陳韻姿，陳淑映，黃 健，何寶凝，梁秀清

(廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000)

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

通絡(luò)祛風(fēng)貼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳韻姿，陳淑映，黃 健，何寶凝，梁秀清

(廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000)

目的建立通絡(luò)祛風(fēng)貼的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)貼膏中的腫節(jié)風(fēng)、山茱萸進(jìn)行定性鑒別，采用氣相色譜法測(cè)定冰片、樟腦的含量。結(jié)果腫節(jié)風(fēng)、山茱萸特征斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾。冰片、樟腦質(zhì)量濃度分別在0.125～0.60 g／L和 0.115～0.69 g／L范圍內(nèi)與各自峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率分別為99.90%和 99.85%，RSD分別為0.12%和0.05%(n＝5)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為通絡(luò)祛風(fēng)貼的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

通絡(luò)祛風(fēng)貼；冰片；樟腦；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中醫(yī)將類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）歸屬于“痹病”范疇， “痹”即閉阻不通之意。中醫(yī)理論認(rèn)為，風(fēng)、寒、濕、熱、毒、勞傷、產(chǎn)后及七情失調(diào)均為RA發(fā)病的誘因，而“正氣存內(nèi)，邪不可干”，發(fā)病主要內(nèi)因是肝腎不足或勞累過(guò)度耗損正氣，致素體正氣虧虛，正氣既虛外邪易入侵，復(fù)感風(fēng)寒濕，氣血痹阻不行，關(guān)節(jié)閉澀，或風(fēng)、寒、濕、熱之邪留滯筋骨關(guān)節(jié)，久之損傷肝腎陰血，筋骨失養(yǎng)，故見(jiàn)關(guān)節(jié)腫痛、僵硬、屈伸不利、活動(dòng)障礙，即為痹癥[1－4]。通絡(luò)祛風(fēng)貼的處方中含腫節(jié)風(fēng)、山茱萸、冰片、樟腦等藥材，能祛風(fēng)化濕、活血化瘀、消腫除痹止痛，用于跌打腫痛、風(fēng)濕腰腿痛、關(guān)節(jié)痛、筋骨痛、肌肉酸痛等。為保證制劑質(zhì)量和療效的穩(wěn)定性，本研究中采用薄層色譜(TLC)法對(duì)貼膏中的腫節(jié)風(fēng)、赤芍進(jìn)行定性鑒別，采用氣相色譜法對(duì)冰片、樟腦進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HWM－226型電熱恒溫水浴鍋（上海赫田科學(xué)儀器有限公司）；ZF－90型暗箱式紫外投射儀 (上海顧村電光儀器廠)；DHG－9146A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）；AS2060B型超聲儀（北京康科瑞檢測(cè)有限公司）；6890N型氣相色譜儀（安捷倫公司），包括7683B自動(dòng)進(jìn)樣器，BALSTON Gas Generator 9150。

1.2 試藥

通絡(luò)祛風(fēng)貼（自制，規(guī)格為7 cm×10 cm，批號(hào)分別為1451410，1451411，1451412）；馬錢(qián)苷對(duì)照品（批號(hào)為110736－200833），異嗪皮啶對(duì)照品（批號(hào)為110837－200304），樟腦對(duì)照品（批號(hào)為110747－200507），冰片對(duì)照品（批號(hào)為110743－200504），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別[5－6]

2.1.1 腫節(jié)風(fēng)

取樣品1貼，剪成小塊，除去蓋襯，加甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至體積不再減少，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，將溶液移入分液漏斗中，加乙酸乙酯振搖提取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取異嗪皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取不含腫節(jié)風(fēng)的陰性樣品1貼，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄TLC法試驗(yàn)，吸取供試品溶液4 μL、對(duì)照品溶液2 μL、陰性對(duì)照品溶液4 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（6∶4∶0.8）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1 A。

