葛偉穎，趙占娟，洪閣，趙建喜

(1.河北大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071002； 2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)工程研究所，天津 300192；3.河北大學(xué)附屬醫(yī)院 放射科，河北 保定 071002)

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半乳糖酞菁光動力治療結(jié)腸癌的實驗研究

葛偉穎1，趙占娟1，洪閣2，趙建喜3

(1.河北大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071002； 2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)工程研究所，天津 300192；3.河北大學(xué)附屬醫(yī)院 放射科，河北 保定 071002)

為了探討新型光敏劑半乳糖酞菁(T1—T4)對結(jié)腸癌細胞CT-26增殖的影響及其相關(guān)機制，通過檢測T1—T4的水溶性，利用熒光分光光度計檢測T1—T4的濃度和孵育時間對CT-26細胞吸收量的影響.MTT(四甲基偶氮唑鹽)法檢測T1—T4對CT-26的細胞毒作用,利用MDC(單丹磺酰尸胺)染色法和流式細胞術(shù)檢測結(jié)腸癌細胞的自噬、凋亡和壞死情況.結(jié)果發(fā)現(xiàn)T1—T4的水溶性隨半乳糖取代基個數(shù)的增加而增強，對CT-26細胞的光動力殺傷作用與其濃度呈正相關(guān)并且細胞CT-26對T1—T3的吸收量隨著孵育濃度的升高和孵育時間的延長而增加，對T4幾乎無吸收.T2可誘導(dǎo)CT-26細胞出現(xiàn)自噬、晚期凋亡和壞死，且有較明顯的劑量依賴性.通過以上數(shù)據(jù)了解到 CT-26對T1—T3的吸收隨藥物濃度和孵育時間的增加而升高,T2介導(dǎo)的光動力療法對CT-26有明顯抑制作用，其機制可能與誘導(dǎo)細胞自噬有關(guān).

酞菁；光動力療法；自噬；凋亡

結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一.近年來,受飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的影響,中國結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率呈明顯的上升趨勢,引起了醫(yī)藥學(xué)家的廣泛關(guān)注[1].目前臨床上治療結(jié)腸癌的主要方法依然是傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療等,但是這些治療手段均會對正常組織造成一定的損傷,甚至引起嚴重的并發(fā)癥,給患者的生活質(zhì)量造成不良影響,因此尋找新的結(jié)腸癌治療方法仍將是科學(xué)家們未來的一項長期而艱巨的任務(wù)[2-3].

光動力療法(photodynamic therapy,PDT)是通過激發(fā)光照射腫瘤組織內(nèi)聚集的光敏劑,使之在分子氧的參與下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),生成單態(tài)氧和自由基等ROS(reactive oxygen species)成分,通過氧化作用破壞腫瘤細胞,達到治療目的.PDT具有創(chuàng)傷小、副作用少、選擇性高、無耐藥性等特點,自20世紀(jì)70年代進入臨床研究以來,隨著其在技術(shù)上的日趨成熟已廣泛應(yīng)用于膀胱癌、胃癌、肺癌、食管癌、宮頸癌等惡性腫瘤的治療[4-5].光敏劑是光動力治療中至關(guān)重要的因素.酞菁類光敏劑以其明確的化學(xué)組成、穩(wěn)定的理化性質(zhì)、適宜的長波吸收和高效的光敏活性,成為腫瘤治療中頗具希望的新一代光敏劑.但是由于酞菁的母體骨架具有較強的疏水性,不利于光敏劑在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運,也給藥物制劑帶來了許多的困難.本實驗室前期通過在單核酞菁外圍的苯環(huán)上引入半乳糖基團增加酞菁的溶解性和靶向性[6],合成了4個半乳糖酞菁(T1—T4)光敏劑.Lv等[7]的研究表明半乳糖酞菁(T3/T4)不僅具有良好的水溶性,而且表現(xiàn)出一定的肝癌靶向性.李艷周等[8]初步研究了半乳糖酞菁(T1—T4)對人胃癌細胞HGC-27、人惡性黑色素瘤細胞A-375、人非小細胞肺癌細胞A549的光毒性和暗毒性,證明半乳糖酞菁介導(dǎo)的光動力療法可以有效抑制多種腫瘤細胞的體外增殖,且暗毒性較小,但對其導(dǎo)致腫瘤細胞死亡的機制還不甚清楚.據(jù)文獻報道，光動力療法引起細胞死亡的主要途徑為凋亡或壞死,以何種途徑主要取決于光敏劑的特性、光敏劑定位的細胞器、細胞系類型、細胞密度以及實驗方法(包括光敏劑濃度、光劑量、培養(yǎng)時間)等因素[9-10].本文在以往研究的基礎(chǔ)上,采用小鼠結(jié)腸癌細胞CT-26為模型,評價半乳糖酞菁(T1—T4)的光敏活性、細胞吸收量、吸收速度以及光動力治療后腫瘤細胞的凋亡情況和自噬規(guī)律,探討4種光敏劑光動力抗腫瘤活性產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機制.

