鄭國(guó)香，趙欣，李健

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程學(xué)院，哈爾濱150030；2.農(nóng)業(yè)部生豬養(yǎng)殖設(shè)施工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030；3.寒地農(nóng)業(yè)可再生資源利用技術(shù)與裝備重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030）

一組耐低溫纖維素降解菌系培養(yǎng)條件優(yōu)化及產(chǎn)酶分析

鄭國(guó)香1,2,3，趙欣1,2,3，李健1,2,3

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程學(xué)院，哈爾濱150030；2.農(nóng)業(yè)部生豬養(yǎng)殖設(shè)施工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030；3.寒地農(nóng)業(yè)可再生資源利用技術(shù)與裝備重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030）

針對(duì)東北寒區(qū)冬季沼氣發(fā)酵水解效率低下問(wèn)題，從土壤中定向篩選一組耐低溫纖維素降解菌系LTF-27。利用間歇試驗(yàn)，通過(guò)Box-Benhnken中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法（RSM），優(yōu)化其稻稈水解培養(yǎng)條件。反應(yīng)裝置有效體積300m L，底物唯一碳源為2 g·L-1水稻秸稈，溫度控制在（17±1）℃、搖床轉(zhuǎn)速100 r·min-1，培養(yǎng)13 d。通過(guò)單因素和中心組合試驗(yàn)確定主要影響因素及優(yōu)化組合為水稻秸稈2 g·L-1，(NH4)SO41.5 g·L-1，NaCl 5 g·L-1，酵母浸粉1 g·L-1，MgSO40.057 g·L-1，CaCO31.49 g·L-1，K2HPO40.75 g·L-1。優(yōu)化后低溫條件下稻桿降解率可達(dá)64.51%，提高10.2%。利用分光光度法對(duì)復(fù)合菌系LTF-27產(chǎn)酶結(jié)果分析表明，該菌系可將纖維素降解為簡(jiǎn)單糖完整纖維素酶系，酶系中3種關(guān)鍵酶產(chǎn)酶過(guò)程相似，β-葡萄糖苷酶酶活（最大值3.4 IU·mL-1）較內(nèi)切葡聚糖酶活（Cx）（最大值8.5 IU·mL-1）、外切葡聚糖酶活（C1）（最大值7.9 IU·mL-1）活性低。

纖維素；耐低溫；復(fù)合菌系；優(yōu)化

鄭國(guó)香,趙欣,李健.一組耐低溫纖維素降解菌系培養(yǎng)條件優(yōu)化及產(chǎn)酶分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(4):61-68.

Zheng Guoxiang,Zhao Xin,Li Jian.Optimization o f cu lture conditions and enzyme analysis of low tem perature-resistant ce llulose degradation com pound strains[J].Journa lof NortheastAgriculturalUniversity,2017,48(4):61-68.(in Chinese w ith Eng lish abstract)

我國(guó)農(nóng)林作物纖維資源豐富，但纖維素結(jié)構(gòu)復(fù)雜、難降解[1]，露天堆放并燃燒浪費(fèi)資源、污染環(huán)境[2]。目前，以生物技術(shù)開(kāi)發(fā)和利用生物質(zhì)資源，成為解決能源與環(huán)境問(wèn)題重要途徑之一[3]。

