李文珂，薛明珠，李 丹，董 俊，王明月，張經(jīng)緯，孫雅念，陳建國，，胡長敏，，周東海，，丁明星，，張安定，3，韓 麗，

（1. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430070；2. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院，湖北武漢 430070；3. 農(nóng)業(yè)部獸用診斷制劑創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗室，湖北武漢 430070）

湖北省武漢市某門診犬細(xì)小病毒病病例統(tǒng)計分析

李文珂1，薛明珠2，李 丹1，董 俊1，王明月1，張經(jīng)緯1，孫雅念2，陳建國1，2，胡長敏1，2，周東海1，2，丁明星1，2，張安定1，3，韓 麗1，2

（1. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430070；2. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院，湖北武漢 430070；3. 農(nóng)業(yè)部獸用診斷制劑創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗室，湖北武漢 430070）

[目的]了解武漢市犬細(xì)小病毒?。–PD）的流行情況和特點(diǎn)。[方法]以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院門診為依托，應(yīng)用膠體金試紙條和PCR檢測技術(shù)，對2015年9月至2016年9月的犬門診病例進(jìn)行調(diào)查分析。[結(jié)果]共檢測門診犬病例2 728例，檢出CPD陽性121例，陽性檢出率為4.4%。從時間分布看，該期間大部分月份的陽性檢出率在3%～5%之間，2015年10月的最高，2016年6—9月的最低。從群間分布看，阿拉斯加、邊牧、哈士奇、比熊、薩摩耶、博美、巴哥等犬種的CPD陽性數(shù)量均占該品種就診犬總數(shù)量的10%以上，而拉布拉多、雪納瑞、德牧、貴賓、金毛犬則在5%以上；雄性犬的CPD陽性檢出率明顯高于雌性；在陽性病例中，2～4月齡幼犬的占比最高，在40%～60%之間；未免疫或未按規(guī)定免疫犬的CPD陽性數(shù)量與總陽性數(shù)量的占比高達(dá)86.7%，而按規(guī)定免疫犬僅為13.3%。[結(jié)論]CPD的發(fā)生與犬的品種、年齡、性別、免疫狀況和氣候等因素存在一定的關(guān)系，尤其是其年齡和免疫狀況。本研究有助于了解該病的流行特點(diǎn)，并可為該病的防治提供參考。

犬細(xì)小病毒病；流行病學(xué)；病例統(tǒng)計分析；武漢市

犬細(xì)小病毒?。–anine parvovirus disease，CPD）是由 犬 細(xì) 小病毒（Canine parvovirus，CPV）感染引起的一種高度接觸性傳染病，可分為腸炎型和心肌炎型，主要以劇烈的嘔吐、出血性腸炎和白細(xì)胞顯著減少，以及急性非化膿性心肌炎為特征[1]。CPV對幼犬危害較大，引起的發(fā)病率和病死率較高，對成犬主要引起劇烈嘔吐和出血性壞死性腸炎。1982年我國首次分離出CPV，隨后由CPV引發(fā)的疫情在我國大范圍流行，對毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)和伴侶動物行業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失[1]。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院的傳染病臨診病例不僅數(shù)量多，而且覆蓋了武漢市各個地區(qū)，是武漢市最具代表性的動物醫(yī)院。因此，本研究以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院的臨診病例為代表，對2015年9月至2016年9月的CPD就診病例及其發(fā)病情況和特點(diǎn)進(jìn)行調(diào)查分析，以便掌握該病的流行特點(diǎn)，為該病的防治提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要儀器

高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf）；核酸擴(kuò)增儀（博日科技有限公司）；核酸電泳系統(tǒng)（北京六一公司）。

1.2 主要試劑

DNAiso Reagent，TaKaRa公司產(chǎn)品；ExTaq Buffer、dNTPs、ExTaq DNA聚 合 酶、DL-2000 DNA Marker，寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品。

1.3 病料及處理

2015年9月至2016年9月，在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院采集2 728份患病犬的大腸拭子。將大腸拭子浸泡在含有青霉素和鏈霉素的滅菌生理鹽水中，迅速送往實(shí)驗室進(jìn)行檢測。

