摘要： 中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春在形態(tài)上較為相似，通常被認(rèn)為是親緣關(guān)系較近的物種。該研究選取核基因ITS序列和葉綠體trnLF為分子標(biāo)記，利用貝葉斯的方法構(gòu)建系統(tǒng)樹(shù)，在用兩種分子標(biāo)記構(gòu)建的系統(tǒng)樹(shù)中，兩種報(bào)春均以0.81的支持率聚成一個(gè)分支，明確了兩種報(bào)春的姐妹種關(guān)系。首先，通過(guò)選取兩個(gè)物種的五個(gè)形態(tài)學(xué)性狀，進(jìn)行主成分分析，聚類(lèi)結(jié)果中兩種報(bào)春各自的個(gè)體分別聚在兩塊區(qū)域，表明兩種報(bào)春的形態(tài)學(xué)性狀產(chǎn)生了明顯的分化，且中甸燈臺(tái)報(bào)春的花部各性狀值明顯大于鵝黃燈臺(tái)報(bào)春，表明花部綜合征和繁育系統(tǒng)間的相關(guān)聯(lián)系。然后，通過(guò)用8對(duì)SSR分子標(biāo)記對(duì)兩種報(bào)春進(jìn)行STRUCTURE聚類(lèi)分析，結(jié)果檢測(cè)K的最適值為2，此時(shí)中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的個(gè)體各自以不同顏色聚成界限清晰的兩塊區(qū)域，揭示了兩種報(bào)春在分子水平上也產(chǎn)生了顯著而穩(wěn)定的分化，通過(guò)Ima2軟件，依據(jù)葉綠體聯(lián)合序列，計(jì)算了兩種報(bào)春的分化時(shí)間大約是在更新世，推測(cè)這兩個(gè)姐妹種的物種分化受更新世氣候動(dòng)蕩和一些地質(zhì)歷史事件的影響。最后，運(yùn)用maxent軟件分析兩個(gè)物種的生態(tài)位差異，結(jié)果表明最干季節(jié)降水量、年均降水量和季節(jié)性降水量對(duì)中甸燈臺(tái)報(bào)春的分布有重要影響，最冷季節(jié)平均溫度、最干月降水量、年均降水量和季節(jié)性降水量對(duì)鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的分布有重要影響，兩個(gè)物種間的生態(tài)位產(chǎn)生了分化。由此推測(cè)，這種生態(tài)位的差異是物種分化的結(jié)果，同時(shí)也是物種間系統(tǒng)演化的重要驅(qū)動(dòng)力。

關(guān)鍵詞： 中甸燈臺(tái)報(bào)春， 鵝黃燈臺(tái)報(bào)春， 姐妹種， SSR， 生態(tài)位

中圖分類(lèi)號(hào)： Q949文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A文章編號(hào)： 10003142（2017）02015310

Abstract： Primula chungensis and P. cockburniana， are usually considered as close species for the similar morphological traits. We reconstructed the phylogenetic trees with the Bayesian inference method based on two DNA fragments， the molecular marker we chose was internal transcribed spacer and chloroplast fragment trnLF， among the two phylogenetic trees we reconstructed， P. chungensis and P. cockburniana got into a branch with 0.81 support， which indicated that P. chungensis and P. cockburniana were sister species. we also utilized principle component analysis based on five morphological traits， and the two species got into two clusters， which indicated that in term of the morphology， there was significant differentiation between the two species， and this differentiation had an important relationship with the mating system， and we discussed the relationship between flora syndrome and breeding system of these two species. We chose eight pairs of SSR primers and sent the polymerase chain reaction production to the company to measure the peak value， according to the anlysis of the softwae STRUCTUER based on the nuclear microsatellite marker， the appropriate value of K was two， the result of structure consisted of two area and with different colors， the red area represented the population of P. cockburniana， and the green area represented the populations of P. chungensis， which meant that there was significant and stable differentiations between the two species on the molecular level. Then we calculated the differentiation time between the two species with Ima2 based on the united chloroplast fragments， which showed turbulent environment and geological and historical accidents in Pleistocene may have an important effect on the differentiation of the two species. Finally we analysed the ecological niches of the two species with the software maxent. The results indicated that the precipitation of the driest quarter， range of annual temperature， isothermality and the annual average precipitation had important effects on the distribution of P. chungensis， the mean temperature of the coldest quarter， precipitation of the driest month， annual average precipitation and the precipitation seasonality had an important effect on the distribution of P. cockburniana. We speculate that the different ecological niches had been influenced by the phylogenetic evolution of the species， and in turn the different niches can also promote the phylogenetic evolution process.

