劉永 闞積香 郭仕峰

·論著·

DC-CIK生物療法聯(lián)合索拉非尼對原發(fā)性肝癌患者療效及免疫功能的影響

劉永 闞積香 郭仕峰

DC-CIK；索拉非尼；原發(fā)性肝癌；免疫功能

原發(fā)性肝癌(primarylivercancer，PLC)是我國常見的腫瘤之一，由多種因素引起，具有病程短、起病隱匿等特點，而且患者常伴有不同程度的免疫缺陷，病死率高，嚴重威脅人類的生命安全。原發(fā)性肝癌治療主要是手術法，但該法預后差、復發(fā)率高，導致治療效果不理想。生物治療是繼手術、放療、化療之后的一種新型腫瘤治療方法，具有殺瘤譜廣、殺瘤活性高等優(yōu)勢，已成為研究的熱點。目前多采用細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokineinducedkiuer，CIK)、體內(nèi)回輸突狀細胞(dendriticcell，DC)等生物治療腫瘤。索拉非尼是一種多靶點靶向治療腫瘤的新藥，為VEGF及其受體的多激酶抑制劑，能夠抑制腫瘤的復發(fā)和轉(zhuǎn)移，提高肝癌的遠期治療效果[1,2]。研究發(fā)現(xiàn)索拉非尼聯(lián)合多種治療手段的綜合治療模式可提高晚期肝癌的療效[3]，但關于DC-CIK生物療法聯(lián)合索拉非尼治療原發(fā)性肝癌的研究較少。本研究旨在探討DC-CIK生物療法聯(lián)合索拉非尼對原發(fā)性肝癌患者的治療效果及免疫功能的影響，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2016年4月到本院腫瘤科就診的原發(fā)性肝癌患者78例，隨機分為對照組和觀察組，每組39例。所有患者經(jīng)影像學確診為原發(fā)性肝癌(參照《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》)。對照組男27例，女12例；年齡35～76歲，平均年齡(49.6±8.7)歲；合并乙型肝炎后肝硬化28例，合并門靜脈高壓11例；患者肝功能分級均為Child-A級，甲胎蛋白(AFP)<5μg/ml者2例，<400μg/ml者24例，≥400μg/ml者13例。觀察組包括男30例，女9例；年齡31～80歲，平均年齡(51.9±9.6)歲。合并乙型肝炎后肝硬化27例，合并門靜脈高壓12例；患者肝功能分級均為Child-A級，甲胎蛋白(AFP)<5μg/ml者4例，<400μg/ml者25例，≥400μg/ml者10例。2組患者年齡、性別比、病程等一般資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①診斷為中晚期原發(fā)性肝癌；②能持續(xù)口服索拉非尼3個月以上；③未使用激素類藥物和免疫抑制劑。

1.2.2 排除標準：①轉(zhuǎn)移性肝癌；②嚴重功能腎衰竭、糖尿病等。

1.3 方法

1.3.1 CIK細胞的分離培養(yǎng)：根據(jù)磁共振顯像結(jié)果確定腫瘤的大小，采集患者外周血，抗凝處理后，血細胞分離機(CS3000)分離外周血單個核細胞后，再加入淋巴細胞分層液，梯度離心，PBS緩沖液洗3次，進一步分離純化外周血單個核細胞(純度≥90%，數(shù)量1×108～3×108)。血細胞計數(shù)后，調(diào)整細胞濃度為1×106/ml，接種到含有1 000 U/ml rh-干擾素的無血清培養(yǎng)液中，第2天向培養(yǎng)液中分別加入50 μg/ml CD3單抗、100 U/ml IL-2，每隔2～3 d換1次培養(yǎng)液，培養(yǎng)20 d。每周測2次白細胞增殖率，當陽性細胞達到85%進行細胞治療。

1.3.2 DC細胞的分離培養(yǎng)：將獲得的外周血單核細胞移至培養(yǎng)皿中培養(yǎng)2 h，使其貼壁，后棄去上清，加入無血清的培養(yǎng)基，加入100 ng/ml巨噬細胞集落刺激因子、500 U/ml IL-4，37℃、5%CO2培養(yǎng)，第5天加入500 U/ml rh-干擾素，第7天收集懸浮的DC，無菌檢驗合格后，進行細胞治療。

1.4 治療方法 對照組：采用索拉非尼(德國Bayer Pharma AG，注冊證號H20130137)治療，飯前口服0.4 g/次，2次/d，4周1個療程，連續(xù)治療3個療程。觀察組：在對照組基礎上，間隔2周以上回輸CIK細胞和DC細胞，每周2～3次，每次回輸CIK細胞1×1010～1×1012個，DC細胞1×109～1×1010個，4周1個療程，連續(xù)治療3個療程。