1 實驗材料

1.1 細胞株

結(jié)腸癌細胞CT-26,由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供.

1.2 主要試劑與儀器

光敏劑T1—T4,由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供，體外實驗時用DMSO均配制成104μmol/L的原液備用；RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)由Gibco公司提供；丙酮酸鈉溶液、PBS緩沖液為Solarbio公司產(chǎn)品；四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、100 g/L葡萄糖溶液均為Sigma公司產(chǎn)品；胰蛋白酶(Tripsin)為Hyclone 公司產(chǎn)品；凋亡流式細胞檢測試劑盒購自碧云天公司;單丹磺酰尸胺(MDC)由Sigma公司提供.半導(dǎo)體激光器，美國Intense公司;流式細胞儀(Accuri C6)，美國BD公司.

2 實驗方法

2.1 對TI—T4光敏劑的脂水分布系數(shù)的測定[11-13]

通過分析光敏劑在薄層色譜上的比移值Rf與其在該系統(tǒng)的分配系數(shù)logP的關(guān)系來測定T1—T4的脂水分布系數(shù).利用反相C18熒光薄層板，以甲醇+水(體積比2∶1)為展開劑展開，測得Rf值，利用下面的公式計算logP值.參考化合物是水楊醛(logP=1.70).

(1)

(2)

Rf為斑點中心距原點的距離與溶劑展開前沿距原點距離的比值，K為常數(shù).

2.2 MTT法測定不同濃度光敏劑在光反應(yīng)和暗反應(yīng)時對結(jié)腸癌CT-26細胞生長的影響

取處于對數(shù)生長期結(jié)腸癌CT-26細胞,接種于96孔板中,2×104/孔,培養(yǎng)24 h使其貼壁,24 h后棄去培養(yǎng)基,分為空白對照組和給藥組(光反應(yīng)組和暗反應(yīng)組),給藥組分別加入濃度為20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078、0.039、0.019 μmol/L的藥物培養(yǎng)液100 μL,每個濃度設(shè)置4個副孔,結(jié)果取平均值;空白對照組給予等體積的空白培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱孵育24 h后,光照組給予 650 nm 的激光照射,功率0.2 W,照射強度6 J/cm2,照射時間20 min,繼續(xù)孵育 24 h,每孔加入質(zhì)量濃度為1 mg/mL的MTT 50 μL培養(yǎng)4 h后棄去上清液,每孔加入150 μL DMSO溶解15 min終止反應(yīng),酶標(biāo)儀上檢測各孔在490 nm波長處的OD值,用以下公式計算細胞存活率:

細胞存活率=給藥組OD值/對照組OD值×100%.

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用PBS緩沖液稀釋光敏劑,使化合物T1—T4溶液的終濃度依次為0.32、0.63、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L,每個濃度吸取200 μL加入96孔板,設(shè)4個副孔,用酶標(biāo)儀在激發(fā)波長640 nm、發(fā)射波長690 nm條件下檢測各孔的OD值.將光敏劑的OD值與濃度關(guān)系制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并做相關(guān)回歸分析.

