劉云云，孫旭，張世曉，李興東，馬曉昱，陳瑤，趙勇

藥學(xué)

四種滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液質(zhì)量影響的比較＊

劉云云，孫旭，張世曉，李興東，馬曉昱，陳瑤，趙勇＊

目的規(guī)范鹽酸丁卡因注射液的滅菌方法，確保鹽酸丁卡因注射液的安全有效。方法采用不同滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液滅菌，運(yùn)用滴定法和HPLC法分別測定鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因的含量，無菌試驗(yàn)檢查滅菌后鹽酸丁卡因注射液的無菌性。結(jié)果鹽酸丁卡因宜采用流通蒸汽滅菌30 min進(jìn)行滅菌。結(jié)論流通蒸汽滅菌30 min即可保證鹽酸丁卡因注射液的無菌性，又可確保其含量的穩(wěn)定性，是較為理想的滅菌方法。

鹽酸丁卡因；滅菌方法；質(zhì)量控制

《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》［1］（簡稱《軍規(guī)》）2002年版收載鹽酸丁卡因注射液，規(guī)格分為0.25%，0.3%，0.5%，1%和2%，用于局部麻醉，如表面麻醉、神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯及椎管內(nèi)阻滯，該制劑《軍規(guī)》所采用的滅菌方法為100℃流通蒸汽滅菌30 min，含量測定方法為分光光度法或滴定法。《中國藥典》［2］2010年版二部附錄XVII滅菌法，濕熱滅菌條件通常采用121℃×15 min，121℃×30 min或者116℃×40 min，也可采用其他參數(shù)，但必須能保證物品滅菌后SAL≤10-6。已有文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法測定鹽酸丁卡因的含量。因此，為探討鹽酸丁卡因注射液滅菌工藝的合理性，本文分別采用上述4種滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液進(jìn)行滅菌，比較了滴定法和HPLC法測定4種滅菌參數(shù)條件（溫度和時(shí)間）下鹽酸丁卡因含量變化，并對4種滅菌法的無菌保證進(jìn)行檢查，以期為保證鹽酸丁卡因注射液的安全有效提供科學(xué)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

蒸汽滅菌柜（R20120046，24 m3，哈爾濱宏光容器設(shè)備有限公司），溫度驗(yàn)證儀（S16型，深圳市研工科技有限公司），UV2501型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津），安捷倫1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫）。鹽酸丁卡因標(biāo)準(zhǔn)品（100456-2000301，中國食品藥品檢定研究所，100%），鹽酸丁卡因注射液（解放軍159醫(yī)院制劑室，規(guī)格：0.25%、0.3%、0.5%、1%和2%，批號(hào)：20130916、20131019、20131020、20131021、20131022、20131023、20131024、20131025、20131026、20131027、20131028），甲醇、乙腈、庚烷磺酸鈉（色譜純）；三乙胺、磷酸二氫鉀（分析純）；水（高純水）。

2 方法與結(jié)果

2.1 滅菌方法及無菌檢查取新鮮配制規(guī)格分為0.25%、0.3%、0.5%、1%和2%的鹽酸丁卡因注射液樣品，采用《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》的100℃流通蒸汽30 min滅菌；《中國藥典》二部附錄XVII滅菌法，濕熱滅菌121℃熱壓滅菌15 min；121℃熱壓滅菌30 min或者116℃熱壓滅菌40 min方法進(jìn)行滅菌；分光光度法和HPLC法分別測定滅菌后鹽酸丁卡因注射劑中丁卡因的含量；《中國藥典》二部附錄XIH無菌檢查法檢查無菌。

2.2 含量測定方法

2.2.1 滴定法精密量取本品適量（約相當(dāng)于鹽酸丁卡因50 mg），加對酚酞指示液顯中性的乙醇-氯仿（1∶1）混合液20 ml，酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L）滴定至水層顯微紅色。每1 ml的氫氧化鈉滴定液相當(dāng)于6.017 mg的C15H24N2O2·HCl［1］。

2.2.2HPLC法色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：水-甲醇-乙腈（45∶45∶10，v/v，含0.02%庚烷磺酸鈉、0.34%磷酸二氫鉀，三乙胺調(diào)pH至7.0）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：310 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μl。在該色譜條件下，理論塔板數(shù)按鹽酸丁卡因峰計(jì)算為11000，保留時(shí)間約13.5 min，色譜行為良好［2-4］。見圖1、2。

圖1 鹽酸丁卡因?qū)φ掌?/p>

圖2 鹽酸丁卡因注射液樣品

2.2.2.1 溶液制備精密稱取鹽酸丁卡因標(biāo)準(zhǔn)品25.13 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，用50%的甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液；精密量取該溶液2 ml，置50 ml容量瓶，用50%甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。精密量取樣品5 ml，置100 ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，精密量取2 ml，置50 ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。精密量取缺鹽酸丁卡因的0.72%氯化鈉溶液0.1 ml，置50 ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，作為陰性對照品溶液。

