李 婷，許艷秋，安萬(wàn)霞，王廣成，高立明，陳丙坤，吳春先

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

◆農(nóng)藥分析◆

蛇床子素的高效液相色譜分析

李 婷，許艷秋，安萬(wàn)霞，王廣成，高立明，陳丙坤，吳春先

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

采用高效液相色譜法，以乙腈＋水為流動(dòng)相，使用ZORBAX SB-C18不銹鋼柱和二極管陣列檢測(cè)器，在321 nm波長(zhǎng)下對(duì)蛇床子素水乳劑中有效成分進(jìn)行定量檢測(cè)。結(jié)果表明，方法的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.002 3，變異系數(shù)為0.24%，平均回收率為101.11%。

蛇床子素；高效液相色譜；分析

蛇床子素（cnidiadin）CAS登錄號(hào)為[484-12-8]，分子式為C15H16O3，化學(xué)名稱(chēng)為7-甲氧基-8-異戊烯基香豆素。其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

圖1 蛇床子素結(jié)構(gòu)圖

蛇床子素是從傘形科植物中提取分離出的天然香豆素類(lèi)化合物，外觀為黃綠色至白色結(jié)晶粉末，不溶于水，易溶于丙酮、甲醇、乙醇等多種常用溶劑[1]。蛇床子素作為植物源殺蟲(chóng)劑，以觸殺為主，胃毒為輔，藥劑進(jìn)入昆蟲(chóng)體內(nèi)后，作用于神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致害蟲(chóng)肌肉非功能性收縮，最終衰竭死亡。其對(duì)多種害蟲(chóng)，如菜青蟲(chóng)、茶尺蠖、棉鈴蟲(chóng)、甜菜夜蛾以及各種蚜蟲(chóng)等有效[2]。作為植物源殺菌劑，其通過(guò)抑制病原菌對(duì)葡萄糖和鈣的吸收，阻礙病原菌細(xì)胞壁中幾丁質(zhì)的沉淀，從而造成菌絲斷裂，孢子產(chǎn)生、萌發(fā)、粘附、入侵及芽管伸長(zhǎng)受阻[3-4]。

本文建立反相高效液相色譜法對(duì)蛇床子素水乳劑進(jìn)行定量分析。方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，適用于企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

乙腈（色譜純）、水（蒸餾水）；98%蛇床子素標(biāo)樣，北京百靈威科技有限公司；1%蛇床子素水乳劑。

Waters 2695高效液相色譜儀，具有二極管陣列檢測(cè)器（2996）和自動(dòng)進(jìn)樣器；Empower I色譜工作站；色譜柱：不銹鋼柱（150 mm×4.6 mm），內(nèi)裝ZORBAX SB-C18填充物（5 μm）；過(guò)濾器：濾膜孔徑約0.45 μm。

1.2 液相色譜操作條件

流動(dòng)相：V（乙腈）∶V（水）=60∶40；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：321 nm；進(jìn)樣體積：10μL。在此條件下，蛇床子素保留時(shí)間約為6.36min。

蛇床子素標(biāo)樣和水乳劑的高效液相色譜圖見(jiàn)圖2、圖3。

圖2 蛇床子素標(biāo)樣高效液相色譜圖（321nm）

圖3 蛇床子素水乳劑高效液相色譜圖

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 溶液的配制

稱(chēng)取蛇床子素標(biāo)樣約0.03 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲10 min。移取上述標(biāo)樣母液10 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，制得標(biāo)樣溶液。

稱(chēng)取含蛇床子素0.006 g（精確至0.000 2 g）左右的試樣于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲10 min，過(guò)濾、待測(cè)。

1.3.2 測(cè)定與計(jì)算

在1.2液相色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，至相鄰2針的響應(yīng)值相對(duì)變化＜1.5%。按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測(cè)定。

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中蛇床子素的峰面積分別進(jìn)行平均，然后按下式計(jì)算試樣中蛇床子素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）。

