（重慶市動物疫病預(yù)防控制中心，重慶 401120）

羊肉產(chǎn)品中的布魯氏菌污染及其風(fēng)險(xiǎn)傳遞調(diào)查

謝建華，周 莉，汪子淳，葉潔瑩，梁望旺，楊澤林，熊仲良

（重慶市動物疫病預(yù)防控制中心，重慶 401120）

[目的]了解羊肉產(chǎn)品的布魯氏菌污染情況和風(fēng)險(xiǎn)傳遞過程。[方法]對養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)的羊及羊肉產(chǎn)品進(jìn)行取樣調(diào)查。[結(jié)果]屠宰環(huán)節(jié)布魯氏菌檢出率從高到低依次為羊內(nèi)臟（3.14%）、羊肉（2.96%）和環(huán)境（1.11%）；大中型屠宰場布魯氏菌檢出率（6.23%）高于小型屠宰場（0.48%）；控制性結(jié)果表明在不發(fā)生二次污染的情況下，僅可從內(nèi)臟中檢出布魯氏菌；子宮（77.78%）和脾臟（46.67%）存在布魯氏菌的風(fēng)險(xiǎn)較大，不表現(xiàn)臨床癥狀的羊子宮也有帶菌風(fēng)險(xiǎn)；屠宰環(huán)節(jié)布魯氏菌感染抗體陽性率為1.13%，羊肉產(chǎn)品和環(huán)境中均存在布魯氏菌污染；屠宰環(huán)節(jié)工作人員對布魯氏菌病防控的認(rèn)識不到位，本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)2名從業(yè)人員被感染。[結(jié)論]存在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的布魯氏菌病感染羊進(jìn)入屠宰生產(chǎn)鏈的風(fēng)險(xiǎn)。

布魯氏菌??；羊肉產(chǎn)品；污染；風(fēng)險(xiǎn)傳遞

布魯氏菌病（Brucellosis），以下簡稱布病，又稱地中海弛張熱、馬耳他熱或波狀熱，是由布魯氏菌（Brucel la）引起的變態(tài)反應(yīng)性人獸共患傳染病[1]。根據(jù)生物學(xué)特性和主要宿 主，將傳統(tǒng)的布魯氏菌為括6個(gè)種19個(gè)型，即羊種（B. melitensis，3個(gè)型）、牛種（B. abortus，8個(gè)型）、豬種（B.Suis，5個(gè)型）、犬種（B.canis）、綿羊附睪種（B.ovis）和沙林鼠種（B. neotormae）。近年來又相繼分離出鯨種（B.ceti）、鰭種（B.pinnipedialis）、田鼠種（B.microti）和未知宿主的B.inopinata[2]。牛種、羊種和豬種布魯氏菌對人均有很強(qiáng)的致病性，其中尤以羊種的致病力最強(qiáng)，且約80%的感染是由羊型布魯菌引起的[3]。人感染后表現(xiàn)為長期發(fā)熱、多汗、生殖系統(tǒng)疾病、關(guān)節(jié)痛、肝脾腫大，以及肌肉-骨骼系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重并發(fā)癥等，病情嚴(yán)重者喪失勞動力[3]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為須通報(bào)的動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，布魯氏菌病每年造成全球經(jīng)濟(jì)損失近30億美元，對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成重大威脅[2，4]。

