李 潔， 丁重陽(yáng)*， 顧正華， 張 梁， 石貴陽(yáng)

（1.江南大學(xué) 生物工程學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122；2.江南大學(xué) 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫214122）

混合碳源對(duì)靈芝多糖發(fā)酵及其抗腫瘤活性的影響

李 潔1，2， 丁重陽(yáng)*1，2， 顧正華1，2， 張 梁1，2， 石貴陽(yáng)2

（1.江南大學(xué) 生物工程學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122；2.江南大學(xué) 糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫214122）

為了高效生產(chǎn)活性靈芝多糖，以葡萄糖液體發(fā)酵的基本碳源，同時(shí)添加兩種靈芝多糖的主要單糖組分——半乳糖和甘露糖，研究混合碳源對(duì)靈芝生長(zhǎng)、多糖合成及其抗腫瘤活性的影響。結(jié)果表明，以不同的混合碳源作為靈芝液態(tài)發(fā)酵的碳源，發(fā)現(xiàn)不同比例的單糖碳源對(duì)靈芝多糖產(chǎn)量和生物量影響較小。不同的靈芝多糖劑量對(duì)皮膚基底癌細(xì)胞A431和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖均有抑制作用，碳源比例對(duì)靈芝多糖活性影響較大。葡萄糖和半乳糖以質(zhì)量濃度比1∶1作碳源時(shí)抑制率可達(dá)到50%～60%；葡萄糖和半乳糖質(zhì)量濃度比1∶2作碳源時(shí)抑制率可達(dá)到75%～85%；葡萄糖和甘露糖質(zhì)量濃度比1∶1作碳源時(shí)抑制率可達(dá)到60%～65%；葡萄糖和甘露糖質(zhì)量濃度比1∶2作碳源時(shí)抑制率可達(dá)到80%～85%；葡萄糖、半乳糖和甘露糖質(zhì)量濃度比1∶1∶1作碳源時(shí)抑制率可達(dá)到80%～85%。初始培養(yǎng)基中半乳糖和甘露糖所占比例大有利于靈芝多糖抗腫瘤活性的發(fā)揮。

靈芝；靈芝多糖；抗腫瘤活性

靈芝（Ganoderma lucidum）是擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌[1]，在古代靈芝被尊稱為神芝、仙草，是具有營(yíng)養(yǎng)保健和藥用價(jià)值的大型擔(dān)子菌之一。近年來(lái)隨著人們生活品質(zhì)的提升，利用食藥用真菌的保健作用越來(lái)越受到關(guān)注，而靈芝是較早進(jìn)行相關(guān)研究的食藥用真菌。靈芝中含有多種具有生物活性的物質(zhì)，其中靈芝胞外多糖（Exopolysaccharides）是靈芝中最主要的有效活性物質(zhì)之一。1948年，Humfeld等人首次利用液態(tài)發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)蕈菌（Agaricus camPestris），率先提出了用液體發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)菌絲體[2]。經(jīng)過(guò)多年液態(tài)發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展，目前關(guān)于靈芝液態(tài)發(fā)酵條件對(duì)產(chǎn)物合成和菌體生長(zhǎng)的影響已有較多研究，培養(yǎng)基組成中碳源對(duì)靈芝多糖的影響尤為明顯。從多糖到二糖再到單糖有關(guān)靈芝碳源的研究有很多。Degeest等[3]在研究多種碳源對(duì)嗜熱鏈球菌多糖產(chǎn)量的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)葡萄糖和乳糖有利于菌體代謝和多糖合成，加入半乳糖不利于多糖產(chǎn)量積累。Hsieh等人的研究結(jié)果也表明，以葡萄糖作為碳源時(shí)，靈芝胞外多糖產(chǎn)量隨著葡萄糖濃度升高而升高[4]。靈芝多糖作為靈芝的主要活性物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)免疫[5]、抗氧化作用[6]、抗腫瘤作用[7]、抗衰老等作用，但目前對(duì)靈芝多糖的研究多集中在提高多糖產(chǎn)量、分析多糖結(jié)構(gòu)[8-9]等，較少關(guān)注發(fā)酵條件尤其是培養(yǎng)基組成對(duì)其生物活性的影響。本文中通過(guò)改變培養(yǎng)基中碳源的組成，以不同單糖組成為混合碳源考察其對(duì)靈芝菌體生長(zhǎng)、胞外多糖合成及其抗腫瘤活性的影響，以期利用外源條件調(diào)控多糖的性質(zhì)與生物活性，為高活性多糖的發(fā)酵生產(chǎn)提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種和試劑 靈芝（G.lucidum）菌株，由江南大學(xué)糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室保藏；皮膚基底癌細(xì)胞A431和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，由江南大學(xué)糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保藏。

