夏穎華 孔曉冬 雷 平 張釋雙 張明義 趙子龍 葛歆瞳

神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用

夏穎華 孔曉冬 雷 平 張釋雙 張明義 趙子龍 葛歆瞳

目的探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用。方法體外分離原代培養(yǎng)18只新生Wister大鼠海馬神經(jīng)元，噻唑藍(lán)法測(cè)定地塞米松誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡的最低敏感劑量，觀察不同質(zhì)量濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)地塞米松（0.10×10?6mol/L）誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用。結(jié)果與陰性對(duì)照組相比，地塞米松Ⅰ組（10×10?6mol/L）、Ⅱ組（1×10?6mol/L）和Ⅲ組（0.10× 10?6mol/L）大鼠海馬神經(jīng)元活性均降低（P=0.000，0.000，0.000）。予不同質(zhì)量濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子后，神經(jīng)生長(zhǎng)因子0.18 ng/ml組大鼠海馬神經(jīng)元活性低于陰性對(duì)照組（P=0.000）和陽(yáng)性對(duì)照組（P=0.010），神經(jīng)生長(zhǎng)因子18 ng/ml組大鼠海馬神經(jīng)元活性高于陽(yáng)性對(duì)照組（P=0.000）和神經(jīng)生長(zhǎng)因子0.18 ng/ml組（P=0.000）。結(jié)論糖皮質(zhì)激素可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡，地塞米松0.10×10?6mol/L是誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡的最低敏感劑量，神經(jīng)生長(zhǎng)因子可以拮抗地塞米松誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡。

神經(jīng)生長(zhǎng)因子；糖皮質(zhì)激素類；海馬；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞，培養(yǎng)的；疾病模型，動(dòng)物

This study was supported by Tianjin Research Program of Application Foundation and Advanced Technology(No.15JCYBJC50500),Science and Technology Foundation of Tianjin Health Bureau(No. 2015KZ118),and Tianjin Medical University General Hospital Youth Incubation Fund(No. ZYYFY2015034).

為適應(yīng)外源性和內(nèi)源性應(yīng)激（如創(chuàng)傷、疾病、精神因素等），機(jī)體調(diào)節(jié)生物活動(dòng)以保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，從而激活下丘腦?垂體?腎上腺（HPA）軸，導(dǎo)致血清皮質(zhì)醇水平異常，嚴(yán)重者甚至誘發(fā)危重癥相關(guān)性糖皮質(zhì)激素不足（CIRCI）［1］或慢性血清皮質(zhì)醇水平升高，破壞免疫穩(wěn)態(tài)，誘發(fā)內(nèi)環(huán)境紊亂、內(nèi)臟型肥胖和胰島素抵抗等代謝性疾病［2?3］。研究顯示，高水平糖皮質(zhì)激素可以引起海馬神經(jīng)元突觸缺失和海馬萎縮，加重海馬齒狀回神經(jīng)元凋亡，從而影響認(rèn)知功能［4］。因此，如何選擇適宜的糖皮質(zhì)激素劑量和使用時(shí)間，從而在有效發(fā)揮外源性糖皮質(zhì)激素治療作用的同時(shí)，避免應(yīng)用不合理導(dǎo)致的神經(jīng)元不良反應(yīng)，是臨床醫(yī)師一直探索的課題。神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）作為臨床應(yīng)用廣泛的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（NTF），業(yè)已證實(shí)在神經(jīng)元存活、生長(zhǎng)、分化和再生等方面發(fā)揮重要作用［5］。本研究旨在大鼠海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)基礎(chǔ)上，采用細(xì)胞酶學(xué)分析法觀察糖皮質(zhì)激素對(duì)新生大鼠海馬神經(jīng)元活性的影響，以及神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康清潔級(jí)24 h內(nèi)新生Wistar大鼠共18只，性別不限，體重為5～7 g，均由解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所提供，每次實(shí)驗(yàn)取同一窩別乳鼠6只。所有孕鼠均于萬(wàn)級(jí)屏障系統(tǒng)喂以潔凈飼料，于室溫（22±3）℃、相對(duì)濕度40%～70%、12 h晝-12 h夜循環(huán)照明環(huán)境中飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。

