韓遠(yuǎn)山，藺曉源，易剛強(qiáng)*，王宇紅，楊 蕙，孟 盼，趙洪慶，杜 青（.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 40007；.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南 長(zhǎng)沙 4008）

復(fù)方柴金解郁片對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠HPA軸及海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響

韓遠(yuǎn)山1，藺曉源1，易剛強(qiáng)2*，王宇紅2，楊 蕙1，孟 盼2，趙洪慶2，杜 青2
（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的 研究復(fù)方柴金解郁片對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠HPA軸及海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響，探討其可能的抗抑郁機(jī)制。方法 將SD大鼠隨機(jī)分為6組：對(duì)照組、模型組、氟西汀組（5.4 mg/kg）、復(fù)方柴金解郁片高、中、低劑量組（2.74、1.37、0.68 g/kg），采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激建立抑郁模型，于造模同時(shí)給藥，連續(xù)28 d。采用蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)測(cè)試檢測(cè)大鼠的抑郁樣行為，Morris水迷宮檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，HE染色觀察大鼠海馬病理結(jié)果變化，ELISA法檢測(cè)大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、皮質(zhì)酮（CORT），以及海馬5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、去甲腎上腺素（NA）、多巴胺（DA）的含量。結(jié)果 與抑郁模型組比較，復(fù)方柴金解郁片組大鼠蔗糖偏嗜度及活動(dòng)次數(shù)均顯著提高，學(xué)習(xí)記憶能力提升，海馬病理?yè)p傷情況得到緩解，血漿CRH、ACTH、CORT含量下降，海馬組織內(nèi)5-HT、NA、DA含量上升，5-HIAA含量下降（P＜0.05）。結(jié)論 復(fù)方柴金解郁片能顯著改善模型大鼠情緒和學(xué)習(xí)記憶功能、緩解海馬組織損傷，其作用可能與抑制HPA軸亢進(jìn)、增加腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量有關(guān)。

復(fù)方柴金解郁片；抑郁；慢性應(yīng)激；HPA軸；海馬；單胺遞質(zhì)

抑郁癥是以情緒低落、興趣喪失、思維遲緩為主要特征的精神性疾病，具有高發(fā)病、高復(fù)發(fā)、高自殺、高醫(yī)療成本的特點(diǎn)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）是機(jī)體一個(gè)重要的內(nèi)分泌軸，海馬是HPA軸負(fù)反饋的調(diào)節(jié)中樞，同時(shí)也是學(xué)習(xí)、記憶以及引起情感障礙的關(guān)鍵腦區(qū)，HPA軸失調(diào)依賴性的海馬神經(jīng)元損傷是抑郁產(chǎn)生的主要驅(qū)動(dòng)力[1-2]。復(fù)方柴金解郁片（專利授權(quán)號(hào)為ZL20 1210126887.X）具有“疏肝理氣、活血解郁”之功效，臨床用于治療輕、中度抑郁癥，療效顯著。為了能更好地探明復(fù)方柴金解郁片的抗抑郁功效及其機(jī)制，本研究以慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激抑郁模型大鼠為研究對(duì)象，通過(guò)研究復(fù)方柴金解郁片對(duì)模型大鼠行為、HPA軸指標(biāo)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、皮質(zhì)酮（CORT）以及海馬單胺遞質(zhì)5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、去甲腎上腺素（NA）、多巴胺（DA）的調(diào)控作用，探討其抗抑郁作用的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠75只，體質(zhì)量160～180 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)：No.11400700028228。許可證號(hào)：SCXK(湘)2012-0001。在光/暗周期為12 h/12 h（光照時(shí)間7：00～19：00）的條件下飼養(yǎng)于籠中，自由飲水和攝食。

1.2 藥物

復(fù)方柴金解郁片浸膏粉，相當(dāng)生藥量為6.6 g生藥/g（文中均按生藥量計(jì)算）(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)為20121025)。復(fù)方柴金解郁片臨床擬用成人每日生藥量為20.5 g。鹽酸氟西汀分散片，Patheon France生產(chǎn)，批號(hào)2860A。

