劉文杰，王耀輝，陳桂星，曾婷婷，陳雪曼，楊思思，臧 穎 （中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院生理教研室，廣東廣州510080）

·基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

蘆薈多糖對(duì)阿司匹林致小鼠胃潰瘍的預(yù)防作用

劉文杰，王耀輝，陳桂星，曾婷婷，陳雪曼，楊思思，臧 穎 （中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院生理教研室，廣東廣州510080）

目的：研究蘆薈多糖對(duì)阿司匹林致小鼠胃潰瘍的預(yù)防作用．方法：采用阿司匹林灌胃造成小鼠慢性胃潰瘍損傷模型，將小鼠隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組、模型組、蘆薈多糖低、中、高劑量預(yù)處理組、硫糖鋁預(yù)處理組．分別測定各組小鼠的胃粘膜潰瘍指數(shù)，計(jì)算潰瘍發(fā)生率及潰瘍抑制率，并觀察大體及顯微鏡下組織學(xué)變化，以評(píng)價(jià)阿司匹林致胃潰瘍損傷程度及蘆薈多糖的預(yù)防保護(hù)效果．結(jié)果：不同濃度的蘆薈多糖預(yù)處理組與模型組比較，胃粘膜潰瘍指數(shù)明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），呈劑量相關(guān)性，濃度越高，潰瘍指數(shù)越低，潰瘍抑制率越高．與硫糖鋁保護(hù)組相比，盡管低、中、高劑量蘆薈多糖組小鼠的胃粘膜潰瘍指數(shù)下降更加明顯，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）．結(jié)論：蘆薈多糖預(yù)處理對(duì)阿司匹林所致的小鼠胃潰瘍有明顯的預(yù)防保護(hù)作用，且其保護(hù)作用與硫糖鋁相當(dāng)．

胃潰瘍；蘆薈多糖；硫糖鋁；阿司匹林

0 引言

阿司匹林作為一種傳統(tǒng)的解熱鎮(zhèn)痛藥，其降低胃黏膜保護(hù)功能致消化性潰瘍的不良反應(yīng)也越來越為人們所熟知．目前，小劑量阿司匹林在預(yù)防和治療各種心血管疾病中的應(yīng)用逐漸增多，然而有研究發(fā)現(xiàn)它的長期使用可對(duì)消化系統(tǒng)產(chǎn)生不良后果，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［1］．蘆薈多糖為蘆薈主要活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、降血糖等多種生物作用［2－3］．此外，蘆薈多糖還可促進(jìn)損傷胃粘膜的修復(fù)過程［4］，在抗?jié)兎矫嬉舶l(fā)揮著重要的作用［5－7］，但其是否對(duì)阿司匹林所致的胃潰瘍有預(yù)防效果尚不清楚．本研究采用阿司匹林誘導(dǎo)小鼠胃潰瘍模型，旨在觀察蘆薈多糖預(yù)防性灌胃對(duì)胃潰瘍小鼠的保護(hù)作用，并與硫糖鋁（臨床上常用的胃黏膜保護(hù)劑［8－9］）處理的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)．

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用成年雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量25～30 g，隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組、阿司匹林致胃潰瘍模型組（A組，蒸餾水，0．1 mL／10 g）、陽性藥硫糖鋁保護(hù)組（B組，50 mg／kg，0．1 mL／10 g）、蘆薈多糖低、中、高劑量組（C、D、E組，50 mg／kg、100 mg／kg、150 mg／kg，0．1 mL／10 g），每組8只．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中山大學(xué)北校區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，室溫及室內(nèi)相對(duì)濕度分別維持在22℃±1℃和65%±5%，按照小鼠的生物節(jié)律將光照時(shí)間維持在每日的7：00 AM～7：00 PM．為盡量減輕動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)中的痛苦，所有實(shí)驗(yàn)步驟均按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的相關(guān)使用原則進(jìn)行操作．

