杜犀+何新+黃宇虹+李自強(qiáng)

[摘要] Cocktail探針?biāo)幬锓ㄗ鳛橐环N快速、準(zhǔn)確、高通量的評(píng)價(jià)CYP450酶活性的研究方法廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)早期篩選、藥物代謝途徑及機(jī)制研究、藥物相互作用研究、指導(dǎo)臨床合理用藥、上市藥物再評(píng)價(jià)及協(xié)助肝腎病理研究等諸多領(lǐng)域。該文對(duì)Cocktail探針?biāo)幬锓ǖ奶攸c(diǎn)做簡(jiǎn)要說(shuō)明，著重介紹其在中醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用進(jìn)展，從中藥活性成分的代謝機(jī)制研究，炮制過(guò)程，方劑配伍對(duì)CYP450的影響，揭示中成藥CYP450代謝特點(diǎn)規(guī)律，民族藥學(xué)應(yīng)用情況，中藥保肝作用及中醫(yī)證候模型研究等，并總結(jié)歸納現(xiàn)有研究成果，比較其在中西醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)應(yīng)用的異同點(diǎn)，為該領(lǐng)域的深入研究工作提供參考。

[關(guān)鍵詞] Cocktail探針?biāo)幬锓?；?xì)胞色素P450酶；中醫(yī)藥；代謝

[Abstract] Cocktail probe substrates approach is a fast，sensitive and high through put method to determine cytochrome P450 enzymes activity. It has been widely used to screen early drug development，analyze drug metabolism types and confirm the metabolism pathways，study drug-drug interactions，optimize clinical regimen，evaluate post marketing drugs and help liver/kidney pathological studies. This article reviewed characteristics of Cocktail probe substrates，focused on the application to traditional Chinese medicine to CYP450 system as follows： the metabolic pathway research of Chinese herb active ingredients；processing way and compatibility of medical herbs affect CYP450；find out the metabolic characteristic of Chinese patent medicine，study in pharmacy of national minority；do research in liver protective effect of traditional Chinese medicine and evaluate traditional Chinese medicine syndromes in animal models. This article make a summary of existing research results and also make a comparison of cocktail probe substrates approach application to western medicine and Chinese medicine.

[Key words] Cocktail probe substrates approach；cytochrome P450；traditional Chinese medicine；metabolism

doi：10.4268/cjcmm20162410

肝臟細(xì)胞色素 P450（CYP450）是肝臟微粒體混合功能氧化酶系的主要成分，是一組由許多同工酶組成的超基因大家族，具有遺傳多態(tài)性，承擔(dān)著大部分內(nèi)源性、外源性化合物在生物體內(nèi)的Ⅰ相轉(zhuǎn)化作用，對(duì)藥理學(xué)和藥物代謝的研究具有重要意義。早在20世紀(jì)90年代初，Breimer等[1]首次提出使用多個(gè)探針?biāo)幬锿瑫r(shí)評(píng)價(jià)多種CYP450同工酶活性的方法，即Cocktail探針?biāo)幬锓ǎ和瑫r(shí)給予多種相對(duì)低劑量的探針?biāo)幬铮瑧?yīng)用現(xiàn)代儀器分析技術(shù)測(cè)定生物樣本中各探針?biāo)幬锏拇x率或代謝分型指標(biāo)，以獲取多個(gè)CYP450 同工酶表型信息的方法。該法具有高通量、高準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，在藥物研發(fā)早期篩選、藥物代謝途徑及機(jī)制研究、藥物相互作用研究、上市藥物再評(píng)價(jià)及疾病對(duì)CYP450同工酶表型影響、改變藥物代謝特點(diǎn)等領(lǐng)域均有重要應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)本文將對(duì)Cocktail探針?biāo)幬锓ǖ奶攸c(diǎn)做簡(jiǎn)要說(shuō)明，將其在中醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜合論述，并對(duì)其在中西醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)應(yīng)用的異同點(diǎn)進(jìn)行比較說(shuō)明。

1 Cocktail探針?biāo)幬锓ㄌ攸c(diǎn)

傳統(tǒng)的探針?biāo)幬镅芯糠ㄒ殉墒鞈?yīng)用于各種CYP450同工酶的表型及活性研究，但是單次探針實(shí)驗(yàn)僅能反應(yīng)單一亞型同工酶的活性特點(diǎn)，且存在的個(gè)體差異會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)的波動(dòng)，不利于實(shí)驗(yàn)研究，而Cocktail法則可以通過(guò)一次實(shí)驗(yàn)獲取多個(gè)CYP450同工酶的表型信息，具有快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、高通量的特點(diǎn)，具有良好而廣闊的應(yīng)用前景。

藥物進(jìn)入生物體內(nèi)，大部分通過(guò)CYP450酶系進(jìn)行生物Ⅰ相轉(zhuǎn)化，同時(shí)也影響著同工酶的活性及表達(dá)水平。通過(guò)轉(zhuǎn)化后，活性藥物可能代謝失活，而前體藥物則可能轉(zhuǎn)化成具有活性的代謝產(chǎn)物，在此過(guò)程中藥物有可能對(duì)CYP產(chǎn)生抑制或誘導(dǎo)的作用，誘導(dǎo)會(huì)加速藥物代謝失活，而抑制作用會(huì)減慢藥物代謝從而導(dǎo)致藥效增強(qiáng)，對(duì)CYP450酶系的誘導(dǎo)及抑制作用也是引起藥物相互作用的重要原因。2000年Basal會(huì)議及2012年FDA《藥物相互作用研究指南》推薦的體內(nèi)研究CYP450同工酶敏感底物、抑制劑及誘導(dǎo)劑見(jiàn)表1[2-3]。