式中：A標(biāo)、A樣分別為標(biāo)樣溶液、試樣溶液中蛇床子素峰面積的平均值；m標(biāo)、m樣分別為標(biāo)樣和試樣的質(zhì)量，g；P標(biāo)為標(biāo)樣中蛇床子素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)Waters二極管陣列檢測(cè)器2996的數(shù)據(jù)采集功能，得到蛇床子素200～400 nm紫外波長(zhǎng)掃描圖（圖4）。從圖4中看出，蛇床子素的最大吸收波長(zhǎng)為321 nm，其在257 nm處也有相對(duì)較好的吸收。當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為321 nm時(shí)，基線噪音小，雜質(zhì)峰干擾少，故將方法檢測(cè)波長(zhǎng)定為321 nm。

圖4 蛇床子素紫外吸收光譜圖

2.2 流動(dòng)相的選擇

依據(jù)蛇床子素的理化性質(zhì)，選用乙腈溶解樣品。流動(dòng)相的選擇則根據(jù)蛇床子素的特點(diǎn)，對(duì)不同體積比的乙腈＋水在色譜柱上進(jìn)行選擇比較。當(dāng)乙腈＋水（體積比60∶40）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min時(shí)，有效成分與雜質(zhì)能很好分離，峰形對(duì)稱(chēng)，基線平穩(wěn)，且分析時(shí)間適中。

2.3 線性相關(guān)性試驗(yàn)

稱(chēng)取蛇床子素標(biāo)樣配制質(zhì)量濃度分別為0.059 3, 0.095 7,0.120 5,0.143 8,0.180 0,0.236 3 g/L的標(biāo)樣溶液。在1.2色譜操作條件下進(jìn)行分析，以蛇床子素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖5）。方法線性方程為y=35134163x-41499，線性相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999 8。

圖5 蛇床子素線性關(guān)系圖

2.4 精密度試驗(yàn)

從同一水乳劑中準(zhǔn)確稱(chēng)取5份試樣，在1.2反相高效液相色譜操作條件下進(jìn)行測(cè)定。測(cè)得蛇床子素的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.002 3，變異系數(shù)為0.24%（表1）。

2.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱(chēng)取6份試樣，分別準(zhǔn)確加入不同體積的標(biāo)樣溶液，在1.2色譜操作條件下進(jìn)行分析。測(cè)得蛇床子素的平均回收率為101.11%（表2）。

表1 蛇床子素精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)高效液相色譜分析條件進(jìn)行選擇與優(yōu)化，建立了蛇床子素水乳劑的高效液相色譜分析方法。本方法的準(zhǔn)確度和精密度較高，線性關(guān)系良好，是蛇床子素水乳劑的一種可行分析方法。

[1]孫小兵,葉吉琴.蛇床子素研究進(jìn)展[J].大眾科技,2009(2): 132-133.

[2]石志琦,陳浩.新型植物源創(chuàng)制農(nóng)藥蛇床子素 [J].世界農(nóng)藥, 2010,32(6):52-54.

[3]Shi Z Q,Shen S G,Zhou W,et al.Fusarium graminearum Growth Inhibition Due to Glucose Starvation Caused by Osthol[J].International Journal of Molecular Sciences,2008,9(3):371-382.

[4]石志琦.蛇床子素作為殺菌劑的活性研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

（責(zé)任編輯：顧林玲）

Analysis of Cnidiadin by HPLC

LI Ting,XU Yan-qiu,AN Wan-xia,WANG Guang-cheng,GAO Li-ming,CHEN Bing-kun,WU Chun-xian
(Sichuan Province Institute for the Control of Agricultural,Chengdu 610041,China)

A method for quantitative analysis of cnidiadin was described by HPLC,using acetonitrile and water as mobile phase,on ZORBAX SB-C18column and DAD,at 321 nm wavelength.The results showed that the linear correlation coefficient of the method was 0.999 8,the standard deviation was 0.002 3,the variation coefficient was 0.24%,the average recovery was 101.11%.

cnidiadin;HPLC;analysis

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.02.011

2016-09-01

李婷（1985—），女，四川省遂寧市人，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)藥管理和農(nóng)藥檢測(cè)工作。E-mail：liting5114@163.com