無(wú)氨基酵母氮源（YNB），購(gòu)自拜爾迪公司；胰蛋白胨（Tryptone），購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司；胎牛血清（FBS），胰蛋白酶，DMEM液體培養(yǎng)液，美國(guó)Hyclone公司產(chǎn)品；雙抗（1×penicillin/streptomycin），購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)。

1.1.2 培養(yǎng)基

1）PDA斜面培養(yǎng)基 （g/L）：土豆200，葡萄糖20，瓊脂條20～22。

2）種子和發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：碳源20，胰蛋白胨5，無(wú)氨基酵母5，KH2PO43，MgSO4·7H2O2；pH 6.0，種子及發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌條件為110℃滅菌20 min，碳源單獨(dú)滅菌后加入培養(yǎng)基。

3）DMEM完全培養(yǎng)基：DMEM培養(yǎng)液，其中含有體積分?jǐn)?shù)10%的胎牛血清與體積分?jǐn)?shù)1%的雙抗。

1.1.3 儀器和設(shè)備 SHI-D型循環(huán)水式真空泵，鞏義市英峪予華儀器廠產(chǎn)品；HYG-C型旋轉(zhuǎn)式搖床，太倉(cāng)市強(qiáng)樂(lè)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)，蘇州安泰凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品；全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋，日本SANYO公司產(chǎn)品；SDX-808型恒溫培養(yǎng)箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；冷凍干燥機(jī)，美國(guó)Labconco公司產(chǎn)品；顯微鏡，順宇光學(xué)科技公司產(chǎn)品；iMarkTM型酶標(biāo)儀，美國(guó)Bio-Rad公司產(chǎn)品；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇榮華儀器制造有限公司產(chǎn)品；MCO-18AIC型細(xì)胞培養(yǎng)箱，日本SANYO公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 液體發(fā)酵培養(yǎng) 種子培養(yǎng)時(shí)，往250 mL的三角瓶里加入80 mL的種子培養(yǎng)基，高壓滅菌，待培養(yǎng)基冷卻后，從菌種斜面中取4塊0.5 cm2大小的活化菌種接入三角瓶?jī)?nèi)，在150 r/min、30℃條件下培養(yǎng)10 d。發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，往含有150 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的500 mL的三角瓶中加入種子，接種量為2 mL菌體勻漿，在150 r/min、30℃條件下培養(yǎng)10 d。

1.2.2 離子色譜測(cè)定碳源消耗速率

1）色譜條件：色譜柱CarboPac PA20陰離子交換柱，包括分析柱（2 mm×200 mm）和保護(hù)柱（2 mm× 50 mm）。

2）淋洗條件：采用梯度洗脫流速，以250 mmol/L NaOH和CH3COONa為淋洗液進(jìn)行梯度洗脫，體積流量為0.5 mL/min。

回歸模型通過(guò)響應(yīng)面法得到最優(yōu)山羊發(fā)酵乳產(chǎn)肽工藝條件為菌種添加量4.31%，后熟時(shí)間10.99 h，發(fā)酵時(shí)間9.54 h?？紤]實(shí)際操作情況與設(shè)備參數(shù)狀況，確定山羊發(fā)酵乳產(chǎn)肽工藝條件為：菌種添加量4%，后熟時(shí)間11 h，發(fā)酵時(shí)間9.5 h，山羊發(fā)酵乳水解度預(yù)測(cè)值8.69%。在上述最佳條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得到山羊發(fā)酵乳水解度平均值9.43%，與理論值接近。