2.1.2 山茱萸

取樣品1貼，剪成小塊，除去蓋襯，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚30 mL振搖提取，棄去乙醚液，水液用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，再用正丁醇飽和水振搖洗滌2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取馬錢(qián)苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取不含山茱萸的陰性樣品1貼，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄TLC法試驗(yàn)，供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液各 1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G預(yù)制板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1 B。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定[7－11]

2.2.1 溶液制備

供試品溶液：取本品5貼，剪成小塊，除去蓋襯，置燒瓶中，加水150 mL，照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定法測(cè)定。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，再加乙酸乙酯5 mL，加熱回流40 min，分取乙酸乙酯液，用鋪有無(wú)水硫酸鈉的漏斗濾過(guò)，濾液加乙酸乙酯至5 mL，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液：稱取冰片對(duì)照品62.50 mg、樟腦對(duì)照品57.50 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加乙酸乙酯分別制成每1 mL含冰片2.5 mg、樟腦2.3 mg的對(duì)照品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按處方比例及制法，不加冰片、樟腦和橡膠，制成不含冰片、樟腦的陰性樣品，照2.2.1項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：HP－5毛細(xì)管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；FID檢測(cè)器；載氣：氮?dú)?，流速?.5 mL／min；氫氣，流速：40 mL／min；色譜柱程序升溫：90℃保留7 min，5℃ ／min升至140℃；檢測(cè)器溫度：280℃，進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣量：2 μL，分流比：10∶1。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定。供試品溶液色譜中呈現(xiàn)與對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同的色譜峰，詳見(jiàn)圖2。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，3.0 mL，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，得冰片0.125，0.25，0.30，0.40，0.60 g／L和樟腦0.115，0.23，0.345，0.46，0.69 g／L的系列對(duì)照品溶液，分別吸取2 μL注入氣相色譜儀，冰片峰面積分別為1 015.25，1 831.22，2 157.6，2 810.37，4 115.91；樟腦峰面積分別為986.40，1 609.44，2 232.49，2 855.54，4 101.63。以冰片、樟腦質(zhì)量濃度（X，g／L）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，冰片 Y＝6 527.7 X＋199.29（r＝0.999 9，n＝5），樟腦Y＝5 417.8 X＋363.35（r＝0.999 9，n＝5）。結(jié)果表明，冰片與樟腦質(zhì)量濃度分別在 0.125～0.60 g／L和0.115～0.69 g／L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：分別取冰片、樟腦對(duì)照品溶液各2 μL，照擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果冰片峰面積為1 009.3，1 009.1，1 009.4，1 008.3，1 010.4，1 010.7，平均為1 009.5，RSD＝0.81%(n＝6)；樟腦峰面積為1 004.6，1 005.7，1 005.2，1 004.5，1 004.4，1 004.5，平均為1 004.8，RSD＝0.47%(n＝6)。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定冰片和樟腦的含量。結(jié)果不同時(shí)間冰片峰面積分別為1 017.5，1 016.6，1 015.7，1 015.1，1 014.9，1 015.5，RSD＝0.90%(n＝6)，樟腦峰面積分別為1 005.8，1 005.6，1 006.4，1 004.7，1 004.9，1 004.5，RSD＝0.67%(n＝6)。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖2 氣相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為1451501）樣品，分別依法制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果得6份樣品冰片含量平均值為0.5 mg，RSD＝0.79%(n＝6)；樟腦含量平均值為0.4 mg，RSD＝0.95%(n＝6)。結(jié)果表明，方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：分別精密稱取陰性樣品6份，剪成小塊，除去蓋襯，分別加入一定量的冰片和樟腦對(duì)照品，依法制備供試品溶液，并進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

3 討論

3.1 處方中主要成分的探討[12－15]