1.2 藥品與試劑蘆薈多糖，貝興牌蘆薈軟膠囊（主要原料：蘆薈汁液凍干粉、大豆油、蜂蠟、明膠、甘油、水、檸檬黃、二氧化鈦、胭脂紅．標(biāo)志性成分：蘆薈多糖，占1．3%），由廣東長興生物科技股份有限公司提供，批號(hào)RLH582212；硫糖鋁咀嚼片，由北海陽光藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)120507；阿司匹林腸溶片，由湖南新匯制藥有限公司提供，批號(hào)130305．

1.3 方法

1．3．1 給藥方法與取材 首先，模型對(duì)照組、蘆薈多糖3個(gè)劑量組及硫糖鋁組按以上劑量灌胃給藥1次．1 h后，除正常對(duì)照組外，其他各組均灌胃給予300 mg／kg，每10 g灌胃0．1 mL的阿司匹林腸溶片懸濁液造模．給予正常活動(dòng)和飲食，并重復(fù)上述灌胃5 d．第5天灌胃后，禁食24 h后脫頸椎處死，解剖取胃，結(jié)扎胃的賁門部與幽門部并經(jīng)胃壁向胃腔內(nèi)注入4%甲醛溶液0．1 mL，將胃浸泡在4%甲醛中，30 min后沿胃大彎剖開并用生理鹽水沖洗干凈，按所在組別進(jìn)行編號(hào)［10］．

1．3．2 胃粘膜損傷指數(shù)和抑制率的計(jì)算 由兩位不清楚實(shí)驗(yàn)分組的觀察者共同在解剖顯微鏡下觀察潰瘍情況，記錄病灶長度并打分．其中病灶長度＜1 mm為1分，病灶長度＜2 mm為2分，病灶長度＜3 mm為3分，病灶長度＜4 mm為4分，若病灶長度＞4 mm，則分段計(jì)分，病灶寬度＞2 mm時(shí)，分?jǐn)?shù)乘以2，最后以全胃病灶分?jǐn)?shù)總和作為該動(dòng)物胃粘膜損傷指數(shù)［11］，同時(shí)計(jì)算以下指標(biāo)：①潰瘍指數(shù)：以全胃病灶分?jǐn)?shù)總和作為潰瘍指數(shù)，每組潰瘍指數(shù)以表示，并進(jìn)行組間t檢驗(yàn)．②潰瘍抑制率：潰瘍抑制率＝（模型對(duì)照組潰瘍指數(shù)?給藥組潰瘍指數(shù)）／模型對(duì)照組潰瘍指數(shù)× 100%．③潰瘍發(fā)生率：潰瘍發(fā)生率＝形成潰瘍動(dòng)物數(shù)／實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)×100%．

1．3．3 胃粘膜組織病理學(xué)檢查 在胃腺近幽門1．0 cm處胃小彎側(cè)取胃組織，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化，并鏡下攝片．

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，P＜0．05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

2 結(jié)果

2.1 各組潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率比較正常對(duì)照組無潰瘍發(fā)生．與模型對(duì)照組相比，硫糖鋁組（P＜0．05）和低（P＜0．05）、中（P＜0．01）、高濃度（P＜0．01）蘆薈多糖預(yù)處理組的潰瘍指數(shù)明顯降低；硫糖鋁，低、中、高濃度蘆薈多糖組均對(duì)胃潰瘍有較高的抑制率，且蘆薈多糖的濃度越高，抑制率越高．與硫糖鋁保護(hù)組相比，盡管低、中、高濃度蘆薈多糖組小鼠的胃粘膜潰瘍指數(shù)下降更加明顯，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05，表1）．

2.2 胃粘膜組織外觀正常對(duì)照組小鼠胃粘膜光滑，無潰瘍、糜爛及出血點(diǎn)．模型組胃粘膜充血、水腫，出血明顯，可見糜爛面和潰瘍形成．各用藥組可見胃粘膜結(jié)構(gòu)較為完整，出血點(diǎn)明顯減少（圖1）．

