馮鵬華+李寶琪

（秦皇島市第一醫(yī)院兒科，河北秦皇島 066000）

[摘 要] 目的：研究輪狀病毒（Rotavirus，RV）感染性腹瀉易感性與維生素D3水平關(guān)系，為RV感染性腹瀉的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法：秦皇島市第一醫(yī)院兒科2016年7月至2017年1月收治的125例RV感染性腹瀉患兒納入感染組，對(duì)照組招募100名健康兒童志愿者。檢測(cè)兩組受試兒童糞便RV，血清1-25羥維生素D3[1-25（OH）D3]，血清白細(xì)胞介素-2（IL-2）、IL-4水平及免疫球蛋白G（IgG）、IgA、IgM，分析RV腹瀉易感性與維生素D3的關(guān)系。結(jié)果：感染組1-25（OH）D3、IgG、IgA、IgM低于對(duì)照組，其IL-2高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。多因素回歸分析顯示，1-25（OH）D3、IgG、IgA、IgM降低及IL-2升高是導(dǎo)致RV感染性腹瀉易感性上升的危險(xiǎn)因素（P<0.05）；Pearson相關(guān)性分析結(jié)果，1-25（OH）D3與IL-2呈負(fù)相關(guān)，與IgG、IgA、IgM呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：維生素D3水平降低可能造成兒童免疫功能失調(diào)，增加RV感染性腹瀉易感性，補(bǔ)充維生素D3有望為RV感染性腹瀉的防治提供新的思路。

[關(guān)鍵詞] 輪狀病毒；感染性腹瀉；易感性；維生素D3

中圖分類號(hào)：R725.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-5200（2017）04-056-03

DOI：10.11876/mimt201704023

輪狀病毒（Rotavirus，RV）是兒童感染性腹瀉最常見(jiàn)的原因，也是僅次于肺炎外導(dǎo)致兒童死亡的又一原因，患兒以大量水樣便伴脫水、酸中毒及電解質(zhì)紊亂為主要癥狀，目前全球范圍內(nèi)每年約有100萬(wàn)兒童死于嚴(yán)重腹瀉[1]。機(jī)體感染RV所致免疫病理學(xué)異常是引發(fā)感染性腹瀉相關(guān)臨床癥狀的主要原因，且與患兒病情嚴(yán)重度有著密切關(guān)聯(lián)[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)，維生素D3可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，在肺炎、風(fēng)濕等免疫相關(guān)性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[3]，但目前臨床關(guān)于維生素D3與RV感染性腹瀉易感性的研究缺乏。為彌補(bǔ)這一空白，本研究對(duì)125例RV感染性腹瀉患兒與100名健康兒童志愿者進(jìn)行了對(duì)照分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

秦皇島市第一醫(yī)院兒科2016年7月至2017年1月參照第八版《兒科學(xué)》中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)確診[4]的125例RV感染性腹瀉患兒為感染組，糞便RV陽(yáng)性，且入院前未接受激素、抗病毒或維生素類藥物治療。對(duì)照組招募100名健康兒童志愿者，入組前篩查RV病毒，無(wú)RV感染方可入組。受試兒童均排除合并先天性免疫缺陷、支氣管炎、上呼吸道感染、營(yíng)養(yǎng)不良患兒；既往有感染、佝僂病等其他可能影響本研究結(jié)果的慢性病病史患兒。感染組125例患兒中，男79例（63.20%），女46例（36.80%），年齡4個(gè)月～8歲，平均（4.06±1.27）歲；對(duì)照組100例患兒中，男63例（63.00%），女37例（37.00%），年齡5個(gè)月～8歲，平均（3.99±1.15）歲。兩組受試兒童年齡、性別比例比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本臨床研究已征得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試兒童監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)

此次研究檢測(cè)指標(biāo)包括糞便RV及血清指標(biāo)：（1）糞便RV：取受試兒童糞便，以乳膠法檢測(cè)糞便RV感染情況[5]，RV抗原檢測(cè)試劑盒購(gòu)自芬蘭Orion診斷公司；（2）血清指標(biāo)：無(wú)菌采集受試兒童晨起空腹肘靜脈血6 mL，分裝于3個(gè)2 mL試管內(nèi)，分別用于血清1-25羥維生素D3[1-25（OH）D3]，

血清白細(xì)胞介素-2（IL-2）、IL-4水平及免疫球蛋白G（IgG）、IgA、IgM檢測(cè)，其中，1-25（OH）D3檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）[6]，試劑盒購(gòu)自美國(guó)Rapidbio公司；IL-2、IL-4檢測(cè)使用ELISA法，試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司；IgG、IgA、IgM檢測(cè)采用透射比濁法[7]，試劑盒購(gòu)自美國(guó)Roche公司。