近年來，由于市場一體化等原因，我國活羊及其產(chǎn)品的大范圍流動極其頻繁，疫情極易跨區(qū)域傳播，布病疫情形勢依然嚴(yán)峻。由于羊布魯氏菌病臨床上常為隱性感染，除了懷孕母畜出現(xiàn)流產(chǎn)外，其他羊群并無臨床特征，很難從外觀上鑒別。鑒于現(xiàn)行宰前檢疫辦法和實(shí)驗(yàn)室抽檢制度，很難阻止部分帶菌羊進(jìn)入屠宰環(huán)節(jié)，為驗(yàn)證羊產(chǎn)品中布魯氏菌污染風(fēng)險(xiǎn)，了解生產(chǎn)鏈條中的布魯氏菌污染風(fēng)險(xiǎn)關(guān)鍵點(diǎn)、風(fēng)險(xiǎn)來源以及風(fēng)險(xiǎn)傳遞過程，本研究對羊養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)進(jìn)行了取樣調(diào)查，以期找到羊肉產(chǎn)品病原帶毒及生產(chǎn)環(huán)節(jié)污染的證據(jù)，從而獲得控制風(fēng)險(xiǎn)關(guān)鍵點(diǎn)，保障羊產(chǎn)品質(zhì)量安全，促進(jìn)公共衛(wèi)生安全。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 取樣品種及數(shù)量。屠宰環(huán)節(jié)：分別在大中型和小型屠宰場取樣，全年共取羊肉405份、羊內(nèi)臟446份、環(huán)境樣品180份和血清353份。控制性實(shí)驗(yàn)：發(fā)病期（有臨床癥狀）和隱性感染期（無臨床癥狀）各15只羊，分別取肌肉、血、肝、脾、腎、心、肺、淋巴結(jié)、胃、腸和子宮等部位進(jìn)行帶菌風(fēng)險(xiǎn)驗(yàn)證。

1.1.2 主要試劑。布氏肉湯，購自BD公司；天隆科技核酸提取試劑盒（磁珠法），購自天隆科技有限公司；布魯氏菌PCR檢測試劑盒，購自北京世紀(jì)元亨有限公司；布魯氏菌抗體RID檢測試劑盒，購自INGEZIM IDR；布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)陽性血清、布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)陰性血清和布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原，均購自青島易邦生物工程有限公司；布魯氏菌病抗體競爭ELISA檢測試劑盒，購自SVANOVIR。

1.2 方法

1.2.1 病原學(xué)檢測。對羊肉、羊內(nèi)臟和環(huán)境拭子，先經(jīng)布氏肉湯37 ℃增菌培養(yǎng)72 h，按照細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒說明提取核酸，用于布魯氏菌病原學(xué)PCR檢測。

1.2.2 血清抗體檢測。采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）（GB/T 18646）初篩，競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（cELISA）確診，對以上任何一種方法檢測呈陽性的樣品，用布病放射免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（RID）方法進(jìn)一步檢測，區(qū)分是否為野毒感染。

1.2.3 檢測數(shù)據(jù)分析。采用t檢驗(yàn)方法，對樣品檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行生物學(xué)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 羊產(chǎn)品布魯氏菌污染調(diào)查結(jié)果

2.1.1 布病血清抗體檢測結(jié)果。從不同地區(qū)來看，西北地區(qū)布病免疫抗體（RBT和cELISA）陽性率最高，與其他地區(qū)相比差異顯著，同時(shí)還存在布魯氏菌感染抗體（表1）。

表1 屠宰環(huán)節(jié)羊布病血清抗體檢測結(jié)果

2.1.2 不同屠宰規(guī)模和樣品類型布魯氏菌檢測結(jié)果。從屠宰規(guī)模來看，大中型屠宰場存在布魯氏菌的風(fēng)險(xiǎn)較高（6.23%），與小型屠宰場相比差異顯著；從樣品類型來看，羊內(nèi)臟、羊肉和環(huán)境中都有存在布魯氏菌的風(fēng)險(xiǎn)（表2）。

2.1.3 不同地區(qū)羊產(chǎn)品中布魯氏菌檢測結(jié)果。從不同地區(qū)來看，來自一類地區(qū)（西北和華北）的動物存在布魯氏菌的風(fēng)險(xiǎn)較高（表3）。

2.2 布魯氏菌病控制性試驗(yàn)檢測結(jié)果

2.2.1 急性發(fā)病期與隱性感染期間布魯氏菌檢測結(jié)果。急性發(fā)病期（其中母羊9只）布魯氏菌檢測結(jié)果顯示：子宮（77.78%）和脾臟（46.67%）存在布魯氏菌的風(fēng)險(xiǎn)較大，與其他臟器相比差異顯著，其次是腎臟和抗凝血，其他部位均未檢測到布魯氏菌。確診已感染，但近期無臨床癥狀 的15只隱性 感染期間的羊（其中母羊8只）中，在4只母羊的子宮內(nèi)檢測到布魯氏菌核酸，其他羊均未檢出，說明這些羊表面無臨床癥狀，但其子宮仍存在帶菌風(fēng)險(xiǎn)（表4）。

