單海峰

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院藥學(xué)部，浙江溫州325200）

荷移-紫外分光光度法測(cè)定硫酸慶大霉素含量

單海峰

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院藥學(xué)部，浙江溫州325200）

利用硫酸慶大霉素與四氯苯醌在水溶液中發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，建立了簡(jiǎn)單快速測(cè)定硫酸慶大霉素含量的荷移紫外分光光度法。荷移絡(luò)合物在波長(zhǎng)342 nm處有最大吸收，該荷移衍生物的吸光度與硫酸慶大霉素濃度在0.1～3 mg/mL范圍內(nèi)吸光度和濃度呈現(xiàn)良好線(xiàn)性關(guān)系y=0.1652x+0.3054，R2=0.9996，平均加樣回收率為100.81%，RSD為2.55%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于硫酸慶大霉素的快速測(cè)定。

硫酸慶大霉素；四氯苯醌；荷移反應(yīng)；紫外分光光度法

硫酸慶大霉素具有療效顯著、抗菌譜廣等特點(diǎn)。同時(shí)存在一定的不良反應(yīng)，以耳毒性最為嚴(yán)重，使用需要注意用量，制劑質(zhì)量需要嚴(yán)格控制。藥典[1]上測(cè)定硫酸慶大霉素含量的方法是高效液相色譜法，該方法分析檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，還有文獻(xiàn)[2]報(bào)道HPLC-ELSD法，該方法操作過(guò)程繁瑣，都不適合生產(chǎn)中快速測(cè)定，因此研究制定簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的硫酸慶大霉素檢測(cè)方法，對(duì)生產(chǎn)工藝過(guò)程和產(chǎn)品質(zhì)量的控制，具有很好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)TU-1901；恒溫水浴鍋HH-W21-600；pH計(jì)RHSJ-4F；電子天平FA2104N。

硫酸慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)130326，效價(jià)638 U/mg）；四氯苯醌、無(wú)水乙醇、硼酸、硼砂均為分析純

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 溶液的制備

硫酸慶大霉素溶液：精密稱(chēng)取10.0 mg硫酸慶大霉素于10 mL容量瓶中，用純化水溶解并定容至刻度，得到1.00 mg/mL的慶大霉素溶液作為儲(chǔ)備液。

四氯苯醌溶液：精密稱(chēng)取20.0 mg四氯苯醌于100 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并定容至刻度，得到0.20 mg/mL的四氯苯醌溶液作為儲(chǔ)備液。

硼酸-硼砂緩沖液：精密稱(chēng)取19.07 g硼砂于1 L容量瓶中，用純化水溶解并定容至刻度，得到0.05 mol/L（等于0.2 mol/L硼酸根）的硼砂溶液；精密稱(chēng)取12.37 g硼酸于1 L容量瓶中，用純化水溶解并定容至刻度，得到0.2 mol/L的硼酸溶液；以0.05 mol/L硼砂：0.2 mol/L硼酸=3.0:7.0的比例混合均勻后用1.0 mol/L HCl調(diào)pH至8.0作為緩沖液儲(chǔ)備液。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

荷移反應(yīng)：用移液管精密移取0.50 mL硫酸慶大霉素溶液，加入至50 mL容量瓶中，加入pH＝8.0的硼酸-硼砂緩沖液11.0 mL、0.20 mg/ mL的四氯苯醌6.0 mL，用純化水定容至刻度，搖勻，放至70℃水浴中恒溫10 min后，迅速冷卻至室溫。

2.3 荷移反應(yīng)條件的選擇

2.3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取硫酸慶大霉素溶液、四氯苯醌溶液和荷移反應(yīng)后的樣品溶液分別進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果如圖1所示，硫酸慶大霉素在200～400 nm處無(wú)紫外吸收，四氯苯醌在287 nm處有最大吸收，荷移反應(yīng)后衍生物在342 nm處有最大吸收，因此選擇342 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 硫酸慶大霉素、四氯苯醌、荷移反應(yīng)后衍生物的紫外掃描圖譜

2.3.2 荷移反應(yīng)介質(zhì)的選擇

按照荷移反應(yīng)配制溶液，選用甲醇、無(wú)水乙醇、丙酮和水為反應(yīng)介質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1，硫酸慶大霉素和四氯苯醌荷移反應(yīng)后溶液澄清，顯淡紫色，且在水為介質(zhì)時(shí)，吸光度最大，因此本實(shí)驗(yàn)選用水作為反應(yīng)介質(zhì)。

表1 不同反應(yīng)介質(zhì)吸光度

2.3.3 四氯苯醌用量的影響

按照荷移反應(yīng)配制溶液，四氯苯醌用量從1.0～10.0 mL逐漸增加，考察四氯苯醌用量對(duì)吸光度的影響。結(jié)果表明，隨著四氯苯醌用量的增加，吸光度呈現(xiàn)先增后降的拋物線(xiàn)形，當(dāng)四氯苯醌用量為6.0 mL時(shí)，吸光度最大。