2.試劑與儀器（1）藥品與試劑：鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子（恩經(jīng)復(fù)，規(guī)格：18 μg/支）購(gòu)自廈門未名生物醫(yī)藥有限公司，地塞米松（規(guī)格：1 mg/ml）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，SFFD培養(yǎng)液［包含DMEM培養(yǎng)基/F?12混合液（1∶1）］和N2無(wú)血清添加劑為美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品，胎牛血清（FBS）由美國(guó)Hyclon公司提供，噻唑藍(lán)（MTT）和二甲基亞砜（DMSO）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。（2）儀器與設(shè)備：96孔培養(yǎng)板購(gòu)自丹麥Nunc公司，倒置相差顯微鏡為日本Olympus公司產(chǎn)品，二氧化碳培養(yǎng)箱由德國(guó)Binder公司提供，Zoom 2000型解剖顯微鏡購(gòu)自德國(guó)Leica公司，Allegra X?15R型離心機(jī)為美國(guó)Beckman公司產(chǎn)品。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)參照文獻(xiàn)［6?7］方法，于無(wú)菌條件下以體積分?jǐn)?shù)75%乙醇溶液消毒處死新生Wistar大鼠，尖鑷子剝離腦組織置于培養(yǎng)皿中，解剖顯微鏡下分離海馬組織，完整去除血管和腦膜，以不含血清的SFFD培養(yǎng)液沖洗，充分剪碎。將含15%胎牛血清的SFFD培養(yǎng)液與剪碎的海馬組織混合加入離心管中，移液管輕輕吹吸，細(xì)胞懸液在200目濾網(wǎng)上過(guò)濾，剩余組織在200目濾網(wǎng)上研磨后過(guò)濾，收集分散的單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至1× 106個(gè)/ml，接種至預(yù)先涂有鼠尾膠原的96孔培養(yǎng)板中，置37℃、含5%二氧化碳的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)第2天全量更換含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，以后每3天半量更換含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，培養(yǎng)至第9天，可見(jiàn)海馬神經(jīng)元貼壁生長(zhǎng)。共制備3張96孔培養(yǎng)板，其中2張用于糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡實(shí)驗(yàn)，1張用于神經(jīng)生長(zhǎng)因子干預(yù)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡實(shí)驗(yàn)。

2.糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡（1）分組：將原代培養(yǎng)至第9天的2張96孔培養(yǎng)板中的海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為8組，每組各24孔細(xì)胞。①陰性對(duì)照組，棄原培養(yǎng)液，更換為新鮮含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，共培養(yǎng)48 h。②地塞米松Ⅰ～Ⅶ組，棄原培養(yǎng)液，更換為含有不同濃度地塞米松（10× 10?6、1×10?6、0.10×10?6、0.01×10?6、1×10?9、0.10×10?9和0.01×10?9mol/L）的含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，培養(yǎng)48 h。（2）MTT法檢測(cè)海馬神經(jīng)元活性：每孔細(xì)胞加入5 g/L MTT溶液15 μl，培養(yǎng)4 h，于離心半徑7 cm、轉(zhuǎn)速1000 r/min離心3 min，棄上清液，加入DMSO溶液150 μl振蕩溶解，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）于590 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值（OD值），代表海馬神經(jīng)元活性。

3.神經(jīng)生長(zhǎng)因子干預(yù)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡（1）分組：將原代培養(yǎng)至第9天的96孔培養(yǎng)板中的海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為4組，每組各24孔細(xì)胞。①陰性對(duì)照組，棄原培養(yǎng)液，更換為新鮮含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，培養(yǎng)48 h。②陽(yáng)性對(duì)照組，棄原培養(yǎng)液，更換為含有0.10×10?6mol/L地塞米松的含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，培養(yǎng)48 h。③神經(jīng)生長(zhǎng)因子0.18 ng/ml組，棄原培養(yǎng)液，更換為含有0.10×10?6mol/L地塞米松的含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，同時(shí)加入0.10 ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子0.18 ng/ml，共培養(yǎng)48 h。④神經(jīng)生長(zhǎng)因子18 ng/ml組，棄原培養(yǎng)液，更換為含0.10×10?6mol/L地塞米松的含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液，同時(shí)加入0.10 ml神經(jīng)生長(zhǎng)因子18 ng/ml，培養(yǎng)48 h。（2）MTT法檢測(cè)海馬神經(jīng)元活性：每孔培養(yǎng)細(xì)胞加入5 g/L MTT溶液15 μl，培養(yǎng)4 h，于離心半徑7 cm、轉(zhuǎn)速1000 r/min離心3 min，棄上清液，加入DMSO溶液150 μl振蕩溶解，采用ELISA法于590 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，代表海馬神經(jīng)元活性。