現(xiàn)代儀器分析技術(shù)與Cocktail法聯(lián)用，使方法學(xué)的開(kāi)發(fā)更加精準(zhǔn)、便捷、高通量。Peng Y等[4]開(kāi)發(fā)了使用LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定針對(duì)人肝微粒體9種CYP450同工酶（1A2，2A6，2B6，2C8，2C9，2C19，2D6，2E1，3A4）的16種Cocktail探針?biāo)幬镝樀姆椒ǎ嘀靥结標(biāo)幬锏膽?yīng)用解決了多重底物結(jié)合及底物依賴(lài)性抑制的現(xiàn)象。Donzelli M等[5]開(kāi)發(fā)了市場(chǎng)化的Basel Cocktail探針?biāo)幬镌噭┖?，包?6種低劑量的探針?biāo)幬锝M合：咖啡因、依法韋侖、氯沙坦、奧美拉唑、美托洛爾、咪達(dá)唑侖，可以同時(shí)、快速檢測(cè)CYP1A2，2B6，2C9，2C19，2D6 和3A4在血漿、唾液和干血點(diǎn)樣品中全部的基因型和藥代動(dòng)力學(xué)類(lèi)型。和凡等[6]使用LC-MS/MS系統(tǒng)快速篩查了33 種黃酮類(lèi)化合物對(duì) CYP450 6 種同工酶的抑制作用，發(fā)現(xiàn)黃酮苷類(lèi)無(wú)抑制作用，苷元類(lèi)對(duì)1A2有抑制作用，對(duì)3A4有誘導(dǎo)作用。以上研究皆說(shuō)明國(guó)內(nèi)外Cocktail法的相關(guān)研究基礎(chǔ)良好，在方法開(kāi)發(fā)及獲取數(shù)據(jù)方面具有獨(dú)到優(yōu)勢(shì)，有利于藥物代謝過(guò)程、相互作用等的研究。

2 Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔ谥嗅t(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用

祖國(guó)醫(yī)學(xué)博大精深，源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，是傳統(tǒng)文化的瑰寶，歷經(jīng)數(shù)千年的臨床考驗(yàn)而不倒，但由于中藥調(diào)和而成，組分復(fù)雜，作用靶點(diǎn)多，如何利用現(xiàn)代的科學(xué)手段明確闡述中藥的藥理作用和代謝過(guò)程成為當(dāng)今中藥研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。Cocktail探針?biāo)幬锓▽?duì)于評(píng)價(jià)肝 CYP450 酶系對(duì)中藥進(jìn)行整體化的代謝物性質(zhì)、藥物相互作用研究、藥物代謝表型分析及臨床給藥方案調(diào)整與評(píng)估，正與中醫(yī)中藥的整體辯證觀不謀而合，其對(duì)中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的應(yīng)用價(jià)值不容忽視。目前應(yīng)用Cocktail法對(duì)中醫(yī)藥的研究主要集中在下幾個(gè)領(lǐng)域：①中藥活性成分的代謝機(jī)制研究；②中藥不同炮制過(guò)程對(duì)CYP450的影響；③方劑配伍對(duì)CYP450活性的影響；④中成藥的CYP450代謝特點(diǎn)研究及藥物相互作用提示；⑤應(yīng)用于民族藥學(xué)研究；⑥中藥保肝作用研究；⑦中醫(yī)證候模型研究。本文也將從上述7個(gè)方面來(lái)梳理總結(jié)現(xiàn)有的研究成果。

2.1 中藥活性成分的代謝機(jī)制研究 中藥活性成分是新藥開(kāi)發(fā)的重要來(lái)源，隨著技術(shù)手段的更新發(fā)展，研究者對(duì)中藥活性成分的藥理、毒理及藥效機(jī)制的研究越發(fā)深入。Cocktail法用于快速篩選考察中藥活性成分的肝藥酶代謝特點(diǎn)，對(duì)于藥物的代謝特點(diǎn)、毒副反應(yīng)的產(chǎn)生機(jī)制及潛在的藥物-藥物相互作用起到一定的提示作用?，F(xiàn)有研究結(jié)果中常見(jiàn)中藥活性成分的CYP450酶代謝特點(diǎn)見(jiàn)表2。

2.2 不同炮制過(guò)程對(duì)CYP450的影響 不同的炮制過(guò)程會(huì)改變中藥的性味歸經(jīng)，從而發(fā)揮不同的藥效?，F(xiàn)代學(xué)者運(yùn)用Cocktail法從肝藥酶角度分析生藥及炮制品或不同炮制過(guò)程所帶來(lái)的代謝特點(diǎn)上的差異，為解釋其炮制機(jī)制及臨床用藥安全提供證據(jù)?，F(xiàn)有的關(guān)于生藥炮制的CYP450代謝特點(diǎn)見(jiàn)表3。通過(guò)表中文獻(xiàn)提示，經(jīng)過(guò)炮制后或者不同炮制過(guò)程的制藥與生藥之間，CYP450酶的代謝特點(diǎn)確實(shí)出現(xiàn)了不同的變化，從這個(gè)角度或可解釋生藥經(jīng)炮制后減毒增效的機(jī)制。

