許璐 方玉松 王丹云 王宗明 許鵬

·基礎(chǔ)研究·

miR-200a抑制YAP1基因表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響

許璐①方玉松②王丹云②王宗明②許鵬②

目的：研究微小RNA-200a（miR-200a）對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響，并探討其分子機(jī)制。方法：采用Real-time PCR檢測(cè)15例非小細(xì)胞肺癌組織和對(duì)應(yīng)癌旁組織、人肺癌細(xì)胞株（A549、NCI-H520、SK-MES-1）及人正常肺支氣管上皮細(xì)胞株16HBE中miR-200a的表達(dá)水平。用CCK-8法檢測(cè)miR-200a對(duì)A549肺癌細(xì)胞增殖活性的影響。通過(guò)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-200a可能的靶基因，雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)合Real-time PCR和Western blot驗(yàn)證miR-200a對(duì)靶基因YAP1的調(diào)控作用。CCK-8法檢測(cè)下調(diào)靶基因YAP1對(duì)A549肺癌細(xì)胞株增殖活性的影響。結(jié)果：miR-200a在非小細(xì)胞肺癌組織和肺癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯降低（P＜0.01）。上調(diào)miR-200a表達(dá)后明顯抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力（P＜0.01）。雙熒光素酶報(bào)告基因顯示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3′-UTR區(qū)域抑制熒光素酶活性（P＜0.01），Real-time PCR和Western blot檢測(cè)顯示上調(diào)miR-200a的表達(dá)能夠明顯下調(diào)A549肺癌細(xì)胞YAP1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平（P＜0.01）。CCK-8法顯示下調(diào)YAP1的表達(dá)能夠明顯抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活性（P＜0.01）。結(jié)論：miR-200a通過(guò)靶向作用于YAP1基因來(lái)抑制肺癌細(xì)胞的增殖，從而在肺癌中發(fā)揮抑癌基因的功能。

miR-200a 肺癌 YAP1 增殖

肺癌已成為人類病死率最高的惡性腫瘤［1-2］，嚴(yán)重威脅著人類的生命及健康。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展和研究的深入，針對(duì)驅(qū)動(dòng)基因的分子靶向治療作為新興的腫瘤治療方式已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，為肺癌的治療提供了一個(gè)有效的手段［3］。微小RNA（microRNA，miRNAs）是一類長(zhǎng)度在17～25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性、高度保守的單鏈非編碼小RNA，可以通過(guò)與下游靶基因mRNA的3′-非編碼區(qū)（3′-UTR）結(jié)合，降解mRNA或在轉(zhuǎn)錄后水平抑制其翻譯，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著“癌基因”或者“抑癌基因”的作用［4］。miR-200a屬于miR-200家族成員之一，其定位于人1號(hào)染色體（1p36.33）［5］，目前研究發(fā)現(xiàn)miR-200a表達(dá)異常與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著一定的關(guān)系，miR-200a在大部分惡性腫瘤如胰腺癌［6］、乳腺癌［7］、腎細(xì)胞癌［8］、肝癌［9］等惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)，起著類似“抑癌基因”的作用，但也有研究發(fā)現(xiàn)其在鼻咽癌［10］、卵巢癌［11］等惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，起著類似“癌基因”的作用。目前有關(guān)miR-200a在肺癌中表達(dá)情況的研究較少，并且作用機(jī)制尚不明確。本研究旨在研究miR-200a在非小細(xì)胞肺癌組織及肺癌細(xì)胞系細(xì)胞中的表達(dá)情況以及對(duì)肺癌細(xì)胞增殖能力的影響，并探討其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織標(biāo)本 收集2015年8月至2015年10月在山東大學(xué)附屬濟(jì)南市中心醫(yī)院手術(shù)切除的15例非小細(xì)胞肺癌組織和對(duì)應(yīng)的距離腫瘤邊緣＞5 cm的癌旁組織；組織離體30 min內(nèi)置入液氮中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?5例肺癌患者中男性10例，女性5例，年齡（54.8±7.9）歲。術(shù)后病理切片均經(jīng)證實(shí)。術(shù)后病理按WHO肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)，其中腺癌8例，鱗癌6例，腺鱗癌1例。所有患者均簽署知情同意書，該研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.1.2 細(xì)胞與試劑 人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、人肺鱗癌細(xì)胞系NCI-H520、SK-MES-1及人正常肺支氣管上皮細(xì)胞株16HBE均購(gòu)自美國(guó)ATCC公司。Trizol試劑和LipofectamineTM2000均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司。RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及Real-time PCR試劑盒、雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒及pmirGLO載體均購(gòu)自美國(guó)Promega公司。miR-200a、YAP1及內(nèi)參U6、GAPDH引物由上海吉瑪公司設(shè)計(jì)合成。YAP1 siRNA質(zhì)粒（siRNA-YAP1）和陰性對(duì)照siRNA-NC，miR-200a mimics和陰性對(duì)照mimics-NC均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。CCK-8試劑盒購(gòu)自上海東仁化學(xué)科技公司。YPA1抗體以及β-actin抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 人肺癌細(xì)胞株A549、NCIH520、SK-MES-1及人正常肺支氣管上皮細(xì)胞株16HBE均置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3d按1:3傳代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549肺癌細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞貼壁達(dá)70%～80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作，轉(zhuǎn)染操作嚴(yán)格按LipofectamineTM2000試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，分別轉(zhuǎn)染miR-200a mimics、mimics-NC以及siR?NA-YAP1、siRNA-NC。

