周 杰,向麗萍*,陳文慧(.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長(zhǎng)沙 4008;.湖南省中醫(yī)院皮膚科,湖南 長(zhǎng)沙 40005)
尋常型銀屑病不同證型蛋白組學(xué)表達(dá)的比較研究
周 杰1,向麗萍2*,陳文慧1
(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長(zhǎng)沙 410208;2.湖南省中醫(yī)院皮膚科,湖南 長(zhǎng)沙 410005)
目的 對(duì)尋常型銀屑病(血熱證、血瘀證、血虛證)患者與正常人差異蛋白進(jìn)行分析,探求三證之間差異性表達(dá)蛋白,從蛋白質(zhì)組學(xué)角度揭示三證之間的差異。方法 取尋常型銀屑病血瘀證、血虛證、血熱證患者的血清,應(yīng)用蛋白提取、定量、雙向電泳技術(shù)、質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,尋找出三證之間的差異蛋白和共有蛋白,并將這些蛋白進(jìn)行組間比較。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)了15種顯著性差異蛋白(P<0.05),其中補(bǔ)體C3、凝聚素、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白、間-α-胰蛋白酶抑制劑H4重鏈(片段)、載脂蛋白E、補(bǔ)體C4-B、甘露糖結(jié)合蛋白C及富亮氨酸-α-2-糖蛋白在血虛型銀屑病患者血清表達(dá)水平高于血熱型和血瘀型 (P<0.05)。纖維蛋白原β鏈、血液接合素、纖維蛋白原γ鏈、HPX蛋白、α-抗胰蛋白酶、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及載脂蛋白Ⅳ在血熱型銀屑病患者血清中的表達(dá)水平高于血瘀型患者(P<0.05)。共同蛋白有5種(P<0.05),分別為血液結(jié)合素、纖維蛋白原γ鏈、HPX蛋白、α-抗胰蛋白酶、載脂蛋白A-Ⅳ。結(jié)論 尋常型銀屑?。ㄑ獰嶙C、血瘀證、血虛證)血清中存在表達(dá)差異性蛋白質(zhì),可能與尋常型銀屑病的發(fā)病機(jī)制和銀屑病不同證型的物質(zhì)基礎(chǔ)有關(guān)。
尋常型銀屑病;血熱證;血瘀證;血虛證;雙向電泳;蛋白質(zhì)組學(xué);差異蛋白
銀屑病是一種常見(jiàn)并且原因尚未完全明了的易反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性皮膚病,具有病程長(zhǎng)、頑固難愈和復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn),是皮膚科的重點(diǎn)研究疾病。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)藥現(xiàn)代化中的應(yīng)用,尤其在證候的整體性、多態(tài)性、動(dòng)態(tài)性方面的很多理論探討,為中醫(yī)證型的客觀化研究提供了方法。比較分析不同證型尋常型銀屑病患者血清差異蛋白,探索尋常性銀屑病證型衍變的物質(zhì)基礎(chǔ),將有助于明確尋常性銀屑病不同證型的差異蛋白和共同蛋白,從而達(dá)到豐富尋常型銀屑病微觀辨證方法,為創(chuàng)新尋常型銀屑病靶向治療提供理論依據(jù)之目的。
1.1 一般資料
本次實(shí)驗(yàn)對(duì)象均來(lái)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一、第二附屬醫(yī)院皮膚科2013年10月~2014年12月間住院部收治的尋常型銀屑病患者,分別在各個(gè)證型(血熱證、血瘀證、血虛證)患者中隨機(jī)抽取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的10例患者作為實(shí)驗(yàn)組,共30例,其中男性20例,女性10例,患者的年齡在23~60歲之間,平均年齡為(36.9±1.7)歲,病程時(shí)間在2個(gè)月~6年之間,平均病程為(1.9±1.5)年,診斷標(biāo)準(zhǔn)符合尋常型銀屑病,中醫(yī)證型診斷符合白疕證型診斷。選取同期進(jìn)行門(mén)診體檢的健康人10例作為對(duì)照組,其中男性8例,女性2例,年齡在20~55歲之間,平均年齡為(33.4±1.8)歲。其性別、年齡與銀屑病各組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)
