劉 明，李文輝，郭 丹，孫 敏，楊鳳娟，譙仕彥，戴 剛*

（1.北京中農弘科生物技術有限公司，北京 102206；2.廊坊市農業(yè)局，河北廊坊 065000；3.中國農業(yè)大學動物科技學院，北京100193）

酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦生長性能、消化酶活性及非特異性免疫的影響

劉 明1，李文輝2，郭 丹1，孫 敏1，楊鳳娟1，譙仕彥3，戴 剛1*

（1.北京中農弘科生物技術有限公司，北京 102206；2.廊坊市農業(yè)局，河北廊坊 065000；3.中國農業(yè)大學動物科技學院，北京100193）

本試驗旨在研究酵母培養(yǎng)物（益康樂）對南美白對蝦生長性能、蛋白酶活性及非特異性免疫的影響。選擇南美白對蝦600尾，隨機分成4組，每組3個重復，每個重復50尾對蝦，4組分別投喂基礎日糧（對照組）和添加0.3%、0.5%、1.0%酵母培養(yǎng)物試驗飼料。經過45 d池塘網箱養(yǎng)殖試驗。結果表明：與對照組相比，添加0.3%、0.5%、1.0%酵母培養(yǎng)物組增重率分別提高了8.50%、16.74%、9.48%（P<0.05），飼料系數(shù)分別降低了7.69%、9.79%、9.09%（P<0.05）；與對照組相比，添加0.3%、0.5%、1.0%酵母培養(yǎng)物組對蝦肝胰腺蛋白酶活性分別提高了13.35%、16.26%、14.94%（P<0.05），添加酵母培養(yǎng)物有提高南美白對蝦腸道蛋白酶活性的趨勢（P>0.05）；相比對照組，各試驗組南美白對蝦酚氧化酶和溶菌酶活性得到了顯著提高（P<0.05），而添加酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦超氧化物歧化酶活性影響不顯著（P>0.05）。綜上可知，添加酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦具有明顯的促生長作用，顯著提高其肝胰腺消化酶活性，并改善部分非特異性免疫指標。

酵母培養(yǎng)物；南美白對蝦；生長性能；蛋白酶活性；非特異性免疫

近年來，南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）養(yǎng)殖快速發(fā)展，成為我國養(yǎng)殖量最大的對蝦養(yǎng)殖品種。但隨著集約化養(yǎng)殖程度不斷加深，導致南美白對蝦養(yǎng)殖中出現(xiàn)疾病頻發(fā)、抗生素濫用、環(huán)境惡化等諸多問題，嚴重制約了行業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。由于甲殼動物的免疫機制以非特異性免疫為主[1]，因此，尋找綠色環(huán)保的飼料添加劑以改善南美白對蝦自身免疫力是應對南美白對蝦疾病爆發(fā)的重要途徑。酵母培養(yǎng)物（Yeast Culture）是在一定工藝條件下酵母菌在特定培養(yǎng)基經過深度發(fā)酵而得到的微生態(tài)制品，含有豐富的寡糖、有機酸、小肽、維生素及未知生長因子等成分。已有研究表明，飼料中添加酵母培養(yǎng)物有提高水產動物生長性能、改善腸道健康和提高機體免疫力的作用[2-5]。本研究在南美白對蝦基礎飼料中添加不同濃度的酵母培養(yǎng)物，探討酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦生長性能和免疫指標的影響，為其在南美白對蝦飼料中的應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 酵母培養(yǎng)物（益康樂）由北京中農弘科生物技術有限公司提供，主要營養(yǎng)成分見表1，南美白對蝦由福建漳州某水產養(yǎng)殖場提供。

1.2 試驗設計與日糧組成 試驗用蝦經過1周馴化飼養(yǎng)后，選擇規(guī)格一致、初始均重為（5.37±0.18）g、體質健壯的個體600尾，隨機分成4組。以基礎飼料作為對照組，在基礎飼料中分別添加0.3%、0.5%、1.0%的酵母培養(yǎng)物作為3個試驗組。每組3個重復，每個重復50尾，基礎飼料配方及營養(yǎng)成分見表2。飼料原料粉碎后過60目篩，混合均勻后壓制成粒徑為1.5 mm的飼料，冷藏儲存?zhèn)溆谩?/p>