三、統(tǒng)計(jì)分析方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。采用Levene方差齊性檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±采用單因素方差分析，方差齊性者組間兩兩比較行LSD?t檢驗(yàn)，方差不齊者組間兩兩比較采用Tamhane's T2法。以P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、糖皮質(zhì)激素對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元活性的影響

不同濃度地塞米松對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元活性的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），其中，地塞米松Ⅰ組（10×10?6mol/L）、Ⅱ組（1×10?6mol/L）和Ⅲ組（0.10×10?6mol/L）海馬神經(jīng)元活性均低于陰性對(duì)照組（P=0.000，0.000，0.000）；而地塞米松Ⅳ～Ⅶ組海馬神經(jīng)元活性與陰性對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05；表1，2），提示地塞米松0.10×10?6mol/L是誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的最低敏感劑量。

表1 不同濃度地塞米松組大鼠海馬神經(jīng)元活性的比較Table1.Comparisonofdifferentconcentrationsof dexamethasone on the activity of rat hippocampal neurons

表1 不同濃度地塞米松組大鼠海馬神經(jīng)元活性的比較Table1.Comparisonofdifferentconcentrationsof dexamethasone on the activity of rat hippocampal neurons

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表2 不同濃度地塞米松組大鼠海馬神經(jīng)元活性的兩兩比較Table 2.Paired comparison of different concentrations of dexamethasone on the activity of rat hippocampal neurons

二、神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用

不同質(zhì)量濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)地塞米松0.10× 10?6mol/L誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），其中，神經(jīng)生長(zhǎng)因子0.18 ng/ml組大鼠海馬神經(jīng)元活性低于陰性對(duì)照組（P=0.000）和陽(yáng)性對(duì)照組（P=0.010）；神經(jīng)生長(zhǎng)因子18 ng/ml組大鼠海馬神經(jīng)元活性僅高于陽(yáng)性對(duì)照組（P= 0.000），而與陰性對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；神經(jīng)生長(zhǎng)因子18 ng/ml組大鼠海馬神經(jīng)元活性高于神經(jīng)生長(zhǎng)因子0.18 ng/ml組（P=0.000；表3，4），表明神經(jīng)生長(zhǎng)因子可以拮抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡，具有神經(jīng)保護(hù)作用。

討論

糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激反應(yīng)、水電解質(zhì)平衡和機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育等諸多方面扮演重要角色，但其臨床應(yīng)用一直飽受爭(zhēng)議。近年相繼有研究顯示，機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)或予非生理水平糖皮質(zhì)激素后，可持續(xù)刺激下丘腦?垂體?腎上腺軸，使靶組織對(duì)激素的敏感性改變，同時(shí)增強(qiáng)海馬神經(jīng)元對(duì)凋亡的敏感性［4，6］。本研究結(jié)果顯示，海馬神經(jīng)元暴露于濃度＞0.10× 10?6mol/L糖皮質(zhì)激素后，可發(fā)生凋亡，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致［4，6］。機(jī)體處于慢性應(yīng)激狀態(tài)，可以刺激下丘腦?垂體?腎上腺軸，促進(jìn)激素分泌增多、神經(jīng)生長(zhǎng)因子分泌減少，導(dǎo)致前額葉和海馬萎縮，從而出現(xiàn)抑郁癥狀［4，8?10］，最終導(dǎo)致向心性肥胖和代謝綜合征以及空間學(xué)習(xí)能力和記憶障礙［1?2］。當(dāng)今社會(huì)隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和生活節(jié)奏的迅速增快，精神疾病發(fā)病率升高，國(guó)民普遍處于慢性應(yīng)激狀態(tài)，血清皮質(zhì)醇水平升高，因此，積極探尋一種神經(jīng)保護(hù)劑以拮抗糖皮質(zhì)激素的負(fù)性作用、提高其有效性即顯得十分必要。

表3 不同質(zhì)量濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子組大鼠海馬神經(jīng)元活性的比較Table 3.Comparison of the activity of rat hippocampal neurons among different groups

表3 不同質(zhì)量濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子組大鼠海馬神經(jīng)元活性的比較Table 3.Comparison of the activity of rat hippocampal neurons among different groups