Key words： Primula chungensis， P. cockburniana， sister species， SSR， ecological niche

物種形成是基本的進(jìn)化過(guò)程，是指一個(gè)物種通過(guò)適應(yīng)不同生境分化出新物種的過(guò)程，也是生物多樣性產(chǎn)生的基本機(jī)制（Cracraft， 1983）。在探究物種形成過(guò)程中，界定物種間的系統(tǒng)位置及其相互關(guān)系，對(duì)于認(rèn)識(shí)生物多樣性的形成過(guò)程具有重要意義，而物種分化的機(jī)制和過(guò)程，一直是進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)（Michalke， 2012）。物種間的分化程度、進(jìn)化狀況都強(qiáng)烈地受到過(guò)去歷史事件的影響，因此對(duì)物種分化現(xiàn)狀的分析，可用于推測(cè)過(guò)去的氣候、地質(zhì)歷史事件（Strasburg et al， 2012）。對(duì)物種或種群進(jìn)化歷史的揭示，可為分析物種的進(jìn)化潛能提供重要信息，從而能對(duì)稀有或?yàn)l危物種采取科學(xué)有效的保護(hù)措施（Nosil Feder， 2012）。

報(bào)春花屬（Primula L.）是報(bào)春花科（Primulaceae）的第一大屬，共有25個(gè)組，近500余種（胡啟明，1990）。廣布于歐亞大陸溫帶地區(qū)，沿東喜馬拉雅山兩側(cè)到云南、四川西部是本屬的現(xiàn)代分布中心（吳之坤等，2006）。報(bào)春花是世界著名的觀賞花卉，燈臺(tái)報(bào)春組（sect. Proliferae）花色艷麗，花序獨(dú)特，具有很高的觀賞價(jià)值（Richards，2014）。Pax（1888）基于顯著的輪狀花序?qū)?5～30個(gè)物種歸并為燈臺(tái)報(bào)春組。燈臺(tái)報(bào)春組擁有原始的輪狀花序和三溝型花粉，種間容易雜交，種間關(guān)系比較復(fù)雜（Wilkins， 2011）。Martins et al（2003）用ITS序列構(gòu)建過(guò)報(bào)春花科的系統(tǒng)樹(shù)。Vos et al（2014）為了探究花部綜合征和花柱繁育系統(tǒng)的關(guān)系，構(gòu)建了報(bào)春花屬124種報(bào)春的系統(tǒng)樹(shù)，然而燈臺(tái)報(bào)春組內(nèi)的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系很少有學(xué)者探究，物種內(nèi)的進(jìn)化歷史也值得深入探討。

中甸燈臺(tái)報(bào)春（Primula chungensis）是燈臺(tái)報(bào)春組多年生的草本植物，根莖極短；葉橢圓形、矩圓形或倒卵狀短圓形，先端圓形，基部楔狀漸窄，邊緣具不明顯的波狀淺裂和不整齊的小牙齒，中脈和側(cè)脈寬扇，在下面稍隆起，葉柄不明顯或長(zhǎng)達(dá)葉片的1/4；花葶通常1 枚，自葉叢中抽出，節(jié)上微被粉，具傘形花序?；ㄆ?-6 月，單花花期4～6 d，每個(gè)植株花期約1個(gè)月。模式標(biāo)本采于云南香格里拉縣，主要分布于云南西北部、四川西南部和西藏東南部。

