林祥群　盧春霞　羅小玲　唐宗貴

摘要：建立了氣相色譜-質(zhì)譜法檢測枸杞中28種農(nóng)藥殘留的分析方法。樣品經(jīng)乙腈提取，carb/NH₂固相萃取柱凈化，DB-17MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）色譜柱分離，選擇離子監(jiān)測模式（SIM）檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，28種農(nóng)藥在0.01～5.00μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性（r²>0.99），方法檢出限為0.008～0.085μg/g，定量限為0.027～0.280μg/g，加標(biāo)回收率為71.0%～106.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.96%～12.30%。該方法靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確，可滿足枸杞樣品中農(nóng)藥多殘留的檢測要求。

關(guān)鍵詞：枸杞；農(nóng)藥殘留；氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）；多殘留檢測；固相萃??；前處理

中圖分類號：TQ450.2⁺63 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1002—1302（2016）01—0285—05

枸杞是我國傳統(tǒng)的藥食同源植物，具有補(bǔ)腎養(yǎng)肝、潤肺明目之功效，同時也是我國主要的出口創(chuàng)匯農(nóng)產(chǎn)品，主要出口韓國、日本、東南亞及歐美地區(qū)等。枸杞屬于香甜細(xì)嫩的花果類植物，在生長過程中，病蟲害種類多、發(fā)生頻率高，往往大量使用多種農(nóng)藥進(jìn)行防治，造成枸杞農(nóng)藥殘留嚴(yán)重，致使枸杞食用、藥用安全性受到影響。目前，農(nóng)藥殘留已成為當(dāng)前影響我國枸杞質(zhì)量安全、出口創(chuàng)匯的主要因素。我國目前仍未規(guī)定枸杞中農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。因此，探討簡單、快速、準(zhǔn)確的枸杞農(nóng)藥多殘留分析方法對控制枸杞農(nóng)藥殘留污染、促進(jìn)枸杞產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。目前，關(guān)于枸杞中農(nóng)藥殘留分析方法的研究報(bào)道較少，主要有液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法等；但以上方法均是針對每一類藥物進(jìn)行檢測，目前枸杞中使用的農(nóng)藥多達(dá)幾十種，無法滿足農(nóng)藥多殘留分析要求。本試驗(yàn)以枸杞生長過程中常用的農(nóng)藥為研究對象，采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）結(jié)合固相萃取技術(shù)，建立簡單、準(zhǔn)確、可靠的枸杞中28種農(nóng)藥多殘留分析方法，該方法前處理簡單、快速、凈化效果好、定性準(zhǔn)確、靈敏度高、回收率穩(wěn)定，各項(xiàng)檢測指標(biāo)均能滿足目前我國農(nóng)藥殘留監(jiān)測要求。

1材料與方法

1.1材料與試劑

earb/NH₂固相萃取柱（500 mg/500 mg/6 mL，德國CNW公司）；丙酮、正己烷（色譜級，美國J.T.Baker公司）；乙腈（色譜級，德國Merck公司）；甲苯（色譜級，德國CNW公司）；敵敵畏、敵百蟲、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧樂果、久效磷、樂果、百菌清、毒死蜱、對硫磷、三唑酮、馬拉硫磷、三氯殺螨醇、丙溴磷、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、噠螨靈、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、苯醚甲環(huán)唑、二甲戊樂靈、克螨特、丙環(huán)唑、戊唑醇、咪鮮胺均購自中國國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，濃度均為1 000 mg/L。其余試劑為分析純，試驗(yàn)用水為超純水。

1.2儀器與設(shè)備

Agilent7890A氣相色譜儀，7000B Triple Quad GC/MS質(zhì)譜儀（Agilent公司）；MassHunter數(shù)據(jù)處理軟件；Rapid Trace全自動固相萃取工作站（美國Biotage公司）；MS3 basic渦旋混合器（德國IKA公司）；T18 ULTRA TURRAX（德國IKA公司）；R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（瑞士步琦公司）；KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）。

1.3方法

1.3.1溶液配制 單標(biāo)儲備液的制備：分別量取標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0 mL，用丙酮稀釋成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20℃下保存?zhèn)溆??；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液的制備：吸取一定量的各標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于同一容量瓶中，用丙酮稀釋成合適濃度的工作溶液。