1.4 膠體金試紙條檢測

將所采集的大腸拭子，采用韓國Bioindist公司生產(chǎn)的膠體金試紙條進(jìn)行檢測。

1.5 PCR檢測

參照張仁舟等[2]、林鵬等[3]建立的CPV PCR檢測方法，根據(jù)GenBank中報道的CPV VP2核酸序列，用Primer 5.0軟件設(shè)計CPV鑒定引物，擴(kuò)增的片段長度為451 bp，引物P1：5′-GTACATTTAAATATGCCAGA-3′；P2：5′-ATTTAATGTTCTATCCCATTG-3′。引物由上海生物工程公司合成。將所采集的大腸拭子，首先進(jìn)行膠體金試紙條檢測，若為陰性，但該樣品來源犬的CPD臨床癥狀明顯，就再采用如下PCR方法復(fù)檢。將所采集的大腸拭子，按照DNAiso Reagent使用說明提取病毒基因組；按照94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，45 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30個循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min的程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增；對擴(kuò)增產(chǎn)物采用瓊脂糖電泳方法進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 時間分布

本研究統(tǒng)計了華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院自2015年9月至2016年9月就診犬的CPD發(fā)病情況，共采集2 728份門診病例樣品，采用韓國Bioindist公司生產(chǎn)的CPV膠體金檢測試紙檢測，結(jié)果檢出陽性121份。隨機(jī)選取20份膠體金檢測為陽性的病料，利用PCR復(fù)檢，結(jié)果仍為陽性，未見臨床癥狀明顯但膠體金檢測為陰性的樣品。因此，在2 728臨床病例中，CPD的總陽性檢出率為4.4%（表1）。

對各月份的CPD檢出陽性率進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)大部分月份的陽性檢出率在3%～5%之間，只有2015年10月份的最高，為15.0%，這很可能與武漢市10月份氣溫多變有關(guān)。另外，2016年6—9月的CPD陽性檢出率較低，均在2.5%以下，其原因可能與這期間的臨床就診病例數(shù)量多有關(guān)，同時也因為該階段武漢市的氣溫適宜，適合幼犬的保溫護(hù)理及成長，但其真正原因需進(jìn)行深入探究。

表1 各月份的CPD病例數(shù)和就診犬?dāng)?shù)統(tǒng)計

2.2 群間分布

本研究對CPD陽性就診犬的品種、性別、年齡進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)阿拉斯加、邊牧、哈士奇、比熊、薩摩耶、博美、巴哥等犬種的CPD陽性數(shù)量均占該品種就診犬總數(shù)的10%以上，而拉布拉多、雪納瑞、德牧、貴賓、金毛犬的占比在5%以上。雖然羅威納犬的占比達(dá)到了50%，但該品種的就診總病例數(shù)只有4例，因此并不能真實(shí)反映實(shí)際情況。相比較而言，其他犬（主要是田園犬）的占比則不到 2%。因此，本研究結(jié)果提示，對阿拉斯加、邊牧、哈士奇、比熊、薩摩耶、博美、巴哥等犬種，應(yīng)特別注意防范CPV感染（表2）。

表2 各品種就診犬的門診數(shù)量及CPD陽性統(tǒng)計

對CPD陽性犬的性別進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)雌性犬占31.5%，雄性則高達(dá)68.5%。由于不清楚本地區(qū)雌性和雄性犬的準(zhǔn)確飼養(yǎng)數(shù)量，因此并不能根據(jù)該結(jié)果確定雄性犬更易感，但從某種程度上可以反映出雄性犬的感染比例較高。

對CPD陽性犬的年齡進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)2月齡以內(nèi)仔犬的數(shù)量很少，原因可能是該年齡段的犬存在母源抗體，具有一定的保護(hù)力。8歲以后成年犬的數(shù)量也很少。陽性病例主要為2～4月齡幼犬，占比為40%～60%，顯著高于其他年齡段（p＜0.01，t檢驗）（表3），這與CPD的流行特點(diǎn)基本一致[1-4]。