鵝黃燈臺(tái)報(bào)春（P. cockburniana）是二年生草本植物，具極短的根莖和成叢的支根；葉矩圓形至矩圓狀倒卵形，先端圓形，基部近圓形或闊楔形，幾乎不下延，因而葉片與葉柄具明顯的界限，邊緣呈不明顯的淺波狀，具細(xì)密的小牙齒，上面綠色，下面淡綠色，被粉質(zhì)腺體；花期6-7 月，果期8 月。主要產(chǎn)于四川西部。生長(zhǎng)于高山潮濕草地和林緣，海拔2 900～4 200 m。模式標(biāo)本采自康定。

中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的形態(tài)學(xué)差異在于：鵝黃燈臺(tái)報(bào)春花深橙黃色至橙紅色，葉片基部鈍圓或闊楔形幾不下延，與葉柄有明顯的界限，中甸燈臺(tái)報(bào)春花淺橙黃色，葉片基部楔狀漸狹窄（胡啟明， 1990）。除了花色和葉片的差異外，兩個(gè)物種間最顯著的差異在于：中甸燈臺(tái)報(bào)春存在花柱異型的現(xiàn)象，異型花柱是指被子植物中一種特殊的花多態(tài)現(xiàn)象和雌雄異位形式，即在一個(gè)居群內(nèi)，根據(jù)雌蕊和雄蕊的高度，可以區(qū)別出兩種或兩種以上花的表型，而表型之間雌雄蕊的高度是互補(bǔ)的（Darwin， 1877； Ganders， 1979； Barrett Richards，1990）。在中甸燈臺(tái)報(bào)春中，有三種花柱形態(tài)，即長(zhǎng)花柱型、短花柱型和等高花柱型，而鵝黃燈臺(tái)報(bào)春只有一種花柱類(lèi)型，即等高花柱類(lèi)型（圖1）。兩個(gè)物種間的差異如表1所示，然而由于花色變異和葉片與葉柄的過(guò)渡程度的差異，在野外鑒定中很容易將這兩個(gè)種混淆。

本研究試圖通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)樹(shù)來(lái)闡明中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的關(guān)系。通過(guò)對(duì)其形態(tài)學(xué)性狀的測(cè)量，生境的考察以及分子方面的分析鑒定，對(duì)這兩個(gè)物種進(jìn)行深入的調(diào)查研究，這對(duì)其引種及資源保護(hù)具有重要的參考意義，并且對(duì)研究報(bào)春花的起源和進(jìn)化提供重要的參考價(jià)值。通過(guò)對(duì)其分化時(shí)間的計(jì)算，以及生態(tài)位的模擬檢測(cè)，探討了促進(jìn)物種形成的驅(qū)動(dòng)力，并且推測(cè)了在物種形成過(guò)程中，不同的選擇壓力對(duì)植物形態(tài)學(xué)性狀的影響。

1材料與方法

1.1 材料

中甸燈臺(tái)報(bào)春采樣居群集中在西藏東南部，鵝黃燈臺(tái)報(bào)春主要集中分布在四川西部，每個(gè)居群采集20～30個(gè)植株新鮮、完整的葉片，植株間隔至少10 m，采集的葉片用硅膠迅速干燥后帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行總DNA提取。共采集中甸燈臺(tái)報(bào)春4個(gè)居群和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春9個(gè)居群。此外，還采集了燈臺(tái)報(bào)春組的粉被燈臺(tái)報(bào)春（Primula pulverulenta），桔紅燈臺(tái)報(bào)春（P. bulleyana），霞紅燈臺(tái)報(bào)春（P. beesiana），橙紅燈臺(tái)報(bào)春（P. aurantiana）。采樣點(diǎn)信息見(jiàn)表2。

1.2 花形態(tài)特征觀測(cè)