1.3.2樣品前處理 稱?。?.00±0.01）g枸杞于50 mL離心管中，加入5 mL水和15 mL乙腈，15 000 r/min勻漿提取1 min，加入2 g氯化鈉，渦旋混合1 min，6 000 r/min離心5 min，取上層有機(jī)相至濃縮瓶中。離心管中再加15 mL乙腈，重復(fù)提取1次，抽取并合并上層有機(jī)相，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1～2 mL，待凈化。earb/NH2固相萃取柱用4 mL乙腈+甲苯（體積比3：1）預(yù)淋洗，待液面到達(dá)柱吸附層時，迅速將上述待凈化液轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再用2 mL乙腈+甲苯（體積比3：1）洗滌樣液瓶并轉(zhuǎn)移上柱，重復(fù)3次，用25 mL乙腈+甲苯（體積比3：1）洗滌凈化柱，收集流出液于濃縮瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入5 mL正己烷再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用正己烷+丙酮（體積比1：1）定容至1 mL，過0.22μm有機(jī)相濾膜，用于氣質(zhì)測定。

1.3.3色譜、質(zhì)譜條件 色譜條件：色譜柱：DB-17MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Agilent公司）；升溫程序：初始溫度70℃，恒溫1 min，以8℃/min的速率升溫至210℃，再以20℃/min的速率升溫至290℃，保持12 min；進(jìn)樣口溫度280℃；進(jìn)樣方式：脈沖不分流；載氣：高純度氦氣；流速：1.2 mL/min；進(jìn)樣量：1.0 μL。質(zhì)譜條件：電子轟擊（EI）電離模式；電離能量70 eV；掃描方式：選擇離子監(jiān)測（sIM）；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；GC-MS接口溫度：280℃；溶劑延遲：3.75 min。

1.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線、方法檢出限及定量限 將28種農(nóng)藥混合溶液稀釋成10.0、5.0、2.0、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01、0.002μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，采用“1.3.3”節(jié)的方法進(jìn)行分析，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計(jì)算，求得28種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)。在陰性樣品中添加28種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算3倍信噪比（S/N>～3）和10倍信噪比（S/N≥10）時所對應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度，分別作為方法的檢出限（LOD）、定量限（LOQ）。

1.3.5方法回收率及精密度試驗(yàn) 采用對陰性樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)來考察方法的準(zhǔn)確度、精密度，對空白枸杞樣品，分別添加不同濃度的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“1.3.2”節(jié)的方法進(jìn)行樣品前處理，在“1.3.3”節(jié)條件下測定，計(jì)算樣品加標(biāo)回收率。每個添加水平重復(fù)6次，測得各組分的峰面積，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2結(jié)果與分析

2.1色譜條件優(yōu)化

選擇合適的色譜柱是農(nóng)藥多殘留分析的前提，本試驗(yàn)考察了DB-5MS、DB-17MS等2種不同極性的色譜柱，通過標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣來比較兩者對28種農(nóng)藥的分離效果。結(jié)果顯示，DB-5MS、DB-17MS均能實(shí)現(xiàn)組分的基本分離，但乙酰甲胺磷、久效磷等有機(jī)磷農(nóng)藥在DB-17MS色譜柱上的峰形（圖1）優(yōu)于DB-5MS色譜柱。

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2.2質(zhì)譜條件優(yōu)化

按照出峰順序?qū)y物進(jìn)行分組，分時段完成所有離子的檢測。保留時間接近的化合物被分進(jìn)一組進(jìn)行多離子同時掃描。采用SIM方法，每種化合物分別選擇1個定量離子、2～3個定性離子，以響應(yīng)值較高且干擾較少的離子進(jìn)行定量，以特征離子及離子問的相對豐度比進(jìn)行定性。28種化合物優(yōu)化的定量離子及定性離子等參數(shù)見表1。SIM掃描每個組分定量離子流圖見圖2。