2.3 藥對(duì)配伍及傳統(tǒng)經(jīng)方對(duì)CYP450活性的影響 中藥配伍應(yīng)用是體現(xiàn)中醫(yī)理論和“辨證論治”思想的重要載體。探索中藥配伍規(guī)律及其內(nèi)在聯(lián)系，對(duì)闡明中藥復(fù)方的作用機(jī)制是必不可少，是中藥復(fù)方研究領(lǐng)域亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。中藥素來(lái)有“十八反、十九畏”等配伍禁忌，同時(shí)，在既往研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)復(fù)方配伍后，藥效指標(biāo)成分的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為及反映的藥效與原單方藥物相比確會(huì)出現(xiàn)明顯的改變，這一過(guò)程必然涉及到體內(nèi)代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程。藥物代謝酶可能是方劑配伍規(guī)律研究的突破點(diǎn)之一，應(yīng)用Cocktail法研究中藥復(fù)方對(duì)CYP450酶影響的規(guī)律也成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。目前藥對(duì)配伍及經(jīng)方的肝藥酶研究進(jìn)展見(jiàn)表4。現(xiàn)有研究通過(guò)CYP450酶的代謝特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)，“十八反、十九畏”的藥對(duì)配伍共同作用后，確實(shí)有增強(qiáng)抑制/誘導(dǎo)某個(gè)或某幾個(gè)同工酶的作用，這也可能就是造成其代謝滯留產(chǎn)生毒性/促進(jìn)代謝降低毒性的原因。王宇光[57]探討了基于CYP450酶的“十八反”配伍的中藥相互作用，研究中揭示了瓜萎、白及、半夏、貝母與烏頭合用按作用強(qiáng)度順序?qū)YP3A和CYPIA2在基因、蛋白和酶活性水平均產(chǎn)生不同程度抑制作用，并通過(guò)代謝產(chǎn)物的鑒定和分析，表明可能正是由于對(duì)CYP3A和CYPlA2的抑制作用減緩了烏頭堿的代謝速率并提高了其血藥濃度，從而造成毒性的蓄積，也正是配伍禁忌所在；丹參、苦參、人參及其與藜蘆合用后均不同程度的抑制了P450酶含量和主要的藥物代謝酶CYP3A及CYP2EI的酶活性，提示可能正是由于3種中藥與藜蘆配伍后對(duì)藥物代謝酶的抑制作用減緩了劇毒中藥藜蘆中相關(guān)物質(zhì)的代謝，導(dǎo)致毒性增加，應(yīng)和“諸參辛芍叛藜蘆”；“藻戟遂芫具戰(zhàn)草”，主要是由于甘草具有誘導(dǎo)CYP3A的代謝特點(diǎn)，導(dǎo)致與其合用時(shí)海藻、大戟、甘遂、芫花的加速代謝。

2.4 中成藥的CYP450代謝特點(diǎn)研究 隨著疾病譜的改變和衛(wèi)生保健需求的日益增長(zhǎng)，中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展，特別是中成藥臨床應(yīng)用越來(lái)越廣泛，名優(yōu)中成藥的二次開(kāi)發(fā)成為當(dāng)前開(kāi)展重大新藥創(chuàng)制的主要途徑之一，也是關(guān)乎我國(guó)民生和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要問(wèn)題之一。臨床定位清晰是用藥安全和用藥有效的首要解決問(wèn)題。我國(guó)研究者進(jìn)行了多種中成藥的肝藥酶研究，旨在闡明中成藥的代謝特點(diǎn)，指導(dǎo)臨床合理用藥，避免毒性較大藥物相互作用?，F(xiàn)有研究中常見(jiàn)中成藥的CYP代謝特點(diǎn)見(jiàn)表5，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

2.5 Cocktail法在民族藥學(xué)中的應(yīng)用研究 王輝[82]對(duì)傣藥“雅解沙把”增強(qiáng)肝臟解毒功能的機(jī)制進(jìn)行研究探討，通過(guò)給予“雅解沙把”后小鼠洋地黃毒苷LD₅₀增大，用藥后戊巴比妥鈉對(duì)正常小鼠和肝損小鼠睡眠時(shí)間縮短，通過(guò)Cocktail法考察服用“雅解沙把”后大鼠的肝藥酶活性，發(fā)現(xiàn)其對(duì)于CYP3A4及2A1有誘導(dǎo)作用，可以加速藥物、毒物等的代謝轉(zhuǎn)化，從藥理層面上解釋傣藥“雅解沙把”增強(qiáng)肝臟解毒的機(jī)制。段雅彬等[83]分析了藏藥余甘子對(duì)大鼠CYP2C9酶活性的影響，對(duì)照組與試驗(yàn)組結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明藏藥甘余子不主要經(jīng)由CYP2C9代謝，對(duì)其活性無(wú)明顯影響。崔雅萍等[84]進(jìn)一步擴(kuò)大了藏藥余甘子的肝藥酶研究，通過(guò)Cocktail法研究其鞣質(zhì)部位對(duì)大鼠肝微粒體CYP3A4，2D6，2A6，1A2，2E1，2C9亞酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)其鞣質(zhì)部位對(duì)肝P450 酶活性影響的IC₅₀均較大，證明其對(duì)肝藥酶的活性影響較小，合并用藥時(shí)從代謝酶角度較為安全，不易發(fā)生藥物相互作用。頭花蓼是貴州苗藥，具有清熱解毒、利尿通淋之功，Zheng L等[85]通過(guò)Cocktail法考察了頭花蓼對(duì)大鼠體內(nèi)CYP1A2，2C9，2C19，2E1及3A4的代謝影響，發(fā)現(xiàn)其能誘導(dǎo)大鼠CYP2C9及3A4，提示其可能會(huì)加速與其合用藥物的代謝，在臨床應(yīng)用中需考慮可能發(fā)生的藥物相互作用。

