魏 鳳，張文通，李 峰，沈志強，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫血清抗體測定及分析

魏 鳳1，張文通2，李 峰1，沈志強1，2

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的，以淋巴結(jié)周邊出血、脾臟邊緣出血性梗死、回盲部淋巴紐扣狀腫和腎臟密集點狀出血等為特征性病理變化的豬的重大傳染病[1-2]。CSF被國際動物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類動物傳染病，我國將其列為一類動物傳染病。目前，盡管豬瘟疫苗已普及使用，但在本單位接診的病例中仍檢測到比較高比例的豬瘟病毒[3-4]。因此豬瘟仍是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的最重要傳染病。合格的豬瘟疫苗，已被公認能夠較好預防豬瘟病毒。但豬瘟病毒仍大量發(fā)生，豬瘟疫苗免疫情況存疑。為弄清楚魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫效果情況，對2016年濱州畜牧獸醫(yī)研究院門診部收集的1 902份豬血清進行檢測及分析，其目的是獲得該區(qū)域豬瘟疫苗免疫效果情況，為防控本區(qū)域CSF提供科學參考。

1 材料和方法

1.1 材料

豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒購自武漢科前動物生物制品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清分離 血液采集方法：所有采集血液的豬場或散養(yǎng)戶均免疫豬瘟疫苗（或免疫豬瘟脾淋苗或免疫豬瘟細胞毒苗），且在免疫3周后采集血液。采集的豬均為保育階段仔豬。

為便于統(tǒng)計與分析將血液來源豬場按規(guī)模分為4種類型：散養(yǎng)戶、小型養(yǎng)豬場、中型養(yǎng)豬場及大型養(yǎng)豬場。其中散養(yǎng)戶為年出欄商品豬100頭以下；小型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬1 000頭以下；中型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬5 000頭以下；大型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬5 000頭以上。散養(yǎng)戶每戶采集6份血液，小型養(yǎng)豬場每個豬場采集15份血液，中型養(yǎng)豬場和大型養(yǎng)豬場每個豬場均采集30份血液。

血清分離：采用頸部靜脈采集，血液37℃放置1 h，4℃靜置過夜；4 000 r/min離心10 min。

1.2.2 血清ELISA抗體測定 按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書對收集的1 902份血清進行測定。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟脾淋苗免疫ELISA抗體測定結(jié)果

所采血清的豬場均來自豬瘟脾淋苗豬場。按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒判定標準：ELISA（S/P值）大于0.17為免疫合格（血清ELISA抗體S/P值大于或等于0.17，相當于豬瘟正向間接血凝抗體大于或等于25）。表1結(jié)果顯示，大型和中型養(yǎng)豬場CSFV ELISA抗體免疫合格的豬場數(shù)較高，分別達91.7%和70.0%；而小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場數(shù)較低，分別為50.0%和33.3%。大型養(yǎng)豬場血清總免疫合格率為85.0%；而中型養(yǎng)豬場、小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為56.3%、42.0%、45.6%。

表1 豬瘟脾淋苗免疫血清ELISA抗體測定結(jié)果統(tǒng)計

2.2 豬瘟細胞毒苗免疫ELISA抗體測定結(jié)果

所采血清的豬場均來自豬瘟細胞毒苗豬場。試劑盒判定標準如2.1中所述。表2結(jié)果顯示，大型和中型養(yǎng)豬場CSFV ELISA抗體免疫合格的豬場數(shù)較高，分別達91.7%和83.3%；而小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場數(shù)較低，分別為 57.1%和50.0%。大型養(yǎng)豬場和中型養(yǎng)豬場血清總免疫合格率分別為93.9%和87.2%；而小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為53.8%、54.2%。

表2 豬瘟細胞毒苗免疫血清ELISA抗體測定結(jié)果統(tǒng)計

3 分析與討論

本單位門診2016年接診來自魯北區(qū)域豬病病例403例，實驗室檢測到豬瘟野毒病例108例，比例為26.8%。這說明本區(qū)域豬瘟仍在不同程度的流行。為弄清楚豬瘟野毒發(fā)生率如此高的原因，對本區(qū)域免疫豬瘟疫苗的不同規(guī)模豬場免疫效果情況進行調(diào)查。

現(xiàn)在市售豬瘟疫苗主要有豬瘟脾淋苗和豬瘟細胞毒疫苗，因此在檢測時特別區(qū)分了兩種疫苗。并且還對不同規(guī)模豬場免疫豬瘟疫苗情況檢測時進行了細分。從檢測結(jié)果看，不論是用脾淋苗還是細胞毒苗大型和中型豬場免疫效果均優(yōu)于小型養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶。從實際檢測豬場數(shù)或總血清數(shù)，豬瘟細胞毒苗稍優(yōu)于豬瘟脾淋苗。