2.4 結(jié)腸癌細胞對半乳糖酞菁T1—T4吸收量的測定

取對數(shù)生長期CT-26細胞用胰酶消化,懸浮于完全培養(yǎng)基中,制成單細胞懸液,接種于96孔板中,2×104/孔,孵育24 h使其完全貼壁后,傾去培養(yǎng)基,給藥組分別加入濃度為1.25、2.5、5、10、20 μmol/L的T1—T4,每個濃度4個副孔,繼續(xù)孵育24 h,PBS沖洗2次,每孔加入100 μL Triton X-100(體積分數(shù)為0.25%)裂解細胞10 min，酶標(biāo)儀檢測每孔OD值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出每孔的藥物含量，以μmol/L表示.

2.5 結(jié)腸癌細胞對T1—T4吞噬速度的測定

取對數(shù)生長期CT-26細胞制成單細胞懸液,接種于96孔板中,2×104/孔，給藥濃度T1—T4均為20 μmol/L.孵育時間分別為2、4、8、12、16、20、24 h,PBS沖洗2遍,加入100 μL Triton X-100(體積分數(shù)為0.25%)裂解細胞10 min.上機檢測每孔的OD值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出每孔的藥物含量，以μmol/L表示.

2.6MDC染色法檢測半乳糖酞菁光動力誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞CT-26自噬

取對數(shù)生長期CT-26細胞,鋪于六孔板中,105/孔，孵育24h使其貼壁,棄去培養(yǎng)基,加入2mL不含血清的化合物T2溶液,濃度依次為0.625、1.25、2.5μmol/L,孵育24h，以650nm的激光照射,功率0.2W,照射強度6J/cm2,照射時間20min.空白對照組避光培養(yǎng)6h后,棄去培養(yǎng)基,加入PBS洗2遍,加入濃度為50μmol/L的MDC溶液,37 ℃孵育60min,加入PBS清洗2遍,倒置熒光顯微鏡下觀察并拍攝,酸性自噬泡呈藍綠色亮點.

2.7 流式細胞儀檢測半乳糖酞菁光動力療法對結(jié)腸癌細胞凋亡的影響

取對數(shù)生長期CT-26細胞,鋪于六孔板中,5×105/孔，孵育24h使其貼壁,分為空白對照組和光動力治療組.空白對照組加入不含血清的培養(yǎng)基,光動力治療組加入不含血清的化合物T2溶液,濃度依次為0.625、1.25、2.5μmol/L,孵育24h后以650nm的激光照射,功率0.2W,照射強度6J/cm2,照射時間20min,空白對照組避光;繼續(xù)孵育6h,收集細胞,加入5μLAnnexinV-FITC和10μLPropidiumIodide,室溫、避光條件下孵育15min后,上機檢測細胞凋亡率.

2.8 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS16.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,結(jié)果以(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.

3 實驗結(jié)果

3.1 光敏劑T1—T4的脂水分布系數(shù)

如圖1所示，T1的logP最大，T4的logP最小，logP值越大越易溶于脂，相反越易溶于水.

圖1 T1—T4的脂水分布系數(shù)Fig.1 Octanol-water partition coefficient of T1—T4

3.2 光敏劑T1—T4對結(jié)腸癌細胞CT-26的抑制作用

實驗研究了在有光照和無光照的條件下半乳糖酞菁的濃度變化對CT-26細胞存活率的影響.經(jīng)PDT處理后通過光學(xué)顯微鏡觀察到CT-26細胞的形態(tài)發(fā)生明顯改變,細胞的生長明顯受到抑制,細胞出現(xiàn)皺縮,折光性下降.嚴重的可觀察到細胞完全壞死、裂解.T1—T4對細胞的抑制作用如圖2a所示，在無光照的條件下CT-26細胞的存活率與光照條件下的細胞存活率有很大差異.在無光照條件下,T1—T4在最大濃度時的細胞存活率分別為(47±0.25)%、(67±5.57)%、(91.8±1.16)%、(92.33±4.33)%,可以看出T1、T2對細胞有一定的暗毒性，并且隨著濃度的增加暗毒性增大;如圖2b所示,在有光照的條件下,其細胞毒性更加明顯,在給藥濃度為10 μmol/L時細胞存活率T1—T4分別為(7.95±0.24)%、(9.09±0.47)%、(11.85±2.25)%、(89.15±5.15)%,由此看出在同一濃度下,T1的細胞毒性最強,T2、T3、T4依次減弱,T4幾乎無細胞毒性.T1、T2、T3的細胞毒性隨著濃度的增加而逐漸增大.

