王潔蓮，牛 瑋，孫 靜

（1山西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測中心，太原030025；2山西省運(yùn)城市鹽湖區(qū)種子管理站，山西運(yùn)城044000）

氣相色譜法檢測平菇中9種農(nóng)藥殘留分析

王潔蓮1，牛 瑋1，孫 靜2

（1山西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測中心，太原030025；2山西省運(yùn)城市鹽湖區(qū)種子管理站，山西運(yùn)城044000）

為解決食用菌中的農(nóng)藥殘留檢測問題，以基地生產(chǎn)的平菇樣品為實(shí)驗(yàn)材料，采用固相萃取方法對平菇中白菌清、三唑酮等9種農(nóng)藥殘留的檢測方法進(jìn)行研究，用石墨碳黑氨基柱凈化樣品，利用氣相色譜作為檢測手段，ECD檢測器進(jìn)行定性定量分析。研究表明，平菇中9種農(nóng)藥的含量重復(fù)性實(shí)驗(yàn)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.05%～6.35%，檢出限為0.0003～0.005 mg/kg，定量限為0.0009～0.02 mg/kg。9種農(nóng)藥在0.05～2.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r值均大于0.990。此方法檢測平菇中9種農(nóng)藥殘留分析準(zhǔn)確、可行。

農(nóng)藥殘留；平菇；氣相色譜法

0 引言

平菇的醇香備受人們的鐘愛，是餐桌上的常見食用菌。食用菌的生產(chǎn)環(huán)境不同于蔬菜，根據(jù)GB 2763—2014規(guī)定[1]，食用菌與蔬菜不同類，食用菌一般是用適宜的菌種在適宜的環(huán)境下人工栽培而成。在平菇的生長過程中，會因環(huán)境的改變產(chǎn)生很多雜菌和蟲害，所以必須使用農(nóng)藥。不按規(guī)定使用農(nóng)藥，或使用農(nóng)藥后在間隔期上市是平菇中農(nóng)藥殘留超標(biāo)的主要問題。目前常用的平菇的檢測方法有質(zhì)譜法和氣相色譜法。質(zhì)譜儀器價(jià)格貴，運(yùn)行成本高，對操作人員要求嚴(yán)格，不適于檢測參數(shù)的大面積普及。目前的氣相色譜法檢測參數(shù)分散，根據(jù)無公害檢測目錄規(guī)定，平菇檢測的有機(jī)氯和菊酯類農(nóng)藥共有5種，需使用3種檢測方法[2-4]，這3種檢測方法所使用的前處理技術(shù)有液液萃取和填充柱法，每種檢測方法的前處理過程均不相同，檢測參數(shù)少，耗時(shí)長，對環(huán)境污染嚴(yán)重，不能為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供簡便快捷的手段。筆者用乙腈提取，氣相色譜法(GC-ECD)檢測，比較3種固相萃取柱和吸附劑凈化區(qū)別，選擇出穩(wěn)定、可靠、靈敏度高、滿足要求的平菇中9種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測的氣相色譜方法，為平菇檢測參數(shù)的普及提供必要的監(jiān)測手段。

1 材料與方法

1.1 前處理材料

1.1.1 樣品來源 呂梁示范基地栽培的平菇樣品。

1.1.2 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品 氯化鈉（天津北辰方正試劑廠）于650℃灼燒2 h后備用，乙腈、正已烷、甲苯、丙酮均為色譜純（迪馬科技）；石墨炭黑氨基固相萃取柱(1000 mg/mL)、氨基固相萃取柱(500 mg/mL)、氟羅里矽柱(500 mg/mL)，均為美國Agilent公司。標(biāo)準(zhǔn)品為百菌清、三唑酮、腐霉利、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯，濃度為100 mg/L，均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境監(jiān)測總站（天津）。

1.1.3 主要儀器 Agilent7890B氣相色譜儀（美國安捷倫公司），μ-ECD檢測器；TP-2101電子天平（丹佛儀器有限公司）；T25basic高速勻漿機(jī)，RV05basic旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，TKA MS3旋窩混勻器（德國IKA公司）；TTL-DCⅡ型氮吹儀（北京同泰公司）。