沼氣發(fā)酵及生產(chǎn)受環(huán)境因素影響，東北寒區(qū)冬季漫長(zhǎng)氣溫低下，在發(fā)酵過(guò)程中，秸稈降解產(chǎn)酸階段是沼氣發(fā)酵關(guān)鍵限速步驟。因此，篩選和開(kāi)發(fā)耐低溫纖維素降解菌系，優(yōu)化培養(yǎng)條件，提高秸稈底物水解能力，對(duì)寒區(qū)生物質(zhì)利用具有重要意義[4]。近年來(lái)，耐低溫纖維素降解微生物研究針對(duì)單一菌株展開(kāi)探討。李春燕等采用富集培養(yǎng)方法篩選1株可降解纖維素細(xì)菌，鑒定為節(jié)桿菌屬（Arthrobacter sp.）細(xì)菌[5]；高云航等從長(zhǎng)白山凍土中分離1株產(chǎn)低溫纖維素酶活力較強(qiáng)菌株NF3-2，鑒定其屬于橢圓葡萄孢菌（Botrytis elliptica strain lily）[6]；穆春雷等在秸稈還田土壤中篩選分離一株低溫條件下高產(chǎn)纖維素酶真菌M 11，鑒定為草酸青霉（Penicillium oxalicum）[7]。呂明生等在海泥中分離1株產(chǎn)纖維素酶菌株Z6，經(jīng)鑒定為交替假單孢菌屬（Pseudoalteromonas sp.）[8]。與單一菌株相比，復(fù)合菌系具有菌種多樣、菌種間協(xié)同作用等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)反應(yīng)環(huán)境具有較強(qiáng)適應(yīng)性和協(xié)同性，在沼氣發(fā)酵研究領(lǐng)域引起關(guān)注。

本文通過(guò)單因素試驗(yàn)與中心組合試驗(yàn)，優(yōu)化獲得一株耐低溫木質(zhì)纖維素降解菌系LTF-27培養(yǎng)條件，獲取最佳稻桿降解率，以期為利用該菌復(fù)合菌強(qiáng)化稻稈水解產(chǎn)酸相，提高后續(xù)產(chǎn)甲烷相氣體產(chǎn)率奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)菌種

本試驗(yàn)采用東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物質(zhì)能源中心篩選的耐低溫木質(zhì)纖維素降解復(fù)合菌系LTF-27。

1.1.2 培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：蛋白胨5 g、氯化鈉5 g、碳酸鈣3 g、酵母粉1 g、蒸餾水1 000mL、經(jīng)處理稻稈2 g。121℃滅菌20min。

稻稈預(yù)處理：先將稻稈浸泡在1%NaOH溶液中24 h，清水反復(fù)沖洗，于100℃烘箱烘干，剪1～2 cm段[9]。

1.1.3 供試藥劑

（NH4）SO4，F(xiàn)eSO4，ZnSO4，MgSO4，CuSO4，CaCO3，K2HPO4，KH2PO4，檸檬酸鈉緩沖溶液、DNS試劑、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液等，試劑均為分析純。

1.1.4 粗酶液制備

取適量水解液，于3500 r·min-1條件下離心20min，取上清液為粗酶液[10]。

1.1.5 培養(yǎng)條件

接種量為5%（V/V），有效發(fā)酵體積為300mL，搖床轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，溫度（17±1）℃培養(yǎng)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 稻稈失重率測(cè)定

水解后殘余物用紗布過(guò)濾，硫酸沖洗紗布中殘余物，除去殘留菌體和碳酸鈣，再用蒸餾水多次沖洗至中性，100℃烘箱中烘至恒重。

1.2.2 纖維素酶活測(cè)定

利用DNS法測(cè)定纖維素酶活性，具體方法見(jiàn)文獻(xiàn)[11-12]。分別取1m L纖維素酶液與上述3種底物溶液2mL混勻。在30℃恒溫水浴條件下反應(yīng)1 h。加入顯色劑3mL，立即沸水浴中顯色5min，冷卻后稀釋到10mL。在540 nm處測(cè)定OD值，每個(gè)反應(yīng)測(cè)定3次，

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 單因素試驗(yàn)

本試驗(yàn)以水稻秸稈作為唯一碳源，對(duì)培養(yǎng)基氮源、微量元素作單因素試驗(yàn)。氮源選取豆粕、玉米粉、麥麩、尿素、硫酸銨、硝酸銨、蛋白胨、酵母浸粉。與水稻秸稈以C/N為30：1配比試驗(yàn)。確定最佳氮源后，分別以CaCO3、FeSO4、MgSO4、ZnSO4、CuSO4、KH2PO4、K2HPO4為單因素試驗(yàn)，質(zhì)量濃度分別為0.25～1.25 g·L-1、0.01～0.03 g·L-1、0.03～0.11 g·L-1、0.004～0.012 g·L-1、0.1～0.26 g· L-1、0.25～0.5 g·L-1、0.3～0.7 g·L-1。以發(fā)酵體系內(nèi)秸稈降解率為衡量指標(biāo)，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.3.2 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)