2.6 中藥保肝作用研究 邱萍等[86]選用KM雄性小鼠分組灌胃給予不同劑量復(fù)方銀杏葉制劑（GCB）、銀杏葉提取物（GBE）及聯(lián)苯雙酯連續(xù)8周，再以白酒灌胃造成急性酒精性肝損模型，測(cè)定各組的血清肝功能生化指標(biāo)、TNF-α、核因子相關(guān)因子2（Nrf2）、CYP2E1活性及表達(dá)。試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，GCB組可顯著增強(qiáng)小鼠肝組織Nrf2表達(dá)并下調(diào)CYP2E1和TNF-α表達(dá)，且成劑量相關(guān)性，從代謝角度及生物分子層面解釋GCB減輕乙醇導(dǎo)致急性肝氧化應(yīng)激損傷機(jī)制。紀(jì)曉霞[87]在研究四君子湯對(duì)小鼠急性乙醇性肝損傷的干預(yù)作用中，對(duì)CYP2E1表達(dá)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)四君子湯可以減少并抑制2E1的表達(dá)，從代謝機(jī)制方面解釋其保肝作用。鄭天慧等[88]通過(guò)用Cocktail法，研究扶正化瘀方對(duì)正常和肝纖維化大鼠CYP450同工酶的影響，發(fā)現(xiàn)扶正化瘀方對(duì)于正常大鼠CYP1A2，2C9，2C19，2D6具有明顯的抑制作用，而對(duì)于肝纖維化模型大鼠則僅表現(xiàn)出對(duì)2C9的抑制作用，對(duì)包括3A4在內(nèi)的其余4種同工酶則不再有明顯的抑制/誘導(dǎo)作用。肝纖維化大鼠模型的選擇更為貼近臨床實(shí)際情況，扶正化瘀方作為抗纖維化用藥，在不同病理形態(tài)下所產(chǎn)生的代謝作用是具有明顯差異的，在臨床應(yīng)用過(guò)程中應(yīng)當(dāng)注意。

2.7 中醫(yī)證候模型研究 楊志福等[89]應(yīng)用Cocktail法評(píng)價(jià)急性血瘀癥對(duì)大鼠CYP450酶活性的影響。以皮下注射鹽酸腎上腺素注射液并寒冷刺激法造模急性血瘀癥大鼠模型，模擬中醫(yī)證候中的氣滯血瘀和寒凝血瘀。與正常組相比，血瘀證組探針?biāo)幬锇北巾康陌胨テ冢═_1/2）明顯延長(zhǎng)，清除率（CL）也減慢，咖啡因的T_1/2明顯縮短，氯唑沙宗的T_1/2和CL則在2組中無(wú)顯著性差異，說(shuō)明血瘀證可以抑制CYP3A4，誘導(dǎo)1A2活性，對(duì)2E1無(wú)明顯影響。Cocktail法為中醫(yī)證本質(zhì)的研究提供了新的思路和方法。

3 Cocktail法在中西醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用特點(diǎn)差異

前文主要闡述Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔ谥嗅t(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用進(jìn)展，該法起源于西方，在西方醫(yī)學(xué)中該法現(xiàn)主要應(yīng)用于以下領(lǐng)域：①藥物代謝途徑確證及CYP酶活性影響考察；②新藥開(kāi)發(fā)臨床前研究，針對(duì)CYP450酶代謝途徑藥物-藥物相互作用篩選工具[3]；③評(píng)價(jià)肝臟代謝機(jī)能臨床意義及疾病發(fā)病機(jī)制研究[90-92]；④CYP450酶表型分析，個(gè)體化差異研究[93]；⑤輔助腎功能評(píng)價(jià)研究[94]。Cocktail法的合理應(yīng)用可以快速表征CYP450酶活性特點(diǎn)，為臨床安全用藥提供指導(dǎo)。

Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔ谥形麽t(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用的異同點(diǎn)比較見(jiàn)表6。

4 小結(jié)與展望

Cocktail探針?biāo)幬锓ㄗ云溟_(kāi)發(fā)以來(lái)就以快速、準(zhǔn)確、高通量的評(píng)價(jià)CYP450酶系活性而在醫(yī)藥研究領(lǐng)域受到重視，特別是在揭示藥物相互作用和臨床給藥方案優(yōu)化方面具有顯著優(yōu)勢(shì)，除FDA外，我國(guó)CFDA在2012年5月發(fā)布的《藥物相互作用研究指導(dǎo)原則》中也特別強(qiáng)調(diào)了研究CYP450酶的重要性。