在野外居群采樣過(guò)程中，隨機(jī)采集鵝黃燈臺(tái)報(bào)春30朵完全開(kāi)放的花，鑒于中甸燈臺(tái)報(bào)春有三種花柱表型，每種表型選擇30朵，共選擇90朵進(jìn)行形態(tài)學(xué)性狀測(cè)量。對(duì)采集的報(bào)春花進(jìn)行縱向解剖，用標(biāo)尺放一旁做比例尺，照相后保存，通過(guò)軟件ImageJ （Abràmoff， 2004）測(cè)量關(guān)鍵的花形態(tài)學(xué)性狀。包括花冠檐直徑、花冠管長(zhǎng)度、花冠口直徑、花藥長(zhǎng)度、柱頭寬5個(gè)性狀（圖2）。從這5個(gè)性狀里提取出兩條最主要的軸axi.1，axi.2。先用R軟件里的knn包里的kmeans函數(shù)進(jìn)行聚類(lèi)分析，再用ggplot2包里的geom_point函數(shù)繪制聚類(lèi)圖。

1.3 系統(tǒng)分析與SSR分析

植物總DNA的提取采取改良的CTAB的方法（Doyle，1987）。ITS（internal transcribed spacer）序列和葉綠體序列是構(gòu)建物種系統(tǒng)樹(shù)常用的分子標(biāo)記（Ngamriabsakul et al， 2000； Martins et al， 2003）。ITS 序列擴(kuò)增采用的引物為ITS1 （5′AGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG3′）和ITS4（5′TCCTCCGCTTATTGATAT GC3′）（White et al， 1990）。trnLF序列擴(kuò)增采用通用引物為（5′CGAAATCGGTAGACGCTACG3′）和通用引物（5′ATTTGAACTGGTGACACGAG3′）（Taberlet et al， 1991）。每個(gè)物種選取2～3個(gè)個(gè)體進(jìn)行目的條帶擴(kuò)增，PCR的反應(yīng)體系為15 μL，在反應(yīng)過(guò)程中，設(shè)置94 ℃預(yù)變性4 min， 94 ℃變性1 min，退火52～55 ℃ 1 min，72 ℃延伸1.5 min，設(shè)置35個(gè)循環(huán)，72 ℃終延伸10 min， 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)銀染后觀察結(jié)果，產(chǎn)物送公司進(jìn)行測(cè)序。我們選取了燈臺(tái)報(bào)春組的16個(gè)近緣種基于ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，以報(bào)春花屬鐘花組的錫金報(bào)春（Primula sikkimensis）作為外類(lèi)群。其中，8種報(bào)春的ITS序列在Genebank下載，包括日本燈臺(tái)報(bào)春（P. japonica）、川東燈臺(tái)報(bào)春（P. mallophylla）、滇緬燈臺(tái)報(bào)春（P. burmanica）、橙紅燈臺(tái)報(bào)春、芒齒燈臺(tái)報(bào)春（P. serratifolia）、小花燈臺(tái)報(bào)春（P. prenantha）、澤地?zé)襞_(tái)報(bào)春（P. helodoxa）、玉山燈臺(tái)報(bào)春（P. miyabeana）。選取燈臺(tái)報(bào)春組的12個(gè)近緣種基于葉綠體trnLF序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，以點(diǎn)地梅屬的點(diǎn)地梅（Androsace umbellata）作為外類(lèi)群。其中，7種報(bào)春的葉綠體序列在Genebank下載，包括橙紅燈臺(tái)報(bào)春（P. aurantiana）、齒葉燈臺(tái)報(bào)春（P. serratifolia）、小花燈臺(tái)報(bào)春（P. prenantha）、燈臺(tái)報(bào)春（P. prolifera）、澤地?zé)襞_(tái)報(bào)春（P. helodoxa）、玉山燈臺(tái)報(bào)春（P. miyabeana）、香海仙報(bào)春（P. wilsoni）。PCR后的產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果導(dǎo)入軟件Sequencher 4.14（Codes， 2000）進(jìn)行編輯，用MegAlign （Clewley， 1997）將堿基序列調(diào)成矩陣的模式，用MEGA4.0 （Tamura et al，2007）打開(kāi)調(diào)整編輯序列，用jmodeltest 0.1 （Posada， 2008）選取合適的模型，用mesquite（Maddison，2001）將矩陣調(diào)整成nex的模式，用MrBayes （Ronquist Huelsenbeck， 2003）軟件分別對(duì)ITS序列和trnLF序列進(jìn)行貝葉斯建樹(shù)。