1.2 檢測方法

1.2.1 樣品的提取與凈化 準(zhǔn)確稱取20.00 g平菇樣品于200 mL玻璃燒杯中，準(zhǔn)確加入40.0 mL乙腈，高速勻漿2 min(10000 r/min)后抽濾，用含5～7 g氯化鈉（已烘）的100 mL具塞量筒收集濾液30～40 mL，加塞密閉，充分振蕩1 min，去塞，在室溫下靜置30 min以上；吸取10 mL上層乙腈相于150 mL雞心瓶中，于40℃下旋蒸濃縮至近干，加乙腈:甲苯(3:1)5 mL待凈化。

凈化：用6.0 mL乙腈:甲苯(3:1)混合溶劑預(yù)淋洗石墨炭黑氨基柱，當(dāng)溶液接近柱表面時(shí)，加入上述凈化液，再分4次用5 mL乙腈:甲苯(3:1)混合溶劑洗瓶，收集洗脫液用于45℃旋蒸濃縮至1 mL左右，用氮?dú)獯蹈桑? mL正已烷準(zhǔn)確定容，待測。

1.2.2 氣相色譜條件 中級性毛細(xì)管柱DB-17(30 m× 0.25 mm×0.25 mm)；程序升溫：初溫150℃，保持1 min，以10℃/min升到270℃，保持15 min，以20℃/min升到280℃，保持2 min；柱流量2 mL/min。檢測器μ-ECD，溫度300℃；進(jìn)樣口溫度235℃；進(jìn)樣模式分流，進(jìn)樣量1μL，分流比10:1；尾吹流量60 mL/min。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確移取1.00 mL的百菌清、三唑酮、腐霉利、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯單個(gè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，用正已烷做溶劑，配制成10 mg/L的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液（貯存在-16℃以下的冰箱中）。上機(jī)之前，用正已烷將10 mg/L混合工作儲備液依次稀釋為2.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.05 mg/L的混合工作使用液。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將配制好的0.05、0.1等一系列的6個(gè)濃度點(diǎn)的工作使用液依據(jù)1.2.2章節(jié)的氣相色譜條件，以質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)濃度5次重復(fù)。

1.4 準(zhǔn)確度和精密度的測定

在陰性平菇樣品中分別添加0.05、0.1、1.0 mg/kg的3個(gè)水平的9種農(nóng)藥的混合工作溶液，每個(gè)水平重復(fù)5次，按1.2.2章節(jié)的氣相色譜條件測定回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，見表1。

表1 9種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限、回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

依據(jù)極性的大小，本著相似相溶的原則，查閱參考文獻(xiàn)[5-7]，選擇丙酮、甲醇、乙腈對樣品進(jìn)行提取。丙酮、甲醇提取樣品時(shí)提取液顏色深，影響色譜柱的使用壽命，對色譜系統(tǒng)污染嚴(yán)重。乙腈提取樣品，雜質(zhì)少，顏色淺，回收率滿意。

續(xù)表1

2.2 凈化條件的選擇

現(xiàn)行的凈化方法是吸附劑(PSA/C18/GCB)凈化[8-13]和SPE柱凈化[14-19]，吸附劑凈化應(yīng)用于平菇的氣相色譜檢測，不能有效減少干擾色譜峰。SPE柱凈化是目前氣相色譜檢測中最常用的凈化方法。SPE柱中的氨基柱、氟羅里矽柱和石墨炭黑氨基柱在這幾種農(nóng)藥檢測中有使用的報(bào)道。查閱現(xiàn)有的檢測標(biāo)準(zhǔn)[1-7]和文獻(xiàn)[20-22]，進(jìn)行單因素水平實(shí)驗(yàn)，確定各凈化柱的洗脫溶液和體積，設(shè)計(jì)3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)見表2，以9種農(nóng)藥的平均回收率為參考指標(biāo)，結(jié)果見表3?？梢钥闯鯝1B3C3、A2B1C2和A3B2C13種組合的回收率水平在70%～130%，為了確保每個(gè)農(nóng)藥的回收率都符合要求，根據(jù)回收率水平70%～130%、最接進(jìn)100%回收率的要求，確定出最佳凈化條件A2B1C2，按照這個(gè)條件進(jìn)行樣品前處理，9種農(nóng)藥得到良好的分離，在28 min內(nèi)完成檢測。空白樣品見圖1。

表2 9種農(nóng)藥殘留正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

表3 9種農(nóng)藥殘留正交因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.3 線性方程、檢出限和定量限