中藥成分復(fù)雜，中藥安全性研究極受重視，但在研究過(guò)程中明確藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用靶點(diǎn)、揭示藥物體內(nèi)代謝過(guò)程存在巨大的困難，Cocktail法的引入與使用為中藥研究提供了新的思路，不但可以推斷中藥體內(nèi)代謝過(guò)程，更為其炮制方法選擇、組方配伍優(yōu)化給出有效幫助從而達(dá)到減毒增效的目的，如運(yùn)用得當(dāng)則可以前瞻性的提高中藥臨床用藥安全。

Cocktail法體外試驗(yàn)已被廣泛應(yīng)用于新藥篩選及藥物相互作用研究，但是其作為臨床試驗(yàn)至今也還存在一定的爭(zhēng)議，包括倫理方面的問(wèn)題，同時(shí)給予多種探針?biāo)幬锖笏幬锸茉囌叩捻槕?yīng)性，所選定的探針?biāo)幬锸欠窈侠?，是否同時(shí)存在其他轉(zhuǎn)運(yùn)體或Ⅱ相代謝酶參與反應(yīng)從而影響藥物機(jī)體代謝過(guò)程等，說(shuō)明Cocktail探針?biāo)幬锓ㄟ€存在許多挑戰(zhàn)及研究空間，但有理由相信伴隨其方法的不斷完善，必將發(fā)揮巨大的潛力和作用，為新藥研發(fā)、中藥大品種二次開(kāi)發(fā)及指導(dǎo)臨床合理用藥提供更為詳實(shí)的科學(xué)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Breimer D D，Schellens J H. A "cocktail" strategy to assess in vivo oxidative drug metabolism in humans[J]. Trends Pharmacol Sci，1990，11（6）： 223.

[2] 樊慧蓉，和凡，劉昌孝.Cocktail探針?biāo)幬锓ㄓ糜谠u(píng)價(jià)細(xì)胞色素P450同工酶影響的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41（14）：1045.

[3] U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research （CDER）. Guidance for industry drug interaction studies——study design，data analysis，implications for dosing，and labeling recommendations[S/OL]. （2012-02）[2016-08-30]. http：//101.96.8.138/www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm292362.pdf.

[4] Peng Y，Wu H，Zhang X，et al. A comprehensive assay for nine major cytochrome P450 enzymes activities with 16 probe reactions on human liver microsomes by a single LC/MS/MS run to support reliable in vitro inhibitory drug-drug interaction evaluation[J].Xenobiotica，2015，45（11）：961.

[5] Donzelli M，Derungs A，Serratore M，et al. The basel Cocktail for simultaneous Pheno typing of human cytochrome P450 isoforms in plasma，saliva and dried blood spots[J].Clin Pharmacokinet，2014，53：271.

[6] 和凡，鐘國(guó)平，趙立子，等.LC-MS/MS法研究黃酮類(lèi)化合物對(duì)人肝微粒體細(xì)胞色素P450酶6種亞型的體外抑制作用[J].中國(guó)新藥雜志，2009，18（24）：2340.

[7] 樊星花，楊秀芬，程允相，等. 活血化瘀藥物及其有效成分對(duì)生物轉(zhuǎn)化酶的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（6）：1355.

[8] 龔文奇，梁曉光，李芹，等.Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)燈盞花素對(duì)大鼠CYP450體內(nèi)代謝活性的影響[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2016，28（6）：440.

[9] 陳健龍，張玉玲，董宇，等. Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)小檗堿對(duì)肝微粒體CYP450酶的抑制作用[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（12）：2009.

[10] 樊慧蓉. “Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)人參皂苷Re對(duì)肝細(xì)胞色素P450酶亞型的影響[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2004.

[11] 陳艷進(jìn)，王宇光，馬增春，等. 三七總皂苷對(duì)大鼠肝臟藥物代謝酶酶活性、mRNA及蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2014，39（19）：3824.

[12] 楊子明，楊秀芬. 三七總皂苷對(duì)大鼠肝組織內(nèi)藥物代謝酶CYP3A 的抑制作用及其動(dòng)力學(xué)分析[J].中國(guó)中藥雜志，2012，37（22）：3486.

[13] 吳淳，高靜雯，姚美村，等. 天然冰片對(duì)大鼠細(xì)胞色素P450四種亞型活性的影響[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2013，18（2）：121.

[14] 郭延磊. CYP2D6介導(dǎo)的柴胡皂苷與氯苯那敏在大鼠體內(nèi)、體外相互作用研究[D]. 重慶：重慶醫(yī)科大學(xué)，2013.

[15] 王來(lái)友，李鏡清，陳濤，等. 大黃素的Ⅰ相代謝途徑及其對(duì)細(xì)胞色素P450酶的抑制作用[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2014，19（3）：241.

[16] 葉林虎，閆明珠，孔令提，等. 槲皮素及其糖苷類(lèi)化合物對(duì)P450酶活性的體外抑制作用[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2014，49（12）：1051.

[17] 鄭姣，周宏灝. 黃酮類(lèi)化合物對(duì)細(xì)胞色素P450 CYP1，2El，3A4和19的影響[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，42（1）：8.

[18] 朱慧丹，周子曄，王賢親，等. 探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)辣椒堿對(duì)大鼠CYP450的影響[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（18）：3474.

[19] Huang Y，Zheng S L，Zhu H Y，et al. Effects of aescin on cytochrome P450 enzymes in rats[J]. J Ethnopharmacol，2014，151（1）：583.