SSR（sequence tagged microsatellite site）序列是廣泛存在于真核生物基因組中的較短重復(fù)序列，在研究居群的遺傳結(jié)構(gòu)和物種間的親緣關(guān)系等方面有重要作用（Barker， 1997； Mateus et al， 2004）。吳之坤和張長(zhǎng)芹（2010）基于轉(zhuǎn)錄組開(kāi)發(fā)了海仙報(bào)春的54對(duì)SSR引物，本研究從中篩選出8對(duì)容易擴(kuò)增多態(tài)性較好的SSR引物序列（表3）。將擴(kuò)增產(chǎn)物先進(jìn)行熒光標(biāo)記后殖民再進(jìn)行峰值的測(cè)定。選取中甸燈臺(tái)報(bào)春4個(gè)居群共154個(gè)個(gè)體，鵝黃燈臺(tái)報(bào)春9個(gè)居群共203個(gè)個(gè)體進(jìn)行分析，熒光標(biāo)記PCR的反應(yīng)條件為巢式PCR（Schuelke，2000）。 設(shè)置94 ℃預(yù)變性4 min，退火52～55 ℃，72 ℃延伸1.5 min；設(shè)置30個(gè)循環(huán)，94 ℃變性1 min，退火52～55 ℃，72 ℃延伸1.5 min；設(shè)置8個(gè)循環(huán)，結(jié)果用軟件GeneMaker v2.2.0（Lukashin Borodovsky，1998）進(jìn)行峰值測(cè)定。

1.4 物種分化時(shí)間的計(jì)算及生態(tài)位的比較

Ima（isolation with migration analysis）是基于隔離-遷移模型，對(duì)基因位點(diǎn)間的差異性進(jìn)行分析，描述兩個(gè)關(guān)系緊密的群體或物種關(guān)系的軟件（Hey Nielsen， 2007），針對(duì)不同的位點(diǎn)，可以采用不同的核苷酸替代模型和進(jìn)化速率，我們選取葉綠體片段進(jìn)行Ima分析。其中，鵝黃燈臺(tái)選14個(gè)個(gè)體，中甸燈臺(tái)選21個(gè)個(gè)體，聯(lián)合葉綠體psbAtrnH，atpBrbcL，trnLF片段。設(shè)置葉綠體每個(gè)位點(diǎn)每年的突變率平均為1.52×109（Yamane et al， 2006），置信區(qū)間設(shè)置為（0.000 001，0.000 1）（Li Graur， 1991； Richardson et al， 2001）。Maxent即最大熵模型（maximum entropy mode），通過(guò)對(duì)物種已知分布數(shù)據(jù)和環(huán)境數(shù)據(jù)，探究對(duì)物種分布影響最大的氣候因子（Phillips et al， 2006）。將實(shí)地采集的物種信息及在CVH中查到的信息進(jìn)行搜集，聯(lián)合在標(biāo)本館中搜集的信息進(jìn)行整理歸納，從wordclim里下載19個(gè)生態(tài)因子，運(yùn)用現(xiàn)有物種分布信息監(jiān)測(cè)物種生態(tài)位的差異。

2結(jié)果與分析

2.1 中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系

核基因ITS序列排列后片段長(zhǎng)度為631 bp， 用jModelTest 0.1尋找用于Bayesian分析的模型，通過(guò)AIC方法算出最適模型為T(mén)PM1uf+I+G，葉綠體基因序列排列后片段長(zhǎng)度為657 bp， 用AIC方法算出最適模型為GTR。在用貝葉斯構(gòu)建的兩個(gè)系統(tǒng)樹(shù)（圖3）中，中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春都以較高的支持率0.81聚成一個(gè)分支，故認(rèn)為，中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春為親緣關(guān)系很近的姐妹種。