a.無光照；b.有光照，照射強度6 J/cm2.圖2 T1—T4對結(jié)腸癌細胞CT-26的暗毒性和光毒性Fig.2 Phototoxicity and dark toxicity of T1—T4 for colon cancer cells CT-26

圖3 T1—T4的藥物吸收量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard curve of drug uptake of T1—T4

3.3 半乳糖酞菁T1—T4的標(biāo)準(zhǔn)吸收曲線

首先繪制出化合物的標(biāo)準(zhǔn)吸收曲線(圖3)，由圖3可看出,光敏劑的熒光強度與濃度呈線性關(guān)系且R2值均大于0.99,可用于光敏劑細胞吸收量和吸收速度的測定.

3.4 光敏劑T1—T4的濃度和孵育時間與細胞吸收量的關(guān)系

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出光敏劑的孵育濃度-細胞吸收含量關(guān)系曲線,如圖4a所示.在實驗濃度范圍內(nèi),結(jié)腸癌細胞對T1、T2、T3的吸收隨著濃度的上升而增加,基本成線性關(guān)系,且未出現(xiàn)飽和現(xiàn)象,而對T4的吸收不明顯.在同一濃度下,CT-26對光敏劑的吸收量為T1最高,T2、T3次之,T4最低.

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出每個時間點細胞的吸收量，繪制出時間-細胞吸收量關(guān)系曲線,如圖4b所示.在同一濃度下,每個時間點細胞對4個光敏劑的吸收量為T1>T2>T3>T4,說明細胞對T1的吸收速率最快,T2、T3、T4次之;T1、T2、T3的吸收規(guī)律均為先快后慢,前期吸收速率較快,隨后進入緩慢吸收期,T4基本無吸收.

圖4 CT-26對T1—T4的吸收量(a)和吸收速度(b)Fig.4 Absorption of compounds T1—T4 taken up by CT-26 as a factor of(a)concentration and(b)time

3.5 MDC染色法檢測半乳糖酞菁光動力誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞CT-26自噬

如圖5所示,空白對照組的MDC染色熒光強度很弱,而光動力治療組MDC染色熒光強度及點狀結(jié)構(gòu)均較空白對照組明顯增多,并且隨著光動力治療給藥劑量的增加,熒光強度越明顯出現(xiàn)的點狀結(jié)構(gòu)越多.

a.空白對照組；b.0.625 μmol/L處理組；c.1.25 μmol/L處理組；d.2.5 μmol/L處理組.圖5 MDC熒光染色檢測不同濃度T2-PDT后CT-26細胞內(nèi)自噬泡的分布情況Fig.5 Detection of autophagic vacuoles with different dose of T2-PDT treatment stained MDC

3.6 流式細胞儀檢測半乳糖酞菁光動力療法對結(jié)腸癌細胞凋亡的影響

流式結(jié)果顯示(圖6),與空白對照組相比,光動力治療后的結(jié)腸癌細胞死亡以晚期凋亡和壞死為主,早期凋亡的細胞較少，并且晚期凋亡和壞死率隨著給藥濃度的升高而逐漸增加,呈明顯的劑量依賴性.

a.空白對照組；b.0.625 μmol/L處理組；c.1.25 μmol/L處理組；d.2.5 μmol/L處理組.圖6 不同治療濃度T2-PDT對CT-26細胞凋亡的影響Fig.6 Apoptosis of CT-26 cells with different concentration of T2-PDT