[20] Ji H Y，Kim S Y，Kim D K，et al. Effects of eupatilin and jaceosidin on cytochrome P450 enzyme activities in human liver microsomes[J]. Molecules，2010，15（9）：6466.

[21] Yao Y M，Cao W，Cao Y J，et al. Effect of sinomenine on human cytochrome P450 activity[J]. Clin Chim Acta，2007，379（1/2）：113.

[22] Chen A，Zhou X，Tang S，et al. Evaluation of the inhibition potential of plumbagin against cytochrome P450 using LC-MS/MS and cocktail approach[J]. Sci Rep，2016，22（6）：28482.

[23] Kong L，Song C，Ye L，et al. The effect of vinpocetine on human cytochrome P450 isoenzymes by using a Cocktail method[J]. Evid Based Complement Alternat Med，2016，doi： 10.1155/2016/5017135.

[24] Zhao Y，Liang A，Zhang Y，et al. Impact of tetrahydropalmatine on the pharmacokinetics of probe drugs for CYP1A2，2D6 and 3A isoenzymes in Beagle dogs[J]. Phytother Res，2016，30（6）：906.

[25] Kim S J，Oh H C，Kim Y C，et al. Selective inhibition of bakuchicin isolated from Psoralea corylifolia on CYP1A in human liver microsomes[J]. Evid Based Complement Alternat Med，2016，doi： 10.1155/2016/5198743.

[26] Zhang Y T，Zhang D F，Ge N Y，et al. Effect of evodiamine on CYP enzymes in rats by a Cocktail method[J]. Pharmacology，2016，97（5/6）：218.

[27] Kim S J，Kim S J，Hong M，et al. Investigation of selective inhibitory effects of glycyrol on human CYP 1A1 and 2C9[J]. Xenobiotica，2016，46（10）：857.

[28] Zhou C J，Qiao L M，Zhao L H，et al. Evaluation of the impact of cantharidin on rat CYP enzymes by using a cocktail of probe drugs[J]. Fitoterapia，2015，107：49.

[29] Yang A H，He X，Chen J X，et al. Identification and characterization of reactive metabolites in myristicin-mediated mechanism-based inhibition of CYP1A2[J]. Chem Biol Interact，2015，237：133.

[30] Kim S J，You J，Choi H G，et al. Selective inhibitory effects of machilin A isolated from Machilus thunbergii on human cytochrome P450 1A and 2B6[J]. Phytomedicine，2015，22（6）：615.

[31] Sim J，Choi E，Lee Y M，et al. In vitro inhibition of human cytochrome P450 by cudratricusxanthone A[J]. Food Chem Toxicol，2015，81：171.

[32] Jin C，He X，Zhang F，et al. Inhibitory mechanisms of celastrol on human liver cytochrome P450 1A2，2C19，2D6，2E1 and 3A4[J]. Xenobiotica，2015，45（7）：571.

[33] Guo Y J，Zheng S L. Effect of myricetin on cytochrome P450 isoforms CYP1A2，CYP2C9 and CYP3A4 in rats[J]. Pharmazie，2014，69（4）：306.

[34] Liang D L，Zheng S L. Effects of icaritin on cytochrome P450 enzymes in rats[J]. Pharmazie，2014，69（4）：301.

[35] Xu R A，Xu Z S，Ge R S. Effects of hydroxysafflor yellow A on the activity and mRNA expression of four CYP isozymes in rats[J]. J Ethnopharmacol，2014，151（3）：1141.

[36] Song M，Hwang J Y，Lee M Y，et al. In vitro inhibitory effect of piperlonguminine isolated from Piper longum on human cytochrome P450 1A2[J]. Arch Pharm Res，2014，37（8）：1063.

[37] Li W，Liu Y，He Y Q，et al. Characterization of triptolide hydroxylation by cytochrome P450 in human and rat liver microsomes[J]. Xenobiotica，2008，38（12）：1551.

[38] Zhang H，Ya G，Rui H. Inhibitory effects of triptolide on human liver cytochrome P450 enzymes and P-glycoprotein[J].Eur J Drug Metab Pharmacokinet，2016，doi： 10.1007/s13318-016-0323-8.

[39] Kim H，Choi H K，Jeong T C，et al. Selective inhibitory effects of mollugin on CYP1A2 in human liver microsomes[J]. Food Chem Toxicol，2013，51：33.

[40] Huang Y，Zheng S，Xu Z S，et al. Effects of unprocessed vs. cooked-processed Gastrodia elata on cytochrome P450 enzymes in rats[J]. Drug Res，2014，64（8）： 424.

[41] Cheng Y，Huang Y，Tian Y，et al. Assessment of the effects of Radix Bupleuri and vinegar-baked Radix Bupleuri on cytochrome 450 activity by a six-drug cocktail approach[J]. Chin J Nat Med，2013，11（3）： 302.

[42] Su T，Mao C，Yin F，et al. Effects of unprocessed versus vinegar-processed Schisandra chinensis on the activity and mRNA expression of CYP1A2，CYP2E1 and CYP3A4 enzymes in rats[J]. J Ethnopharmacol，2013，146（3）：734.

[43] Gao J，Shi Z，Zhu S，et al. Influences of processed rhubarbs on the activities of four CYP isozymes and the metabolism of saxagliptin in rats based on probe cocktail and pharmacokinetics approaches[J]. J Ethnopharmacol，2013，145（2）：566.

