李 丹，惠 瑞，韓 巖

(1.解放軍總醫(yī)院外科臨床部整形修復(fù)科 北京 100853；2.海軍總醫(yī)院神經(jīng)外科 北京 100048)

血竭局部外用對兔耳缺血創(chuàng)面愈合的影響

李 丹1，惠 瑞2，韓 巖1

(1.解放軍總醫(yī)院外科臨床部整形修復(fù)科 北京 100853；2.海軍總醫(yī)院神經(jīng)外科 北京 100048)

目的：血竭為傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中生肌方劑的主要成分，曾長期應(yīng)用于臨床治療多種難愈性創(chuàng)面，具有確切的療效。本課題應(yīng)用兔耳缺血創(chuàng)面模型，觀測血竭對創(chuàng)面愈合的作用。方法：血竭用基質(zhì)稀釋為A1(0.3mg/ml)，A2(3mg/ml)，A3(30mg/ml)，A4(100mg/ml)4種濃度，并以基質(zhì)A5作對照，作用于兔耳缺血創(chuàng)面，于創(chuàng)面形成后第3、6、9、12天進行大體觀察及顯微測量，通過蘇木精-伊紅染色觀測創(chuàng)面愈合組織病理變化，天狼猩紅染色觀察創(chuàng)面愈合過程中Ⅰ、Ⅲ型膠原比例。結(jié)果：血竭組A2(13.1±1.7)d、A3（12.3±0.9)d創(chuàng)面愈合速度快于對照組A5（15.7±0.9)d，兩者差異具有顯著性意義(P＜0.01)；術(shù)后3d到術(shù)后12d創(chuàng)面愈合過程中，A2，A3組創(chuàng)面愈合面積與對照組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；A3組新生肉芽組織體積與對照組相比差異有顯著意義(P＜0.01)；創(chuàng)面愈合第6天A3組天狼猩紅染色Ⅰ、Ⅲ型膠原比值2.23/1大于對照組1.44/1(P＜0.01)，而第15天Ⅰ、Ⅲ型膠原比例與對照組相比無明顯差異(P＞0.05)。結(jié)論：血竭能夠提高兔耳缺血創(chuàng)面愈合速度，改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量，具有顯著促進缺血創(chuàng)面愈合的作用。

血竭；創(chuàng)面愈合；兔耳缺血創(chuàng)面

血竭具有顯著的促進傷口愈合以及活血止痛的作用。南美洲民間醫(yī)學(xué)常用血竭治療創(chuàng)傷，我國中醫(yī)學(xué)運用血竭單方或含有血竭的生肌復(fù)方治療難愈性創(chuàng)面，具有確切的療效。目前關(guān)于血竭對動物傷口模型作用的報道僅見Porras-Reyes[1]研究發(fā)現(xiàn)南美洲血竭具有促進小鼠線性傷口愈合的作用。國內(nèi)文獻多為對血竭或含血竭復(fù)方臨床應(yīng)用中的療效觀察，有文獻報道血竭提取物對角質(zhì)形成細胞與成纖維細胞的增殖有促進作用[2-4]，而對血竭作用于難愈性創(chuàng)面動物模型的研究尚未見報道。本實驗應(yīng)用兔耳缺血模型，觀測血竭對其愈合時間及愈合質(zhì)量的影響，為闡明血竭促進難愈性創(chuàng)面愈合的機理提供了有意義的實驗資料。

1 材料和方法

1.1 主要試劑：846合劑（長春農(nóng)牧研究所）；天狼猩紅染料（Sirius Red F3B，英國）；30%飽和苦味酸（廣東汕頭西隴化工廠）；40%甲醛（天津大茂化學(xué)試劑廠）；0.1%磷酸緩沖液（天津大茂化學(xué)試劑廠）；血竭（皇冠牌，印度尼西亞）；Harris蘇木精染液（西京醫(yī)院病理科）。

1.2 主要儀器：6mm活檢打孔器（本科實驗室）；石蠟切片機（德國Leitz公司）；BX-60熒光顯微鏡及照相系統(tǒng)Olympus（日本）。

1.3 藥物的制備

1.3.1 藥物的配制：使用乳缽將血竭研磨成粉末，在56℃水浴條件下加熱30min，并不斷攪拌混勻直至完全溶于基質(zhì)，基質(zhì)成分為硬脂酸、凡士林、單硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、水等混合而成。將血竭制成濃度為0.3mg/ml、3mg/ml、30mg/ml、100mg/ml的藥膏待用。