表3 各品種不同年齡段的陽性犬?dāng)?shù)量統(tǒng)計（單位：只）

本研究還對CPD陽性就診犬的免疫狀態(tài)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)未免疫或未按規(guī)定免疫犬的占比高達(dá)86.7%，而按規(guī)定免疫犬僅為13.3%。另外，處于免疫期內(nèi)（首免后至完成免疫的時期）的CPD陽性犬占比為18.3%，但該年齡段未免疫的陽性犬?dāng)?shù)量占比高達(dá)56.45%。這意味著免疫可有效降低CPD發(fā)病率。由于難以對犬的飼養(yǎng)規(guī)模和免疫狀態(tài)進(jìn)行大規(guī)模調(diào)查，所以本研究僅從就診陽性犬是否免疫進(jìn)行分析，不能準(zhǔn)確反映免疫對降低發(fā)病率的影響，但本研究可提示免疫對防控該病的重要性。

對檢測陽性和免疫情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，所有檢測為強(qiáng)陽性（++++）的均為非免疫或未按規(guī)定免疫犬；弱陽性（+）犬在非免疫犬中的占比為62.1%，而在未按規(guī)定免疫犬中的占比為63.6%，在按規(guī)定免疫犬中為68.8%，說明在發(fā)病犬中，疫苗免疫犬的病毒含量也相對較低，而且臨床癥狀相對較輕，并且免疫犬的治療后成活率高，這進(jìn)一步說明了疫苗免疫對防控該病具有重要效果。

3 討論

本研究以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院為代表，對武漢市2015年9月至2016年9月期間的CPD門診犬陽性情況進(jìn)行了統(tǒng)計分析。整體而言，武漢市CPD門診犬陽性率略低于彭春平等[6]所調(diào)查的洛陽地區(qū)比例（4.77%），明顯低于劉靜等[4]所調(diào)查的泰州地區(qū)（16.46%）、羅厚強(qiáng)等[7]調(diào)查的溫州地區(qū)（19.6%）、艾靜等[5]所調(diào)查的蘇州地區(qū)（22%）以及吳潔等[8]所調(diào)查的石河子地區(qū)（33.4%）。但這些調(diào)查研究中的樣本數(shù)差別較大，因此很難確認(rèn)各地區(qū)的CPD發(fā)病情況具有可比性，這也更加表明系統(tǒng)的流行病學(xué)分析十分必要。

CPD門診陽性犬的時間分布結(jié)果顯示，武漢市大部分月份的CPD陽性檢出率較平穩(wěn)，主要在3%～5%之間，但2015年10月份的檢出陽性率最高（15.0%），2016年8月和9月的陽性率較低，低于2%。比較文獻(xiàn)報道的各地門診犬CPD陽性率發(fā)現(xiàn)，河南省CPD的陽性率表現(xiàn)出每年12月至次年2月份相對較高，而6—8月相對較低[10]，與其他地區(qū)的調(diào)查結(jié)果相差較大[8-9]，這可能是受地域和氣候差異以及飼養(yǎng)規(guī)模和飼養(yǎng)習(xí)慣等影響造成的。因此各地區(qū)應(yīng)根據(jù)實(shí)際CPD流行特點(diǎn)，有針對性地進(jìn)行指導(dǎo)和防治。

就診犬群間分布結(jié)果顯示，阿拉斯加、邊牧、哈士奇、比熊、薩摩耶、博美、巴哥等犬種的CPD陽性數(shù)占該品種就診犬總數(shù)的10%以上，拉布拉多、雪納瑞、德牧、貴賓、金毛犬在5%以上，相比而言，其他犬（主要是田園犬）的占比則不到2%。這與其他相關(guān)研究結(jié)論一致，品種犬更易發(fā)生CPD。因此，在武漢市，應(yīng)特別注意這些犬種的CPD防范。

另外分析發(fā)現(xiàn)，患病犬中雌性占31.5%，雄性則高達(dá)68.5%，結(jié)合劉靜等所調(diào)查的泰州地區(qū)與艾靜等調(diào)查的蘇州地區(qū)的CPD流行情況，表明雄性犬比雌性犬具有更高的感染比例，這很可能與公犬飼養(yǎng)率以及公犬活動性較母犬高、與其他犬接觸更加頻繁有關(guān)[4-5]。當(dāng)然，關(guān)于CPD陽性率與性別的關(guān)系，需結(jié)合其他地區(qū)的CPD發(fā)病情況進(jìn)一步明確。