1.3 試劑與主要儀器

5-HT、5-HIAA、NA、DA、ACTH、CRH、CORT酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自美國(guó)R＆D公司；DB001 Morris水迷宮購(gòu)自北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司；MK3型酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo；ET-12P組織脫水機(jī)購(gòu)自江西富華生物技術(shù)有限公司；RM223切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)萊卡公司；DVP-W7顯微鏡圖像處理系統(tǒng)購(gòu)自南京民城信息系統(tǒng)公司。

1.4 分組與給藥

所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后進(jìn)行蔗糖水消耗測(cè)試，選取蔗糖水?dāng)z入量相近的72只大鼠隨機(jī)分為6組，包括正常對(duì)照組、抑郁模型組、氟西汀組（5.4 mg/kg）、復(fù)方柴金解郁片高、中、低劑量組(2.74、1.37、0.68 g/kg)。造模同時(shí)灌胃給藥，每日1次，連續(xù)28 d，對(duì)照組、模型組則給予等體積的蒸餾水。末次給藥結(jié)束后，所有大鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)完成后用水合氯醛將大鼠麻醉，腹主動(dòng)脈取血，取大鼠下丘腦、垂體、腎上腺等組織固定于10%甲醛溶液中，冷凍臺(tái)上取海馬組織，液氮速凍，保存待用。

1.5 造模

采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激聯(lián)合孤養(yǎng)建立抑郁大鼠模型[3]，應(yīng)激方法包括冰水浴4 min、禁食或禁水24 h、50 V電擊3 min、傾籠24 h、噪音4 h、光照或黑暗24 h、潮濕墊料24 h、夾尾1 min，每天采用1～2種刺激，同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，軀體應(yīng)激每周限1次（電擊、夾尾），共28 d，期間動(dòng)物均孤籠飼養(yǎng)。

1.6 行為學(xué)測(cè)試

1.6.1 糖水偏嗜度 給藥28 d后，禁食禁水24 h，測(cè)定每組動(dòng)物4 h內(nèi)的1%蔗糖水偏嗜度。蔗糖偏嗜度=蔗糖水消耗量/(蔗糖水消耗量+蒸餾水消耗量)×100%。

1.6.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 將大鼠放入高40 cm，長(zhǎng)寬為80 cm的測(cè)試敞箱，以大鼠在3 min內(nèi)穿越底面次數(shù)為水平得分（四爪均進(jìn)入方格），以直立次數(shù)為豎直得分（兩前爪離開底面）。記錄大鼠水平得分和豎直得分的總和。

1.6.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮操作系統(tǒng)：直徑為1.5 m的圓形水池，平臺(tái)直徑為0.15 m，水深0.4 m，平臺(tái)置于迷宮西南象限。水面高出平臺(tái)3 cm，水溫保持(24±1)℃。于第23天開始對(duì)各組大鼠進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，訓(xùn)練5 d，訓(xùn)練完成后記錄大鼠爬上平臺(tái)的潛伏期時(shí)間，考查大鼠的學(xué)習(xí)能力；于第28天撤去平臺(tái)，記錄大鼠進(jìn)入平臺(tái)所在象限的潛伏時(shí)間，考察大鼠的記憶能力。

1.7 HE染色

取固定于4%甲醛溶液中的組織，常規(guī)石蠟包埋，切片，薄片用二甲苯和各級(jí)乙醇切片脫蠟水洗，洗完后用蘇木素染色5 min，蒸餾水沖洗至干凈，經(jīng)鹽酸乙醇分化和自來(lái)水浸泡后置伊紅液中2 min，純酒精脫水，二甲苯使之變透明，用加拿大樹膠封固，光學(xué)顯微鏡下觀察待檢測(cè)組織的病理情況。