表2 基礎日糧組成及營養(yǎng)成分 %

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗在福建漳州某水產養(yǎng)殖場內一個3 300 m2左右的池塘內進行，共12個網箱，網箱規(guī)格為1 m×1 m×1 m。試驗期為45 d，飼料每天投喂3次（06:00、12:00和18:00），早晚投喂量占總量的60%，日投飼率為體重的5%左右。試驗期間水溫為（25±2.0）℃，溶解氧>5.0 mg/L，pH為7.5～8.5，氨氮<0.2 mg/L，亞硝酸鹽<0.01 mg/L。

1.4 指標測定與方法

1.4.1 生長指標測定 養(yǎng)殖試驗結束后，試驗蝦在網箱中停食24 h，然后逐箱起捕，計數(shù)、稱重，計算增重率、飼料系數(shù)、成活率。

增重率=（末體質量-初體質量）/初體質量×100%

飼料系數(shù)=攝食量/（末體質量-初體質量）

成活率=試驗末對蝦尾數(shù)/試驗初對蝦尾數(shù)×100%

1.4.2 消化酶活性測定 養(yǎng)殖試驗結束后，每個網箱隨機選取對蝦15尾，分別取出腸道和肝胰腺，腸道去除糞便，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。測定時，將上述組織在4℃解凍，于10倍體積雙蒸水中冰浴勻漿。在4℃下離心30 min（10 000 r/min），取上清液備用。

蛋白酶活性的測定采用福林-酚法，以37℃每分鐘水解酶蛋白產生1 μg酪氨酸為1個酶活力單位。酶液蛋白含量的測定采用考馬斯亮蘭法。

1.4.3 非特異性免疫指標測定 養(yǎng)殖試驗結束后，試驗蝦在網箱中停食24 h，每個網箱取對蝦15尾，用1 mL的無菌注射器抽取對蝦心臟血液，4℃靜置過夜，然后3 000 r/min離心10 min，取上清液于-20℃冰箱保存待測。

酚氧化酶活性測定采用Ashida[6]的方法。將100 μL濃度為0.01 mol/L的L-dopa加入到3.0 mL磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L，pH為6.0）中，混勻，再加入100 μL血清，混勻，于490 nm波長下讀取光密度值。以試驗條件下每分鐘OD490增加0.001為一個酶活力單位。

溶菌酶活性測定采用比濁法，參照Hultmark等[7]的方法，以溶壁微球菌（Micrococcus lysodeikticus）凍干粉（購于南京建成生物工程研究所）為底物，用 0.1 mol/L的PBS緩沖液（稱取 13.97 g K2HPO4和2.69 g KH2PO4溶于蒸餾水中，定容到1 000 mL，pH為7.4）配制成底物懸液（OD570=0.3）。取3 mL懸液加入試管中，分別加入待測樣品和標準品（購于南京建成生物工程研究所）混勻，分別測定570 nm處吸光度值T樣0和T標0，然后將試液移入37℃水浴中30 min，取出后立即置于冰浴中10 min終止反應，測定其吸光度值T樣和T標。溶菌酶活力UL計算公式：

超氧化物歧化酶采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進行測定，具體方法參考試劑盒說明書進行。超氧化物歧化酶活性定義為每毫升血清中超氧化物歧化酶抑制率達50%時所對應的超氧化物歧化酶的量為1個酶活單位。

1.5 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS 14.0版統(tǒng)計軟件中One-Way過程進行方差分析，并進行Duncan's法多重比較，顯著水平為0.05，結果采用平均值±標準差表示。

2 結 果

2.1 生長性能 由表3可知，相比對照組，0.3%、0.5%、1.0%酵母培養(yǎng)物組增重率分別提高了8.50%、16.74%、9.48%（P<0.05）；飼料系數(shù)分別降低了7.69%、9.79%、9.09%（P<0.05）。對蝦成活率在91.00%～96.00%，各組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 蛋白酶活性 由表4可知，與對照組相比，0.3%、0.5%、1.0%酵母培養(yǎng)物對蝦肝胰腺蛋白酶活性分別提高了13.35%、16.26%、14.94%（P<0.05），添加酵母培養(yǎng)物有提高南美白對蝦腸道蛋白酶活性的趨勢（P>0.05）。

2.3 非特異性免疫酶活性 由表5可知，相比對照組，各試驗組南美白對蝦酚氧化酶和溶菌酶活性得到了顯著提高（P<0.05），而添加酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦超氧化物歧化酶活性影響不顯著（P>0.05）。