4 討論

光動力療法(PDT)是利用光敏劑與相應(yīng)波長的激發(fā)光發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)來實現(xiàn)其抗腫瘤作用的,由于光敏劑和腫瘤組織可特異性結(jié)合而激光照射亦可實現(xiàn)局部精準(zhǔn)照射,所以光動力療法對腫瘤組織具有選擇性的殺傷作用,而對周圍正常組織影響甚小.除此之外,光動力療法還具有適用范圍廣、可重復(fù)治療等優(yōu)點.光敏劑是PDT治療的關(guān)鍵因素,實驗中應(yīng)用的光敏劑是由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所設(shè)計合成的酞菁類光敏劑,酞菁屬于第2代光敏劑,具有結(jié)構(gòu)單一、光熱穩(wěn)定性好、吸收波長正好在組織最佳透射范圍內(nèi)等優(yōu)點.半乳糖酞菁是通過向單核無取代酞菁引入半乳糖基團,從而提高了酞菁的兩親性與靶向性.據(jù)報道,galectin-3在結(jié)腸癌細胞中高表達,galectin-3屬于半乳糖凝集素(Gelectin)家族,可誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞分化和血管生長,能夠促進腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移,被認為是一種潛在的腫瘤預(yù)警分子,并且galectin-3可特異性識別半乳糖殘基[14].因此,通過半乳糖對酞菁的修飾可提高光敏劑的溶解性、生物相容性及對結(jié)腸癌的主動靶向治療效果.本研究結(jié)果顯示,結(jié)腸癌CT-26細胞對此類光敏劑的吸收呈濃度和時間依賴性.在相同孵育時間下,孵育濃度越高吸收量越大,且并未出現(xiàn)飽和現(xiàn)象;在同一孵育濃度時,T1的吸收量最高,T2、T3、T4依次遞減,這可能與這幾種光敏劑的分子結(jié)構(gòu)有關(guān).通過檢測化合物的水溶性發(fā)現(xiàn)T1的logP最大,說明其脂溶性最強,T4的logP最小,說明其水溶性最好.T4的細胞吸收量最少,主要原因可能是細胞膜為親脂膜,脂溶性強的化合物更易吸收，然而在4種光敏劑中，T4的水溶性最強，脂溶性最弱.另外，T1—T4的分子質(zhì)量逐漸增大,在進入細胞時其阻力逐漸增大,因此T4不易被細胞吸收.通過吸收速度的結(jié)果也可以看出,T1可更迅速地進入細胞內(nèi),并且在實驗時間范圍內(nèi),其吸收速率均是先快后慢,T1后期的吸收速率為負值,可能與其產(chǎn)生細胞毒性引起細胞死亡有關(guān).MTT結(jié)果顯示,在有光照的條件下,T1的細胞殺傷力最強,T2、T3、T4的細胞殺傷力依次減弱,與細胞吸收量結(jié)果相對應(yīng).在相同時間內(nèi),進入細胞的光敏劑越多,其光動力治療效果越明顯.對于光動力療法引起腫瘤細胞死亡的方式有多種:凋亡、壞死以及細胞自噬.在本文的研究體系中,這3種細胞死亡方式均有體現(xiàn).實驗采用AnnexinV-FITC、PI雙染的方法,利用流式細胞儀分析了PDT后CT-26細胞的凋亡和壞死比例,正常細胞不會被FITC、PI著色,早期凋亡的細胞僅被FITC染色,而被雙染的細胞則是晚期凋亡和壞死的細胞,結(jié)果顯示半乳糖酞菁-PDT可同時誘導(dǎo)晚期凋亡和壞死,但是壞死的比例居多,且凋亡和壞死的比例均與給藥劑量呈正相關(guān),但是其壞死比例可能更敏感于光敏劑濃度.細胞自噬是廣泛存在于真核細胞內(nèi)的依賴溶酶體的降解途徑,生長因子缺乏、氧自由基、DNA損傷等均可引起細胞自噬[16]；MDC是一種熒光染料,可用來跟蹤自噬泡,因此在倒置熒光顯微鏡下就可以根據(jù)熒光信號的強弱變化來判斷自噬的活化.本實驗結(jié)果顯示,光敏劑半乳糖酞菁可導(dǎo)致腫瘤細胞的自噬,且自噬水平與濃度呈正相關(guān).有研究報道,如果光敏劑定位于線粒體內(nèi),則PDT主要引起細胞發(fā)生凋亡;如果定位于溶酶體則主要發(fā)生細胞自噬[15].據(jù)此可推斷此類光敏劑可能定位于腫瘤細胞的溶酶體上,通過促進細胞自噬來誘導(dǎo)細胞死亡.以上研究結(jié)果表明,半乳糖取代基提高了酞菁的水溶性和靶向性,其吸收規(guī)律與光敏劑濃度、取代基個數(shù)、脂溶性等因素有關(guān).根據(jù)MDC染色結(jié)果和流式結(jié)果可大膽推測半乳糖酞菁介導(dǎo)的光動力治療以引起細胞的自噬、壞死為主,而且本課題組推測其殺傷細胞的機制是破壞細胞的溶酶體和線粒體,但以溶酶體破壞為主,當(dāng)然這還需要進一步的研究和探討.