3）檢測(cè)器：脈沖安培檢測(cè)器。

1.2.3 體外腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制分析

1）培養(yǎng)細(xì)胞：本試驗(yàn)中選取皮膚基底癌細(xì)胞A431和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231兩株細(xì)胞，用DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，在體積分?jǐn)?shù)5%CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁率達(dá)80%，然后用胰蛋白酶消化配制成每毫升培養(yǎng)基中含有4×104個(gè)細(xì)胞濃度的細(xì)胞懸浮液。

2）鋪板：以每孔100 μL細(xì)胞懸浮液的量加入到96孔板中，空白組中加等體積的DMEM完全培養(yǎng)基。將96孔板置體積分?jǐn)?shù)5%CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

3）加樣：將96孔板中原來(lái)的培養(yǎng)基除去，分別加入不同劑量的DMEM培養(yǎng)基配制的多糖樣品100 μL，每個(gè)樣品設(shè)6個(gè)復(fù)孔?？瞻捉M更換新的DMEM培養(yǎng)基。加樣后繼續(xù)在37℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時(shí)間。隨后加入噻唑藍(lán)（MTT），繼續(xù)于37℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h。

4）檢測(cè)：移去96孔板中的所有培養(yǎng)基，向每孔內(nèi)加入二甲基亞砜（DMSO）150 μL，反復(fù)吹吸后，在雙波長(zhǎng)595 nm（檢測(cè)波長(zhǎng)）和655 nm（參考波長(zhǎng)）酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔的吸光值A(chǔ)。按照式（1）計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。

其中，P為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；A0為對(duì)照組吸光組；A1為空白組吸光組；A2為實(shí)驗(yàn)組吸光組。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖和半乳糖混合碳源對(duì)靈芝生長(zhǎng)和多糖合成的影響

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在細(xì)胞增殖和代謝產(chǎn)物的生物合成過(guò)程中具有重要作用，不同種類及不同質(zhì)量濃度的碳源均能造成微生物生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的差異。在之前研究靈芝液態(tài)發(fā)酵時(shí)發(fā)現(xiàn)，以葡萄糖為單一碳源時(shí)靈芝合成的多糖中主要單糖為葡萄糖、半乳糖和甘露糖[10]。因此，在葡萄糖為基本碳源的條件下，加入另外兩種靈芝多糖的主要單糖，考察混合碳源對(duì)靈芝生長(zhǎng)和多糖合成的影響。以不同比例葡萄糖和半乳糖為碳源進(jìn)行液體發(fā)酵后 （見(jiàn)圖1），結(jié)果顯示不同比例的葡萄糖和半乳糖對(duì)菌體生長(zhǎng)和多糖產(chǎn)量的影響基本相同。對(duì)菌體生長(zhǎng)而言，在經(jīng)過(guò)前兩天的生長(zhǎng)適應(yīng)期后，菌體量從第3天開始加速生長(zhǎng)并在第7天平緩增加；對(duì)多糖質(zhì)量濃度的影響為接種后多糖質(zhì)量濃度會(huì)先有小幅下降，然后在第6天質(zhì)量濃度達(dá)到最高，葡萄糖和半乳糖質(zhì)量濃度比例為1∶1和1∶2時(shí)分別為0.51 g/L和0.55 g/L，在達(dá)到最高后，多糖質(zhì)量濃度開始下降，至發(fā)酵結(jié)束時(shí)（第10天）分別為0.17 g/L和0.08 g/L。

圖1 葡萄糖和半乳糖作為碳源對(duì)靈芝菌體干重和靈芝多糖產(chǎn)量的影響Fig.1 Effects of different ratios of glucose to galactose as carbon source on G.lucidum biomass and EPS production