1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照趙辨[1]主編《臨床皮膚病學(xué)》:(1)具有典型的臨床表現(xiàn),皮損以丘疹、斑丘疹和大小不等的紅色斑塊為主,覆有多層干燥銀白色鱗屑,刮除鱗屑可見(jiàn)一層發(fā)亮的薄膜,薄膜下可有點(diǎn)狀出血,不斷有新皮疹出現(xiàn);(2)進(jìn)行期有同形反應(yīng),好發(fā)于頭皮、四肢伸側(cè)及腰骶部,但可發(fā)生在體表各處。發(fā)于頭皮者,毛發(fā)呈束狀;發(fā)于甲板(指、趾)者,可有頂針樣凹陷或前沿剝離;(3)依皮損形態(tài)可分為點(diǎn)滴狀、錢(qián)幣狀、地圖狀或混合型;(4)依病程可分為進(jìn)行期、靜止期和退行期。
1.2.2 中醫(yī)辨證分型[2](1)血熱證:主要見(jiàn)于進(jìn)行期,皮損多呈點(diǎn)滴狀,隨之逐漸增多,范圍不斷擴(kuò)大,其色鮮紅,甚或紅斑相互融合成片,鱗屑增多,局部瘙癢劇烈;常伴有口干舌燥,大便干,小便黃;舌質(zhì)紅絳,苔黃,脈弦滑或數(shù);(2)血瘀證:主要見(jiàn)于靜止期,皮疹暗紅,或有色素沉著、鱗屑較多,皮損多呈斑塊狀,或呈蠣殼狀,或伴有關(guān)節(jié)活動(dòng)不利;舌質(zhì)紫暗有瘀點(diǎn)瘀斑,脈沉澀;(3)血虛證:主要見(jiàn)于靜止期和退行期,皮膚干燥,鱗屑較多,顏色淡紅,或有皸裂、疼痛、瘙癢;全身癥狀多不明顯;舌質(zhì)淡紅,苔薄白,脈細(xì)。
1.3 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)
1.3.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合西醫(yī)銀屑病及中醫(yī)“白疕”的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)受試前1月內(nèi)沒(méi)有接受過(guò)系統(tǒng)的內(nèi)服藥物史(包括中藥及西藥),2周內(nèi)無(wú)外用藥物治療史;(3)無(wú)其他皮膚病及系統(tǒng)性疾??;(4)年齡介于20歲~60歲之間;(5)比較全面了解該實(shí)驗(yàn),并簽署了知情同意書(shū)。
1.3.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)妊娠和哺乳期的女性;(2)發(fā)病年齡<20歲或>60歲者;(3)屬于膿皰型、紅皮型及關(guān)節(jié)型銀屑病患者;(4)合并有嚴(yán)重的其他臟器(如心、肝、腎等)并發(fā)癥患者;(5)受試前1月內(nèi)接受過(guò)系統(tǒng)的內(nèi)服藥物史(包括中藥及西藥),或2周內(nèi)有外用藥物治療史的患者。
2.1 試劑與儀器
丙酮Acetone(Fisher公司);24 cm IPG干膠條(pH4-7)(BIORAD公司);去高分度蛋白試劑盒ProteoPrep Blue Albumin and IgG Depletion Kit (Sigma公司);水化盤(pán)immobile drystrip rewelling tray(GE公司);超聲儀(寧波新芝生物科技股份有限公司);冷凍離心機(jī) (湘儀公司);掃描儀(MICROTEK ScanMakeri 800公司);等電聚焦儀(GE公司ETTAN IPGPHOR3產(chǎn)品);電泳槽 (GE公司ETTAN IPGPHOR3產(chǎn)品);鋼靶 (Applied Biosystems公司產(chǎn)品);ImageMaster 2D platinum 5.0軟件(GE公司);MALDI-TOF質(zhì)譜儀(Bruker Dalton)。
2.2 標(biāo)本采集與處理
血熱證、血瘀證、血虛證三組尋常型銀屑病患者及正常健康人抽取外周靜脈血10 mL,常溫下放置0.5 h,以1 500 r/min離心10 min,吸取血清(不能溶血),置常溫下,10 000 r/min再離心5 min,取上清于每EP管100 uL分裝置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)研究