2.2 兩種報(bào)春的形態(tài)學(xué)差異

從圖4中的散點(diǎn)分布可以看出，中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的個(gè)體分別聚在兩塊區(qū)域，且兩塊區(qū)域間區(qū)分較明顯，這從形態(tài)學(xué)上來(lái)說(shuō)，兩個(gè)姐妹種間的差異明顯且穩(wěn)定，兩個(gè)姐妹種之間產(chǎn)生了形態(tài)學(xué)上穩(wěn)定的分化。從各解剖結(jié)構(gòu)測(cè)量值上，可以知道中甸燈臺(tái)報(bào)春的花朵顯著大于鵝黃燈臺(tái)報(bào)春，我們推測(cè)這種花部特征與交配系統(tǒng)密不可分， 花部形態(tài)對(duì)訪花昆蟲(chóng)對(duì)花部的拜訪有重要影響。鵝黃燈臺(tái)報(bào)春有很高的自交親和性，而通過(guò)對(duì)中甸燈臺(tái)報(bào)春進(jìn)行套袋實(shí)驗(yàn)表明，傳粉昆蟲(chóng)對(duì)中甸燈臺(tái)報(bào)春的繁殖成功具有很高的貢獻(xiàn)率，且在野外實(shí)驗(yàn)和觀測(cè)中，熊蜂為其有效的傳粉者，故相對(duì)于鵝黃燈臺(tái)報(bào)春來(lái)說(shuō)，中甸燈臺(tái)報(bào)春對(duì)花設(shè)計(jì)的資源投入相對(duì)較多，擁有更大的花展示，表明交配系統(tǒng)在塑造花部性狀過(guò)程中的重要作用。

2.3 SSR的structure聚類(lèi)分析

通過(guò)對(duì)這兩個(gè)物種共357個(gè)個(gè)體進(jìn)行structure聚類(lèi)分析，我們看到，無(wú)論是L′（K）值還是Delta K值，都是在K值為2時(shí)，其值具有明顯的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，即K的最適值為2，當(dāng)K=2時(shí)，可以看到聚類(lèi)結(jié)果形成顏色分明的兩個(gè)分支，其中綠色的是中甸燈臺(tái)報(bào)春的個(gè)體，紅色的是鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的個(gè)體。從聚類(lèi)結(jié)果（圖5）可以看出，中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春在分子水平上是聚類(lèi)明顯的兩個(gè)物種。即兩個(gè)物種間的分子組成成分相差較明顯，在分子方面，兩個(gè)物種間也產(chǎn)生了穩(wěn)定的分化。

2.4 物種間的分化時(shí)間

聯(lián)合的葉綠體的序列長(zhǎng)度為1 650 bp，通過(guò)Ima2計(jì)算，兩個(gè)物種間的分化時(shí)間大約在13.058 2萬(wàn)年前，處于更新世時(shí)期，更新世時(shí)期地球經(jīng)歷了劇烈的氣候動(dòng)蕩和地質(zhì)形成過(guò)程。對(duì)動(dòng)植物來(lái)說(shuō)，更新世時(shí)期氣候的動(dòng)蕩對(duì)物種的形成和分化以及分布格局有重要的影響，特別是對(duì)今天的姐妹種之間的形成和分化有重要的作用（Soltis， 2013）。這種冰期間冰期氣候的劇烈變化可能對(duì)這兩種報(bào)春的形成和分化產(chǎn)生了重要的影響。

2.5 物種間生態(tài)位的差異

共收集了中甸燈臺(tái)報(bào)春9個(gè)地理分布信息，鵝黃燈臺(tái)報(bào)春18個(gè)地理分布信息。通過(guò)軟件對(duì)生態(tài)位進(jìn)行檢測(cè)，從氣候因子的貢獻(xiàn)率可以看出來(lái)，在中甸燈臺(tái)報(bào)春中，bio17、bio7、bio3、bio12即最干季節(jié)降水量、年均溫變化范圍、等溫性和年均降水量對(duì)其分布有重要的影響（表4）。在鵝黃燈臺(tái)報(bào)春中，bio11、bio14、bio12、bio15即最冷季節(jié)平均溫度、最干月降水量、年均降水量和季節(jié)性降水量對(duì)其分布有重要的影響（表5）。由此可見(jiàn)，兩種報(bào)春的生態(tài)位發(fā)生了一定程度的分化。