1.2.2 Real-time PCR檢測(cè)miR-200a及YAP1 mRNA的表達(dá) 利用Trizol試劑提取組織或細(xì)胞總RNA，測(cè)RNA濃度，以1 μg總RNA按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。配置Real-PCR體系，PCR反應(yīng)條件為：95℃3 min、95℃10 s、59℃30 s，共40個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以U6/GAPDH作為內(nèi)參，miR-200a和YAP1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量以2-ΔΔCt法計(jì)算，［ΔΔCt=（待測(cè)組目的基因平均Ct值-待測(cè)組內(nèi)參基因平均Ct值）-（對(duì)照組目的基因平均Ct值-對(duì)照組內(nèi)參基因平均Ct值）］。

1.2.3 Western blot檢測(cè)YAP1蛋白的表達(dá) 收集轉(zhuǎn)染后48h的各組細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞3遍，用蛋白裂解液提取細(xì)胞總蛋白，用BCA法測(cè)定蛋白濃度。分別取40 μg蛋白上樣，SDS-PAGE上電泳30min，蛋白質(zhì)半干轉(zhuǎn)移至PVDF膜，加入5%脫脂奶粉的封閉液，室溫封閉2 h后，加入適當(dāng)濃度YPA1、β-actin一抗，4℃過(guò)夜，次日洗膜后，加入二抗室溫孵育2 h，洗膜后，加入ECL發(fā)光劑，凝膠成像系統(tǒng)顯影，以YPA1蛋白條帶灰度值與β-actin蛋白條帶灰度值的比值表示YPA1蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活力 細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h后細(xì)胞接種于96孔板，常規(guī)培養(yǎng)，分別于轉(zhuǎn)染后24、48、72、96 h 4個(gè)時(shí)點(diǎn)參照CCK-8試劑盒操作說(shuō)明書操作向每孔加入10 μL CCK-8溶液，置于37℃、50 ml/L CO2的培養(yǎng)箱中避光孵育2 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處的吸光度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 miR-200a靶基因的預(yù)測(cè)及雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證 應(yīng)用miRNA在線靶基因預(yù)測(cè)軟件miRanda（http：//www.microrna.org），并結(jié)合基因的功能分析，最終篩選出YAP1極有可能為miR-200a的直接靶基因。雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-200a的靶基因。委托上海吉瑪公司構(gòu)建帶有野生型結(jié)合位點(diǎn)的熒光報(bào)告載體pmirGLO-YAP1-wtUTR和帶有突變型結(jié)合位點(diǎn)的熒光報(bào)告載體pmirGLO-YAP1-mtUTR。轉(zhuǎn)染前1天，將肺癌細(xì)胞A549接種于24孔板中，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，將經(jīng)過(guò)測(cè)序驗(yàn)證正確的pmirGLO-YAP1-wtUTR或pmirGLO-YAP1-mtUTR熒光報(bào)告載體與miR-200a mimics或mimics-NC共轉(zhuǎn)染入肺癌A549細(xì)胞。細(xì)胞共分為4組：miR-200a mimics+pmirGLO-YAP1-wtUTR組、miR-200a mimics+pmirGLO-YAP1-mtUTR組、mimics-NC+pmirGLO-YAP1-wtUTR組、mimics-NC+pmirGLO-YAP1-mtUTR組。轉(zhuǎn)染后48h收集細(xì)胞，按照雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作檢測(cè)螢火蟲熒光素酶及海腎熒光素酶活性。