2.3.1 蛋白提取和定量 按照去高分度蛋白試劑盒 ProteoPrep Blue Albumin and IgG Depletion Kit(Sigma)說(shuō)明書(shū)提取4組血清樣本的蛋白質(zhì);采用Bradford染色法對(duì)提取到的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.3.2 雙向電泳 根據(jù)定量所得的數(shù)據(jù)吸取相應(yīng)量的蛋白質(zhì)(血虛組為1 304.988 μg,血熱組為1 595.865 μg,血瘀組為1 333.439 μg,正常組為1 963.829 μg),各組取100 μg蛋白質(zhì)和含1% DTT、0.5%~1%IPG緩沖液、1×溴酚藍(lán)和RB溶液(7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲,40 g/LCHAPS)的水化上樣緩沖液混合,總體積為450 μL;IPG干膠條在上述混合物中于20℃條件下泡脹過(guò)夜(10~12 h),記錄下各膠條的號(hào)碼;之后按以下程序進(jìn)行等電聚焦,程序?yàn)椋?00V維持1 h,然后1 h電壓由500V階梯上升至1 000V;之后3 h電壓由1 000V階梯上升至8 000V;最后8 000V維持5 h 32 min),整個(gè)聚焦過(guò)程所用總電壓為60 KVh。等電聚焦結(jié)束后,將膠條先在含100 mmol/L DTT的平衡液中平衡15 min,將液體倒掉后,再加入含250 mmol/L IAA的平衡液再平衡15 min,然后移至12%聚丙烯酰胺凝膠上端進(jìn)行SDS-PAGE電泳;雙向電泳膠參照廣州輝駿生物科技有限公司的銀染法進(jìn)行染色并掃描成像。
2.3.3 圖像分析 采用UMAX Powerlook1100掃描儀掃描得到雙向電泳圖譜,再利用Image Master 2D platinum 5.0軟件進(jìn)行圖譜的差異斑點(diǎn)分析。找出3組結(jié)果中,銀屑病各組與正常組比均上調(diào)或均下調(diào)的斑點(diǎn),確定有顯著性差別的蛋白表達(dá)豐度比值標(biāo)準(zhǔn)為1.5倍。
2.3.4 質(zhì)譜鑒定 對(duì)著打印圖挖出相應(yīng)的點(diǎn),并將對(duì)應(yīng)點(diǎn)的編號(hào)輸入電腦。對(duì)選取的差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切,抽提出肽段并純化,之后用含30%CAN 和0.1%TFA的樣本重溶液將抽干的肽段重溶,再將管底的重溶液反復(fù)吹打,將其點(diǎn)在鋼靶的小孔內(nèi)并風(fēng)干。待干燥后,再把剩下的重溶液點(diǎn)到相同的小孔內(nèi),反復(fù)操作,直到所有樣本溶液全部點(diǎn)到小孔上。最后一次點(diǎn)樣后,當(dāng)液滴揮發(fā)到原體積的1/3左右時(shí),在樣品上加入0.5 μL基質(zhì),至完全干燥后送入MALDI-TOF質(zhì)譜儀檢測(cè)。
2.3.5 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索 通過(guò)MASCOT檢索引擎搜索uniprot_human數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,數(shù)據(jù)庫(kù)的搜索選擇下列參數(shù):肽質(zhì)量范圍:800-4 000Da;表觀PI與表觀Mr的誤差范圍:無(wú)限制;一級(jí)質(zhì)譜質(zhì)量誤差范圍:50 ppm;二級(jí)質(zhì)譜質(zhì)量誤差范圍:0.5Da;酶解片段不完全(遺漏酶切位點(diǎn)):1個(gè);物種來(lái)源:Bacteria;電荷:+1;同位素峰:monoisotopic;固定修飾:半胱氨酸碘乙酰胺化;可變修飾:蛋氨酸氧化,裂解酶為胰蛋白酶,允許遺漏酶切位點(diǎn)的最大數(shù)為1。P<0.05,把匹配得分超過(guò)顯著性閾值的認(rèn)為是可信蛋白質(zhì)。
3.1 銀屑病組與正常組2-DE選點(diǎn)結(jié)果
收集不同證型的銀屑病患者血清蛋白,將其與正?;颊叩难宓鞍纂p向電泳條帶進(jìn)行對(duì)比,得到的雙向電泳圖譜及其選點(diǎn)結(jié)果如圖1。結(jié)果表明:銀屑病各組與正常組比,血清蛋白表達(dá)均上調(diào)或均下調(diào)。
圖1 血清蛋白雙向電泳圖譜及其選點(diǎn)結(jié)果
3.2 銀屑病組與正常組血清蛋白表達(dá)的差異