NGF，nerve growth factor，神經(jīng)生長(zhǎng)因子

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表4 不同質(zhì)量濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子組大鼠海馬神經(jīng)元活性的兩兩比較Table4.Pairedcomparisonoftheactivityofrat hippocampal neurons among different groups

本研究結(jié)果顯示，海馬神經(jīng)元活性降低與地塞米松呈劑量依賴性，一定濃度（10×10?6、1×10?6和0.10×10?6mol/L）糖皮質(zhì)激素可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元凋亡，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致［11?12］。本研究采用MTT法檢測(cè)海馬神經(jīng)元活性，其原理是：細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶（SDH）脫氫原子后，氫原子接收劑MTT可由黃色可溶性還原為藍(lán)色不可溶性沉淀物，與神經(jīng)元數(shù)目呈正相關(guān)，定量反映神經(jīng)元活性和凋亡情況［13］。有文獻(xiàn)報(bào)道，抑郁癥模型動(dòng)物予神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（如神經(jīng)生長(zhǎng)因子）后，可有效改善海馬萎縮［8?9］，為進(jìn)一步尋找可以拮抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的保護(hù)性措施提供理論依據(jù)。目前，臨床應(yīng)用較為廣泛的是神經(jīng)生長(zhǎng)因子。神經(jīng)生長(zhǎng)因子是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，可在腦卒中、神經(jīng)損傷和阿爾茨海默?。ˋD）等神經(jīng)變性病的治療中發(fā)揮促神經(jīng)細(xì)胞成熟分化、血管新生以及抗炎癥反應(yīng)、抗細(xì)胞凋亡和神經(jīng)保護(hù)作用［14?15］。本研究采用的神經(jīng)生長(zhǎng)因子是臨床常用的粉末狀鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子，我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示，神經(jīng)生長(zhǎng)因子1.80 ng/ml可以使神經(jīng)元數(shù)目減少、脫落死亡，出現(xiàn)細(xì)胞毒性作用。研究顯示，神經(jīng)生長(zhǎng)因子50 ng/ml可以拮抗地塞米松1×10?6mol/L誘導(dǎo)的嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞凋亡，究其原因是糖皮質(zhì)激素受體激活［5］。本研究地塞米松0.10×10?6mol/L是誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的最低敏感劑量，因此推測(cè)發(fā)揮有效拮抗作用的神經(jīng)生長(zhǎng)因子＞5 ng/ml，考慮到神經(jīng)元較腫瘤細(xì)胞脆弱敏感，本研究采用含N2無(wú)血清添加劑的SFFD培養(yǎng)液稀釋1000倍后以終質(zhì)量濃度18 ng/ml模擬高水平神經(jīng)生長(zhǎng)因子組，稀釋100 000倍后以終質(zhì)量濃度0.18 ng/ml模擬低水平神經(jīng)生長(zhǎng)因子組，結(jié)果顯示，神經(jīng)生長(zhǎng)因子可以拮抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡，然而體內(nèi)研究的神經(jīng)生長(zhǎng)因子起效劑量和作用方式尚待進(jìn)一步的基礎(chǔ)與臨床研究。我們推測(cè)，在不同疾病模型和機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)下，神經(jīng)生長(zhǎng)因子起效劑量不同［6，8］，足劑量神經(jīng)生長(zhǎng)因子才會(huì)啟動(dòng)神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。

神經(jīng)生長(zhǎng)因子拮抗糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡作用機(jī)制，可能與糖皮質(zhì)激素受體有關(guān)。糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡可以分為3個(gè)階段［16］：首先，是糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的基因調(diào)節(jié)；其次，是促進(jìn)與拮抗細(xì)胞凋亡因子平衡，對(duì)細(xì)胞凋亡的發(fā)生起決定性作用；最后，是內(nèi)切核酸酶活性和Caspase蛋白是細(xì)胞凋亡的執(zhí)行階段［17］。基于上述理論基礎(chǔ)，如果在神經(jīng)元凋亡程序啟動(dòng)前，予以足夠劑量的神經(jīng)保護(hù)劑（如神經(jīng)生長(zhǎng)因子），即可發(fā)揮拮抗糖皮質(zhì)激素、阻斷神經(jīng)元凋亡的作用。糖皮質(zhì)激素與其受體結(jié)合，可以抑制蛋白激酶B（PKB）和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）激活和磷酸化，阻止神經(jīng)生長(zhǎng)因子與其受體——酪氨酸激酶受體1型的結(jié)合，從而抑制神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)［5，15，18?19］。因此推測(cè)，補(bǔ)充足夠劑量的神經(jīng)生長(zhǎng)因子后，神經(jīng)生長(zhǎng)因子與酪氨酸激酶受體1型充分結(jié)合，可能通過(guò)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制凋亡相關(guān)基因表達(dá)，阻斷凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)，抑制神經(jīng)元凋亡，發(fā)揮促血管新生、恢復(fù)下丘腦?垂體?腎上腺軸功能的作用。