1.3.2 Bouin氏液：苦味酸飽和水溶液(1.22%)75ml、40%甲醛25ml、冰醋酸5ml

1.4 實驗動物及方法

1.4.1 動物模型的制作及分組

1.4.1.1 實驗動物：新西蘭白兔20只，體重3.5～4.0kg，雌雄不限，兔齡2年。隨機分為5組：A1(0.3mg/ml)，A2(3mg/ml)，A3(30mg/ml)，A4(100mg/ml)4種濃度，并以基質(zhì)A5作對照，每組4只。

1.4.1.2 兔耳缺血模型制作：采用846合劑以0.1ml/kg進行耳緣靜脈麻醉。在雙側(cè)兔耳根部環(huán)行切開耳背、耳腹側(cè)皮膚，刮除軟骨膜，暴露軟骨，分離結(jié)扎耳背側(cè)中央動脈及頭側(cè)動脈，保留尾側(cè)動脈及所有靜脈(圖1)。在耳腹側(cè)用活檢打孔器制成直徑6mm的5個圓形創(chuàng)面，均勻分布，創(chuàng)面內(nèi)刮除表皮及軟骨膜。

1.4.1.3 創(chuàng)面用藥：將同一只實驗用兔雙側(cè)兔耳共10個圓形創(chuàng)面隨機分為A1、A2、A3、A4、A5組，每組2個創(chuàng)面，分別以1cm×1cm大小醫(yī)用紗布薄片蘸取約100mg血竭藥膏或基質(zhì)敷于創(chuàng)面，外層覆蓋醫(yī)用膠布固定于兔耳。其中A1組用藥濃度為0.3mg/ml、A2為3mg/ml、A3為30mg/ml、A4為100mg/ml、A5組使用基質(zhì)作為對照組。術(shù)后隔日換藥。

1.4.2 創(chuàng)面攝影與大體觀察：分別于創(chuàng)面形成后第0、3、6、9、12天行創(chuàng)面攝影（距離4cm，微距拍攝模式）。觀察創(chuàng)面愈合過程中不同濃度用藥組以及對照組皮溫、顏色、肉芽組織生長、表皮爬行增生等變化，并記錄愈合時間。

1.4.3 標本切取及處理：創(chuàng)面形成后于第3、6、9、12天分別過量麻醉劑處死動物，以每一創(chuàng)面為中心，切取1cm×1cm正方形組織塊(含兔耳全層)，并過創(chuàng)面圓心將組織塊分為兩份。標本置于Bounie氏液中固定24h，常規(guī)石蠟包埋、制作厚度為3μl切片。

1.4.4 HE染色：選取術(shù)后第3、6、9、12天分別處死的兔耳組織切片進行HE染色。主要步驟為切片浸入蘇木精染液，1%鹽酸酒精分化，10%氨水使細胞核藍化，伊紅液浸染，經(jīng)80%、85%、90%、95%無水酒精順序脫水后用二甲苯透明，中性樹膠封片。在光鏡下觀察炎細胞浸潤、組織水腫、肉芽組織生成和表皮增生、移行等情況。

1.4.5 苦味酸-天狼猩紅染色：①染液配制：0.1%苦味酸一天狼星紅溶液：天狼猩紅(Sirius red) 0.1g、飽和苦味酸溶液100ml；②染色步驟：選取術(shù)后第6天和第12天兔耳石蠟組織切片在二甲苯中徹底脫蠟，經(jīng)各級乙醇脫水，0.1%飽和苦味酸一天狼星紅溶液中浸染2h以上，流水沖洗5min，按常規(guī)方法用Harris蘇木精復(fù)染，經(jīng)各級乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。染色后的切片膠原著色，在普通顯微鏡下呈紅色。使用偏振光顯微鏡觀察染色切片并進行顯微攝影。

1.4.6 顯微測量與圖像分析

1.4.6.1 顯微鏡下用顯微測微標尺（精確到0.1mm) 測量HE染色各組切片的新生上皮間距(EG)、新生肉芽組織間距(GTG)、新生肉芽組織平均厚度(MH)，見圖1。由此推算在術(shù)后第3、6、9、12天創(chuàng)面愈合面積(S愈合)及新生肉芽組織體積(V肉芽組織)：

其中d1：新生上皮細胞間距（EG）；d0：總創(chuàng)面直徑6mm；(d0/2)2×π：總創(chuàng)面面積S總；愈合面積占總創(chuàng)面的百分比：S愈合/S總×100%。S愈合和S愈合/S總均能準確反映創(chuàng)面愈合速度。