表2 不同屠宰規(guī)模和樣品類型布魯氏菌檢測結(jié)果

表3 不同地區(qū)羊產(chǎn)品中布魯氏菌檢測結(jié)果

表4 急性發(fā)病期和隱性感染期布魯氏菌檢測結(jié)果

2.2.2 從業(yè)人員的風(fēng)險(xiǎn)調(diào)查結(jié)果。屠宰環(huán)節(jié)從業(yè)人員問卷調(diào)查顯示，屠宰企業(yè)部分相關(guān)人員，尤其是少數(shù)民族地區(qū)的人員，對布魯氏菌病不知曉且無個(gè)人防護(hù)意識；存在屠宰人員私自攜帶未經(jīng)處理的羊產(chǎn)品（如羊胎盤）回家食用的現(xiàn)象。通過問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在取樣的屠宰和養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中，各有1名從業(yè)人員感染布病。

3 風(fēng)險(xiǎn)分析

3.1 屠宰環(huán)節(jié)羊產(chǎn)品布魯氏菌風(fēng)險(xiǎn)分析

不同地區(qū)來源的羊產(chǎn)品取樣調(diào)查結(jié)果表明，來自西北地區(qū)的產(chǎn)品帶菌率為4.94%，而來自西南地區(qū)的未檢出，說明西北地區(qū)作為我國布病防控一類地區(qū)，羊產(chǎn)品帶菌風(fēng)險(xiǎn)相對較高。通過取樣調(diào)查發(fā)現(xiàn)，屠宰環(huán)節(jié)的羊產(chǎn)品和環(huán)境均存在布魯氏菌污染風(fēng)險(xiǎn)；從不同規(guī)模來看，大中型屠宰場的污染風(fēng)險(xiǎn)（6.23%）高于小型屠宰場（0.48%），原因主要是小型屠宰場清洗消毒徹底，羊的來源主要局限于當(dāng)?shù)?，而大中型屠宰場待宰羊多、工作量較大，可能存在清洗不徹底、消毒不到位的問題；另一方面，羊需求量大、來源廣，尤其是從一類地區(qū)來源的羊較多，從而加大了污染的概率。

3.2 風(fēng)險(xiǎn)傳遞過程分析

控制性試驗(yàn)結(jié)果表明：發(fā)病期子宮、脾臟、腎臟和血液中均有布魯氏菌被檢出，與2012年趙兵等[5]的報(bào)道相似，說明發(fā)病期內(nèi)臟和血液帶菌風(fēng)險(xiǎn)較大，這可能與布魯氏菌多寄生于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)有關(guān)[1]；對于隱性感染期的羊，僅在其子宮中檢出布魯氏菌，其他部位未檢出，說明對于無臨床癥狀的感染羊，其子宮是帶菌的最大風(fēng)險(xiǎn)源。

從控制性試驗(yàn)結(jié)果可見，無論是急性發(fā)病期，還是隱性感染期的羊，在不發(fā)生二次污染的情況下，僅可從內(nèi)臟中檢出布魯氏菌；但屠宰環(huán)節(jié)布病感染抗體陽性率為1.13%，且羊產(chǎn)品和屠宰環(huán)境中均存在布魯氏菌污染，可見存在布病感染羊只因宰前檢疫漏檢而進(jìn)入屠宰生產(chǎn)鏈的風(fēng)險(xiǎn)。

3.3 從業(yè)人員的風(fēng)險(xiǎn)分析

結(jié)合問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)的從業(yè)人員大多不了解布病，也沒有個(gè)人防護(hù)意識，更沒有采取個(gè)人防護(hù)措施，且養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)均出現(xiàn)人感染布病病例，說明養(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)的從業(yè)人員是高風(fēng)險(xiǎn)人群，若防護(hù)措施不當(dāng)極易導(dǎo)致布病感染[6-8]。