綜上所述，糖皮質(zhì)激素可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡，其中地塞米松0.10×10?6mol/L是誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的最低敏感劑量；神經(jīng)生長(zhǎng)因子可以拮抗地塞米松誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡。因此，糖皮質(zhì)激素聯(lián)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子既可以達(dá)到較好的神經(jīng)保護(hù)作用，又可以降低藥物劑量相關(guān)不良反應(yīng)，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。鑒于體外研究的局限性，臨床實(shí)踐中糖皮質(zhì)激素的用藥時(shí)間和安全劑量、神經(jīng)生長(zhǎng)因子的用藥時(shí)間和方式，以及如何達(dá)到理想的神經(jīng)保護(hù)作用，尚待進(jìn)一步深入研究。

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Protective effect of nerve growth factor on glucocorticoid?induced apoptosis of primary cultured rat hippocampal neurons

XIA Ying?hua1,KONG Xiao?dong1,LEI Ping1,ZHANG Shi?shuang1,ZHANG Ming?yi1,ZHAO Zi?long2,GE Xin?tong21Department of Geriatrics,Tianjin Medical University General Hospital;Tianjin Geriatrics Institute,Tianjin 300052,China

2Department of Neurosurgery,Tianjin Medical University General Hospital;Tianjin Neurological Institute; Tianjin Key Laboratory of Injury,Variation and Regeneration of Nervous System;Key Laboratory of Post?trauma Neuro?repair and Regeneration in Central Nervous System,Ministry of Education,Tianjin 300052, China

Corresponding author:KONG Xiao?dong(Email:xiaodongkong@163.com)

ObjectiveTo observe the protective effect of nerve growth factor(NGF)on apoptosis of primary cultured rat hippocampal neurons which were induced by glucocorticoids.MethodsThe neurons isolated from the hippocampus of 18 neonatal Wister rats were cultured in vitro.Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)analysis was used to detect the lowest concentration of dexamethasone?induced hippocampal neuronal apoptosis,so as to explore the protective effect of different concentrations of NGF on 0.10×10?6mol/L dexamethasone?induced hippocampal neuronal apoptosis.ResultsCompared with negative control group,the activity of rat hippocampal neurons was reduced significantly in dexamethasoneⅠ(10×10?6mol/L),Ⅱ(1×10?6mol/L)andⅢ(0.10×10?6mol/L)groups(P=0.000,0.000,0.000).After different concentrations of NGF were given,the activity of hippocampal neurons in NGF 0.18 ng/ml group was significantly lower than negative control group(P=0.000)and positive control group(P=0.010),while the activity of hippocampal neurons in NGF 18 ng/ml group was significantly higher than positive controlgroup(P=0.000)and NGF 0.18 ng/ml group(P=0.000).Conclusions Glucocorticoids can induce the apoptosis of in vitro cultured rat hippocampal neurons,and 0.10×10?6mol/L dexamethasone is the lowest sensitive dose.NGF plays a role of blocking dexamethasone?induced apoptosis.

Nerve growth factor;Glucocorticoids;Hippocampus;Apoptosis;Cells,cultured; Disease models,animal

2017?02?22）

10.3969/j.issn.1672?6731.2017.03.009

天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：15JCYBJC50500）；天津市衛(wèi)生局科技基金資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2015KZ118）；天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院青年孵育基金資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：ZYYFY2015034）

300052天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院保健醫(yī)療部天津市老年病學(xué)研究所（夏穎華，孔曉冬，雷平，張釋雙，張明義）；300052天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院神經(jīng)外科天津市神經(jīng)病學(xué)研究所天津市神經(jīng)損傷變異與再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室教育部中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷修復(fù)與再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（趙子龍，葛歆瞳）

孔曉冬（Email：xiaodongkong@163.com）