熒光酶活性比值=螢火蟲熒光素酶活性值/海腎熒光素酶活性值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 miR-200a在非小細(xì)胞肺癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)Real-time PCR結(jié)果顯示miR-200a在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1A）。并且miR-200a在肺癌細(xì)胞株A549、NCI-H520、SK-MES-1中的表達(dá)水平明顯低于正常肺支氣管上皮細(xì)胞株16HBE，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1B），其中miR-200a在肺癌細(xì)胞株A549中相對(duì)表達(dá)量最低，因此選擇肺癌細(xì)胞株A549作為后續(xù)研究對(duì)象。

圖1 miR-200a在非小細(xì)胞肺癌組織和肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯降低Figure 1 The expression of miR-200a in non-small cell lung cancer tissues and lung cancer cell lines was significantly decreased

2.2 上調(diào)miR-200a表達(dá)抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力

A549肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-200a mimics或mimics-NC后，Real-time PCR顯示轉(zhuǎn)染后miR-200a mimics組細(xì)胞miR-200a表達(dá)水平明顯高于mimic-NC組（P＜0.01，圖2A），證明轉(zhuǎn)染效率較高。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力顯示miR-200a mimics組A549肺癌細(xì)胞48、72、96 h時(shí)吸光度明顯低于mimics-NC組細(xì)胞，提示上調(diào)miR-200a表達(dá)能夠明顯抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力（P＜0.01，圖2B）。

2.3 YAP1是miR-200a的直接調(diào)控靶基因

應(yīng)用靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)miRanda，并結(jié)合基因的功能分析，預(yù)測(cè)miR-200a的可能靶基因?yàn)閅AP1，發(fā)現(xiàn)YAP1的3′UTR區(qū)存在與miR-200a的種子序列理論上互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)（圖3A）。為進(jìn)一步驗(yàn)證YAP1是否為miR-200a的直接調(diào)控靶基因，在A549肺癌細(xì)胞共轉(zhuǎn)染miR-200a mimics、mimics-NC和野生型pmirGLO-YAP1-wtUTR或突變型pmirGLO-YAP1-mtUTR后，雙熒光素酶報(bào)告基因顯示miR-200a mim?ics+pmirGLO-YAP1-wtUTR組細(xì)胞熒光素酶活性比mimics-NC+pmirGLO-YAP1-wtUTR組細(xì)胞熒光素酶活性明顯減低（P＜0.01）；而miR-200a mimics+pmir?GLO-YAP1-mtUTR組細(xì)胞熒光素酶活性與mimics-NC+pmirGLO-YAP1-mtUTR組細(xì)胞熒光素酶活性相近，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖3B）。證實(shí)miR-200a能夠特異性結(jié)合YAP1的3′UTR區(qū)，使熒光蛋白表達(dá)水平明顯降低，而YAP1的3′UTR區(qū)突變后則無(wú)此作用，說(shuō)明YAP1是miR-200a的直接調(diào)控靶基因。

圖2 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞miR-200a表達(dá)水平增高,增殖活力下降Figure 2 The expression level of miR-200a increased and the proliferation activity decreased after transfection in A549 cells

圖3 雙熒光素酶報(bào)告基因Figure 3 Dual luciferase reporter gene assay

2.4 上調(diào)miR-200a抑制YAP1 mRNA和蛋白的表達(dá)

Real-time PCR和Western blot結(jié)果顯示miR-200a mimics組A549肺癌細(xì)胞中YAP1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯低于mimic-NC（P＜0.01，圖4A、B），提示miR-200a能夠負(fù)調(diào)控YAP1的表達(dá)。

2.5 下調(diào)YAP1能夠抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力

A549肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA-YAP1或siRNA-NC后，Real-time PCR和Western blot顯示轉(zhuǎn)染后siRNA-YAP1組A549細(xì)胞中YAP1 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯低于siRNA-NC組（P＜0.01，圖5A、B），證明轉(zhuǎn)染效率較高，成功下調(diào)A549肺癌細(xì)胞YAP1的表達(dá)。同時(shí)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力顯示siRNA-YAP1組A549肺癌細(xì)胞48、72、96 h時(shí)吸光度明顯低于siRNA-NC組細(xì)胞，提示下調(diào)YAP1表達(dá)能夠明顯抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力（P＜0.01，圖5C）。