5 結(jié)論

半乳糖基增強了酞菁的水溶性,并且隨著糖基數(shù)目的增加其水溶性增加,親脂性下降.T1,T2,T3的PDT體外能明顯抑制結(jié)腸癌細胞的增殖,但T4的效果很弱,這可能與半糖基取代數(shù)目和化合物的光化學(xué)特性有關(guān).T2-PDT可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞產(chǎn)生大量的自噬泡,通過自噬途徑誘導(dǎo)腫瘤細胞死亡,并且通過流式檢測到T2-PDT也可引起細胞的壞死.因此，本課題組猜測半乳糖酞菁光動力治療結(jié)腸癌的機制主要是引起細胞的自噬、壞死.

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(責(zé)任編輯：趙藏賞)

Experiment research of photodynamic therapy of colon cancer with a novel photosensitizer galactose substituted phthalocyanines

GE Weiying1,ZHAO Zhanjuan1,HONG Ge2,ZHAO Jianxi3

(1.College of Medicine,Hebei University,Baoding 071002,China；2.Institute of Biomedical Engineering,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Tianjin 300192,China ；3.Department of Radiology，Affiliated Hospital of Hebei University,Baoding 071002,China)

To explore the effect and its related mechanism of new photosensitizers galactose substituted phthalocyanines(T1—T4)on the proliferation of colon cancer cell CT-26,consequently to provide experimental basis for the clinical photodynamic therapy of colon cancer,the water distribution coefficient of T1—T4 was detected to understand its water-soluble ability,the concentration and incubation time of T1—T4 were detected by fluorescence spectrophotometer to know their influence on CT-26 cell absorbing capacity,the cytotoxic effect of T1—T4 to CT-26 was detected by MTT the autophagy,apoptosis and necrosis of the colon cancer cells were detected through MDC staining and flow cytometry.It was found that the water-soluble ability of T1—T4 enhanced,with the number of galactose substituents increasing.The photodynamic damage effect of T1—T4 to CT-26 was positively correlated with their concentration.The absorptive amount of CT-26 to T1—T3 increased with the concentration of incubation and with the extension of incubation time,but it can hardly absorb T4.Autophagy,apoptosis and necrosis of CT-26 can be induced by T2,and there is obvious dose-dependent effect.Through the above data, colon cancer cell absorbs more T1—T3 when the incubation concentration and incubation time increase.T2 mediated photodynamic therapy can obviously inhibit CT-26.The mechanism may be due to cell autophagy.

phthalocyanine；photodynamic therapy；autophagy;apoptosis

10.3969/j.issn.1000-1565.2017.02.012

2016-09-25

河北大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)科建設(shè)項目(2015A2001);河北省研究生創(chuàng)新項目(S2016019);中西部高校綜合實力提升工程經(jīng)費資助項目

葛偉穎(1991—),女,河北保定人,河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部在讀碩士研究生.E-mail:837064531@qq.com

趙建喜(1966—),男,河北保定人,河北大學(xué)教授,主要從事影像診斷研究.E-mail:jianxizhaov@163.com 洪閣(1980—),男,天津人,中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所助理研究員,博士,主要從事抗腫瘤藥物的研究.E-mail:hongge6688@aliyun.com

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A

1000-1565(2017)02-0180-07