2.2.2.2 方法學(xué)考察（1）線性關(guān)系考察。精密量取對照品貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0 ml，分別置50 ml容量瓶，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，以鹽酸丁卡因峰面積A對進(jìn)樣濃度C進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A=26.17C-6.6153（r=0.9999，n=6）。結(jié)果表明鹽酸丁卡因質(zhì)量濃度在5.026～160.832 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。（2）精密度試驗(yàn)。取0.02mg/ ml的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，20 μl/次，以峰面積計(jì)算，得出RSD=0.25%（n=5）。（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣20 μl。結(jié)果峰面積RSD=0.62%（n=8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。（4）重現(xiàn)性試驗(yàn)。取同一批的樣品5份，依法測定。結(jié)果平均為，RSD=0.35%（n= 5）。（5）鹽酸丁卡因加樣回收試驗(yàn)。精密量取已知含量的樣品0.1 ml共6份，置50 ml容量瓶中，分別精密加入對照品貯備液各0.5、1.0、2.0 ml，各2份。用流動(dòng)相稀釋至刻度。依法測定含量，以外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸丁卡因注射液加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.2.3 樣品含量測定取規(guī)格為0.25%、0.3%、0.5%、1%和2%的鹽酸丁卡因注射液樣品，分別采用100℃流通蒸汽滅菌30 min；121℃熱壓滅菌15 min；121℃熱壓滅菌30 min和116℃熱壓滅菌40 min方法進(jìn)行滅菌；冷卻后按照2.2溶液制備項(xiàng)下制備供試品溶液。取對照品溶液和供試品溶液各進(jìn)樣20 μl，按照外標(biāo)法進(jìn)行含量測定，并與《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》和《中國藥典》中的滴定方法比較，結(jié)果見表2和表3。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果顯示，鹽酸丁卡因注射液分別采用100℃流通蒸汽滅菌30 min；121℃熱壓滅菌15 min；121℃熱壓滅菌30 min和116℃熱壓滅菌40 min，其溶液的顏色、pH沒有顯著變化；無菌檢查結(jié)果亦表明這4種滅菌方法均能保證鹽酸丁卡因注射液的無菌性。因此，外觀、pH和無菌這三項(xiàng)檢查表明此4種滅菌方法均可用于鹽酸丁卡因注射液。

紫外掃描結(jié)果顯示，鹽酸丁卡因在波長310 nm處有最大吸收，因此，在HPLC方法中采用的檢測波長為310 nm。本研究比較了不同文獻(xiàn)HPLC法測定鹽酸丁卡因含量的效果，得到HPLC色譜條件為：色譜柱Agilent Eclipse Plus C18柱，流動(dòng)相為水-甲醇-乙腈（45∶45∶10，v/v，含0.02%庚烷磺酸鈉、0.34%磷酸二氫鉀，三乙胺調(diào)pH至7.0），流速為1.0 ml/min，檢測波長為310 nm，柱溫為室溫；進(jìn)樣量為20 μl時(shí)線性關(guān)系、穩(wěn)定性、精密度和重現(xiàn)性均較好，能在理想的時(shí)間內(nèi)得到穩(wěn)定、對稱、峰寬較窄、高靈敏度的色譜峰，表明該方法可行。

從鹽酸丁卡因注射液的含量測定結(jié)果可看出，4種滅菌方法主藥的含量基本符合規(guī)定，但是隨著滅菌溫度的升高，滅菌時(shí)間的增長，主藥含量呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢。濃度越低，含量降低得越明顯，0.25%鹽酸丁卡因注射液使用121℃滅菌，HPLC法測定鹽酸丁卡因含量為0.234和0.231，分別低于標(biāo)示量的95.0%，出現(xiàn)不合格現(xiàn)象（結(jié)果見表3）。這些數(shù)據(jù)表明滅菌溫度是影響鹽酸丁卡因注射劑含量的主要因素，其次為滅菌時(shí)間，滅菌溫度越高，時(shí)間越長，則鹽酸丁卡因的含量降低越多。相對于116℃和121℃滅菌，采用流通蒸汽滅菌30 min，外觀、主藥穩(wěn)定性和無菌均符合要求。因此，在保證無菌的條件下，為減少主藥降解，宜采用滅菌溫度較低的滅菌方法，即首選《軍規(guī)》的流通蒸汽滅菌30 min進(jìn)行滅菌。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，HPLC法的含量測定結(jié)果與滴定法無顯著性差異，但從靈敏度和準(zhǔn)確度上，HPLC法優(yōu)于滴定法，是更加準(zhǔn)確的測定方法。

表2 不同滅菌方法對鹽酸丁卡因注射液含量的影響

表3 鹽酸丁卡因的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105.0%

［1］中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范［S］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：306.

［2］國家藥典委員會(huì)編.《中國藥典》2010年版二部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：630.

［3］李昂，胡翮，郭丙炎.鹽酸丁卡因注射液中鹽酸丁卡因的含量測定［J］.中國藥業(yè)，2008，17（24）：23.

［4］吳洪文，王超華.HPLC測定鹽酸丁卡因注射液的含量［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25（5）：442-443.

［2016－08－15收稿，2016－09－13修回］［本文編輯：劉一洋］

Influence of four different sterilization methods on the injection quality of tetracaine hydrochloride：Comparative studyComparative study

LIU Yun-yun①，SUN Xv，ZHANG Shi-xiao，et al.①Institute for Drug and Instrument Control of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250022，China

ObjectiveTo validate the sterilization methods of tetracaine hydrochloride injection so as to ensure its safety and effective ness.MethodsDifferent kinds of methods were used to sterilize the tetracaine hydrochloride injection，then the content of tetracaine hydrochloride were determined by titration method and HPLC，and the sterility of tetracaine hydrochloride injection was measured.ResultsFlow-steam sterilized for 30min is suitable for the sterilization of tetracaine hydrochloride injection.ConclusionFlow-steam sterilized for 30mins not only ensure the sterility of tetracaine hydrochloride injection，but also can keep its content stability，thus it is more ideal sterilization method.

Tetracaine hydrochloride injection；Sterilization methods；Quality control

R971.2

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.03.021

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題計(jì)劃（13ZJZ21-2）

250022山東濟(jì)南，濟(jì)南軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所（劉云云，孫旭，李興東，馬曉昱，陳瑤）；463000河南駐馬店，解放軍159醫(yī)院（張世曉）；250014山東濟(jì)南，原濟(jì)南軍區(qū)聯(lián)勤部疾病預(yù)防控制中心（趙勇）

趙勇，Email：475769669@qq.com