其中d1：新生肉芽組織間距(GTG)；d0：總創(chuàng)面直徑6mm；h：新生肉芽組織平均厚度(PH)。

圖1 兔耳創(chuàng)面模型及愈合檢測指標示意圖

1.4.6.2 苦味酸-天狼猩紅染色切片，采用Photoshop 7.0圖像分析系統(tǒng)分別進行檢測。在偏振光顯微鏡下每張切片按系統(tǒng)抽樣法隨機抽取5個視野，用Photoshop 7.0中的色彩范圍工具選取顏色，用直方圖計算不同顏色所占像素大小，分析其比例變化，以此測定I、Ⅲ型膠原含量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析：實驗所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行處理，并以均數(shù)±標準差表示。兩組間比較采用t檢驗，多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察：創(chuàng)面形成后，周圍青紫水腫，前2天最明顯，第3天以后基本恢復(fù)，術(shù)后第3天創(chuàng)緣有少量肉芽形成，用藥組分泌物較對照組多，5d后顯示實驗組肉芽色澤較紅潤，術(shù)后3～6d創(chuàng)緣有新生上皮爬行。前3天各組未見明顯差別，第6天后用藥組愈合速度快于對照組。第12天A2、A3用藥組部分創(chuàng)面已經(jīng)完全上皮化（圖2）。第15天觀察愈合后基質(zhì)組瘢痕與用藥組相比并無顯著差異。各組愈合時間差異見表1。

2.2 顯微測量：通過對創(chuàng)面愈合過程中第3、6、9、12天兔耳切片EG、GTG、MH的顯微測量，結(jié)合計算公式可以得出S愈合及V肉芽組織。由表2可以得出，A2、A3組的S愈合在術(shù)后第3～12天創(chuàng)面愈合過程中均高于對照組，且與血竭呈劑量依賴性，其中A3組最為顯著（P＜0.01）。由表3可以得出，A2組、A3組、A4組的V肉芽組織在術(shù)后第3～12天創(chuàng)面愈合過程中均高于對照組，且在3～30mg/ml濃度范圍內(nèi)與血竭濃度呈劑量依賴關(guān)系，其中A3組V肉芽組織與對照組差異最為顯著（P＜0.01)。

表1 5組創(chuàng)面愈合時間比較 （,d）

表1 5組創(chuàng)面愈合時間比較 （,d）

注：*與對照組A5組比較，P＜0.05

A1組 A2組 A3組 A4組 A5組（對照組）愈合時間 16.5±1.1 13.1±1.7* 12.3±0.9* 14.3±1.6 15.7±0.9

表2 各時間點血竭濃度與愈合面積關(guān)系 （，mm2）

表2 各時間點血竭濃度與愈合面積關(guān)系 （，mm2）

注：*與對照組A5組相比 P＜0.05**;與對照組A5組相比 P＜0.01

組別 3d 6d 9d 12d A1 18.08±1.73 18.59±1.05 20.47±0.89*19.13±1.21*A2 20.96±0.84 22.02±0.98*22.32±1.60**21.09±1.78*A3 21.29±1.39 24.99±1.90* 25.63±1.34**25.49±2.12*A4 27.55±2.41 27.74±1.08* 28.21±1.13*27.15±2.55*A5 18.26±0.95 20.56±1.47 23.04±2.03 26.19±2.72

2.3 組織形態(tài)學(xué)觀察：光鏡下觀察HE染色切片顯示，術(shù)后第3天,血竭組創(chuàng)緣部分表皮細胞開始向中心移行，皮脂腺上皮顯著增生，多位于真皮淺層。皮下有少量新生血管，組織水腫較輕，炎細胞浸潤較少；對照組未見皮脂腺上皮增生，皮下血管較少，組織水腫顯著，炎細胞浸潤較多。

術(shù)后第6天，血竭組表皮進一步向創(chuàng)面中心移行，且表皮層數(shù)顯著增多，出現(xiàn)多處皮脂腺樣結(jié)構(gòu)。皮下有較多新生小血管和成纖維細胞，膠原纖維較粗，且排列平行有序（圖2）；對照組表皮層數(shù)較少，毛囊和皮脂腺上皮細胞增生仍不顯著，膠原纖維纖細，排列松散不平行（圖3）。