由于不同比例的葡萄糖和半乳糖對(duì)菌體生長(zhǎng)和多糖質(zhì)量濃度的影響并不具有明顯的差異，因此在發(fā)酵過(guò)程中對(duì)兩種碳源的質(zhì)量濃度進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果（見(jiàn)圖2）顯示，以葡萄糖和半乳糖為碳源時(shí)，兩種碳源質(zhì)量濃度在不同混合比例中下降速度差別不明顯，說(shuō)明靈芝對(duì)兩種碳源的吸收利用是同時(shí)進(jìn)行，同時(shí)半乳糖質(zhì)量濃度高于葡萄糖時(shí)對(duì)靈芝菌體量和多糖質(zhì)量濃度的影響無(wú)明顯差異，說(shuō)明碳源的混合使用不影響靈芝的利用。

圖2 葡萄糖和半乳糖作為碳源發(fā)酵過(guò)程中碳源的消耗Fig.2 Consumption of glucose and galactose as carbon sources during G.lucidum fermentation

2.2 葡萄糖和甘露糖混合碳源對(duì)靈芝生長(zhǎng)和多糖合成的影響

以葡萄糖和甘露糖為組合碳源時(shí)，靈芝菌體生物量和胞外多糖質(zhì)量濃度的變化規(guī)律見(jiàn)圖3，結(jié)果顯示葡萄糖和甘露糖質(zhì)量濃度比1∶1混合碳源對(duì)靈芝生長(zhǎng)和胞外多糖質(zhì)量濃度的影響與葡萄糖和半乳糖混合時(shí)相類似，但菌體生物量在發(fā)酵前期沒(méi)有出現(xiàn)適應(yīng)期，從開始便呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，在發(fā)酵結(jié)束時(shí)菌體生物量分別達(dá)到9.35 g/L和8.05 g/L；胞外多糖質(zhì)量濃度在發(fā)酵前期有明顯的下降趨勢(shì)，從第3天開始增加到第6天達(dá)到最高，葡萄糖和甘露糖質(zhì)量濃度比例為 1∶1和 1∶2時(shí)分別為 0.53 g/L、0.55 g/L。測(cè)定發(fā)酵過(guò)程中葡萄糖和甘露糖的質(zhì)量濃度時(shí)發(fā)現(xiàn)，靈芝對(duì)這兩種碳源的利用速率基本一致，在發(fā)酵過(guò)程中葡萄糖和甘露糖都可以得到充分利用（見(jiàn)圖4）。Jeong S K[11]等選取多種碳源其中包括葡萄糖、甘露糖和半乳糖，對(duì)蛹蟲草深層發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分別以葡萄糖和甘露糖為碳源時(shí)菌體生物量最終積累量和多糖質(zhì)量濃度基本一樣，以半乳糖為碳源時(shí)多糖質(zhì)量濃度低。這也說(shuō)明菌體對(duì)葡萄糖和甘露糖的吸收和利用水平相當(dāng)。

圖3 葡萄糖和甘露糖作為碳源對(duì)靈芝菌體干重和靈芝多糖產(chǎn)量的影響Fig.3 Effect of glucose and mannose as carbon sources on G.lucidum biomass and EPS yield

圖4 葡萄糖和甘露糖作為碳源發(fā)酵過(guò)程中碳源的消耗Fig.4 Consumption of glucose and galactose as carbon sources during G.lucidum fermentation

