金高娃 秦迎春 葛永利 欒巍 烏云高娃

肺癌患者血清和胸腔積液膜聯(lián)蛋白A2水平改變及其臨床意義研究

金高娃 秦迎春 葛永利 欒巍 烏云高娃

目的 探討肺癌患者血清和胸腔積液膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)水平改變及其臨床意義。方法 連續(xù)性收錄60例肺癌患者，以及40例肺部良性病變患者。檢測血清和胸腔積液中ANXA2水平改變，分析其與腫瘤分期、淋巴結以及遠處組織轉移情況等相關性。結果 肺癌組中血清及胸腔積液內ANXA2(血清：32.3±14.0 ng/mLvs.16.8±6.5 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：66.8±14.7 ng/mL vs.25.2±12.6 ng/mL，P<0.05)水平明顯高于良性肺病組。肺癌患者胸腔積液中ANXA2濃度高于血清濃度(32.3±14.0 ng/mL vs. 76.8±14.7 ng/mL，P<0.05)。TNM分期Ⅰ-Ⅱ期患者血清及胸腔積液ANXA2明顯低于Ⅲ-Ⅳ期患者(血清：29.1±12.1 ng/mL vs. 34.7±16.2 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：61.6±18.8 ng/mL vs.78.5±11.7 ng/mL，P<0.05)；有淋巴結轉移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無淋巴結轉移患者(血清：35.2±16.1ng/mL vs. 30.5±11.3 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：88.6±20.7 ng/mL vs. 59.3±11.5 ng/mL，P<0.05)；有遠處轉移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無遠處轉移患者(血清：37.4±9.6ng/mL vs. 29.1±6.8 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：82.2±12.3ng/mL vs. 65.9±18.7 ng/mL，P<0.05)。血清ANXA2診斷肺癌的AUC為0.712， cut-off值為40.2 ng/mL；而胸腔積液ANXA2水平診斷肺癌的AUC為0.822，cut-off值為78.2 ng/mL。血清和胸腔積液ANXA2水平與肺癌呈正相關(血清：r=0.706，P<0.05；胸腔積液：r=0.812，P<0.05)。結論 肺癌患者血清和胸腔積液中ANXA2水平明顯上升，對于肺疾病合并胸腔積液者, 血清及胸水ANXA2測定,有助于肺癌鑒別診斷和分期。

肺癌；膜聯(lián)蛋白A2；早期診斷

我國目前處于老年化社會，國內肺癌的發(fā)病率和死亡率逐年上升[1]。肺癌是一種起源于支氣管黏膜上皮的惡性腫瘤。鱗癌、腺癌和大細胞癌等非小細胞肺癌占我國肺癌發(fā)病總數的絕大部分[2]。非小細胞性肺癌患者早期缺乏特征性的臨床表現(xiàn)，目前傳統(tǒng)的檢測手段(主要是胸片、CT和支氣管鏡等)難以實現(xiàn)腫瘤的早期診斷[3]。膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)是人體內主要的生長調節(jié)因子，屬于膜聯(lián)蛋白多基因家族中的成員，由339個氨基酸組成，分子量約為36kDa，主要表達于內皮細胞、巨噬細胞和單核細胞，并可以由細胞分泌進入循環(huán)中[4-5]。ANXA2的生理學作用主要是負責胞飲、胞吐和膜蛋白運輸等一系列細胞內外物質交換機制，由于ANXA2具有肌動蛋白微絲F-actin的結合位點，因此也可以調控細胞骨架網絡[6-7]。無限制的增殖和分裂是腫瘤細胞的基本特征之一，細胞骨架改變與細胞惡變、粘附以及癌細胞轉移密切相關。近期部分研究發(fā)現(xiàn)ANXA2在一些肺癌組織中異常表達，比如李璟波等學者發(fā)現(xiàn)人類肺癌組織中ANXA2明顯升高，有助于肺癌的早期鑒別診斷[8]。體外實驗發(fā)現(xiàn)通過RNA干擾下調肺癌細胞株內ANXA2水平可以明顯抑制肺癌細胞的增殖[9]。目前對于肺癌患者循環(huán)中ANXA2水平改變情況研究報道較少。本研究以ANXA2為切入點，綜合分析不同病理類型、分期肺癌患者血清及胸水ANXA2水平改變。現(xiàn)總結如下。

資料與方法

一、一般資料

本研究連續(xù)性收錄2013年1月至2015年12月期間于我院腫瘤科就診的60例肺癌患者，以及40例肺部良性病變患者。肺癌組包括40例非小細胞肺癌(包括19例鱗癌、14例腺癌和7例腺鱗癌)和20例小細胞肺癌。TNM分級顯示，肺癌組包括15例Ⅰ期患者，15例Ⅱ期患者，20例Ⅲ期患者，以及10例Ⅳ期患者。良性肺部疾病組包括肺炎和肺結核等。納入標準：①年齡在18-80歲；②經過病理確診肺癌類型；③肺癌組患者未合并肺炎等肺部良性疾病；④兩組患者合并胸腔積液。排除標準：①心、肝腎和血液功能異常的患者；②考慮其它部位惡性腫瘤轉移；③資料不全或丟失的患者；④入組后1個月死亡患者。