圖1 小鼠的胃粘膜外觀

2.3 組織病理學(xué)改變鏡下可見正常對(duì)照組小鼠胃的粘膜層、固有層、肌層結(jié)構(gòu)完整連續(xù)，腺體排列緊密，未見粘膜充血、出血；模型對(duì)照組粘膜結(jié)構(gòu)紊亂，失去完整性及連續(xù)性，部分區(qū)域粘膜上皮層缺失，腺體排列疏松，腺體細(xì)胞水腫，可見粘膜下層出血及炎性細(xì)胞浸潤；硫糖鋁和蘆薈多糖組胃粘膜損傷明顯減輕，上皮基本完整，腺體排列較整齊，未見炎性細(xì)胞浸潤，胃粘膜充血較輕微（圖2）．

圖2 各組小鼠胃粘膜組織病理學(xué)改變

3 討論

本研究阿司匹林致小鼠胃潰瘍的發(fā)生率為100%，潰瘍指數(shù)為實(shí)驗(yàn)研究的觀測指標(biāo)，阿司匹林通過抑制環(huán)氧酶（cyclcoxygenase，COX），從而抑制前列腺素的合成，發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛、抗炎抗風(fēng)濕的作用，但同時(shí)由于抑制了胃黏膜的COX?1，減少前列腺素的合成，使得碳酸氫鹽和黏液的分泌減少，減弱胃黏膜保護(hù)屏障，導(dǎo)致消化性潰瘍的發(fā)生［2，12］．此外，阿司匹林對(duì)胃酸分泌的影響也可能是導(dǎo)致胃潰瘍發(fā)生的原因之一［13－14］．阿司匹林導(dǎo)致的潰瘍?cè)谂R床上比較常見，可以引起大出血、穿孔，甚至死亡，這在很大層面上限制了阿司匹林在臨床上的應(yīng)用［15］．蘆薈作為一種古老的常用中藥，從傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)都對(duì)蘆薈的藥用價(jià)值和保健功能給予充分的肯定［16－17］．有研究［3，18－19］表明，蘆薈多糖在抗?jié)兎矫嬉舶l(fā)揮著重要的作用，蘆薈多糖可通過增加內(nèi)皮生長因子（endothelial growth factor，EGF）的表達(dá)來增強(qiáng)胃粘膜清除自由基的能力，促進(jìn)損傷胃粘膜的修復(fù)過程［4］．此外，由于蘆薈多糖具有黏性，可附著于潰瘍表面形成一層保護(hù)膜，防止和減少胃酸對(duì)黏膜的刺激［6］．本研究觀察到經(jīng)蘆薈多糖處理過的小鼠點(diǎn)狀潰瘍、線狀潰瘍明顯降低，總潰瘍指數(shù)降低，潰瘍抑制率達(dá)到84．93%，表明蘆薈多糖能抑制阿司匹林導(dǎo)致的小鼠胃潰瘍，促進(jìn)胃黏膜損傷的愈合，明顯改善胃黏膜病變．由此可見，蘆薈多糖對(duì)阿司匹林導(dǎo)致的潰瘍有明顯的預(yù)防作用．

本研究在前人研究成果的基礎(chǔ)上，應(yīng)用阿司匹林型小鼠胃潰瘍模型來探索蘆薈多糖的抗?jié)冏饔茫Y(jié)果顯示，蘆薈多糖組潰瘍指數(shù)明顯下降，其中中、高劑量的蘆薈多糖組潰瘍指數(shù)降低程度更甚（P＜0．01）．這表明蘆薈多糖對(duì)阿司匹林所致的胃潰瘍模型具有良好的預(yù)防作用；相同劑量給藥的蘆薈多糖對(duì)該模型的預(yù)防作用略優(yōu)于硫糖鋁，且鑒于蘆薈的制備和使用方法簡單方便、價(jià)格便宜、副作用少等優(yōu)點(diǎn)，該結(jié)果預(yù)示著蘆薈多糖可能有更好的臨床實(shí)用價(jià)值．