4 建議

近幾年，布病疫情有上升趨勢，動物發(fā)病數(shù)逐年增多，人間發(fā)病數(shù)也隨之增高。人間布病與動物布病密切相關(guān)，呈一定的線性關(guān)系[3]。因此，畜牧獸醫(yī)部門除了要加強(qiáng)與衛(wèi)生計(jì)生、工商等部門的協(xié)作，強(qiáng)化信息溝通和聯(lián)防聯(lián)控外，還應(yīng)做好宰前檢疫，防止布魯氏菌從養(yǎng)殖環(huán)節(jié)進(jìn)入屠宰環(huán)節(jié)。然而傳統(tǒng)意義上的宰前檢疫無法檢出隱性感染期的帶菌羊只，因此應(yīng)該考慮引入敏感性較高的檢測方法，盡可能檢出帶菌羊只。在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)應(yīng)繼續(xù)強(qiáng)化布病的監(jiān)測凈化工作，尤其是加強(qiáng)對羊的監(jiān)測凈化，優(yōu)先從種羊開始，爭取減少源頭上的布病傳播風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)還應(yīng)加強(qiáng)對從業(yè)人員的職業(yè)培訓(xùn)，尤其是布病認(rèn)知和防護(hù)知識培訓(xùn)，提升個(gè)人防護(hù)意識和水平，使其保持健康正確的工作和生活習(xí)慣，并定期體檢，一旦發(fā)現(xiàn)感染布病，應(yīng)緊急就醫(yī)，以獲得良好治療預(yù)期。

[1] 李長友，李明. 動物布魯氏菌病防治指導(dǎo)手冊[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012：134-137.

[2] 邱宇鶴，王錦何，淑云. 人布魯氏菌病的流行、檢測與防治研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志，2015，7（3）：187-188.

[3] 田克恭，李明. 動物疫病診斷技術(shù)理論與應(yīng)用[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2014：209-218.

[4] 吐爾洪·努爾，谷文喜. 布魯菌病研究進(jìn)展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（7）：82-87.

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[8] 陳虎英，葛興農(nóng). 延安市畜間布魯氏菌病流行概況、防治現(xiàn)狀與對策[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志，2014，5（33）：93-94.

（責(zé)任編輯：杜憲）

Investigation on Brucella Contamination in Mutton Products and Its Risk Transmission

Xie Jianhua，Zhou Li，Wang Zichun，Ye Jieying，Liang Wangwang，Yang Zelin，Xiong Zhongliang
（Chongqing Animal Disease Prevention and Control Center，Chongqing 401120）

[Objective]In order to recognizeBrucellacontamination in mutton and fi nd out its risk transmission process.[Methods]An investigation was carried out towards sheep and mutton products in the links of sheep breeding and slaughtering.[Results]From high to low，the detection rates ofBrucellawere 3.14%（samples were from viscera），2.96%（mutton），and 1.11%（environment）. Otherwise，the detection rates in large and medium slaughterhouses（6.23%）were higher than that in small slaughterhouses（0.48%）. The control test results showedBrucellacould only be detected in viscera in the absence of secondary contamination. Probability of detectingBrucellafrom uteri and spleens was high，the ratios of which were 77.78% and 46.67%，respectively. It was worth noting that，sheep uteri without clinic symptoms also had infection risk. The antibody positive rate ofBrucellain the slaughtering link was 1.13%，andBrucellawas found in mutton products and the environment. Besides，the staffs in slaughtering link lacked enough awareness in protecting themselves to avoidBrucellainfection，and 2 practitioners were confi rmed to be infected byBrucellain this investigation.[Conclusion]The risk ofBrucellaspreading in the whole chain from sheep breeding to slaughtering existed actually.

Brucellosis；mutton products；contamination；risk transmission

S855.1

：B

：1005-944X（2017）05-0031-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.05.009

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估項(xiàng)目（GJFP2017007）；農(nóng)業(yè)部援疆項(xiàng)目“動物產(chǎn)品中七種主要人獸共患致病菌風(fēng)險(xiǎn)評估技術(shù)研究”（cstc2016shmszx80121）

熊仲良