1.8 ELISA檢測(cè)

往預(yù)先包被待測(cè)抗體的微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與各物質(zhì)的含量呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 對(duì)抑郁大鼠糖水偏嗜度的影響

給藥前（造模前），各組大鼠糖水偏嗜度無(wú)明顯差異（P＞0.05）。28 d造模結(jié)束后，與對(duì)照組比較，模型組大鼠糖水偏嗜度明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，氟西汀組、復(fù)方柴金解郁片高、中劑量組大鼠糖水偏嗜度明顯升高（P＜0.01或P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠糖水偏嗜度的影響(±s，n=12,%)

表1 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠糖水偏嗜度的影響(±s，n=12,%)

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別對(duì)照組模型組氟西汀組復(fù)方柴金解郁片高劑量組復(fù)方柴金解郁片中劑量組復(fù)方柴金解郁片低劑量組F P給藥前78.3±12.3 78.5±7.5 77.9±11.8 77.8±10.3 78.3±9.4 77.6±10.3 0.003 1.000給藥后82.3±5.9 59.2±9.4** 75.3±7.5##73.0±9.9##69.1±11.9#67.9±14.5 1.682 0.003

2.2 對(duì)抑郁大鼠活動(dòng)次數(shù)的影響

與對(duì)照組比較，抑郁模型組大鼠自主活動(dòng)次數(shù)顯著下降（P＜0.01）。與模型組比較，氟西汀組和復(fù)方柴金解郁片高劑量組大鼠總活動(dòng)數(shù)明顯增加 （P＜ 0.01）；同時(shí)，中劑量的復(fù)方柴金解郁片也能使模型大鼠活動(dòng)次數(shù)增加（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 對(duì)抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶障礙，表現(xiàn)為爬上平臺(tái)潛伏期時(shí)間和進(jìn)入目標(biāo)象限所耗時(shí)間均明顯延長(zhǎng)（P＜0.01）。在給予氟西汀和高劑量的復(fù)方柴金解郁片后，大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力均有所提升，表現(xiàn)為找到平臺(tái)時(shí)間與進(jìn)入目標(biāo)象限時(shí)間均顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠活動(dòng)次數(shù)及學(xué)習(xí)記憶的影響 (±s，n=12)

表2 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠活動(dòng)次數(shù)及學(xué)習(xí)記憶的影響 (±s，n=12)

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

對(duì)照組模型組氟西汀組復(fù)方柴金解郁片高劑量組復(fù)方柴金解郁片中劑量組復(fù)方柴金解郁片低劑量組F P總活動(dòng)數(shù)(次) 28.1±8.7 4.8±2.3** 14.3±4.4##11.0±4.7##8.4±2.1#5.6±2.4 7.808 0.002爬上平臺(tái)時(shí)間(s) 12.4±5.6 75.9±10.7** 40.4±13.7##47.4±13.5#58.9±12.3 68.3±15.1 10.247 0.001進(jìn)入目標(biāo)象限時(shí)間(s) 4.2±2.6 10.3±4.6** 5.4±2.8#6.3±2.1#7.2±3.7 10.7±4.5 1.655 0.008組別

2.4 對(duì)抑郁大鼠血漿ACTH、CRH、CORT含量的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿ACTH、CRH、CORT均明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較，氟西汀組、復(fù)方柴金解郁片高劑量組大鼠ACTH、CRH、CORT含量均明顯下降 (P＜0.01或P＜0.05)；復(fù)方柴金解郁片中劑量組大鼠血漿CORT含量顯著下降 (P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠血漿ACTH、CRH、CORT影響 (±s，n=12)

表3 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠血漿ACTH、CRH、CORT影響 (±s，n=12)

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別對(duì)照組模型組氟西汀組復(fù)方柴金解郁片高劑量組復(fù)方柴金解郁片中劑量組復(fù)方柴金解郁片低劑量組F P ACTH(ng/L) 9.75±3.05 16.12±1.30** 11.94±1.85##13.71±1.68#15.12±2.21 15.88±2.22 3.601 0.004 CRH(ng/L) 3.23±0.46 4.14±0.56** 3.40±0.72##3.43±1.06#3.58±0.78 3.83±0.95 2.124 0.010 CORT(ng/mL) 16.34±3.76 31.76±4.66** 22.83±3.17##24.64±4.21#25.23±4.13#29.48±5.51 3.943 0.001