術(shù)后第9天，血竭組表皮層增厚更為明顯，出現(xiàn)垂直于表皮的“皮釘”，表皮細胞排列致密，上層表皮出現(xiàn)角化。皮下可見大量成纖維細胞已形成成熟的梭形纖維細胞，皮下可見豐富的新生血管；對照組創(chuàng)面也可見較多新生血管，成纖維細胞排列紊亂，纖維細胞數(shù)目少，表皮細胞層數(shù)較血竭組少。

圖2 30mg/ml血竭組與對照組兔耳難愈創(chuàng)面愈合情況比較

圖3 術(shù)后第9天30mg/ml血竭組與對照組HE染色鏡下觀察結(jié)果（×200）

圖4 術(shù)后第6天30mg/ml血竭組與對照組天狼猩紅染色鏡下觀察結(jié)果（×400）

表3 各時間點血竭濃度與新生肉芽組織含量關(guān)系 （，mm3）

表3 各時間點血竭濃度與新生肉芽組織含量關(guān)系 （，mm3）

注：*與對照組A5組相比 P＜0.05;**與對照組A5組相比 P＜0.01

組別 3d 6d 9d 12d A1 2.50±0.07 4.03±0.09* 3.05±0.03* 2.33±0.13 A2 3.13±0.12 5.54±0.16* 8.75±0.05** 6.28±0.18*A3 4.72±0.20 5.93±0.14 7.28±0.10** 7.01±0.11*A4 5.24±0.17 8.38±0.25* 8.90±0.21** 7.71±0.23*A5 1.75±0.18 4.76±0.12 5.61±0.22 6.68±0.25

術(shù)后第12天，血竭組部分創(chuàng)面已基本愈合，表皮層增厚，皮下可見大量梭形的纖維細胞，平行緊密排列，新生血管數(shù)較第9天有所減少；對照組創(chuàng)面仍未愈合，新生血管較多，成纖維細胞與用藥組相比尚未成熟，間質(zhì)中膠原排列較為整齊。2.4 創(chuàng)面Ⅰ、Ⅲ膠原比例：使用偏振光顯微鏡觀察天狼猩紅染色切片，鏡下可見術(shù)后第6天A3組、A4組I、Ⅲ型膠原比例較對照組增高，其中A3組與對照組差異最為顯著（P＜0.01）；A2組I、Ⅲ型膠原比例較對照組顯著降低（P＜0.01）見表4、圖4。術(shù)后第15天完全愈合時，實驗組與對照組相比Ⅰ、Ⅲ膠原比例無明顯差異（表4）。

3 討論

血竭作為古老的止血生肌藥物在國內(nèi)外傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中均有廣泛的應(yīng)用。近年來研究表明，血竭除有改善創(chuàng)面血液循環(huán)、提高免疫力等作用外，還可能具有直接的促進創(chuàng)面愈合作用[5-9]。目前僅有國外Porras-Reyes報道血竭可以提高小鼠線性傷口愈合后的抗張力強度[1]，而尚無關(guān)于血竭作用于慢性創(chuàng)面動物模型研究的報道。本實驗采用兔耳缺血模型作為慢性創(chuàng)面的動物模型，觀察到血竭對兔耳缺血創(chuàng)面具有促進愈合的作用。

慢性難愈性創(chuàng)面是由全身和局部多種因素造成的，主要表現(xiàn)為創(chuàng)面的愈合緩慢或不愈合，目前尚無一種標準的動物模型供研究使用。兔耳缺血模型最早由Ahn ST[10]于1990年報道，是目前應(yīng)用較多的一種具有局部缺血特征的與人類難愈創(chuàng)面比較接近的理想動物模型。該模型具以下優(yōu)點：①靜脈血氣分析以及皮溫測定證實低氧狀態(tài)明確可靠；②較低的感染率及壞死率；③兔耳軟骨可以防止創(chuàng)面收縮，利于準確觀測其愈合速度；④剝除軟骨膜后創(chuàng)基即為無血運的軟骨，新生肉芽組織從四周創(chuàng)緣均勻地向創(chuàng)面中心生長，這種規(guī)則的愈合方式也有助于準確觀測愈合速度[11]。由于兔耳缺血模型的以上優(yōu)點，本實驗采用其來研究血竭對難愈性創(chuàng)面的作用，所得結(jié)果確實、可信，具有說服力。目前評價創(chuàng)面愈合的方法較多，其中創(chuàng)面愈合率、創(chuàng)面愈合時間及組織病理學(xué)分析，仍是最直接有效的創(chuàng)面愈合評價指標[12]。本實驗中，我們采用顯微鏡下測微尺測量法，精確度高，較適用于規(guī)則創(chuàng)面的測量。實驗結(jié)果表明，血竭對缺血創(chuàng)面修復(fù)中再上皮化及肉芽組織形成的促進作用存在著劑量依賴性，當(dāng)濃度為3mg/ml時，有一定的促進作用；濃度為30mg/ml時，作用最為顯著；濃度過低（0.3mg/ml）時，數(shù)值雖然與對照組相比存在差異，但無統(tǒng)計學(xué)意義。濃度過高（100mg/ml）時，血竭僅對肉芽組織形成具有促進作用，但卻延緩了再上皮化過程。