[44] 王菊，陸兔林，毛春芹，等.Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)生、醋莪術(shù)對(duì)CYP450酶亞型的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（11）：1562.

[45] 劉蓬蓬，賈天柱，徐珊，等. Cocktail 探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)生、制黃柏對(duì)CYP450 酶亞型的影響[J].中藥材，2015，38（10）：2065.

[46] 肖娟，王瑩，蔡巧玲，等.Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)半夏瀉心湯及不同配伍組對(duì)CYP450酶活性的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（4）：181.

[47] 韋靈玉，張玉杰，魏寶紅，等.黃連黃芩及配伍誘導(dǎo)對(duì)大鼠肝微粒體5種CYP450亞酶活性的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（9）：1426.

[48] 李丹，韓永龍，余濤，等. 黃連解毒湯對(duì)人細(xì)胞色素P450酶6個(gè)亞型的體外抑制作用研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2012，17（2）：131.

[49] 朱冠秀，王宇光，李飛，等. Cocktail 探針?lè)y(cè)定南沙參與藜蘆配伍對(duì)大鼠CYP450 亞酶活性的影響[J].中國(guó)藥物警戒，2013，10（5）：257.

[50] 王撫夢(mèng)，盧燕，孔令東. 半夏厚樸湯及君臣配伍對(duì)小鼠肝臟CYP450和腎臟離子轉(zhuǎn)運(yùn)子的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（1）：60.

[51] 張韶瑜，宋乃寧，樊慧蓉，等. 痹祺膠囊配伍組分對(duì)體內(nèi)CYP450 同工酶活性的影響[J].中草藥，2011，42（8）：1571.

[52] 朱冠秀. 南、北沙參與藜蘆配伍增毒相互作用研究[D]. 長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2013.

[53] 沈晶晶，張春華，陳山喬，等. 海藻-昆布藥對(duì)對(duì)大鼠肝微粒體代謝酶的影響及肝毒性研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2015，38（3）：256.

[54] 周昆，朱桃桃，馬志會(huì)，等. 乳香沒(méi)藥對(duì)細(xì)胞色素P450活性的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（22）：131.

[55] 梁淼，馬增春，易劍峰，等.四物湯及其配伍對(duì)大鼠肝臟P450酶活性及mRNA表達(dá)的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（21）：3720.

[56] 李飛. 基于藥物相互作用的藜蘆配伍丹參毒性研究[D]. 長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2013.

[57] 王宇光.基于藥物代謝酶的中藥相互作用研究[D].北京：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2006.

[58] 崔學(xué)艷. “Cocktail”探針底物法篩選祛瘀劑對(duì)5種細(xì)胞色素P450酶的抑制作用[D]. 上海：復(fù)旦大學(xué)，2010.

[59] 胡冰，岳潔皓，段超慧，等. Cocktail法評(píng)價(jià)注射用益氣復(fù)脈（凍干）對(duì)大鼠肝微粒體CYP1A2、CYP3A的誘導(dǎo)作用[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40（2）：62.

[60] 韓永龍，孟祥樂(lè)，李丹，等. 清開(kāi)靈注射液及其主要成分黃芩苷和梔子苷對(duì)人肝微粒體CYP450酶6種亞型的體外抑制作用研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，46（19）：1486.

[61] 趙文婷，張波，李湘暉，等. 疏血通注射液對(duì)大鼠細(xì)胞色素P450酶6種亞型活性的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2012，23（4）：445.

[62] 謝文明，樊寶才，張琳，等. 速效救心丸對(duì)大鼠體內(nèi)CYP450酶活性影響的研究[J].海峽藥學(xué)，2012，24（12）：22.

[63] 劉史佳，居文政，陳為烤，等. 血栓通注射液對(duì)大鼠體內(nèi)細(xì)胞色素P450酶活性的影響[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2010，45（2）：115.

[64] 高湘，高俊，許愛(ài)霞，等. 貞芪扶正膠囊對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450酶CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的影響[J].中藥藥理與臨，2011，27（1）：84.

[65] 劉松燦，張亮，裘福榮，等. 9 種常用含丹參中成藥對(duì)人肝微粒體CYP3A 的體外抑制作用[J].中成藥，2013，35（8）：1776.

[66] 胡東華，王宇光，陳志武，等. 復(fù)方丹參滴丸對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450 酶的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（4）：678.

[67] 劉麗雅，韓永龍，余奇，等. 10種心血管類(lèi)中藥注射劑對(duì)人細(xì)胞色素P4507種亞型的體外抑制作用[J].中國(guó)藥房，2014，25（11）：990.

[68] 程小桂，居文政，戴國(guó)梁，等. Cocktail 探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)威麥寧膠囊對(duì)大鼠體內(nèi)CYP450 活性的影響[J].中國(guó)新藥與臨床雜志，2014，33（8）：593.

[69] 賈海，許愛(ài)霞，袁繼勇，等. 發(fā)酵蟲(chóng)草菌粉對(duì)細(xì)胞色素P450酶的影響研究[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34（16）：2079.

[70] 劉麗雅，韓永龍，余奇，等. 消癌平注射液等4種抗腫瘤中藥注射劑對(duì)人肝微粒體中CYP450酶7種亞型的體外抑制作用研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2014，19（5）：522.

[71] 周昆，朱桃桃，張玥，等. 壯骨關(guān)節(jié)丸對(duì)大鼠肝微粒體P450 的影響[J].天津中醫(yī)藥，2014，31（11）：690.