腫節(jié)風(fēng)為金粟蘭科腫節(jié)風(fēng)的全草，又名草珊瑚、九節(jié)茶、接骨木等，是江西等省稀有的中藥材之一。其味辛、苦，性平，有抗菌消炎、清熱、解毒、祛風(fēng)除濕、活血止痛、通經(jīng)接骨等功效，用于治療各種炎癥性疾病、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、瘡瘍腫毒、跌打損傷。山茱萸含有生理活性較強(qiáng)的山茱萸苷、酒石酸、沒(méi)食子酸、蘋(píng)果酸、樹(shù)酯、鞣質(zhì)和多種維生素等有效成分，具有增強(qiáng)免疫、抗炎、抗菌等藥理作用。樟腦味辛，性溫，具有通竅辟穢、溫中止痛等作用。冰片能通諸竅，散郁火，去翳明目，消腫止痛。

3.2 薄層色譜條件的選擇

腫節(jié)風(fēng)的薄層鑒別曾采用甲苯－乙酸乙酯－甲酸（9∶4∶1），斑點(diǎn)分離不理想，認(rèn)為與展開(kāi)劑的極性過(guò)大有關(guān)，經(jīng)多次試驗(yàn)，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（6∶4∶0.8）為展開(kāi)劑，具有良好的分離效果，斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾，可作為本品的TLC鑒別系統(tǒng)。山茱萸的薄層鑒別中曾采用藥典方法，用甲醇超聲處理后的濃縮液進(jìn)行點(diǎn)樣，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)成分太多，特征斑點(diǎn)被掩蓋，改為超聲提取后分別用乙醚、水飽和正丁醇多次振搖提取，以正丁醇飽和的水進(jìn)行提取、洗滌、處理。曾選擇藥典中三氯甲烷－甲醇（3∶1）作為山茱萸的展開(kāi)劑，斑點(diǎn)分離不理想，改用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑后，斑點(diǎn)分離清晰、理想。

3.3 氣相色譜方法的建立

曾用TLC法對(duì)方中的冰片樟腦進(jìn)行定性鑒別，出現(xiàn)供試品溶液無(wú)斑點(diǎn)的情況，考慮到樟腦、冰片本身具有易揮發(fā)、易升華的化學(xué)性質(zhì)，采用氣相色譜法對(duì)兩者進(jìn)行含量測(cè)定。在提取方法的考察中，曾用乙酸乙酯浸泡貼膏1 h后超聲45 min，但此方法的回收率不及揮發(fā)油測(cè)定法高，而且揮發(fā)油測(cè)定法方法簡(jiǎn)便快捷，故作為本研究中冰片、樟腦的提取方法。測(cè)定樟腦、冰片的含量時(shí)對(duì)柱溫進(jìn)行了優(yōu)選，柱溫過(guò)低時(shí)分析時(shí)間較長(zhǎng)，柱溫過(guò)高時(shí)柱效偏低，冰片、樟腦未能完全分離。結(jié)果表明，用色譜柱程序升溫，90℃保留 7 min，5℃／min升至

140℃；檢測(cè)器溫度為280℃，進(jìn)樣口溫度為250℃，分離效果最佳。

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Study on Quality Standard of Tongluo Qufeng Plaster

Chen Yunzi,Chen Shuying,Huang Jian,He Baoning,Liang Xiuqing
(Foshan Hospital of TCM,Foshan,Guangdong,China 528000)

Objective To establish the method for the quality standard of Tongluo Qufeng Plaster.M ethods Herba Sarcandrae and Fructus Corni in the Plaster were identified by TLC,while the content of borneol and camphor were determined by GC.Results The chromatographic spots were clear without interference and easy to recognize.The linear ranges of borneol and camphor were 0.125－0.60 g／L and 0.115－0.69 g／L,and the average recoveries were 99.90%(RSD＝0.12%)and 99.85%(RSD＝0.05%)respectively.Conclusion The method is easy,accurate and reproducible,which can be used as the quality standard for Tongluo Qufeng Plaster.

Tongluo Qufeng Plaster;borneol;camphor;quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)05－0037－04

2016－10－23；

2016－11－22)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.010

陳韻姿（1982－），女，大學(xué)本科，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)及藥品檢驗(yàn)工作，（電子信箱）wincechen＠163.com。