在上述檢測結(jié)果的基礎(chǔ)上對免疫不合格的豬場進行了詳細調(diào)查，并收集了12種豬瘟疫苗（其中豬瘟脾淋苗6種、豬瘟細胞毒苗6種）。對這12種豬瘟疫苗進行了效力檢驗（測疫苗種兔體感染量）發(fā)現(xiàn)，4種豬瘟脾淋苗和1種豬瘟細胞毒苗不合格。這說明豬瘟免疫失敗疫苗不合格是一個重要原因，但不是唯一原因。

該課題的研究結(jié)果提示魯北養(yǎng)豬行業(yè)在豬瘟防疫過程中，一方面要選擇合格豬瘟疫苗，另一方面要正確使用豬瘟疫苗。

[1]單虎，李明義，沈志強．現(xiàn)代獸醫(yī)獸藥大全[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2011：304-307．

[2]蔡寶祥主編．家畜傳染病學[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999：147-151．

[3]蔡奕琪，朱燕秋，王悅彬．2001—2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測結(jié)果分析[J]．養(yǎng)豬，2009（3）：73-74．

[4]楊慧君．淺談豬瘟流行新特點與防治措施[J]．農(nóng)業(yè)科技與信息，2009（3）：5．

（編輯：郭玉翠）

中國科學家用活病毒創(chuàng)造疫苗

【香港《南華早報》網(wǎng)站12月2日報道】題：中國科學家的突破敲響了致命病毒的喪鐘嗎？

中國科學家或許已經(jīng)找到了創(chuàng)造有效疫苗對付世界最致命病毒的關(guān)鍵—通過打破傳統(tǒng)疫苗學的兩種禁忌。北京大學一個科研團隊開展的研究被贊為疫苗領(lǐng)域的“革命”。研究論文周五刊登在美國《科學》周刊上。該團隊打破疫苗研究領(lǐng)域的兩大禁忌：先是用具備完全感染力的活病毒創(chuàng)造一種疫苗，然后把疫苗注入感染這種病毒的瀕死動物體內(nèi)。論文說，這些動物在接受注射之后都徹底痊愈。這項突破有望簡化疫苗的研發(fā)過程，幫助科學家在疫情暴發(fā)幾周內(nèi)就得到有效的疫苗甚至療法，以對付禽流感、非典、埃博拉和艾滋病等各類病毒。研究人員調(diào)整活病毒的遺傳密碼，使病毒株的自我復制機制失效。但是，他們保留了病毒的感染力，從而使宿主細胞生成免疫力。使用具有完全感染力的活病毒之前被視為一種禁忌，因為病毒會迅速傳播。目前廣泛銷售和使用的疫苗通常含有的病毒要么已死要么毒性微弱。獲準臨床使用的活病毒疫苗通常都經(jīng)過結(jié)構(gòu)上的處理，使得毒性減弱，但這影響了疫苗的效力。此外，很多致命的病毒都沒有相應的疫苗。

這項研究的帶頭人、北京大學藥學院教授周德敏說，此前，研究界與病毒的斗爭是一場必敗之戰(zhàn)。他說：“現(xiàn)在我們有了新的武器……能夠消滅幾乎任何一種病毒及其變體。這可以改變這場戰(zhàn)斗?！?/p>

據(jù)《科學》周刊稱，周的團隊開展了三項實驗，用活體禽流感病毒制作疫苗。他們對小鼠、雪貂和豚鼠使用了這種疫苗，它們都產(chǎn)生了免疫力。

分析還顯示，這種人造病毒與野生病毒重組，從而使生成的病毒不能自我復制。

周說：“這不僅是一種疫苗，也是一種藥物?！边@種疫苗使用的禽流感病毒與天然禽流感病毒有99%以上的相似度。

周的研究團隊僅僅調(diào)整了病毒DNA的3個堿基—病毒通常有幾十萬個這種堿基。

病毒需要食物才能存活，而氨基酸就是食物的一個來源。野生病毒幾乎任何氨基酸都吃，但周德敏團隊培育的基因經(jīng)修改的病毒卻只接受一種特定形式的氨基酸。這種非天然的氨基酸只能在實驗室里制造，動物或人體內(nèi)都不存在。周說：“所以，把這些病毒注入宿主體內(nèi)以后，因為缺少（適合的）氨基酸，它們就無法自我復制，最終會‘餓’死?！敝艿膱F隊在人造細胞系里制造這些病毒，細胞里充滿了非天然的氨基酸。病毒隨后將在這些人造細胞里大量自我復制。

假設(shè)疫情暴發(fā)，研究人員可以迅速從患者體內(nèi)分離出未知的病毒株，修改病毒的3個堿基，然后用這種基因經(jīng)修改的病毒生產(chǎn)疫苗提供給公眾。這一切只需幾周就可實現(xiàn)。

疫苗還可以注射給已感染病毒的患者。

周說：“副作用非常小，接種者幾乎沒有感覺?！彼f，他相信這項技術(shù)“很快”就將造?；颊摺?/p>

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2016-12-03）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)02-0116-02

2017-01-19

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團隊項目（SDAIT -08-17）

魏 鳳（1979-），女，河南遂平人，助理研究員，碩士，主要從事獸用生物制品研究工作.E-mail：hzndzwt1@163.com