2.5 對(duì)抑郁大鼠海馬組織病理形態(tài)的影響

如圖1所示，正常大鼠海馬椎體細(xì)胞排列整齊，形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞間隙正常。模型組大鼠海馬椎體細(xì)胞排列疏松，可見(jiàn)不同程度的胞體固縮，深染及空泡變性；給予氟西汀或高劑量復(fù)方柴金解郁片后，空泡細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞腫脹程度減輕，排列相對(duì)整齊；而中、低劑量的復(fù)方柴金解郁片對(duì)海馬椎體細(xì)胞的保護(hù)作用較弱。

2.6 對(duì)抑郁大鼠海馬組織內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬5-HT、NA、DA含量均明顯降低 (P＜0.01)，5-HT代謝產(chǎn)物5-HIAA含量升高，兩者比值也顯著升高(P＜0.01)。與模型組比較，高劑量復(fù)方柴金解郁片組5-HT、NA、DA含量均明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，5-HT代謝率（5-HIAA/5-HT）下降(P＜0.01)；中劑量復(fù)方柴金解郁片組5-HT含量升高(P＜0.05)，5-HT代謝率下降(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表4。

圖1 大鼠海馬光鏡圖（HE×400）

表4 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠海馬內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響 (±s，n=12)

表4 復(fù)方柴金解郁片對(duì)抑郁大鼠海馬內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響 (±s，n=12)

注：與對(duì)照組相比：*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比：#P＜0.05，##P＜0.01。

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3 討論

目前，抑郁癥發(fā)病率逐年增加，全球有9億以上人口深受其害，預(yù)測(cè)到2020年，將上升為世界第二大疾病[4]。關(guān)于抑郁癥發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，但較為公認(rèn)的是，慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激是能有效模擬抑郁癥臨床發(fā)病特征的動(dòng)物造模方法，被廣泛用于抑郁癥相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究[5]。本研究中，采用28天慢性應(yīng)激建立抑郁大鼠模型，行為學(xué)評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)模型大鼠蔗糖水偏食度、活動(dòng)次數(shù)以及學(xué)習(xí)記憶能力均明顯下降，提示其具有快感缺失、活動(dòng)能力下降、學(xué)習(xí)記憶功能受損等特征，符合抑郁癥的臨床發(fā)病特點(diǎn)，模型建立成功。給予復(fù)方柴金解郁片干預(yù)后，抑郁大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)有顯著回升，說(shuō)明該復(fù)方具有良好的抗抑郁效果。

復(fù)方柴金解郁片為本課題組研發(fā)的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由柴胡、貫葉金絲桃、姜黃、紫蘇、芍藥、知母組成。方中君以柴胡疏肝解郁；臣以貫葉金絲桃助君疏肝解郁，取散諸結(jié)之意，姜黃化瘀行氣，主血瘀氣滯諸證；佐以紫蘇理氣解郁，芍藥養(yǎng)血柔肝，知母滋陰除煩。全方共奏疏肝理氣、活血解郁之功。復(fù)方柴金解郁片是基于抑郁癥“瘀、郁”的中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)立法組方而成，因抑郁癥屬中醫(yī)“郁證”范疇，主要病位在肝、腦。情志以血為本，以氣為用，因情而郁，氣血失調(diào)是其病機(jī)關(guān)鍵。郁證之初以肝郁氣滯為主，繼發(fā)血瘀，瘀結(jié)于內(nèi)，不得宣泄，上犯清竅，神明失用。故具有“瘀、郁”的中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)，治宜“疏肝理氣、活血解郁”。林佩琴的《類證治裁》中有載：“七情內(nèi)起之郁，始而傷氣，繼必及血，終乃成勞”；王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》則明確指出瘀血可導(dǎo)致郁證的發(fā)生。