已有研究［7］表明，蘆薈多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎腸粘膜具有良好的保護(hù)作用．以往研究多采用胃粘膜急性損傷來建造胃潰瘍模型，這不符合臨床長期使用阿司匹林引起胃潰瘍的情況，因此，本研究建立并優(yōu)化阿司匹林致小鼠胃潰瘍的慢性模型，對(duì)于預(yù)防阿司匹林致小鼠胃潰瘍的研究起重要作用，更貼近臨床．除此以外，本研究設(shè)置了空白陰性對(duì)照組以及硫糖鋁陽性對(duì)照組，在充分排除隨機(jī)誤差的前提下以解剖鏡下胃黏膜的潰瘍個(gè)數(shù)和潰瘍指數(shù)為指標(biāo)，以病理組織切片的結(jié)果為依據(jù)探究蘆薈多糖對(duì)胃潰瘍的預(yù)防作用以及不同濃度下的差異，以期得出更為客觀的結(jié)論．

綜上所述，蘆薈多糖具有抗阿司匹林所致胃潰瘍的作用，這為蘆薈多糖與阿司匹林的聯(lián)合用藥提供了理論依據(jù)．但其二者之間的最佳濃度配伍仍有待進(jìn)一步探究．蘆薈多糖對(duì)阿司匹林所致的胃潰瘍的保護(hù)作用可能是多種作用的綜合效果，不僅對(duì)胃黏膜表面起保護(hù)作用，也可直接對(duì)胃酸分泌、胃蛋白酶分泌等致潰瘍因素有抑制作用，提高胃液pH值，促進(jìn)潰瘍愈合［20］，但其組織細(xì)胞及分子水平的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究．

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The preventive effect of aloe polysaccharides on gastric ulcer in mice induced by aspirin

LIU Wen?Jie，WANG Yao?Hui，CHEN Gui?Xing，ZENG Ting?Ting，CHEN Xue?Man，YANG Si?Si，ZANG Ying
Department of Pathophysiology，Zhongshan School of Medical，Sun Yat?sen University，Guangzhou 510080，China

AIM：To investigate the preventive effect of aloe polysaccharides on gastric ulcer in mice induced by aspirin．METHODS：The model of chronic gastric ulcer caused by gavage of aspirin was established．The mice were randomly divided into 6 groups，including normal control group，model group，aloe poly?saccharides preconditioning groups（including low?dose，middle?dose and high?dose group）and sucralfate preconditioning group．The ulcer index of mice were measured in per groups，and the ulcer incidence and inhibition rate of gastric ulcers were calculated．Through gross appearance and histological changes under the microscope，the injury severity of gastric ulcer induced by aspirin and preventive effect of aloe polysaccharides on gastric ulcers were evaluated．RESULTS：Ulcer indexes of aloe polysaccharides preconditioning groups were obviously lower than those of model control，with statistically significant differences（P＜0．05）．The more the aloe polysaccharides dosage，the lower ulcer indexes and the higher rate of inhibition of gastric ulcer were，which was dose related．Compared with sucralfate preconditioning group，Ulcer indexes were reduced significantly in aloe polysaccharides precon?ditioning groups，with no statistically significant differences（P＞0．05）．CONCLUSION：The preconditioning of aloe polysaccha?rides has significant preventive effect on gastric ulcer in mice induced by aspirin，and its effect is comparable with sucralfate．

gastric ulcer；aloe polysaccharides；sucralfate；aspirin

R573．1

A

2095?6894（2017）03?30?03

2016－12－15；接受日期：2017－01－06

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81371228）；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012B031800254）；廣東省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（S2013010016647）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助（16ykjc02）

劉文杰．博士．E?mail：sysuliuwenjie＠163．com

臧 穎．博士，副教授，碩士生導(dǎo)師．E?mail：yingzang＠163．com