2.3.4 緩沖液pH和用量的影響

按照荷移反應(yīng)配制溶液，緩沖液pH從5.0～ 9.0逐漸增加，考察緩沖液pH對(duì)吸光度的影響。結(jié)果表明:緩沖液為酸性或者中性時(shí)，荷移反應(yīng)后，溶液呈淡黃色，結(jié)合吸光度，說(shuō)明硫酸慶大霉素和四氯苯醌在酸性和中性緩沖液中，基本不發(fā)生反應(yīng)。當(dāng)緩沖液pH值為8.0時(shí)，吸光度最大，隨后緩沖液pH的增加，吸光度反而有所下降，因此本實(shí)驗(yàn)選用緩沖液pH=8.0。還通過(guò)考察緩沖液的用量，結(jié)果顯示，緩沖液用量在0～1 mL時(shí)，吸光度迅速增加，而后隨著緩沖液用量的增加，吸光度逐漸增加，當(dāng)緩沖液用量大于11 mL時(shí)，吸光度變化不大，因此本實(shí)驗(yàn)選用緩沖液的用量為11 mL。

2.3.5 荷移反應(yīng)溫度和時(shí)間的影響

按照荷移反應(yīng)配制溶液，反應(yīng)溫度40℃、50℃、60℃、70℃，水浴恒溫10 min后，迅速冷卻至室溫，測(cè)定吸光度。結(jié)果顯示，隨著反應(yīng)溫度的增加，吸光度逐漸增加，因此本實(shí)驗(yàn)選用荷移反應(yīng)溫度為70℃。還考察了荷移反應(yīng)時(shí)間，結(jié)果顯示：隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，吸光度也相應(yīng)的增加，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為10 min時(shí)，吸光度達(dá)到最大值，而后增加反應(yīng)時(shí)間，吸光度趨于穩(wěn)定，因此本實(shí)驗(yàn)選用荷移反應(yīng)時(shí)間為10 min。

2.3.6 荷移反應(yīng)后絡(luò)合物穩(wěn)定性的考察

按實(shí)驗(yàn)方法，待反應(yīng)完成后，放置0 d、1 d、2 d、3 d、4 d測(cè)定吸光度的變化，結(jié)果見(jiàn)表2，荷移反應(yīng)后衍生物在4 d內(nèi)未見(jiàn)顯著性差異，RSD為1.149%。

表2 樣品穩(wěn)定性參數(shù)

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

精密稱(chēng)取硫酸慶大霉素，分別配制成濃度為0.1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL的硫酸慶大霉素，分別取1 mL，進(jìn)行荷移反應(yīng)后，測(cè)定吸光度，以硫酸慶大霉素濃度為橫坐標(biāo)、荷移反應(yīng)衍生物的吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程y=0.1652x+ 0.3054，R2=0.9996，結(jié)果如圖2所示。結(jié)果表明本品在硫酸慶大霉素濃度為0.1～3 mg/mL范圍內(nèi)吸光度和濃度呈現(xiàn)良好線(xiàn)性關(guān)系。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.5 加樣回收率

用移液管精密移取1.0 mg/mL硫酸慶大霉素溶液1 mL加入至50 mL容量瓶中，共9份，再分別加入1.0 mg/mL硫酸慶大霉素0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL各3份，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行荷移反應(yīng)后，測(cè)定其吸光度，計(jì)算該方法的加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表3，平均回收率為100.81%，RSD為2.55%。

3 結(jié)論

硫酸慶大霉素缺乏共軛基團(tuán)，不具有紫外吸收，因此本實(shí)驗(yàn)將硫酸慶大霉素經(jīng)四氯苯醌荷移反應(yīng)后可在波長(zhǎng)342 nm處直接檢測(cè)，四氯苯醌不干擾測(cè)定，在濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可用于生產(chǎn)中硫酸慶大霉素含量的快速測(cè)定。

表3 加樣回收率

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.二部.2015:1324-1326.

[2]陳志，李傳響.HPLC-ELSD法測(cè)定硫酸慶大霉素含量的方法改進(jìn)[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2014，（8）:34-35.

Determination of Gentamicin Sulfate by Charge Transfer Spectrophotometry

SHAN Hai-feng
（Department of Pharmacy，the 3rd Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou，Zhejiang 325200，China）

In the water medium，the charge transfer reaction between gentamicin sulfate and tetrachlorobenzoquinone investigated by spectrophotometry，a simple and rapidmethod for the determination of gentamicin sulfate was developed.The maximum absorption wavelength of the charge transfer complex was 342 nm.The absorbance and concentration of the charge transfer complex showed good linear relationship with the concentration of gentamicin in the range of 0.1～3 mg/mL.y=0.1652x+0.3054，R2=0.9996.The average recovery was 100.81%.RSD was 2.55%.this method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the rapid determination of gentamicin sulfate.

gentamicin sulfate;tetrachlorobenzoquinone;spectrophotometry;charge transfer reaction

1006-4184（2017）4-0052-03

2016-12-12

單海峰（1985-），男，浙江紹興人，碩士，藥師，從事醫(yī)院的藥學(xué)工作。E-mail:306759345@qq.com。