HPA軸是機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵樞紐，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)具有重要作用，其高亢是抑郁癥發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素[6]。研究發(fā)現(xiàn)，HPA軸功能亢進(jìn)導(dǎo)致體內(nèi)糖皮質(zhì)激素含量升高，進(jìn)而透過(guò)血腦屏障入腦，而海馬組織是腦中最易受糖皮質(zhì)激素攻擊的組織，當(dāng)海馬中皮質(zhì)醇含量異常升高時(shí)，可產(chǎn)生神經(jīng)毒性，加速海馬萎縮和損傷，進(jìn)而誘發(fā)抑郁的產(chǎn)生[7]。更糟糕的是，作為HPA軸的高位調(diào)節(jié)中樞，海馬組織損傷后會(huì)進(jìn)一步惡化神經(jīng)內(nèi)分泌的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，加重HPA軸功能紊亂，造成惡性循環(huán)[8]，而HPA軸過(guò)度活化可導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)與功能發(fā)生障礙[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，抑郁大鼠血漿HPA軸相關(guān)指標(biāo)ACTH、CRH、CORT含量均顯著上升，說(shuō)明其體內(nèi)HPA軸亢進(jìn)明顯，在給予中藥干預(yù)后，HPA軸高亢現(xiàn)象得到緩解。

海馬具有調(diào)節(jié)情緒認(rèn)知、學(xué)習(xí)記憶的功能，主要負(fù)責(zé)機(jī)體的學(xué)習(xí)與記憶，是抑郁癥研究的關(guān)鍵靶器官[10]。本研究從行為、病理兩方面探討抑郁大鼠腦內(nèi)海馬組織的功能及病理?yè)p傷情況，Morris水迷宮測(cè)試發(fā)現(xiàn)，抑郁大鼠找到平臺(tái)以及進(jìn)入平臺(tái)所在象限的時(shí)間均明顯延長(zhǎng)，說(shuō)明其學(xué)習(xí)以及記憶功能受到損傷；病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，抑郁大鼠海馬椎體神經(jīng)元數(shù)量減少，排列紊亂，存在胞體固縮，核仁深染等病理現(xiàn)象。上述結(jié)果說(shuō)明，抑郁大鼠存在學(xué)習(xí)記憶功能受損，海馬病理?yè)p傷等現(xiàn)象，該損傷與抑郁大鼠體內(nèi)HPA軸亢進(jìn)相關(guān)。

腦內(nèi)單胺遞質(zhì)能改變是抑郁癥發(fā)病及治療研究的關(guān)鍵，其含量的減少直接與精神及情緒變化有關(guān)，有研究證實(shí)，5-HT能神經(jīng)傳遞機(jī)能的減退不僅導(dǎo)致情緒障礙如抑郁與焦慮的形成，而且還可通過(guò)影響其他遞質(zhì)的活動(dòng)誘發(fā)抑郁癥[11]。在抑郁癥狀態(tài)下，5-HT代謝加速，經(jīng)一系列反應(yīng)后最終代謝生成5-HIAA，臨床研究證實(shí)，抑郁癥患者血漿5-HIAA的濃度顯著高于正常對(duì)照組[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，抑郁大鼠5-HIAA/5-HT值顯著升高，說(shuō)明5-HT能系統(tǒng)代謝異常，腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量持續(xù)處于過(guò)低狀態(tài)，最終導(dǎo)致情緒障礙；在給予復(fù)方柴金解郁片干預(yù)后，模型大鼠海馬內(nèi)5-HT、NA、DA含量回升，5-HT代謝程度降低，說(shuō)明復(fù)方柴金解郁片的調(diào)節(jié)情緒作用與增強(qiáng)腦內(nèi)單胺遞質(zhì)的釋放有一定關(guān)系。