Plackett-Burman試驗(yàn)可從多個(gè)因素中篩選對(duì)試驗(yàn)影響較大因子設(shè)計(jì)試驗(yàn)[13]。研究篩選8個(gè)影響因素，每個(gè)因素2個(gè)水平（-1為低水平，+1為高水平），高水平為低水平1.25倍，各因子水平見(jiàn)表1。利用Minitab軟件評(píng)價(jià)各因素重要性，篩選出顯著性較高因素作下一步試驗(yàn)。

1.3.3 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)

響應(yīng)面擬合方程僅在緊接鄰域內(nèi)可充分?jǐn)M合真實(shí)情況，逼近最佳區(qū)域后建立有效響應(yīng)面擬合方程。最陡爬坡法以試驗(yàn)值變化梯度為爬坡方向[14]。根據(jù)PB設(shè)計(jì)結(jié)果，由各因素效應(yīng)值確定變化步長(zhǎng)。按一定梯度增加或者減少各因素水平值，檢測(cè)稻桿降解率，最高降解率水平值即為響應(yīng)面分析中心點(diǎn)[15-17]。

表1 Plackett-Burm an設(shè)計(jì)Table 1 Top design of Plackett-Bu rman (g·L-1)

1.3.4 Box-Behnken設(shè)計(jì)

選取Plackett-Burman試驗(yàn)篩選3個(gè)重要因子MgSO4、CaCO3、K2HPO4作為試驗(yàn)因素，通過(guò)最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選質(zhì)量濃度作試驗(yàn)中心點(diǎn)，每個(gè)試驗(yàn)因素及其水平分別為MgSO4（0.05、0.055、0.06 g·L-1）、CaCO3（1.3、1.4、1.5 g·L-1）、K2HPO4（0.6、 0.7、0.8 g·L-1），共計(jì)15組試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

結(jié)合稻稈降解率為響應(yīng)值的二階數(shù)學(xué)模型：

表2 Box-Behnken設(shè)計(jì)Tab le2 Top design of Box-Behnken (g·L-1)

式中，Y為預(yù)測(cè)值，即秸稈降解率；A為回歸系數(shù)；Ai為Xi線性效應(yīng)；Aii為Xi二次效應(yīng)；Aij為Xi與Xj之間線性交互效應(yīng)；k為變量數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)分析

8種氮源對(duì)耐低溫菌系LTF-27降解稻稈影響結(jié)果見(jiàn)圖1a，無(wú)機(jī)氮源（NH4）SO4作為氮源更有利于復(fù)合菌系LTF-27發(fā)酵產(chǎn)酸，稻桿水解率最高，為52.81%。（NH4）SO4單因素試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1b，最佳質(zhì)量濃度為1.5 g·L-1時(shí)稻稈降解率最高。

以（NH4）SO4為氮源，分別考查CaCO3、FeSO4、MgSO4、ZnSO4、CuSO4、KH2PO4、K2HPO4等7種元素對(duì)復(fù)合菌系LTF-27降解稻桿效率影響試驗(yàn)，結(jié)果如圖1c～i所示。

圖1 單因素對(duì)秸稈降解影響Fig.1 Effect of single factor on straw degradation

由圖1可知，各因素隨質(zhì)量濃度變化呈先增后減趨勢(shì)。CaCO3在1.0 g·L-1時(shí)，降解率最高，為52.91%；FeSO4在0.015 g·L-1時(shí)，降解率最高，為53.98%；MgSO4在0.07 g·L-1時(shí)，降解率最高，為56.58%；ZnSO4在0.008 g·L-1時(shí)，降解率最高，為47.51%；CuSO4在0.18 g·L-1時(shí)，降解率最高，為52.91%；KH2PO4在0.3125 g·L-1時(shí)，降解率最高，為52.98%；K2HPO4在0.5 g·L-1時(shí)，降解率最高，為54.02%。因此，CaCO3、FeSO4、Mg?SO4、ZnSO4、CuSO4、KH2PO4、K2HPO4選取質(zhì)量濃度分別為1.0、0.015、0.07、0.008、0.18、0.3125、0.5 g·L-1最優(yōu)。