2.3 葡萄糖、半乳糖和甘露糖混合碳源對(duì)靈芝生長(zhǎng)代謝的影響

葡萄糖、半乳糖和甘露糖質(zhì)量濃度比為1∶1∶1作為碳源時(shí)，靈芝菌體在第5天胞外多糖質(zhì)量濃度達(dá)到最高值0.57 g/L，菌體生物量最高達(dá)到9.88 g/L（見(jiàn)圖5）。與葡萄糖和半乳糖、葡萄糖和甘露糖兩種混合方式相比，多糖質(zhì)量濃度在不同碳源混合發(fā)酵過(guò)程中并無(wú)明顯差異，僅在菌體量方面表現(xiàn)出一定差異。Jonathan等[12]在比較不同碳源（葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、鼠李糖等）對(duì) Psathyerella atroumbonata藥食用真菌生物量的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，葡萄糖是菌體最喜愛(ài)的碳源，其次為甘露糖，半乳糖較差。圖6為葡萄糖、半乳糖和甘露糖質(zhì)量濃度比1∶1∶1作為碳源發(fā)酵過(guò)程中碳源的消耗。在發(fā)酵過(guò)程中，3種碳源的質(zhì)量濃度基本一直在下降，葡萄糖和甘露糖下降速度相當(dāng)，半乳糖下降速度較慢。

圖5 葡萄糖、半乳糖和甘露糖（質(zhì)量濃度比為1∶1∶1）作為碳源對(duì)靈芝菌體干質(zhì)量和靈芝多糖產(chǎn)量的影響Fig.5 Effect of glucose，galactose and mannose（1∶1∶1）as carbon sources on G.lucidum biomass and EPS yield

圖6 葡萄糖、半乳糖和甘露糖（質(zhì)量濃度比為1∶1∶1）作為碳源發(fā)酵過(guò)程中碳源的消耗Fig.6 Consumption of glucose，galactose and mannose（1∶1∶1）as carbon sources during G.lucidum fermentation

2.4 靈芝胞外多糖的抗腫瘤活性

近年來(lái)對(duì)多種真菌多糖的研究發(fā)現(xiàn)，多糖在單糖組成、相對(duì)分子質(zhì)量等方面的不同會(huì)導(dǎo)致其生物活性也會(huì)有所差異[13]。靈芝多糖的單糖構(gòu)成中，常見(jiàn)的有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸和阿拉伯糖[14]，而之前的研究中發(fā)現(xiàn)本試驗(yàn)所用的靈芝單糖組分主要為葡萄糖、甘露糖和半乳糖。目前研究碳源對(duì)多糖產(chǎn)量的報(bào)道較多，但很少有研究關(guān)注碳源對(duì)靈芝多糖活性影響的報(bào)道。本研究中以不同混合碳源條件下獲得的靈芝胞外多糖作為加樣多糖，檢測(cè)了不同碳源下獲得的靈芝多糖對(duì)皮膚基底癌細(xì)胞A431和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的抑制率。

選用同一發(fā)酵階段不同培養(yǎng)基組合條件下獲得的靈芝多糖作為加樣多糖，使用DMEM完全培養(yǎng)基將其分別配成3個(gè)質(zhì)量濃度梯度。檢測(cè)其對(duì)皮膚基底癌細(xì)胞A431和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的抑制率，見(jiàn)圖7。

圖7 不同混合碳源下，獲得的靈芝多糖對(duì)A431和MDAMB-231的抑制作用Fig.7 Effects of different carbon sources on anti-tumor activity of G.lucidum EPS against the growth A431 and MDA-MB-231 cells

結(jié)果顯示，不同混合碳源條件下得到的多糖在不同質(zhì)量濃度中對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率顯現(xiàn)出明顯差異，其中在葡萄糖與半乳糖和甘露糖分別以質(zhì)量濃度比1∶2和1∶1∶1比例混合下獲得的多糖活性最高，同時(shí)隨著多糖質(zhì)量濃度的增加對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率都有明顯的增加，在2 g/L質(zhì)量濃度下兩種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率可以達(dá)到80%左右。Lee等[15]也曾報(bào)道培養(yǎng)基碳源種類不同對(duì)P.linteus的多糖的活性的影響較大，當(dāng)以甘露糖或淀粉為碳源時(shí)，獲得的多糖的免疫調(diào)節(jié)活性要比葡萄糖作為碳源時(shí)多糖的活性高出1.5倍。喬等[16]在研究液體發(fā)酵條件對(duì)靈芝菌體形態(tài)及胞外多糖活性的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)pH、培養(yǎng)溫度、轉(zhuǎn)速對(duì)靈芝多糖抗腫瘤活性都會(huì)產(chǎn)生影響。Peng[17]等研究發(fā)現(xiàn)，含有一定比例的半乳糖及蛋白質(zhì)的靈芝多糖擁有較高的抗腫瘤活性。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果也表明，培養(yǎng)基中半乳糖和甘露糖所占比例高有益于靈芝多糖抗腫瘤活性的發(fā)揮。半乳糖和甘露糖的加入提高了靈芝多糖的抗腫瘤活性。