二、研究方法

所有納入本研究患者經胸腔穿刺方法獲取胸腔積液，在胸穿前采取患者的血標本。血液和胸腔積液標本于4℃，5000轉/分離心20分鐘后取上清液儲存在-80℃冰箱，直至被檢測。癌胚蛋白(CEA)和細胞角色素21-1(CYFRA21-1)由我院檢驗科完成檢測。ANXA2水平通過ELISA測定，試劑盒購自上海希美化學有限公司，貨號為NO503919，檢測操作完全按照說明書進行。

三、統(tǒng)計學分析

結 果

一、一般資料結果

兩組患者在年齡和性別分布上未見明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與良性肺病組相比，肺癌組中血清及胸腔積液內CEA(血清：11.5±7.5 ng/mLvs. 3.5±1.2 ng/mL，P<0.05；胸腔積液： 12.2±4.7 ng/mLvs. 6.3±3.1 ng/mL，P<0.05)、CYFRA21-1(血清：10.4±5.5 ng/mLvs. 3.2±1.0 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：26.7±11.5ng/mL vs.9.1±4.7 ng/mL，P<0.05)和ANXA2(血清：32.3±14.0 ng/mLvs.16.8±6.5 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：66.8±14.7 ng/mLvs.25.2±12.6 ng/mL，P<0.05)的含量均顯著上升，同時，肺癌患者胸腔積液中CYFRA21-1(10.4±5.5 ng/mL vs. 26.7±11.5 ng/mL，P<0.05)及ANXA2(32.3±14.0 ng/mL vs. 76.8±14.7 ng/mL，P<0.05)的水平均要顯著高于血清(P<0.05)。(見表1)。

二、ANXA2水平與肺癌患者臨床資料的關系

根據性別、腫瘤分期、淋巴結以及遠處組織轉移情況等將肺癌患者分組，比較血清及胸腔積液ANXA2在組間的差異。如表2所示，在性別上，男性與女性之間血清及胸腔積液ANXA2無差異(P>0.05)；病理分型上，小細胞癌和非小細胞癌患者之間血清及胸腔積液ANXA2無差異(P>0.05)。TNM分期、淋巴結轉移和遠處轉移方面，可見TNM分期Ⅰ-Ⅱ期患者血清及胸腔積液ANXA2明顯低于Ⅲ-Ⅳ期患者(血清：29.1±12.1 ng/mL vs. 34.7±16.2 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：61.6±18.8 ng/mL vs.78.5±11.7 ng/mL，P<0.05)；有淋巴結轉移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無淋巴結轉移患者(血清：35.2±16.1ng/mL vs. 30.5±11.3 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：88.6±20.7 ng/mL vs. 59.3±11.5 ng/mL，P<0.05)；有遠處轉移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無遠處轉移患者(血清：37.4±9.6ng/mL vs. 29.1±6.8 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：82.2±12.3ng/mL vs. 65.9±18.7 ng/mL，P<0.05)。(見表2)。

表1 兩組患者一般資料比較

三、ROC曲線分析

通過ROC曲線分析比較血清和胸腔積液ANXA2水平y(tǒng)與肺癌、TMN分期、淋巴結轉移、遠處轉移以及病理類型的相關性。如表3所示，以AUC大于0.7為基準，可見血清ANXA2水平診斷肺癌的AUC為0.712，95%CI為0.564-0.824，cut-off值為40.2 ng/mL；而胸腔積液ANXA2水平診斷肺癌的AUC為0.822，95%CI為0.676-0.899，cut-off值為78.2 ng/mL；診斷TMN分期(Ⅰ-Ⅱ期)的AUC為0.772，95%CI為0.664-0.856，cut-off值為63.3ng/mL；診斷淋巴結轉移的AUC為0.711，95%CI為0.614-0.803，cut-off值為63.3 ng/mL；診斷遠處轉移的AUC為0.702，95%CI為0.632-0.851，cut-off值為85.1 ng/mL。(見表3)。

表2 血清及胸腔積液ANXA2水平與肺癌患者臨床資料的關系

表3 ROC曲線分析

四、相關性分析

通過Spearman相關性分析比較血清和胸腔積液ANXA2水平與肺癌、TMN分期、淋巴結轉移、遠處轉移以及病理類型等的相關性。結果如表4所示，可見血清和胸腔積液ANXA2水平與肺癌呈正相關(血清：r=0.706，P<0.05；胸腔積液：r=0.812，P<0.05)。其他方面未見明顯相關性。(見表4)。