[72] 吳磊，陸超，戴國(guó)梁，等. Cocktail 法評(píng)價(jià)清熱養(yǎng)心顆粒對(duì)大鼠體內(nèi)P450 酶活性的影響研究[J].赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，31（10）：72.

[73] 郭沛鑫，李奕融，鄭進(jìn)，等. Cocktail 探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)百解膠囊對(duì)肝藥酶亞型CYP2C19、CYP2E1 的影響[J].中藥藥理與臨床，2015，31（4）：163.

[74] 孫冰婷，張倩，宗陽(yáng)，等. 混合探針?lè)ㄔu(píng)價(jià)白香丹膠囊對(duì)大鼠體內(nèi)CYP450 酶活性的影響[J].藥學(xué)與臨床研究，2016，24（1）：6.

[75] 尚芳紅，俸珊，陳乾，等. 加味佛手散膠囊對(duì)大鼠和人肝微粒體 CYP450 酶活性的抑制作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2016，51 （6）：926.

[76] 趙文珠，居文政，臧雨馨，等. 毛冬青膠囊對(duì)大鼠體內(nèi)細(xì)胞色素P450 代謝活性的影響[J].藥學(xué)與臨床研究，2015，23（3）：217.

[77] Xia C H，Sun J G，Wang G J，et al. Herb-drug interactions： in vivo and in vitro effect of Shenmai injection，a herbal preparation，on the metabolic activities of hepatic cytochrome P450 3A1/2，2C6，1A2，and 2E1 in rats[J]. Planta Med，2010，76（3）：245.

[78] Jin Y，Shao L，Li G，et al. Assessment of effect of Zhu-tan Tong-luo decoction on CYP450 isoforms activity of rats[J]. Int J Clin Exp Med，2015，8（9）：15940.

[79] Geng T，Si H，Kang D，et al. Influences of Re Du Ning Injection，a traditional Chinese medicine injection，on the CYP450 activities in rats using a cocktail method[J]. J Ethnopharmacol，2015，174：426.

[80] Du X，Ye H，Zhang C，et al. Effect of kanglaite on rat cytochrome P450[J]. Pharm Biol，2015，53（7）：995.

[81] Han S Y，Zhao H Y，Zhou N，et al. Marsdenia tenacissima extract inhibits gefitinib metabolism in vitro by interfering with human hepatic CYP3A4 and CYP2D6 enzymes[J]. J Ethnopharmacol，2014，151（1）：210.

[82] 王輝.傣藥“雅解沙把”增強(qiáng)肝臟解毒功能的機(jī)制研究[D].昆明：云南中醫(yī)學(xué)院，2013.

[83] 段雅彬，姚星辰，李向陽(yáng).藏藥余甘子對(duì)大鼠CYP2C9活性的影響[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2014（11）：8.

[84] 崔雅萍，楊光輝，亓旗，等. 藏藥余甘子鞣質(zhì)部位對(duì)大鼠肝微粒體代謝酶P450活性的影響[J].世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2016，18（7）：1159.

[85] Zheng L，Lu Y，Cao X，et al. Evaluation of the impact of Polygonum capitatum，a traditional Chinese herbal medicine，on rat hepatic cytochrome P450 enzymes by using a cocktail of probe drugs[J]. J Ethnopharmacol，2014，158 Pt A：276.

[86] 邱萍，劉平平，孔德松，等.復(fù)方銀杏制劑對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠的防護(hù)作用及其機(jī)制[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2014，28（3）：373.

[87] 紀(jì)小霞.四君子湯對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的干預(yù)作用及其機(jī)制研究[D].揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2014.

[88] 鄭天慧，劉偉，李淑萍，等. 扶正化瘀方對(duì)正常及肝纖維化大鼠體內(nèi)CYP450 酶的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（6）：1166.

[89] 楊志福，田云，楊靜，等.Cocktail探針評(píng)價(jià)血瘀證對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450的影響[C].長(zhǎng)沙：2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周，2009.

[90] Brockmller J，Roots I.Assessment of liver metabolic function. Clinical implications[J].Clin Pharmacokinet，1994，27（3）：216.

[91] Lanchote V L，Almeida R，Barral A，et al. Impact of visceral leishmaniasis and curative chemotherapy on cytochrome P450 activity in Brazilian patients[J]. Br J Clin Pharmacol，2015，80（5）：1160.

[92] Jiang X，Zhuang Y，Xu Z，et al. Development of a physiologically based pharmacokinetic model to predict disease-mediated therapeutic protein-drug interactions： modulation of multiple cytochrome P450 enzymes by interleukin-6[J]. AAPS J，2016，18（3）：767.

[93] Setiabudy R，Kusaka M，Chiba K et al.Dapsone N-acetylation，metoprolol alpha-hydroxylation，and S-mephenytoin 4-hydroxylation polymorphisms in an indonesian population： a cocktail and extended phenotyping assessment trial[J].Clin Pharmacol Ther，1994，56（2）：142.

[94] Gross A S，McLachlan A J，Minns I，et al.Simultaneous administration of a cocktail of markers to measure renal drugelimination pathways： absence of a pharmacokinetic interaction between fluconazole and sinistrin，p-aminohippuric acid and pindolol[J].Br J Clin Pharmacol，2001，51（6）：547.

[責(zé)任編輯 馬超一]