先后通過Sephadex LH-20柱色譜(氯仿.甲醇洗脫,1:4)、高效制備薄層色譜(氯仿.丙酮展開,82:18)分離得到化合物4(31mg),5(113mg),6(70mg),7(43mg),8(110mg),10(64mg),11(58mg),12(44mg),13(60mg),14(10mg)。
3結(jié)構(gòu)鑒定
4討論
預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示,盔狀黃芩95%乙醇提取物對肺癌A549、淋巴癌P288及乳腺癌MCF-7細(xì)胞株有顯著的生長抑制作用。從盔狀黃芩的95%乙醇提取物中分離鑒定了14個新克羅烷型二萜化合物,均為首次從該植物中獲得。根據(jù)之前的文獻(xiàn)報道,實(shí)驗(yàn)得到的新克羅烷型二萜對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制活性,結(jié)合預(yù)試驗(yàn)中該植物95%乙醇提取物具有的的抗腫瘤活性,對新克羅烷型二萜作為盔狀黃芩的抗腫瘤藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了初步探明,為進(jìn)一步開發(fā)利用盔狀黃芩提供了科學(xué)依據(jù)。