3 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)，隨著對(duì)靈芝研究的不斷深入，靈芝多糖的合成和生物活性已引起生物化學(xué)領(lǐng)域和醫(yī)藥界的普遍關(guān)注。Yang[18]發(fā)現(xiàn)向培養(yǎng)基中添加植物油能夠刺激靈芝的菌體生長(zhǎng)及多糖的積累。Tang等[19]在研究培養(yǎng)條件對(duì)靈芝多糖和靈芝酸產(chǎn)量的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)乳糖有利于靈芝菌體生長(zhǎng)，而蔗糖有利于靈芝多糖產(chǎn)量的提高。作者通過(guò)控制培養(yǎng)基碳源組合和比例，研究了菌體對(duì)培養(yǎng)基初始碳源的利用率和不同碳源組合對(duì)靈芝多糖質(zhì)量濃度和菌體生物量的影響，并且研究了不同培養(yǎng)基組合條件下獲得的靈芝多糖對(duì)皮膚基底癌細(xì)胞A431和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的抗腫瘤活性。雖然混合碳源對(duì)靈芝多糖質(zhì)量濃度沒(méi)有影響，但是對(duì)多糖的生物活性產(chǎn)生了影響，培養(yǎng)基中半乳糖和甘露糖所占比例高有益于靈芝多糖抗腫瘤活性的發(fā)揮。因此，在今后的研究中不能只關(guān)注多糖質(zhì)量濃度的提高，如何生產(chǎn)出穩(wěn)定的高活性的多糖才是最主要的目標(biāo)。

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Effects of Mixed Carbon Sources on Production and Antitumor Activity of Ganoderma lucidum Exopolysaccharides by Submerged Culture

LI Jie1，2， DING Zhongyang*1，2， GU Zhenghua1，2， ZHANG Liang1，2， SHI Guiyang2
（1.School of Biotechnology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；2.National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

To enhance production and activity of G.lucidum exopolysaccharides（EPS），a mixed carbon source containing glucose，galactose and mannose was applied and effects of mixed carbon sources on cell growth，EPS composition and antitumor activity were studied.Results showed that dry cell weight and EPS production were slightly affected by the ratio and type of monosaccharides. Anti-tumor activity analysis of G.lucidum EPS indicated that the raise of EPS concentration increased its biological activity.The inhibition reached up to 50%～60%with the ratio of glucose to galactose 1∶1 as carbon source，75%～85%with the ratio of glucose to galactose 1∶2，60%～65%withthe ratio of glucose to mannose 1∶1，80%～85%with the ratio of glucose to mannose 1∶2 and 80%～85%with the same concentrations for three monosaccharides.The high ratio of galactose or mannose in culture medium was beneficial to the anti-tumor activity of EPS against the growth of A431and MDA-MB-231 cells.

Ganoderma lucidum，exopolysaccharides，anti-tumor activity

TQ 281

A

1673—1689（2017）02—0129—07

2015-04-17

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （31271918）；國(guó)家863計(jì)劃項(xiàng)目 （2012AA021505）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（JUSRP51319B）。

*通信作者：丁重陽(yáng)（1975—），男，江蘇南通人，工學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事發(fā)酵過(guò)程優(yōu)化控制及食藥用真菌生物技術(shù)研究。E-mail：zyding@jiangnan.edu.cn

李潔，丁重陽(yáng)，顧正華，等.混合碳源對(duì)靈芝多糖發(fā)酵及其抗腫瘤活性的影響[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2017，36（02）：129-135.