CPD的發(fā)病與犬的年齡存在一定的關(guān)系。各品種的CPD陽性病例中，2～4月齡幼犬占比最高，基本為40%～60%。其原因可能是2～4月齡犬的母源抗體基本消失，而其免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善。因此應(yīng)特別注意對2～4月齡幼犬的CPD預(yù)防和治療。

本研究發(fā)現(xiàn)，患病犬中疫苗免疫犬的比例遠(yuǎn)低于非免疫犬以及未按規(guī)定免疫犬，表明疫苗免疫可有效降低CPD的發(fā)生率，這與各地的調(diào)查結(jié)果相符[6-10]。疫苗免疫犬就診時的病毒含量相對較低，臨床發(fā)病也相對較輕，進(jìn)一步表明疫苗免疫對防控該病具有重要效果。因此，疫苗免疫是有效減少CPD發(fā)生的重要措施。CPD的發(fā)病與犬的品種、年齡、免疫與否、溫度的劇烈改變以及性別等存在一定的關(guān)系，尤其與年齡和免疫狀況有著密切的關(guān)系。因此，無論是畜主，還是獸醫(yī)工作人員，都應(yīng)在這幾方面多加注意，不斷完善CPD的防控措施。

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（責(zé)任編輯：朱迪國）

Statistical Analysis on Cases of Canine Parvovirus Disease in an Animal Clinic in Wuhan City of Hubei Province

Li Wenke1，Xue Mingzhu2，Li Dan1，Dong Jun1，Wang Mingyue1，Zhang Jingwei1，Sun Yanian2，Chen Jianguo1，2，Hu Changmin1，2，Zhou Donghai1，2，Ding Mingxing1，2，Zhang Anding1，3，Han Li1，2
（1. College of Veterinary Medicine，Huazhong Agricultural University，Whuhan，Hubei 430070；2. Animal Hospital of Huazhong Agricultural University，Whuhan，Hubei 430070；3. Key Laboratory of Veterinary Diagnostic Products Development，Ministry of Agriculture，Whuhan，Hubei 430070）

[Objective] In order to investigate the epidemic status and characteristics of Canine parvovirus disease（CPD）in Wuhan city. [Methods] Taking the animal hospital outpatient clinic of Huazhong Agricultural University as the basis，using Colloidal gold detection and RT-PCR，a total of 2 728 CPD cases collected from September 2015 to September 2016 were investigated and analyzed. [Results] 121 of the cases were tested positive，accounting for 4.4%. According to the time distribution，an average positive rate of 3%～5% in most months was observed during the investigation period. In particular，the positive rate was highest in October，2015，while the lowest values occurred in the time period of June to September of 2016. According to the group distribution，the detection rates were over 10% when diagnosing the following canine breeds：Alaska，Border shepherd，Husky，Bichon，Samoyed，Bomei and Bago. Compared with this，the detection rates in breeds of Labrador，Schnauzer，German Shepherd，Poodle and Goldena were over 5%. Besides，the male canines were much more susceptible than the females. Otherwise，the ages of canines infected by CPD were mainly 2～4 months old，occupying 40%～60% of all the positive cases. Canineswithout vaccination or vaccination not following the standard regulations showed a high CPD positive rate of 86.7%，which was in contrast to the rate of 13.3% in canines adopted proper immunization. [Conclusion] There were certain relationship between CPD infection and some factors including the breeds，ages，genders，immunization status and climate，especially the ages and immunization status. This investigation would contribute to better recognize the CPD epidemic characteristics and provide reference for its prevention and control.

Canine parvovirus disease（CPD）；epidemiology；cases statistical analysis；Wuhan city

S854.4

：B

：1005-944X（2017）05-0012-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.05.004

科技部重點(diǎn)研發(fā)專項（2016YFD0501007）；中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項（2014QC002）

韓 麗