2.2 Plackett-Burnman試驗(yàn)分析

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)8個(gè)因素選取適當(dāng)水平，應(yīng)用Minitab 17軟件P-B試驗(yàn)設(shè)計(jì)，探討Ca?CO3、FeSO4、MgSO4、ZnSO4、CuSO4、（NH4）SO4、 KH2PO4、K2HPO4等因素對(duì)菌株水解稻稈影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，根據(jù)P-B試驗(yàn)方法以及Minitab 17等軟件作數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見(jiàn)表4。8個(gè)因素中影響顯著性順序?yàn)镵2HPO4＞CaCO3＞MgSO4＞KH2PO4＞FeSO4＞CuSO4＞ZnSO4＞（NH4）SO4。且K2HPO4（P=0.016）、CaCO3（P=0.021）、MgSO4（P= 0.044）P值＜0.05。對(duì)稻稈水解影響顯著。確定其為下一步試驗(yàn)關(guān)鍵因子。

2.3 最陡爬坡試驗(yàn)分析

根據(jù)Plackett-Burnman試驗(yàn)中K2HPO4、CaCO3、MgSO4因素效應(yīng)值確定變化方向和步長(zhǎng)。由表4可知，MgSO4存在負(fù)效應(yīng)，應(yīng)減少；K2HPO4、CaCO3存在正效應(yīng)，應(yīng)增加。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表5，可知，第4組稻桿降解率最高。以MgSO40.055 g·L-1、 CaCO31.4 g·L-1、K2HPO40.7 g·L-1作為響應(yīng)面分析試驗(yàn)中心點(diǎn)。

表3 Plackett-Bu rman試驗(yàn)設(shè)計(jì)表與結(jié)果(N=8)Tab le 3 Design and resu lt of Plackett-Burm an experiment(N=8)

表4 Plackett-Burman顯著性分析Table4 Significantanalysisof Plackett-Burman

表5 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table5 Design and resultof steepestascentexperiment

2.4 Box-Behnken試驗(yàn)分析

根據(jù)Box-Behnken中心組合原理，設(shè)計(jì)3因素3水平試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表6。

運(yùn)用Design-Expert8.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)二次多項(xiàng)式回歸模擬，建立稻桿降解率隨MgSO4、CaCO3、K2HPO4變化回歸方程：

Y=61.59+7.34A+3.22B+4.22C+2.60AB+2.11AC-4.08BC-10.68A2-2.18B2-5.90C2

方差分析表見(jiàn)表7，可知出回歸方程回歸項(xiàng)P＜0.05，失擬項(xiàng)＞0.05，說(shuō)明回歸效果顯著，失擬效果不顯著，方程回歸系數(shù)R2=0.9496，Radj=0.8851，說(shuō)明回歸方程擬合度較好，可利用該模型預(yù)測(cè)實(shí)際稻桿最高降解率。

表6 中心組合設(shè)計(jì)因素編碼及結(jié)果Tab le6 Factors codesand resu ltof central compost design

表7 二次多項(xiàng)模擬方差分析Tab le 7 Analysisof variance and regression for the quadraticm odel

圖2 中心組合設(shè)計(jì)響應(yīng)面Fig.2 Response sur face p lotof central com post design