1.3 分析方法

比較兩組受試兒童糞便RV及血清指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的差異，將存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的指標(biāo)以自變量的形式納入多因素分析，以感染性腹瀉為因變量，采用Logistic逐步回歸方程檢驗(yàn)1-25（OH）D3等指標(biāo)對(duì)RV感染性腹瀉易感性的影響。此外，運(yùn)用Pearson相關(guān)性分析，計(jì)算1-25（OH）D3與其他血清指標(biāo)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS20.0進(jìn)行分析，性別、RV陽(yáng)性率以（n/%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，并采用t檢驗(yàn)，影響RV感染性腹瀉易感染的相關(guān)因素采用Cox回歸方程，相關(guān)性分析采用Pearson法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

感染組1-25（OH）D3、IgG、IgA、IgM低于對(duì)照組，其IL-2高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.1 影響因素分析

多因素回歸分析結(jié)果，1-25（OH）D3、IgG、IgA、IgM降低及IL-2升高是導(dǎo)致RV感染性腹瀉易感性上升的危險(xiǎn)因素（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.2 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析示，1-25（OH）D3與IL-2呈負(fù)相關(guān)（r=-0.426，P<0.05），與IgG（r=0.525）、IgA（r=0.631）、IgM（r=0.531）呈正相關(guān)，均P<0.05。

3 討論

RV是引起兒童感染性腹瀉的主要病原體，其傳染性極強(qiáng)，除糞-口途徑外，還存在呼吸道傳播途徑，報(bào)道表明，6個(gè)月～3歲嬰幼兒RV感染率極高，這與該年齡段嬰幼兒機(jī)體免疫、消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，而來(lái)自母體的抗體已明顯下降有關(guān)[8]。由于RV感染性腹瀉尚無(wú)特殊治療藥物，臨床多強(qiáng)調(diào)以RV疫苗預(yù)防腹瀉發(fā)生，但仍有部分家庭未按免疫頻次要求接種或無(wú)RV疫苗接種史，導(dǎo)致我國(guó)兒童RV感染性腹瀉發(fā)生率居高不下[9-10]。

在本次研究中，血清指標(biāo)的觀察可以發(fā)現(xiàn)，感染組患兒血清IL-2明顯升高，IgG、IgA、IgM顯著下降，說(shuō)明患兒處于免疫功能失調(diào)狀態(tài)，這是由于RV侵犯空腸絨毛上皮細(xì)胞可刺激其大量分泌T淋巴細(xì)胞，而T淋巴細(xì)胞激活可引發(fā)NF-κB通路活化，上調(diào)IL-2表達(dá)水平，作為一種具有細(xì)胞毒性的炎癥因子，IL-2水平升高不僅意味著自身免疫受限，還可造成局部炎癥反應(yīng)增強(qiáng)、腸道屏障系統(tǒng)破壞[11-12]。初始CD4+T細(xì)胞接受抗原刺激后，在IL-4作用下可分化為Th2細(xì)胞，發(fā)揮抑制炎癥應(yīng)答作用，但本研究感染組患兒血清IL-4水平未見(jiàn)升高，考慮與患兒免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟，適應(yīng)性細(xì)胞免疫應(yīng)答無(wú)法有效發(fā)揮抗病毒效應(yīng)有關(guān)[13]。感染組患兒IgG、IgA、IgM均明顯下降，說(shuō)明RA感染性腹瀉患兒普遍處于體液免疫抑制狀態(tài)，RV感染所致T細(xì)胞功能紊亂、B細(xì)胞分化增殖抑制及免疫球蛋白分泌下降可能是導(dǎo)致這一狀態(tài)的主要原因[14]。

最新研究發(fā)現(xiàn)，作為一種脂溶性類固醇衍生物，維生素D3不僅可調(diào)控機(jī)體鈣磷平衡，還具有神經(jīng)內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)激素作用，可參與免疫調(diào)節(jié)，并在保證腸道黏膜上皮細(xì)胞正常功能環(huán)節(jié)扮演重要角色[15]。有學(xué)者將維生素D3用于RV感染性腹瀉患兒的治療，發(fā)現(xiàn)維生素D3對(duì)于患兒臨床癥狀的改善具有顯著作用[16]，說(shuō)明維生素D3可能與RV感染性腹瀉的發(fā)生發(fā)展具有一定關(guān)聯(lián)。本研究多因素分析顯示，維生素D3水平下降可造成兒童RV感染性腹瀉易感性上升，且相關(guān)性分析顯示維生素D3與IL-2、免疫球蛋白水平變化具有相關(guān)性，其機(jī)制可能為：1）維生素D3具有維持腸黏膜完整性、增強(qiáng)防御素表達(dá)作用，而維生素D3水平下降可造成腸黏膜屏障通透性上升、固有免疫功能下降，增加感染性腹瀉易感性[17]；2）維生素D3還可參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)，抑制T淋巴細(xì)胞分泌功能，其水平下降可造成T淋巴細(xì)胞激活、炎癥因子釋放，并造成體液免疫抑制，進(jìn)而影響腸道功能、引起腹瀉癥狀[18]。

維生素D3缺乏可造成兒童免疫功能失調(diào)，增加RV感染性腹瀉易感性，其原因考慮與Th1細(xì)胞因子激活與體液免疫抑制有關(guān)，由于口服維生素D3不受腸道營(yíng)養(yǎng)不良、病原菌侵害等因素影響，且不會(huì)造成肝腎負(fù)擔(dān)，補(bǔ)充維生素D3有望成為RV感染性腹瀉的新型治療手段，值得進(jìn)一步關(guān)注。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 馬慧， 黃敬孚， 林書祥，等. 兒童輪狀病毒腹瀉的流行病學(xué)研究[J]. 中國(guó)實(shí)用兒科雜志， 2010， 25（1）：52-53.