2.3樣品前處理?xiàng)l件優(yōu)化

比較了乙腈、丙酮、丙酮+正己烷（5：5）等溶劑對28種農(nóng)藥的提取效果，結(jié)果表明，枸杞復(fù)水后加乙腈提取效果最好，這可能與樣品中加入水促進(jìn)了枸杞中糖分溶解，從而提高了乙腈的滲透能力有關(guān)。加入NaCl后，乙腈可從混合溶液中快速分離，有利于后續(xù)操作。丙酮提取液中干擾物較多，不利于下一步凈化。丙酮+正己烷（5：5）的提取效率低于以上2種提取溶劑。因此，本試驗(yàn)采用乙腈作為提取溶劑。

目前多農(nóng)殘分析主要采用固相萃取柱吸附雜質(zhì)方式來凈化，本試驗(yàn)對比了C18、Florisil、carb/NH₂3種吸附劑的凈化效果。由于枸杞基質(zhì)復(fù)雜，含有較多的糖類、蛋白質(zhì)及色素等，C18對這些雜質(zhì)的吸附能力弱，凈化效果較差。Florisil柱雖然對雜質(zhì)有較強(qiáng)的吸附能力，但對極性較強(qiáng)的有機(jī)磷農(nóng)藥也有吸附能力，增強(qiáng)洗脫液極性，可將此類組分洗脫，但雜質(zhì)也會被同步洗脫。carb/NH₂的凈化效果最好，但對百菌清等含有芳香族結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥也產(chǎn)生明顯吸附效果，在洗脫液中加入25%左右的甲苯可以破壞吸附劑和此類農(nóng)藥的相互作用。同時，甲苯的存在可防止堿性敏感的農(nóng)藥在堿性吸附劑（NH₂）上的降解。因此，本試驗(yàn)選擇carb/NH₂作為固相萃取柱，乙腈+甲苯（體積比3：1）為洗脫溶劑。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線、方法檢出限和定量限

28種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用外標(biāo)法定量，在“1.3.3”節(jié)條件下分析，以定量離子峰面積（y）對質(zhì)量濃度（x）得出校正曲線，通過回歸分析得出回歸方程、決定系數(shù)（表2）。結(jié)果表明，28種農(nóng)藥在0.01～5.00μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r²>0.99），方法的檢出限（LOD）和定量下限（LOQ）分別為0.008～0.085μg/g和0.027～0.280μg/g，滿足農(nóng)藥殘留定量分析要求。

2.5方法的回收率與精密度

分別在空白樣品中添加不同濃度水平的混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，每個添加水平平行分析6次，添加后按“1.3.2”節(jié)和“1.3.3”節(jié)所述步驟進(jìn)行提取、凈化、測定，樣品加標(biāo)回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表3。結(jié)果顯示，在3個加標(biāo)水平下，28種農(nóng)藥的平均回收率范圍為71.0%～106.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.96%～12.3%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.6實(shí)際樣品測定

利用本試驗(yàn)方法，分別對來自農(nóng)貿(mào)市場、超市、農(nóng)戶、枸杞加工企業(yè)、生產(chǎn)基地的27個枸杞樣品進(jìn)行檢測，其中有11個樣品檢出23次農(nóng)藥殘留。檢出的農(nóng)藥和檢出量分別為：毒死蜱（0.091～0.275 mg/kg）、丙溴磷（0.528 mg/kg）、聯(lián)苯菊酯（0.016 mg/kg）、三氟氯氰菊酯（2.22 mg/kg）、噠螨靈（1.09 mg/kg）、氯氰菊酯（0.194～0.434 mg/kg）、氰戊菊酯（0.284～0.616 mg/kg）、溴氰菊酯（3.11～3.59 mg/kg）、苯醚甲環(huán)唑（0.0780～0.212 mg/kg）、甲氰菊酯（0.148 mg/kg）、克螨特（0.145 mg/kg）、戊唑醇（0.412 mg/kg）。

3結(jié)論

本研究建立了枸杞中28種農(nóng)藥多殘留的氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法，包括11種有機(jī)磷殺蟲劑、1種有機(jī)硫殺蟲劑、1種有機(jī)氮?dú)⑾x劑、3種有機(jī)氯殺蟲劑、7種擬除蟲菊酯類殺蟲劑、4種含氮?dú)⒕鷦?種除草劑，該方法靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，為枸杞中農(nóng)藥多殘留的測定提供了簡單可靠的前處理方法和檢測手段。