表4 Ⅰ、Ⅲ膠原在創(chuàng)面愈合第6天時在各組中的比例

皮膚膠原主要為Ⅰ、Ⅲ型膠原，其中I型膠原是由兩條α2和一條α1肽鏈構(gòu)成，Ⅲ型膠原是由三條α1肽鏈構(gòu)成。Ⅰ型膠原在占總膠原含量的80%～85%，在組織中起支架的作用。Ⅲ型膠原在皮膚中占總膠原量的15%～20%，含Ⅲ型膠原偏多的皮膚其纖維束較細，且彈性較好。皮膚中15周胎兒皮膚，Ⅰ型膠原與Ⅲ型膠原含量之比為0.8:1，成人則為3.5～6:1。創(chuàng)傷愈合早期Ⅲ型膠原含量相對較多，隨著時間的推移，逐漸恢復(fù)正常[12]。在創(chuàng)傷修復(fù)、愈合過程中，其關(guān)鍵步驟之一是肉芽組織的形成，肉芽組織形成的高峰期在創(chuàng)面形成后3～6d，此期成纖維細胞數(shù)量急劇增多，并開始產(chǎn)生膠原纖維，膠原的數(shù)量和質(zhì)量直接影響著創(chuàng)面修復(fù)愈合程度[13]。我們在實驗中選擇創(chuàng)面形成后第6天，來觀察血竭在創(chuàng)面愈合早期對Ⅰ、Ⅲ型膠原的影響?？辔端?天狼星紅特殊染色切片經(jīng)偏振光觀察可發(fā)現(xiàn)不同創(chuàng)面愈合組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原的形態(tài)和分布特點，并結(jié)合圖像分析技術(shù)分別測量出肉芽組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原的含量[14-15]。本實驗結(jié)果顯示，創(chuàng)面愈合第6天，血竭組中30～100mg/ml濃度范圍內(nèi)，Ⅰ型膠原所占比例均高于對照組，其中30mg/mlⅠ型膠原所占比例最高。而較低濃度0.3～3mg/ml血竭組的Ⅲ型膠原所占比例則高于對照組。創(chuàng)面愈合第12天，血竭組各組Ⅰ、Ⅲ型膠原比例與對照組無顯著差異。這與Porras-Reyes[1]報道的濃度為25mg/ml血竭于創(chuàng)面形成后第5～7天可以顯著促進傷口愈合的張力強度，而在第12天血竭組與對照組并無明顯差別的結(jié)果相一致。說明血竭可以在創(chuàng)面愈合早期促進傷口愈合質(zhì)量，形成較為成熟的Ⅰ型膠原，而在完全愈合后并不會出現(xiàn)由于過度修復(fù)所造成的病理性瘢痕現(xiàn)象。由實驗結(jié)果可以推論出，血竭在濃度為30mg/ml時，對于兔耳缺血創(chuàng)面的再上皮化、肉芽組織形成以及Ⅰ型膠原的比例均有顯著促進作用，為血竭促進創(chuàng)面愈合的最適應(yīng)用濃度。

綜上，本試驗觀察到血竭外敷于兔耳缺血創(chuàng)面，促進了兔耳缺血組織的快速增殖修復(fù)。其機制可能為：①可以促進細胞的遷移游走；②促進新生毛細血管化；③促進上皮細胞增殖；④調(diào)節(jié)膠原合成，提高Ⅰ型膠原合成比例。我們將進一步研究血竭促進兔耳缺血創(chuàng)面愈合過程中，藥物對肉芽組織中微血管密度及相關(guān)生長因子表達調(diào)控的影響。

[1]Porras-Reyes BH,Lewis WH,Roman J,et al.Enhancement of wound healing by the alkaloid taspine def l ning mechanism of action[J].Proc Soc Exp Biol Med,1993,203(1):18-25.

[2]李丹,郭樹忠,王勝春,等.血竭提取物對角質(zhì)形成細胞增殖的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué),2005,14(3):274-276.