根據(jù)二項(xiàng)多項(xiàng)式模型，利用Design-Expert8.0軟件繪制響應(yīng)面圖[18-20]，見(jiàn)圖2。由圖2a可知，當(dāng)MgSO4與CaCO3在點(diǎn)（0.54，0.9）時(shí)，菌系降解秸稈效率最高，圖2b為MgSO4與K2HPO4交互作用對(duì)秸稈降解影響，在點(diǎn)（0.54，0.5）時(shí)稻桿降解率最高，經(jīng)圖2c驗(yàn)證結(jié)果一致。從圖中陡峭情況看，圖2a、2b曲面圖較2c陡峭，說(shuō)明MgSO4與CaCO3、MgSO4與K2HPO4交互作用顯著，當(dāng)各因素固定在（0.54，0.9，0.5）時(shí)，較大降解率存在曲面中心區(qū)域，且區(qū)域內(nèi)存在降解率極值點(diǎn)。經(jīng)軟件分析得出預(yù)測(cè)模型：MgSO40.057 g·L-1、CaCO31.49 g·L-1、K2HPO40.75 g·L-1，降解率為64.82%。

為驗(yàn)證稻桿降解率響應(yīng)模型準(zhǔn)確性與可靠性，在此條件下，5次試驗(yàn)測(cè)定稻桿降解率分別為65.01%、64.22%、63.97%、64.21%、65.14%，平均值為64.51%，比未優(yōu)化[21]前提高10.2%，與預(yù)測(cè)值相近，表明該模型可預(yù)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果。

2.5 酶系組成分析

利用不同底物，分析復(fù)合菌系LTF-27產(chǎn)酶組成，采用羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、水楊苷為底物，檢測(cè)其酶活。結(jié)果見(jiàn)圖3?？芍獌?nèi)切葡聚糖酶活（Cx）、外切葡聚糖酶活（C1）、β-葡萄糖苷酶在6 d時(shí)達(dá)最大值（8.5、7.9、3.4 IU·mL-1L）后酶活下降且產(chǎn)酶過(guò)程相似，外切葡聚糖酶活（C1）、內(nèi)切葡聚糖酶活（Cx）3 d后大量分泌，酶活上升速度加快，達(dá)到最大值后迅速下降，β-葡萄糖苷酶產(chǎn)酶開(kāi)始時(shí)與其他兩種酶相似，3 d后產(chǎn)酶速度變慢，在6～12 d內(nèi)平緩降低。主要原因是發(fā)酵液pH降低，酶活性降低，β-葡萄糖苷酶在后期酶活下降較慢，可能由于低pH造成菌體自溶，胞內(nèi)和菌體β-葡萄糖苷酶分泌到發(fā)酵液中，下降速度變緩[22]。優(yōu)化后Cx、C1、β-葡萄糖苷酶最大酶活較優(yōu)化前（Cx 4.34 IU·mL-1、C13.58 IU·mL-1、β-葡萄糖苷酶2.5 IU·mL-1）分別提高1.95、2.2、1.54倍。

圖3 發(fā)酵過(guò)程中纖維素酶各主要成分及變化Fig.3 Com ponents cellu lose com position and change in the fermentation process

3 討論與結(jié)論

目前按照常規(guī)方法篩選纖維素降解菌多數(shù)最適溫度為45～65℃。耐低溫降解纖維素細(xì)菌降解秸稈效率一般較低，可通過(guò)優(yōu)化提高降解效率。任紅梅等在土壤中篩選出一株低溫纖維素降解菌M7，通過(guò)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法優(yōu)化后CMC酶活可達(dá)4.39 IU·mL-1[11]。胡麗娟等對(duì)芽孢桿菌25-2采用最陡爬坡試驗(yàn)，結(jié)合中心組合試驗(yàn)及響應(yīng)面分析確定最優(yōu)發(fā)酵條件，酶活提高1.748倍[23]。王曉林等通過(guò)單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)對(duì)菌株YA-14培養(yǎng)條件優(yōu)化后，酶活提高2.68倍[24]。

