周 文，潘 琪，張 敏，陳燕芬，劉 博

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院·廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院，廣東廣州 510006；2.廣州研創(chuàng)生物技術(shù)發(fā)展有限公司，廣東廣州 510663)

·實驗研究·

防己黃芪湯顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

周 文1，潘 琪1，張 敏2，陳燕芬1，劉 博1

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院·廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院，廣東廣州 510006；2.廣州研創(chuàng)生物技術(shù)發(fā)展有限公司，廣東廣州 510663)

目的建立防己黃芪湯顆粒的薄層色譜（TLC）鑒別法。方法 采用TLC法，對防己黃芪湯顆粒中的代表性藥物熟地黃、黃芪、防己進行定性鑒別。結(jié)果各供試品溶液色譜中，在與各自對照品藥材或?qū)φ掌啡芤荷V相同位置上，顯相同顏色的斑點，鑒別斑點清晰，特征斑點專屬性強，陰性對照無干擾。結(jié)論 該方法專屬性強，重復(fù)性好，靈敏度高，可作為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

防己黃芪湯顆粒；薄層色譜；定性鑒別；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

防己黃芪湯是根據(jù)醫(yī)院名老中醫(yī)多年的臨床驗方研制而成的中藥制劑，以熟地黃、黃芪、防己、鹿角膠為主藥，具有溫補腎陽、益氣活血的功效，多用于治療腎陽虧虛、腰膝冷痛、虛寒喘咳等[1－3]。熟地黃味甘，性微溫，具有滋陰補血、益精填髓之功效[4]，為方中君藥；防己具有利水消腫、祛風(fēng)止痛的功效，用于治療水腫腳氣、濕疹腸癰、風(fēng)濕痹痛等癥[5]，為方中臣藥；黃芪具有扶正祛邪、益氣固表、補虛益損等多種功效[6]。為了提高患者的用藥依從性，依據(jù)臨床需要和劑型選擇，醫(yī)院將原湯劑改進為顆粒劑。本研究中采用薄層色譜(TLC)法鑒定該制劑中的防己、黃芪、熟地黃3味中藥材，作為檢測該制劑質(zhì)量的指標(biāo)，以期為改進該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

卡瑪薄層點樣展開及成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）；DK－S26型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；BS224S型分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；LK／CSJ－20型超聲波清洗機（成都老肯科技有限公司）；預(yù)制硅膠G板（100 mm×100 mm，青島海洋化工廠）。

1.2 試藥

防己黃芪湯顆粒（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院自制，批號分別為2014082111，2014091125，2014091521）；熟地黃對照藥材（批號為121198－201105），黃芪對照品（批號為121462－201003），粉防己堿（批號為110711－200708），均購自中國食品藥品檢定研究院；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 熟地黃[7－9]

2.1.1 溶液制備

供試品溶液：取本品粉末8 g，加80%甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次10 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，即得。

對照藥材溶液：取熟地黃對照藥材0.5 g，按供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

陰性對照溶液：按處方稱取缺熟地黃的各藥材，模擬處方生產(chǎn)缺熟地黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.1.2 薄層色譜試驗

照TLC法(附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液5 μL、對照品溶液3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇(12∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%硫酸香草醛，在105℃加熱至斑點顯色清晰。置日光燈下檢視，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾。詳見圖1。

圖1 熟地黃薄層色譜圖

2.2 黃芪[10－12]

2.2.1 溶液制備

供試品溶液：取本品粉末8 g，加乙醇30 mL，加熱回流20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3%氫氧化鈉溶液15 mL使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5～6，用乙酸乙酯3 mL振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干。殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，即得。

對照藥材溶液：取黃芪對照藥材1 g，按供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

陰性對照溶液：按處方組成稱取缺黃芪的各藥材，模擬處方生產(chǎn)缺黃芪的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.2 薄層色譜試驗

照TLC法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光主斑點，且陰性對照無干擾。詳見圖2。

2.3 防己[13－14]

2.3.1 溶液制備

供試品溶液：取本品16 g，研細(xì)，加水40 mL，稀鹽酸調(diào)至酸性，攪拌使溶解，濾過，濾液用濃氨溶液調(diào)至顯堿性，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并提取液，水浴揮干溶劑，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

對照品溶液：取粉防己堿2 mg，加三氯甲烷配制成每1 mL含1 mg的混合溶液，即得。

圖2 黃芪薄層色譜圖

陰性對照溶液：按處方組成稱取缺黃芪的各藥材，模擬處方生產(chǎn)缺防己的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.3.2 薄層色譜試驗

照TLC法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮甲醇－5%濃氨試液(6∶1∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾。詳見圖3。

2.4 試驗條件選擇試驗

2.4.1 薄層板選擇

在選定的條件下，分別運用手工鋪制的硅膠G板與預(yù)制硅膠G板。結(jié)果表明，兩者的斑點均清晰，條帶無擴散，均能滿足鑒別的要求。詳見圖4。

圖3 防己薄層色譜圖

2.4.2 影響因素考察

用不同濃度的硫酸水溶液控制相對濕度，觀察展開劑在相對濕度為32%和88%時的展開情況。結(jié)果顯示，濕度影響較小，能滿足鑒別的要求，詳見圖5。在相對濕度為65%時，分別在室溫（20，4℃）下考察溫度對展開條件的影響。結(jié)果顯示，溫度影響較小，能滿足鑒別的要求，詳見圖6。

圖4 G板影響因素考察薄層色譜圖

圖5 相對濕度影響因素考察薄層色譜圖

圖6 溫度影響因素考察薄層色譜圖

3 討論

黃芪藥材按照2015年版《中國藥典(一部)》檢測方法，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，但色譜斑點較少，同時斑點分離效果并不理想。因此，改用三氯甲烷－甲醇(10∶1)為展開劑，可得到多個斑點[14]。