圖4 miR-200a mimics組A549細(xì)胞YAP1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平降低Figure 4 mRNA and protein expression of YAP1 in the miR-200a mimic group was lower than that in the mimic-NC group

圖5 下調(diào)YAP1能夠抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力Figure 5 Downregulation of YAP1 could inhibit the proliferation of A549 lung cancer cells

3 討論

肺癌是一種高發(fā)性惡性腫瘤，肺癌的發(fā)生發(fā)展是多種基因改變、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，其發(fā)生發(fā)展的具體分子機(jī)制尚不明確。近年來(lái)隨著表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，miRNA在疾病中作用越來(lái)越受到重視。研究顯示在多數(shù)惡性腫瘤中存在miRNA的異常表達(dá)，miRNA在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用［12-13］。

miR-200a屬于miR-200家族成員之一，目前研究發(fā)現(xiàn)miR-200a表達(dá)異常與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，Gao等［14］研究發(fā)現(xiàn)，miR-200a在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中表達(dá)較癌旁組織明顯降低，上調(diào)miR-200a的表達(dá)可以通過(guò)靶向AP-2γ基因抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和成瘤作用。Yao等［15］報(bào)道m(xù)iR-200a在乳腺癌中表達(dá)減低，上調(diào)miR-200a的表達(dá)可以通過(guò)靶向TFAM基因抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。但目前有關(guān)miR-200a與肺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系方面的研究較少。Zhen等［16］和Chen等［17］均在研究中證實(shí)miR-200a在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中表達(dá)降低。本研究中通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)了15例非小細(xì)胞肺癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織、人肺癌細(xì)胞株（A549、NCI-H520、SKMES-1）及人正常肺支氣管上皮細(xì)胞株16HBE中miR-200a的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-200a在非小細(xì)胞肺癌組織和肺癌細(xì)胞系中表達(dá)均明顯降低，與其他研究結(jié)果一致。但miR-200a對(duì)肺癌細(xì)胞增殖影響及機(jī)制方面的研究國(guó)內(nèi)外尚缺乏研究報(bào)道。為了研究miR-200a對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響，通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)法將miR-200a mimics成功轉(zhuǎn)染入A549肺癌細(xì)胞，成功在A549細(xì)胞過(guò)表達(dá)miR-200a。CCK-8法顯示過(guò)表達(dá)miR-200a能夠明顯抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力，說(shuō)明miR-200a能夠抑制肺癌細(xì)胞的增殖，屬于肺癌“抑癌基因”。

一個(gè)miRNA可以參與調(diào)控多個(gè)靶基因，并且每個(gè)靶基因又可以受到多個(gè)miRNA的同時(shí)調(diào)節(jié)。miRNA在腫瘤中的作用主要取決于其調(diào)控的下游靶基因的生物學(xué)效應(yīng)。Zhen等［16］發(fā)現(xiàn)miR-200a可以通過(guò)靶向EGFR和c-Met抑制肺癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移。Chen等［17］報(bào)道m(xù)iR-200a可以通過(guò)靶向TSPAN1抑制肺癌細(xì)胞的侵襲。為了研究miR-200a對(duì)肺癌細(xì)胞增殖影響可能的機(jī)制，應(yīng)用靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)miRanda，并結(jié)合基因的功能分析，預(yù)測(cè)miR-200a的可能靶基因YAP1、YAP1的3′UTR區(qū)存在與miR-200a的種子序列理論上互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)miR-200a能夠特異性結(jié)合YAP1的3′UTR區(qū)，使熒光蛋白表達(dá)水平明顯降低，為了進(jìn)一步驗(yàn)證YAP1是否為miR-200a的靶基因，本研究應(yīng)用Real-time PCR和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上調(diào)miR-200a能夠明顯下調(diào)YAP1 mRNA和蛋白表達(dá)的水平，說(shuō)明miR-200a對(duì)YAP1基因存在負(fù)調(diào)控關(guān)系，從基因和蛋白兩個(gè)水平驗(yàn)證兩者之間的靶向調(diào)控關(guān)系，結(jié)合雙熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)YAP1是miR-200a的直接調(diào)控靶基因。