[3]李丹,惠瑞.胡詠武.血竭提取物促進成纖維細胞增殖及膠原分泌[J].中國組織工程研究,2014,18(46):7437-7441.

[4]李丹,惠瑞,胡詠武,等.血竭提取物對成纖維細胞增殖及合成透明質(zhì)酸的影響[J].中華整形外科雜志,2015,32(1):53-57.

[5]Kenneth J.Review of Sangre de Drago (Croton lechleri)—a south american tree sap in the treatment of diarrhea,inflammation,insect bites, viral infections, and wounds:traditional uses to clinical research. the journal of alternative and complementary medicin[J].J Altern Complement Med,2003,9(6):877-896.

[6]李紅賓,王正文.血竭治療皮膚黏膜創(chuàng)傷及其作用機制研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2003,12(18):2016-2017.

[7]陳德,高青,施偉民.中藥中活血化瘀藥對皮膚創(chuàng)傷愈合的影響[J].上海醫(yī)學(xué),2000,23(3):145-147.

[8]俞琦,王文佳,王平.血竭對組織工程皮膚移植模型大鼠創(chuàng)傷修復(fù)的影響[J].中國組織工程研,2016,20(37):5524-5529.

[9]Ahn ST,Mustoe TA.Effects of ischemia on ulcer wound healing: a new model in the rabbit ear[J].Ann Plast Surg,1990,24(1):17-23.

[10]彭湃,魯開化,郭樹忠,等.兔耳缺血創(chuàng)面模型的構(gòu)建[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,1999,20(11):989-990.

[11]黃康,陳玉林.創(chuàng)面愈合評價指標進展[J].中國修復(fù)重建外科雜志,2001,15(2):126-129.

[12]楊力,李薈元.用兔耳模型觀察透明質(zhì)酸與羥脯氨酸含量變化的關(guān)系.創(chuàng)傷研究動物模型[M].西安:第四軍醫(yī)大學(xué)出版社,2005:95.

[13]黎君友,王會信,付小兵,等.創(chuàng)傷修復(fù)的生化及代謝.現(xiàn)代創(chuàng)傷修復(fù)學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,1999:20.

[14]Nauta AC,Grova M,Montoro DT,et al.Evidence that mast cell are not required for healing of splinted cutaneous excisional wound in mice[J].PLoS One,2013,8(3):e59167.

[15]劉鈺,沈沖,孟琴.體外構(gòu)建3D人工皮膚[J].中國組織工程研究,2016,20(46):6915-6921.

Effect of Dragon’s Blood for External Use on Ischemic Ulcer Wound Healing of Rabbit Ears

LI Dan1,HUI Rui2,HAN Yan1
(1.Department of Plastic and Reconstructive Surgery,Chinese People’s Liberation Army General Hospital, Beijing 100853,China;2.Department of Neurosurgery,Navy General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To study the effects of Dragon’s blood on ischemic ulcer wound healing of rabbit ears in vivo.MethodsDragon’s blood was diluted into A1(0.3mg/ml), A2(3mg/ml), A3(30mg/ml), A4(100mg/ml) by vanesline, while the vaseline was used as control group. We used the different ointment in ischemic ulcer of rabbit ears. The photos and microscopic observation were carried out at 3,6,9,12,15 days post operation. Picrosirius-polarization method was used to observe the ratio of tape Ⅰ collagen/tape Ⅲ collagen at 6,15 days post operation. Results The wound healing speed of group A2(13.1±1.7）d、A3（12.3±0.9）dwere faster than that of control A5（15.7±0.9）d,the difference was signif l cant (P＜0.01). From 3rdto 12thdays post operation, Sheal of A3 were signiflcantly higher than control（P＜0.011), Vgranulation of A3 were higher than control(P＜0.01).The ratio of tapeⅠcollagen/tape Ⅲ collagen in group A3 2.23/1 was higher than the control 1.44/1 at 6thday post operation(P＜0.01),there was no difference between Dragon’s blood group and control at 15thday (P＞0.05). Conclusion Dragon’s blood can improve the healing speed and quality of rabbit ear ischemic ulcer．

Dragon’s blood;wound healing;ischemic ulcer of rabbit ears

R285.5

A

1008-6455（2017）04-0056-05

2017-01-18

2017-04-06

編輯/張惠娟

韓巖，中國人民解放軍總醫(yī)院整形修復(fù)科,主任醫(yī)師,教授;E-mail:13720086335@163.com