[2] 高健， 張鴻彥， 張國(guó)利， 等. 2014年哈爾濱地區(qū)小兒輪狀病毒腹瀉流行特征探析[J]. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2016， 50（2）： 159-161.

[3] Bucak I H， Ozturk A B， Almis H， et al. Is there a relationship between low vitamin D and rotaviral diarrhea？[J]. Pediatr Int， 2016， 4（58）： 270-273.

[4] Badillo-Godinez O， Gutierrez-Xicotencatl L， Plett-Torres T， et al. Targeting of rotavirus VP6 to DEC-205 induces protection against the infection in mice[J]. Vaccine， 2015， 33（35）： 4228-4237.

[5] Scharf R J， DeBoer M D， Guerrant R L. Recent advances in understanding the long-term sequelae of childhood infectious diarrhea[J]. Curr Infect Dis Rep， 2014， 16（6）： 1-7.

[6] Das J K， Salam R A， Bhutta Z A. Global burden of childhood diarrhea and interventions[J]. Curr Infect Dis Rep， 2014， 27（5）： 451-458.

[7] 陸愛(ài)英， 陽(yáng)茂春. 兩種不同方法檢測(cè)EB病毒VCA-IgA的比較[C]// 全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議. 2009.

[8] De V B， Vesikari T， Linhares A C， et al. A rotavirus vaccine for prophylaxis of infants against rotavirus gastroenteritis.[J]. Pediatr Infect Dis J， 2004， 23（10 Suppl）：S179-82.

[9] Kandasamy S， Chattha K S， Vlasova A N， et al. Prenatal vitamin A deficiency impairs adaptive immune responses to pentavalent rotavirus vaccine （RotaTeq?） in a neonatal gnotobiotic pig model[J]. Vaccine， 2014， 32（7）： 816-824.

[10] 徐子乾. 輪狀病毒疫苗[J]. 中國(guó)疫苗和免疫， 2007， 13（6）：611-613.

[11] Maffey L， Vega C G， Parreno V， et al. Controlling Rotavirus-associated diarrhea： Could single-domain antibody fragments make the difference？[J]. Rev Argent Microbiol， 2015， 47（4）： 368-379.

[12] ORyan G M， Ashkenazi-Hoffnung L， ORyan-Soriano M A， et al. Management of acute infectious diarrhea for children living in resource-limited settings[J]. Expert Rev Anti Infect Ther， 2014， 12（5）： 621-632.

[13] 熊田甜， 馬智超， 陳兵， 等. 2010—2015年深圳市寶安區(qū)輪狀病毒腹瀉流行特征[J]. 公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2016， 27（5）： 37-39.

[14] Velázquez R F， Linhares A C， Mu?oz S， et al. Efficacy， safety and effectiveness of licensed rotavirus vaccines： a systematic review and meta-analysis for Latin America and the Caribbean[J]. BMC Pediatr， 2017， 17（1）： 14.

[15] Kawashima H， Ishii C， Ioi H， et al. Transaminase in rotavirus gastroenteritis[J]. Pediatrics International， 2012， 54（1）：86-88.

[16] Zhao Y， Yu B， Mao X， et al. Dietary vitamin D supplementation attenuates immune responses of pigs challenged with rotavirus potentially through the retinoic acid-inducible gene I signalling pathway[J]. Br J Nutr， 2014， 112（3）： 381-389.

[17] Guarino A， Ashkenazi S， Gendrel D， et al. European Society for Pediatric Gastroenterology， Hepatology， and Nutrition/European Society for Pediatric Infectious Diseases evidence-based guidelines for the management of acute gastroenteritis in children in Europe： update 2014[J]. J Pediatr Gastroenterol Nutr， 2014， 59（1）： 132-152.

[18] Taniuchi M， Platts-Mills J A， Begum S， et al. Impact of enterovirus and other enteric pathogens on oral polio and rotavirus vaccine performance in Bangladeshi infants[J]. Vaccine， 2016， 34（27）： 3068-3075.

基金項(xiàng)目：秦皇島市科學(xué)技術(shù)局，項(xiàng)目編號(hào)：201602A092。

第一作者：馮鵬華，本科，主治醫(yī)師，研究方向：兒科臨床，Email：sxpyfph6@163.com。