Yes相關(guān)蛋白1（yes-associated protein 1，YAP1）是Hippo信號(hào)通路（hippo pathway）的下游信號(hào)分子，在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、DNA修復(fù)、內(nèi)源性穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)正?；罨癄顟B(tài)的YAP1可以促進(jìn)生物體的創(chuàng)傷修復(fù)，但是超激活狀態(tài)下的YAP1將過(guò)度促進(jìn)細(xì)胞的增殖能力，從而促進(jìn)了腫瘤的形成［18］。目前研究已經(jīng)證實(shí)YAP1在肺癌中表達(dá)上調(diào)，許多上游基因可以調(diào)控YAP1參與肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移等生物學(xué)行為［19-21］。本研究通過(guò)干擾實(shí)驗(yàn)，下調(diào)肺癌A549細(xì)胞中YAP1的表達(dá)，CCK-8法顯示下調(diào)YAP1表達(dá)能夠明顯抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖活力，與上調(diào)miR-200a表達(dá)對(duì)A549肺癌細(xì)胞惡性表型的影響一致，進(jìn)一步證實(shí)miR-200a通過(guò)對(duì)YAP1基因的調(diào)控影響肺癌細(xì)胞的增殖。

綜上所述，本研究證實(shí)miR-200a在肺癌組織和細(xì)胞中呈表達(dá)降低，YAP1是miR-200a的直接調(diào)控靶基因，miR-200a通過(guò)負(fù)性調(diào)節(jié)YAP1的表達(dá)從而抑制肺癌細(xì)胞的增殖，為肺癌的治療提供了新的研究思路，并且有可能成為未來(lái)肺癌基因治療的潛在靶點(diǎn)。

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（2016-12-14收稿）

（2017-03-09修回）

（編輯：楊紅欣 校對(duì)：武斌）

Effects of miR-200a on the proliferation of lung cancer cells by inhibiting YAP1

Lu XU1,Yusong FANG2,Danyun WANG2,Zongming WANG2,Peng XU2

Peng XU;E-mail:lwys002@163.com
1Department of Oncology,The Central Hospital of Xinwen Mining Group,Tai'an 271233,China;2Department of Thoracic Surgery,Ji'nan Central Hospital Affiliated to Shandong University,Ji'nan 250013,China

Objective:To investigate the effects of miR-200a on the proliferation of lung cancer cells and to identify its direct target genes.Methods:Real-time PCR was performed to analyze the miR-200a expression in 15 paired clinical specimens of non-small cell lung cancer and adjacent noncancerous tissues,human lung cancer cell lines(A549,NCI-H520,and SK-MES-1),and one human normal lung bronchial epithelial cell line(16HBE).The effects of miR-200a on the proliferation of A549 lung cancer cells were detected through CCK-8 method.The candidate target genes of miR-200a were identified by bioinformatics screening and then verified by dual luciferase reporter gene assay,real-time PCR,and Western blot.The effects of YAP1 downregulation on the proliferation of A549 lung cancer cell line were also observed through CCK-8 method.Results:The miR-200a expression in non-small cell lung cancer tissues and lung cancer cell lines was significantly decreased(P＜0.01).The upregulation of miR-200a expression could significantly inhibit the proliferation of A549 lung cancer cells(P＜0.01).Dual luciferase reporter gene indicated that miR-200a could directly affect the 3′‐untranslated region of the YAP1 gene to inhibit luciferase activity(P＜0.01).Real-time PCR and Western blot revealed that the upregulation of miR-200a expression could significantly reduce the mRNA and protein expression levels of YAP1 in A549 lung cancer cells(P＜0.01). CCK-8 method indicated that the downregulation of YAP1 could significantly prevent the proliferation of A549 lung cancer cells(P＜0.01).Conclusion:MiR-200a inhibits the proliferation of lung cancer cells by targeting YAP1.Thus,miR-200a elicits tumor suppression effects.

miR-200a,lung cancer,YAP1,proliferation

10.3969/j.issn.1000-8179.07.424

①新汶礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院腫瘤科（山東省泰安市271233）；②山東大學(xué)附屬濟(jì)南市中心醫(yī)院胸外科

許鵬 lwys002@163.com

許璐 專業(yè)方向?yàn)閻盒阅[瘤內(nèi)科治療。

E-mail：xuluzlk@yeah.net