綜上所述，復(fù)方柴金解郁片具有改善情緒和學(xué)習(xí)記憶功能、緩解海馬組織損傷等作用，其作用機(jī)制可能與抑制HPA軸的過(guò)度活化，增強(qiáng)單胺遞質(zhì)系統(tǒng)的活性，尤其是降低5-HT的代謝，從而恢復(fù)腦內(nèi)遞質(zhì)的平衡有關(guān)。以上研究闡明了復(fù)方柴金解郁片發(fā)揮抗抑郁作用的部分機(jī)制，為中藥復(fù)方治療抑郁癥的臨床應(yīng)用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。此外，通過(guò)進(jìn)一步梳理中醫(yī)郁證的發(fā)病機(jī)制可知，肝主疏泄，調(diào)暢氣機(jī)，若肝失疏泄，氣機(jī)阻滯，郁而化火，傷津耗液，則耗氣傷陰。同時(shí)肝藏血，以血為本，若肝郁氣滯，則血運(yùn)不暢，瘀而化滯，滯久化熱，熱灼津液，更加耗傷陰津。肝腎同源，肝火旺盛，損耗陰精，則腎陰不足。腎藏精，精生髓，腦為髓海，故腎通于腦。腎陰精不足，則髓?？仗?，氣虛無(wú)以行血?jiǎng)t血停為瘀，陰虛而虛火上熬則瘀阻腦絡(luò)，終致清竅失養(yǎng)，神明不用，發(fā)為郁證[13]。由此不難發(fā)現(xiàn)“腎通于腦”在郁證的發(fā)病中起重要作用，這恰恰與HPA軸相一致。如基于腎本質(zhì)研究成果的“腎-髓-腦”生物軸理論研究表明，腎本質(zhì)可能位于神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的HPA軸[14]。因此我們有理由認(rèn)為，基于腎通于腦的“腎-髓-腦”可能做為一條生物軸，在抑郁癥中承擔(dān)著與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)HPA軸相類似或者相一致的功能調(diào)控作用。因此，本文正是選擇HPA軸指標(biāo)和腦神經(jīng)遞質(zhì)指標(biāo)，以復(fù)方柴金解郁片的抗抑郁機(jī)制反正了以上理論的合理性。但復(fù)方柴金解郁片更多的分子機(jī)制仍有待深入研究。

[1]Du X,Pang TY.Is dysregulation of the HPA-axis a core pathophysiology mediating co-morbid depression in neurod egenerative diseases?[J].Frontiers in Psychiatry,2015,6:1-33.

[2]Schatzberg AF,Keller J,Tennakoon L.HPA axis genetic variation,cortisol and psychosis in major depression[J].Molecular Psychiatry,2014,19(2):220-227.

[3]趙洪慶,杜 青,凌 佳,等.左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬神經(jīng)元JNK/Elk-1/c-fos通路的調(diào)控作用[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2016,21(6):625-629.

[4]Ménard C,Hodes,GE,Russo,SJ.Pathogenesis of depression: Insights from human and rodent studies[J].Neuroscience,2016, 321:138-162.

[5]She Y,Xu J,Duan Y,et al.Possible antidepressant effects and mechanism of electroacupuncture in behaviors and hippocam pal synaptic plasticity in a depression rat model[J].Brain Res, 2015,1629:291-297.

[6]Nader Maghsoudi,Rasoul Ghasemi,Zahra Ghaempanah,et al. Effect of chronic restraint stress on HPA axis activity and expression of BDNF and trkb in the hippocampus of pregnant rats:possible contribution in depression during pregnancy and postpartum period[J].Basic Clin Neurosci,2014,5(2):131-137.

[7]Dorey R,Piérard C,Chauveau F,et al.Stress-Induced memory retrieval Impairments:different time-course involvement of corticosterone and glucocorticoid receptors in dorsal and ventral hippocampus [J].Neuropsychopharmacology,2012,37(13):2870-2880.