3 討 論

在飼料中添加酵母培養(yǎng)物可促進水產動物生長已有大量報道。劉哲等[8]在建鯉飼料中添加0.5%的酵母培養(yǎng)物，顯著提高了建鯉的生長性能，餌料系數(shù)降低了19.34%。李高鋒等[9]報道，0.2%的酵母培養(yǎng)物能提高團頭魴特定生長率12.95%，餌料系數(shù)降低9.87%。Robinette等[10]研究表明，在飼料中添加0.12%酵母培養(yǎng)物提高了斑點叉尾增重率22%，餌料系數(shù)降低15%。在本研究中，飼料中添加0.5%酵母培養(yǎng)物能顯著提高南美白對蝦增重率25.81%，降低餌料系數(shù)12.59%。酵母培養(yǎng)物能提高動物的生長性能與其含有豐富的寡糖、有機酸、小肽、維生素等活性成分有關。酵母培養(yǎng)物通過改善腸道健康、促進消化酶活性，提高機體對營養(yǎng)物質的消化、吸收利用[11-12]，從而促進水產動物生長。在本試驗條件下，飼料中添加0.3%、0.5%、1.0%酵母培養(yǎng)物均能促進南美白對蝦生長，最佳添加量為0.5%，但在栗雄高等[13]的報道中，飼料中僅添加0.075%和0.1%酵母培養(yǎng)物能顯著提高南美白對蝦生長性能，這可能與酵母培養(yǎng)物的生產工藝、產品劑型有關。

水產動物中肝胰臟及腸道蛋白酶活性能夠直接影響機體對營養(yǎng)物質的吸收利用程度，從而影響水產動物的生長[14]。本研究中，酵母培養(yǎng)物能顯著提高南美白對蝦肝胰腺蛋白酶活性，同時有提高南美白對蝦腸道蛋白酶活性趨勢，但各組之間差異不顯著，這與栗雄高等[13]的研究結果相似。酵母培養(yǎng)物對機體消化酶活性的影響可能與其含有豐富的有機酸有關，有機酸解離出的H+能夠降低消化道pH，從而提高消化器官蛋白酶活性[15]，具體機理有待進一步研究。

溶菌酶和酚氧化酶等指標常用來表征對蝦等甲殼動物的非特異性免疫機能[16]。在本研究中，酵母培養(yǎng)物能顯著提高南美白對蝦酚氧化酶活性及溶菌酶活性，這與在牙鲆[17]、黃顙魚[5]、刺參[18]等水產動物中的報道一致。酵母培養(yǎng)物是一種復雜的發(fā)酵產物，它能提高南美白對蝦免疫指標可能與其含有豐富的β-葡聚糖、甘露寡糖、有機酸、核苷酸等多種活性成分有關。β-葡聚糖作為一種天然免疫增強劑，在多種甲殼動物中進行了大量的研究[19-21]，它可激活甲殼動物酚氧化酶原系統(tǒng)，促進細胞因子的釋放、溶菌酶等的分泌[22]；甘露寡糖可提高吞噬細胞活性，能與某些病毒、毒素等抗原結合，減緩抗原吸收，還能促進有益菌的繁殖[23]。另外也有研究表明，有機酸、核苷酸對提高甲殼動物機體非特異性免疫也有積極作用[24-25]，具體機理有待進一步研究。

表3 酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦生長性能的影響

表4 酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦蛋白酶的影響 U/mg Prot

表5 酵母培養(yǎng)物對南美白對蝦血清非特異性免疫酶活性的影響 U/mL

4 小 結

飼料中添加酵母培養(yǎng)物能顯著提高南美白對蝦生長性能和肝胰腺蛋白酶活性，可顯著提高南美白對蝦部分非特異性免疫指標。酵母培養(yǎng)物在南美白對蝦飼料中最佳添加水平為0.5%。

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S945.1

A

10.19556/j.0258-7033.2017-04-108

2017-01-20；

2017-02-14

2016年北京市科技型中小企業(yè)促進專項項目（Z160 10101463）

劉明（1981-），男，山東萊陽人，碩士，主要從事綠色飼料及飼料添加劑研發(fā)工作，E-mail：liuming@ hongkebio.cn

* 通訊作者：戴剛，碩士，主要從事綠色飼料及飼料添加劑研發(fā)工作，E-mail：daigang@hongkebio.cn