用正己烷溶劑作為9種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次稀釋為2.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.05 mg/L一系列6個(gè)濃度點(diǎn)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用氣相色譜ECD進(jìn)行檢測，外標(biāo)法定量。9種農(nóng)藥的6個(gè)濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系。在最低添加濃度0.05 mg/kg下，以相同的時(shí)間段計(jì)算，3倍的信躁比為檢出限，10倍的信躁比為定量限。9種農(nóng)藥的線性方程、檢出限及定量限見表1。

圖1 空白樣品色譜圖

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度

結(jié)果表明，在0.05～1.0 mg/kg 3個(gè)添加水平下，平均回收率為71%～119%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.05%～6.35%，定量限為0.0009～0.02 mg/kg，檢出限為0.0003～0.005 mg/kg，說明本方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，可作為平菇中9種農(nóng)藥殘留的檢測方法。

在已知的陰性平菇樣品中分別加入9種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，每個(gè)加標(biāo)樣品做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)測定5次，計(jì)算平均回收率為70%～119%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于7%（表1），說明本方法準(zhǔn)確可靠。圖2為標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，圖3為樣品添加色譜圖。

2.5 實(shí)際樣品分析

按照本方法比較后選定的前處理方法和儀器條件對呂梁示范基地的平菇樣品在上市前進(jìn)行檢測，共檢測樣品50個(gè)。隨機(jī)抽取20個(gè)樣品做加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)濃度為0.1、1.0 mg/kg，回收率為71%～119%，說明本方法能滿足實(shí)際樣品的分析要求。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖3 平菇加標(biāo)樣品色譜圖

3 結(jié)論

筆者先比較了吸附劑和固相萃取柱兩種凈化方式，確定固相萃取柱凈化，然后再設(shè)計(jì)3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn)，比較不同的溶劑、溶劑的用量在石墨炭黑氨基柱、氨基柱和氟羅里矽柱3種固相萃取柱凈化平菇樣品的區(qū)別，最終確定了白菌清等9種農(nóng)藥在平菇中的氣相色譜儀上的檢測方法。本方法選用石墨炭黑氨基柱對平菇樣品進(jìn)行凈化，該方法準(zhǔn)確、靈敏度高，滿足國家要求；本方法為目前普及的氣相色譜提供了檢測參考，為平菇的質(zhì)量安全增加了檢測方法；本方法補(bǔ)充了平菇樣品中的農(nóng)藥多殘留檢測方法，有望成為地方標(biāo)準(zhǔn)。

4 討論

食用菌作為單列類（與蔬菜不同類），目前農(nóng)藥多殘留檢測的方法是質(zhì)譜法[7-9]，氣相色譜方法涉及的多殘留檢測使用的前處理方法不統(tǒng)一，一個(gè)參數(shù)一個(gè)方法。筆者將食用菌常檢的農(nóng)藥用同一種前處理方法凈化，以平菇為樣品，一次處理可同時(shí)檢測9個(gè)參數(shù)，平菇中農(nóng)藥殘留氣相色譜檢測的報(bào)道文獻(xiàn)[22-25]最多檢測5種農(nóng)藥。本研究的不足之處是石墨炭黑氨基柱凈化使用的淋洗液用量大，增加了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，有待進(jìn)一步研究。

[1]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會,中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.GB 2763—2014,食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014:11-25.

[2]中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所,北京是疾病預(yù)防控制中心,等.GB/T 5009.146—2008,植物性食品中有機(jī)磷和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定[S].北京:中國質(zhì)檢出版社,2008:3-4

[3]農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心(天津),農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所.NY/T 761—2008,蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008:16-28.

[4]中華人民共和國秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局.GB/T 19648—2006,水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法[S].北京:中國質(zhì)檢出版社,2006:25.

[5]張?zhí)?食用菌中農(nóng)藥多殘留研究[D].長春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

[6]常巧英.食用菌中農(nóng)藥多殘留LC-MS/MS測定方法研究[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.

[7]中華人民共和國秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東農(nóng)業(yè)大學(xué),等.GB/ T 23216—2008,食用菌中503種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法[S].北京:中國質(zhì)檢出版社,2008:21.

[8]中華人民共和國秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東農(nóng)業(yè)大學(xué).GB/T 23202—2008,食用菌中440種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京:中國質(zhì)檢出版社,2008:10

[9]中華人民共和國秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東農(nóng)業(yè)大學(xué).GB/T 20769—2008,水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S]北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008:3

[10]肖海軍,張偎,陳孝權(quán),等.分散固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法同時(shí)檢測茶葉中32種農(nóng)藥多殘留[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2015,40 (12):28-32.