根據(jù)雙向電泳及質(zhì)譜結(jié)果,共成功鑒定出20種蛋白質(zhì),其在銀屑病組及正常組血清中直接表達(dá)結(jié)果見(jiàn)表1。與正常組相比,銀屑病組患者血液中纖維蛋白原β鏈、血液結(jié)合素、纖維蛋白γ鏈、HPX蛋白、α-胰蛋白酶、載脂蛋白A-Ⅳ、補(bǔ)體C3、凝聚素(載脂蛋白,片段)、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白、間-α-胰蛋白酶抑制劑H4重鏈(片段)、載脂蛋白E、補(bǔ)體C4-B、甘露糖結(jié)合蛋白-C、富亮氨酸-α-2-糖蛋白及血清白蛋白的表達(dá)明顯升高,而血清白蛋白(片段)、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、IgαC鏈、載脂蛋白L1、結(jié)合珠蛋白的表達(dá)則顯著降低。
3.3 銀屑病組三個(gè)不同證型患者血清蛋白差異
尋常型銀屑病各證型之間的血清蛋白的直接比較,發(fā)現(xiàn)血虛證與血熱證、血瘀證比較有8種差異蛋白,血熱證與血瘀證比較有7種差異蛋白,結(jié)果如表2。
表1 銀屑病組與正常組血清蛋白直接表達(dá)結(jié)果比較 (n=10)
表2 鑒定蛋白在不同證型銀屑病組的差異表達(dá)情況 (n=10)
銀屑病是一種常見(jiàn)并且原因尚未完全明了的易反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性皮膚病,病理表現(xiàn)為角化過(guò)度、角化不全、微膿瘍等,中醫(yī)學(xué)稱(chēng)之為“白疕”。根據(jù)國(guó)家中醫(yī)藥管理局頒布的《中醫(yī)皮膚病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》將白疕證型分為三型:血熱證、血瘀證、血虛證,并在臨床上取得了一定療效,但是由于醫(yī)生本身經(jīng)驗(yàn)主觀性較大,給中醫(yī)藥用藥治療造成了不小的困擾。
蛋白組學(xué)是從一個(gè)機(jī)體或一個(gè)組織、一個(gè)細(xì)胞等不同層次“整體”的蛋白活動(dòng)的角度來(lái)揭示和闡明疾病形成與發(fā)展的基本規(guī)律,這與中醫(yī)學(xué)的體質(zhì)、證型有不謀而合之處[3]。通過(guò)對(duì)不同疾病的同一證型(異病同證)和同一疾病的不同證型 (同病異證)蛋白質(zhì)組學(xué)研究的逐步完善,從而全面揭示證候的科學(xué)內(nèi)涵 ,探尋病證的診斷性蛋白,為診斷的客觀化提供確實(shí)可靠的科學(xué)依據(jù)[4]。目前,雙向凝膠電泳作為蛋白組學(xué)研究中蛋白分離的核心技術(shù),具有高靈敏度、高分辨率、重復(fù)性好的蛋白質(zhì)圖譜、提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)橫向及縱向的可比性、可以很好地與質(zhì)譜分析等鑒定方法匹配等很多優(yōu)點(diǎn)[5-7]。雖然蛋白組學(xué)技術(shù)在銀屑病研究取得一定的成績(jī),但對(duì)于銀屑病相關(guān)蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間相互作用、銀屑病發(fā)病機(jī)制及藥物治療方面的研究很少。故筆者從蛋白質(zhì)組學(xué)入手,進(jìn)行了對(duì)尋常型銀屑病血熱證、血瘀證、血虛證差異研究,希望找到證型之間差異蛋白,從而豐富尋常型銀屑病微觀辨證,使尋常型銀屑病辨證更加清晰、準(zhǔn)確。
本研究利用雙向電泳及質(zhì)譜的方法對(duì)不同證型尋常型銀屑病患者研究發(fā)現(xiàn)顯著差異蛋白有15種,其中補(bǔ)體C3、凝聚素、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白、間-α-胰蛋白酶抑制劑H4重鏈(片段)、載脂蛋白E、補(bǔ)體C4-B、甘露糖結(jié)合蛋白C及富亮氨酸-α-2-糖蛋白在血虛型銀屑病患者血清表達(dá)水平高于血熱型和血瘀型。纖維蛋白原β鏈、血液接合素、纖維蛋白原γ鏈、HPX蛋白、α-抗胰蛋白酶、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及載脂蛋白Ⅳ在血熱型銀屑病患者血清中的表達(dá)水平高于血瘀型患者。這些蛋白中已證實(shí)與銀屑病有關(guān)的蛋白有補(bǔ)體C3、富亮氨酸-α-2-糖蛋白、載脂蛋白E,其它蛋白研究較少,且未見(jiàn)與銀屑病研究相關(guān)資料報(bào)道。