2 結(jié)果

2.1 DC-CIK細胞培養(yǎng)結(jié)果 DC-CIK細胞1～3 d增殖較慢，處于潛伏期，4～6 d增殖較快，處于對數(shù)生長期，8 d以后細胞數(shù)目趨于穩(wěn)定。DC-CIK細胞比單純CIK細胞的增殖速度更快，培養(yǎng)至第25天時DC-CIK細胞的增殖倍數(shù)為1 300，CIK細胞的增殖倍數(shù)為150。

2.2 臨床治療效果 觀察組患者治療后腫瘤總緩解率(48.71%)顯著高于對照組(23.08%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者病情緩解情況 n=39,例(%)

注: 與對照組比較，*P<0.05

免疫指標治療前對照組觀察組治療后對照組觀察組2組治療后比較t值P值CD+342.13±7.6941.65±7.5244.56±8.2470.96±9.63*#13.0080.000CD+422.87±3.1323.14±3.1125.61±3.7836.58±8.03*#7.7190.000CD+821.25±2.1620.47±2.3623.41±2.3429.23±3.12*#9.3190.000CD+4/CD+81.08±0.121.04±0.151.05±0.131.24±0.16*#5.7560.000CD+165.41±0.395.76±0.456.14±0.7110.24±1.13*#14.5060.000CD+5623.68±2.3424.02±3.2726.10±3.8930.25±5.41*#3.8890.000

注: 與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

2.4 不良反應 觀察組患者發(fā)生低熱5例，發(fā)生高熱3例，持續(xù)時間3～6h，自行消退，發(fā)生皮疹10例，發(fā)生惡心、嘔吐4例。對照組患者發(fā)生低熱3例，發(fā)生高熱2例，自行消退，發(fā)生皮疹7例，發(fā)生惡心、嘔吐5例，2組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

PLC作為一種常見惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已成為嚴重危害人體健康的惡性疾病。由于PLC發(fā)病較隱匿，患者初期并無任何不適感，且相關癥狀易被忽視，而當患者覺察機體有不適癥狀時，多數(shù)已

進入中晚期，中晚期肝癌患者免疫功能受抑制，其免疫調(diào)節(jié)機制紊亂，并以疼痛、乏力、腹水、食欲不振等為臨床主要表現(xiàn)[5]。同時，免疫應答及啟動應答方面存在一定缺陷，而肝切除等手術治療并不能達到滿意效果，隨著免疫分子與細胞生物學技術的不斷成熟，PLC治療方法也從單一手術或藥物治療逐漸發(fā)展為多模式聯(lián)合治療，DC與CIK生物療法聯(lián)合索拉非尼等抗腫瘤藥物為PLC患者提供了新的腫瘤治療途徑，該療法可通過生物技術與生物反應調(diào)節(jié)劑，向腫瘤患者體內(nèi)回輸免疫細胞，增強其自身免疫功能，并最終達到抑制及殺死腫瘤細胞的目的[6]。DC-CIK療法通過向腫瘤患者體內(nèi)回輸免疫細胞，使機體的免疫力增強，從而達到治療腫瘤的目的。DC是人體內(nèi)抗原呈遞細胞，通過識別、處理抗原來激活機體的免疫系統(tǒng)。CIK細胞是腫瘤殺傷細胞，主要通過自身細胞毒性及細胞因子來發(fā)揮抗腫瘤作用。DC-CIK共同培養(yǎng)時，能增強CIK細胞的增殖能力、殺傷活性以及DK的功能，從而提高治療效果[6]。索拉非尼與傳統(tǒng)治療腫瘤的不同，主要作用是控制藥物生長，可以實現(xiàn)患者的“帶瘤生存”[7]。

綜上所述，采用DC-CIK生物療法聯(lián)合索拉非尼治療，能提高FLC患者的免疫功能，療效顯著且不良反應可以控制，但由于本研究所選病例數(shù)量及療效觀察時間有限，存在一定不足，對于如何建立更規(guī)范有效的DC-CIK生物療法以及與索拉非尼治療相匹配的方案，以降低FLC患者治療費用，進一步保證患者的治療效果并提高生活質(zhì)量，仍是臨床亟需解決的問題。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.08.033

276400 山東省沂水縣人民醫(yī)院(劉永、闞積香)；山東省沂水中心醫(yī)院(郭仕峰)

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1002-7386(2017)08-1234-03

2016-10-29)