[11]褚能明,楊俊英,柴勇,等.兩種SPE凈化方法在蔬菜農(nóng)藥多殘留分析中的比較[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,23(5):1525-1528.

[12]王潔蓮,董燕飛.高效液相色譜法同時(shí)檢測蔬菜中的7種農(nóng)藥殘留的分析[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2015,31(12):267-272.

[13]王潔蓮,閻會平.氣相色譜法同時(shí)檢測蘋果中的6種農(nóng)藥殘留的分析[J].食品研究與開發(fā),2015,36(19):155-157.

[14]王潔蓮,閻會平.氣相色譜法檢測橙子中氟蟲腈農(nóng)藥殘留分析[J].農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào),2016,6(1):83-87.

[15]徐虹,曹文婷,易承學(xué),等.液液萃取氣相色譜法測定飲用水中百菌清等12種農(nóng)藥殘留[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,24(23):3363-3365.

[16]Chen X S,Bian Z Y,Yang F,et al.Comparison of three different QuEChERS sample treatment methods in the analysis of more than one hundred pesticide residues in tobacco by gas chromatographytandem mass spectrometry[J].Chinese Journal of Chromatography, 2013,11(31):1116-1128.

[17]王潔蓮,牛瑋,劉巍,等.蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)及其檢測方法概述[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2016,7(4):1587-1592.

[18]王天嬌,吳平谷,胡爭艷,等.固相萃取-超高效液相色譜法檢測保健食品中維生素D3[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,7(14):128-131.

[19]閆震,聶繼云,徐國鋒,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對比4種凈化方式對不同色素含量基質(zhì)中19種農(nóng)藥殘留檢測的影響[J].分悉測試學(xué)報(bào),2014,33(9):1000-1009.

[20]王潔蓮,田子卿.液相色譜法檢測韭菜中阿維菌素殘留方法的改進(jìn)[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2015,6(1):289-292.

[21]尚天翠.超聲波法提取曼陀羅種子總生物堿的工藝優(yōu)化[J].遼寧化工,2016,30(5):537-539.

[22]柳佳,陳國寶,宋桂萍,等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選降脂合劑的制備工藝[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2016,21(4):31-34.

[23]王潔蓮,?，|,劉巍.氣相色譜法測定圓茄子中氟啶脲[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2014,5(7):2215-2219.

[24]劉永明,葛娜,崔宗巖.糧谷中農(nóng)藥殘留前處理技術(shù)的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2014,5(7):2151-2160.

[25]周長紅.氣相色譜法測定平菇中16種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[J].中國食用菌,2013,32(1):35-37.

Determination of 9 Pesticide Residues in Oyster Mushroom by Gas Chromatography

Wang Jielian1,Niu Wei1,Sun Jing2
(1Agricultural Products Quality Safety Monitoring Center of Shanxi Province,Taiyuan 030025,Shanxi,China;2Salt Lake Valley Seed Station of Yuncheng City,Yuncheng 044000,Shanxi,China)

To detect pesticide residues in edible mushrooms,oyster mushroom samples were taken as the experiment material.The solid-phase extraction method was adopted to study the detection methods for 9 pesticide residues such as chlorothalonil and triadimefon in oyster mushrooms.The samples were extracted with acetonitrile,further cleaned-up by graphite carbon amino columns and detected by gas chromatography with electron capture detector(GC-ECD).The result showed that the relative standard deviations of nine pesticides content were 2.05%-6.35%under this method,the limits of detection were 0.0003-0.005 mg/kg and the limits of quantification were 0.0009-0.02 mg/kg.The nine pesticides had a good linearity from 0.05 to 2.0 mg/L and the r values were greater than 0.990.The method is feasible and accurate for determining nine residues in oyster mushroom.

Pesticide Residues;Oyster Mushroom;Gas Chromatography

S657.71，TQ450.26

：A論文編號：cjas16080024

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目“農(nóng)藥殘留與農(nóng)田鼠害防治技術(shù)研究”(20130310011-4)。

王潔蓮，女，1980年出生，山西臨猗人，高級農(nóng)藝師，碩士，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測。通信地址：030025山西省太原市晉源新區(qū)景明北路5號山西省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測中心，E-mail：agilent2006@163.com。

2016-08-29，

：2016-12-02。