將尋常型銀屑病三證之間的顯著差異蛋白進(jìn)行歸類(lèi),主要分屬于兩大類(lèi)蛋白:血液凝聚相關(guān)和炎癥相關(guān)。其中血液凝聚相關(guān)蛋白中纖維蛋白原β鏈和γ鏈蛋白與血液凝集相關(guān)[8],其在銀屑病組患者血液中顯著提高可以顯著影響血液流動(dòng)性,阻礙身體營(yíng)養(yǎng)供給,即表現(xiàn)為血瘀;血液結(jié)合素及HPX蛋白可以和游離的血紅蛋白的分解產(chǎn)物結(jié)合形成,清除血紅蛋白[9],其在銀屑病患者血液中異常高表達(dá)可能會(huì)影響血液血紅蛋白的含量;載脂蛋白E一方面與脂類(lèi)代謝相關(guān),一方面與神經(jīng)和免疫相關(guān),從多方面影響銀屑病的發(fā)展[10];α-抗胰蛋白酶、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4-B、間-α-胰蛋白酶抑制劑H4重鏈(片段)均與炎癥的發(fā)生過(guò)程相關(guān),多數(shù)與白細(xì)胞吞噬結(jié)束后的后續(xù)處理相關(guān),而銀屑病的發(fā)生本質(zhì)就是由免疫和炎癥引發(fā)的皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞增殖,因此也不難理解與炎癥相關(guān)的因子在銀屑病患者中血液中的表達(dá)水平高于正常的健康人群,此部分結(jié)果與吳瑋等人[11]的研究結(jié)果相似。此外,還有血清轉(zhuǎn)鐵蛋白、甘露糖結(jié)合蛋白C、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等,多與脂質(zhì)代謝、糖代謝及維生素A代謝相關(guān),因此也有學(xué)者認(rèn)為銀屑病患者存在一定的脂代謝紊亂,進(jìn)而影響了血液循環(huán),引發(fā)血虛、血瘀等癥狀[12],同時(shí)這些蛋白也受到血液凝聚狀態(tài)的影響,血液越趨于凝聚,其含量也會(huì)相應(yīng)的偏高。
筆者通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)三證之間存在5種共同的血清蛋白,分別為血液結(jié)合素、纖維蛋白原γ鏈、HPX蛋白、α-抗胰蛋白酶、載脂蛋白A-Ⅳ。因此,上述5種蛋白是否能作為診斷銀屑病的指標(biāo),但仍有待于進(jìn)一步的研究。同樣在不同證型尋常型銀屑病患者中鑒定出的15種顯著性差異蛋白,是否能作為區(qū)別血熱證、血瘀證與血虛證的蛋白有待進(jìn)一步證實(shí)。但本實(shí)驗(yàn)從血清蛋白質(zhì)組學(xué)的角度,將蛋白質(zhì)組學(xué)和中醫(yī)證型研究結(jié)合起來(lái),共成功鑒定出15種顯著性差異蛋白質(zhì),其在銀屑病組不同證型中有不同的表達(dá),對(duì)從整體水平評(píng)價(jià)銀屑病的發(fā)病機(jī)制和銀屑病證的實(shí)質(zhì)具有重要的意義,為開(kāi)發(fā)新型中藥制劑開(kāi)辟了新思路和新方法。
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(本文編輯 李 杰)
Comparative Research on the Proteomics in Different Syndrome of Psoriasis Vulgaris
ZHOU Jie1,XIANG Liping2*,CHEN Wenhui1
(1.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China;2.Department of Dermatology,Hunan Hospital of Traditional Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410000,China)