熟地黃藥材以甲醇作為提取溶劑，采用超聲處理的方法，可達到無毒、省時、效果好的目的。同時，在鑒別熟地黃藥材時，經(jīng)反復(fù)試驗，優(yōu)化較為理想的TLC分離系統(tǒng)，以氯仿－甲醇（10∶1）為展開劑，斑點明顯，無拖尾現(xiàn)象，重復(fù)性好，分辨率較高。

熟地黃藥材按照2015年版《中國藥典(一部)》檢測方法，用乙醇作提取溶劑，采取超聲處理的方法，達到了無毒、省時、效果好的目的。

TLC法是中藥鑒別、中藥成方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要的研究和控制手段，對中藥成方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義[15]。TLC法是藥物鑒別最基本、簡便，使用最廣泛的方法[16]，分別在化學(xué)藥品、抗生素、中藥材、中成藥及基層藥品的鑒別檢查中起重要作用[17]，其專屬性好，分析速度快，設(shè)備簡單，操作方便。

綜上所述，采用TLC定性鑒別防己黃芪湯顆粒中的防己、黃芪和熟地黃藥材，所得斑點清晰，分離度良好，專屬性強，陰性樣品無干擾，重復(fù)性好，方法簡便易行，可作為該制劑質(zhì)量控制的方法。

[1]秦增樣，馬引懷.防己黃芪湯藥理與應(yīng)用[J].中成藥，1998，20(9):37－38.

[2]馬 界，陳學(xué)忠，王 毅.防己黃芪湯加減結(jié)合西藥治療高血壓腎損傷水腫的臨床觀察[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2012，18(8):879－880. [3]王 嵐，范堯夫，魏睦新.防己黃芪湯加味治療原發(fā)性腎病綜合征療效分析[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，15(3): 111－112.

[4]朱 妍，舒 暢.熟地黃活性成分藥理作用研究進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，7（11）：173－175.

[5]侯紹遠(yuǎn) .防己及其偽品的性狀鑒別[J].中國藥業(yè)，2008，17(10):71－71.

[6]劉 瑛，徐銀伍.地黃及加工炮制品薄層鑒別方法的改進[J].時珍國醫(yī)國藥，2005，16(8):765－769.

[7]曾聰彥，梅全喜.熄風(fēng)通腦膠囊中地黃的薄層色譜鑒別研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，7(增刊):17－18.

[8]霍 浩.舒肝樂片的制備與薄層色譜鑒別[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2003，9(6):68－69.

[9]華 豐 .復(fù)方黃芪口服液薄層鑒別[J].時珍國醫(yī)國藥，2001，12(1):12－15.

[10]金 芳，俞明霞，顧 凱，等.黃芪的薄層色譜熒光鑒別[J].中國中藥雜志，2002，27(9):711－712.

[11]孫冬梅，陳路林.健胃舒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中成藥，2001，24(10):752－753.

[12]黃 蘅.炎見寧片中防己的薄層色譜鑒別[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17(24):55－56.

[13]鐘永康.桔梗、連翹、五倍子薄層色譜鑒別方法的研究與改進[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，1(3):13－14.

[14]張 燕，莫曉燕，曹 陽，等.芪膠膏的薄層色譜鑒別[J].中國藥業(yè)，2013，22（23）：32－33.

[15]徐芳琴，馬晨超，曹金一，等.露源膠囊中枸杞子、女貞子的薄層色譜鑒別研究[J].中國藥業(yè)，2016，25(20):57－59.

[16]何騰龍，譚亞亞，孫艷霞.愈骨膠囊的薄層色譜鑒別[J].中國藥業(yè)，2014，23(13):32－33.

[17]高雅風(fēng)，孫大中，王俊淞，等.痛風(fēng)立消復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，24(13):69－72.

Quality Standard of Fangji Huangqi Decoction Granules

Zhou Wen1,Pan Qi1,Zhang Min2,Chen Yanfen1,Liu Bo1
(1.The Second Affiliated Hospital to Guangzhou University of Chinese Medicine·Guangdong Provincial Academy of Chinese Medical Sciences,Guangzhou, Guangdong,China 510006; 2.Guangzhou Research＆ Creativity Biotechnology Co.,Ltd,Guangzhou,Guangdong,China 510663)

Objective To establish the quality standard of Fangji Huangqi Decoction Granules.M ethods Radix Rehmanniae Praeparata, Radix Astragali and Cocculus Orbiculatus in the Granules were identified by thin－layer chromatogram(TLC).Results The characteristic spots on the chromatogram of the preparation were corresponding to the ones of contrast product,and the negative contrast solution had no interference.Conclusion This method has good specialization,reproducibility and sensitivity,which can be used for the quality control of Fangji Huangqi Decoction Granules.

Fangji Huangqi Decoction Granules;TLC;qualitative identification;quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)05－0010－05

2016－10－18；

2016－11－01)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.003

國家自然科學(xué)基金[81202398]；廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)藥轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究專項[YN2014ZHR209，YN2015MS03]；廣東省科技計劃項目[2013B010102006，2014A020221035，2015A020211025]；國家中醫(yī)藥管理局國家中醫(yī)臨床研究基地業(yè)務(wù)建設(shè)科研專項[JDZX2012010]。

周文(1982－)，男，碩士研究生，研究方向為中藥化學(xué)和藥物制劑，（電子信箱）xtunzhou＠163.com。

劉博(1979－)，男，研究員，博士研究生導(dǎo)師，研究方向為藥物化學(xué)與中藥化學(xué)，（電子信箱）doctliu＠263.net。