表4 相關性分析

討 論

肺癌是一個多基因突變、多因素、多通路、多步驟的病變過程。腫瘤的早期診斷和分期評估是患者臨床預后的關鍵因素。但肺癌患者早期往往無明顯臨床癥狀和影像學表現(xiàn)，同時易誤診為肺部良性病變，從而耽誤病情。相當一部分肺癌患者在臨床確診時已處于中晚期，治療效果不佳。本研究以血清ANXA2為切入點，發(fā)現(xiàn)肺癌患者循環(huán)和胸水中的ANXA2水平較肺部良性病變患者明顯升高，對于肺癌和相應的臨床分期等具有一定的早期診斷評估價值。

ANXA2的分子結構主要包括一個33kD大小的C端結構域和一個3kD大小的N端結構域。C-端結構域具有4個重復序列，可與鈣離子和磷酯等結合，參與細胞骨架的重組裝和細胞膜相關變化反應。而細胞骨架改變與細胞惡變、粘附以及癌細胞轉移密切相關。本研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者血清和胸腔積液ANXA2水平明顯高于良性肺部病變患者。部分研究發(fā)現(xiàn)ANXA2在一些腫瘤組織中表達異常增加，比如郝立強等學者發(fā)現(xiàn)結直腸癌患者腫瘤組織中磷酸化ANXA2的水平與腫瘤分期和臨床特征密切相關[10]。張海健等學者通過下調ANXA2表達水平比較肝癌細胞生物學行為改變，發(fā)現(xiàn)下調ANXA2表達明顯下調肝癌細胞S期比例，抑制細胞增殖、遷移潛能和侵襲潛能，并且裸鼠移植瘤模型顯示干擾ANXA2表達后腫瘤重量明顯下降[11]。ANXA2在肺癌中的具體調控機制尚未明確。ANXA2可能通過調控蛋白激酶C的磷酸化，影響DNA復制、細胞增殖進而細胞周期的進程[5, 12-14]。

目前，關于ANXA2與肺癌的關系報道較少，現(xiàn)有的研究報道多集中于腫瘤組織中的ANXA2水平改變，對于肺癌的早期診斷并無太多臨床價值[15]。本研究以肺癌患者血清和胸腔積液為研究點，提示胸腔積液中ANXA2水平明顯上升，胸腔積液ANXA2水平有助于區(qū)分不同TMN分期的患者和淋巴或是遠處轉移的患者，但血清與胸水ANXA2水平在小細胞肺癌和非小細胞肺癌患者之間沒有差異。

綜上所述，肺癌患者血清和胸腔積液中ANXA2水平明顯上升，有助于肺癌的診斷和分期預測。

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Diagnostic value of ANXA2 in serum and pleural effusion in patients with lung cancer

JINGao-wa,QINYing-chun,GEYong-li,LUANWei,WUYUNGao-wa

DepartmentofInternalMedicine-Oncology,InnerMongoliaAutonomousRegionPeople'sHospital,Huhhot,InnerMongolia010000,China

Objective To estimate the diagnosis value of ANXA2 in serum and pleural effusion in patients with lung cancer. Methods 60 lung cancer patients and 40 pneumonia benign disease patients were enroll in this study. The levels of ANXA2 in serum and pleural effusion were measured and recorded. Correlation analysis was used to evaluate the association between ANXA2 and tumor stage, lymphatic metastasis and distant metastasis. Results The levels of ANXA2 in serum and pleural effusion in the lung cancer group were significantly higher than those in the control group (serum: 32.3±14.0 ng/mL vs.16.8±6.5 ng/mL,P<0.05; pleural effusion: 66.8±14.7 ng/mL vs.25.2±12.6 ng/mL,P<0.05). The contents of serum ANXA2 were higher than those of pleural effusion in lung cancer patients (32.3±14.0 ng/mL vs. 76.8±14.7 ng/mL,P<0.05). In comparison with stage Ⅲ-Ⅳ patients, the ANXA2 levels of both serum and pleural effusion in Ⅰ-Ⅱ patients were increased(serum: 29.1±12.1 ng/mL vs. 34.7±16.2 ng/mL，P<0.05；pleural effusion: 61.6±18.8 ng/mL vs.78.5±11.7 ng/mL，P<0.05). The lung cancer patients with lymphatic metastasis had a higher levels of ANXA2 in serum and pleural effusion compared with those without lymphatic metastasis (serum: 35.2±16.1ng/mL vs. 30.5±11.3 ng/mL,P<0.05; pleural effusion: 88.6±20.7 ng/mL vs. 59.3±11.5 ng/mL,P<0.05). ROC analysis showed that the AUC for lung cancer diagnosis of serum and pleural effusion of ANXA2 were 0.712 and 0.822 respectively, which cut-off value were 40.2 ng/mL and 78.2 ng/mL, respectively. Correlation analysis showed that both serum and pleural effusion of ANXA2 were positively related with lung cancer (serum: 0.706,P<0.05; pleural effusion:r=0.812,P<0.05). Conclusion The levels of serum and pleural effusion ANXA2 are elevated in lung cancer patients, which may be used for early detection and stage prognosis.

lung cancer; ANXA2; early diagnosis

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.05.014

010000 內蒙古 呼和浩特，內蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腫瘤內科

2016-09-05]