3討論

報(bào)春花屬燈臺(tái)報(bào)春組擁有較原始的輪狀花序和三溝型花粉，組間物種因?yàn)樾螒B(tài)和生境上的相似性，種間易雜交（Wilkins， 2011）。因此，通過(guò)多方面探究理清組內(nèi)的物種關(guān)系，對(duì)報(bào)春花屬的起源和進(jìn)化有重要意義。本研究通過(guò)用貝葉斯的方法構(gòu)建關(guān)于核糖體和葉綠體的系統(tǒng)樹(shù)，兩棵樹(shù)一致表明了中甸燈臺(tái)報(bào)春和鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的姐妹種關(guān)系。除去花柱異型的特征，我們用另外五組形態(tài)學(xué)性狀進(jìn)行主成分聚類(lèi)分析，發(fā)現(xiàn)兩種報(bào)春的性狀產(chǎn)生了穩(wěn)定的分化，即中甸燈臺(tái)報(bào)春的各花部性狀大于鵝黃燈臺(tái)報(bào)春的。而通過(guò)SSR的分析數(shù)據(jù)表明， 在分子上兩個(gè)姐妹種的遺傳背景也發(fā)生了穩(wěn)定而顯著的分化。通過(guò)對(duì)兩種報(bào)春種間關(guān)系的界定，為物種的引種和保護(hù)提供了參考價(jià)值。Ima的分析表明，這兩個(gè)分化較為穩(wěn)定的姐妹種，其分化時(shí)間大約是在更新世時(shí)期，故我們推測(cè)更新世時(shí)期氣候的動(dòng)蕩，地質(zhì)歷史的形成時(shí)期，特別是冰期間冰期的反復(fù)震蕩對(duì)全球氣候的影響，對(duì)姐妹種的分化產(chǎn)生了一定的促進(jìn)作用。

花柱異型是由一對(duì)等位基因控制的性狀（Wedderburn Richards 1992； Nowak et al， 2015）。我們推測(cè)在更新世時(shí)期，兩個(gè)物種的共同祖先產(chǎn)生了基因突變，這種突變基因型由于適合特定的生境，故在適合自身生境范圍進(jìn)行擴(kuò)散。兩種報(bào)春的分布范圍產(chǎn)生了一定分化。而不同生境內(nèi)由于生態(tài)位的不同，選擇壓力不同，物種交配系統(tǒng)受到影響，產(chǎn)生了不同的交配系統(tǒng)。花作為被子植物的繁殖器官，具有很高的變異性，為適應(yīng)不同的環(huán)境以利于植物的繁殖延續(xù)，花部性狀易產(chǎn)生適應(yīng)性的進(jìn)化（Dafni 1996； Bynum Smith， 2001； Galen， 2005）。基于鵝黃燈臺(tái)報(bào)春同型的花柱系統(tǒng)，且自交親和性較高，可能對(duì)傳粉昆蟲(chóng)的依賴(lài)性較小，而在中甸燈臺(tái)報(bào)春中，傳粉昆蟲(chóng)對(duì)中甸燈臺(tái)報(bào)春的繁殖成功有很高的貢獻(xiàn)率，故相對(duì)于鵝黃燈臺(tái)報(bào)春來(lái)說(shuō)，對(duì)花展示的資源投入相對(duì)較多，中甸燈臺(tái)報(bào)春擁有更大的花展示。通過(guò)對(duì)這兩種報(bào)春的分化歷史進(jìn)行探究，為更新世時(shí)期氣候的動(dòng)蕩促進(jìn)物種的分化提供了新的參考，同時(shí)揭示了花部綜合征和繁育系統(tǒng)間的相互聯(lián)系。

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