[8]Joao MN,Paula MA,Rui AC,et al.Caffeine consumption prevents diabetes induced memory impairment and synaptotoxicity in the hippocampus of NONcZNO10/LTJ mice[J].PLos One, 2012,7(4):1-10.

[9]Lang BT,Yan Y,Dempsey RJ,et al.Impaired neurogenesis in adult type-2 diabetic rats[J].Brain Res,2009,1258:25-33.

[10]劉瓊珍,呂文婷,蔡旻煊,等.代謝性疾病對(duì)情緒和認(rèn)知功能的影響及其可能機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2015,29 (5):847-855.

[11]Sumner JA,Vrshek-Schallhorn S,Mineka S,et al.Effects of the serotonin transporter polymorphism and history of major depressio n on overgeneral autobiographical memory[J].Cognition and Emotion,2014,28(5):947-958.

[12]和昱辰,張 波,瞿 瑋,等.血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物在重度抑郁癥及抑郁共病焦慮障礙診斷中的應(yīng)用[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2014,36(8):806-810.

[13]藺曉源，韓遠(yuǎn)山，孟 盼,等.糖尿病并發(fā)抑郁癥“虛、瘀、郁”的中醫(yī)病機(jī)探討[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2016,27(8):1492-1493.

[14]賀文彬，張俊龍，陳乃宏.“腎-髓-腦”生物軸理論初探[J].中醫(yī)雜志,2015,56(14):1182-1184.

（本文編輯 楊 瑛）

Effects of Compound Chaijin Jieyu Tablets on HPA Axis and Hippocampal Monoamine Neurotransmitter in Chronic Stress Depression Rats

HAN Yuanshan1,LIN Xiaoyuan1,YI Gangqiang2*,WANG Yuhong2，YANG Hui2,MENG Pan2,ZHAO Hongqing2,DU Qing2
(1.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;2.Training Bases of Hunan Key Laboratory of Chinese Materia Medica Powder and Innovative Drugs Established by Provincial and Ministry, Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

Objective To study the effect of compound Chaijin Jieyu tablets on HPA axis and hippocampal monoamine neurotransmitter in chronic unpredictable stress model rats,and to explore its possible antidepressant mechanism.Methods SD rats were randomly divided into six groups:the controlgroup,modelgroup,fluoxetine group (5.4 mg/kg), and high,medium and low dose of compound Chaijin Jieyu tablets group (2.74,1.37,0.68 g/kg).Chronic unpredictable mild stress was used to build the model of depression,and the model was administered simultaneously for 28 days.Sugar preference test and open field test were used to test the depressive behavior of rats,Morris water maze was used to test the ability of learning and memory of the rats.Pathological changes of hippocampus were observed by HE staining.Serum CRH,ACTH, CORT,hippocampal 5-HT,5-HIAA,NA and DA levels were measured by ELISA.Results Compared with model group, the degree of sucrosepreference,activities,learning and memory ability were significantly increased.Hippocampal pathological damage were alleviated.Levels of CRH,ACTH and CORT in plasma decreased,and 5-HT,NA and DA in hippocampusincreased,the content of 5-HIAA decreased.Conclusion Compound Chaijin Jieyu tablets could significantly improve the mood, learning and memory function of rats,alleviate the injury of hippocampus.The role of Chaijin Jieyu tablets might be related to inhibition of HPA axis hyperactivity,and increasing the content of monoamine transmitters in the brain.

compound Chaijin Jieyu tablets;depression;chronic stress;HPA axis;hippocampus;monoamine neurotransmitter

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.03.003

2016-12-26

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81573965）。

韓遠(yuǎn)山，男，研究實(shí)習(xí)員，研究方向：中藥神經(jīng)藥理。

*易剛強(qiáng)，男，研究員，E-mail:wyh107@126.com。

本文引用：韓遠(yuǎn)山，藺曉源，易剛強(qiáng)，王宇紅，楊 蕙，孟 盼，趙洪慶，杜 青.復(fù)方柴金解郁片對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠HPA軸及海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（3）：240-244.