Objective The differential proteins between patients with psoriasis vulgaris (blood heat,blood stasis and blood deficiency syndromes)and healthy people were analyzed and investigated.The three types of syndromes were elaborated from proteomics.Methods The serum of psoriasis vulgaris patients with blood stasis,blood deficiency and blood heat syndromes was collected.The differential and same proteins of the three trpes of syndromes were screened by protein extraction, quantitative analyses,two-dimensional electrophoresis,mass spectrometry and database searches,and the differential and same proteins between between groups were compared.Results Fifteen significantly differential expressed proteins were found between groups (P<0.05).The expression of serum alexin C3,condensed pigment,serum turned iron protein,inter-alpha-trypsin inhibitors H4 heavy chain (fragment),lipoproteinb E,serum alexin C4-B,seminose combined protein C and rich leucine-alpha-2-glycoprotein in psoriasis vulgaris patients with blood deficiency were higher than those in patients with blood heat and blood stasis syndroms (P<0.05).The expression of fibrinogen beta chain,blood connexin,fibrinogen gamma chain,HPX protein,α-antitrypsin,thyroid hormone transporters and apolipoprotein IV in patients with blood heat psoriasis were higher than those in patients with blood stasis syndrome(P<0.05).There are five same proteins,hemopexin,fibrinogen gamma chain,HPX protein,Alpha-antitrypsin,apolipoprotein A-IV.Conclusion There are differential expressed proteins in the serum of patients with psoriasis vulgaris(blood heat,blood stasis and blood deficiency syndromes),which may be related to the different pathogenesis of psoriasis vulgaris and the components of different syndrome types of psoriasis.
psoriasis vulgaris;blood heat syndrome;blood stasis syndrome;blood deficiency syndrome;two-dimensional electrophoresis;proteomics;differential expressed proteins
R275;R785.63
A
10.3969/j.issn.1674-070X.2017.03.005
2016-06-13
湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013FJ4055)。
周 杰,女,在讀碩士研究生,研究方向:皮膚病防治。
*向麗萍,女,教授,碩士研究生導(dǎo)師,E-mail:xlpxkj@126.com。
本文引用:周 杰,向麗萍,陳文慧.尋常型銀屑病不同證型蛋白組學(xué)表達(dá)的比較研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2017,37(3):249-253.