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)Plackett-Burman試驗(yàn)篩選顯著影響水解因子為K2HPO4、CaCO3、MgSO4。通過(guò)Box-Behnken設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析，獲得二次多項(xiàng)式方程。通過(guò)響應(yīng)方程回歸分析，水解最優(yōu)培養(yǎng)基組成為：水稻秸稈2 g·L-1，（NH4）SO41.5 g·L-1，NaCl5 g·L-1，酵母浸粉1 g·L-1，Mg?SO40.057 g·L-1，CaCO31.49 g·L-1，K2HPO40.75 g·L-1。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，該條件下最大稻桿降解率為64.51%，較優(yōu)化前提高10.2%。對(duì)比劉甲峰[25]等研究，本研究秸稈降解率是其1.43倍。分析該復(fù)合菌系產(chǎn)酶酶系組成，其中具有將纖維素降解為簡(jiǎn)單糖完整纖維素酶系，酶系中各種纖維素降解酶產(chǎn)酶過(guò)程相似且β-葡萄糖苷酶（最大值3.4 IU·mL-1）較Cx酶（最大值8.5 IU·mL-1）、C1酶（最大值7.9 IU·mL-1）活性低。相比于鄧芳等[26]篩選ZF-6C（Bacil?lus korlensis）菌株，董碩等[27]篩選菌株SWD-28（Penicillium cordubense），該復(fù)合菌系產(chǎn)酶完整，耐低溫性能強(qiáng)。優(yōu)化試驗(yàn)后低溫纖維素降解細(xì)菌降解稻桿周期縮短（由20 d縮短為13 d）[21]。自然條件下，同高溫和中溫木質(zhì)纖維素降解菌相比，耐低溫復(fù)合菌系LTF-27纖維素降解率存在差距，但條件優(yōu)化可縮短差異。

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Optim ization of culture conditions and enzyme analysis o f low tem perature-resistant ce llu lose degradation com pound strains/ZHENG

Guoxiang1,2,3,ZHAO Xin1,2,3,LIJian1,2,3
(1.Schoo lof Engineering,NortheastAgricultura lUniversity,Harbin 150030,China;2.Key Laboratory of Pig-breeding Facilities Engineering,Ministry of Agricu lture,Harbin 150030,China;3.Heilongjiang Key Laboratory of Techno logy and Equipment for the Utilization of Agricu lturalRenewable Resources,Harbin 150030,China)

Aim ing at solving the low efficiency of biogas ferm entation hydrolysis in northeast cold region of China,a low temperature-resistant cellulose degrading strains LTF-27 was successfully screened from soil.Batch experiments were performed to investigate the optimal hydrolysis conditions by the m ethod of Box-Benhnken central com posite design test and response surface m ethodology (RSM).LTF-27 was cultured w ith a working volume of 300m Lw ith rice straw of 2 g·L-1as sole carbon source.The tem perature was m aintained at(17±1)℃and the rotate speed w as 100 r·m in-1，cu ltivated 13 d.The optimal straw degradation conditions were determ ined by single factor experim ents and Box-Behnken experim entdesign.The optim ized com bination were rice straw 2 g·L-1，(NH4)SO41.5 g·L-1，NaC l5 g·L-1，yeast 1 g·L-1，MgSO40.057 g·L-1,CaCO31.49 g·L-1,K2HPO40.75 g·L-1.The best straw degradation rate was 64.51%,which was 10.2%higher than that of control.Furtherm ore,the enzyme activity of compound strain LTF-27 was analyzed by spectrophotometer w ith time,the results showed that the strains has a com p lete ce llu lase system degrading ce llu lose into sim p le sugars.The enzyme-producing variation trend was sim ilar and the activity of beta glycosidase(max.3.4 IU·m L-1) was lower than thatof Cx(m ax.8.5 IU·m L-1)and C1(m ax.7.9 IU·m L-1).

cellulose;low temperature-resistant;compound strains;optim ization

S141.4；S182

A

1005-9369（2017）04-0061-08

時(shí)間2017-4-24 6:20:09[URL]http://kns.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20170424.0620.016.html

2017-03-10

黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（E2015023）；黑龍江省博士后啟動(dòng)基金（LBH-Q13023）

鄭國(guó)香（1972-），女，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)檗r(nóng)業(yè)生物環(huán)境與能源工程。Email:zgx720331@126.com