郭亞男，曹思婷，何生虎，王 爽，張 鑫，孫 鵬

(寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏銀川 750021)

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2013年—2015年寧夏地區(qū)牛支原體感染的血清學(xué)調(diào)查分析

郭亞男，曹思婷，何生虎*，王 爽，張 鑫，孫 鵬

(寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏銀川 750021)

為了摸清寧夏地區(qū)肉牛和奶牛牛支原體(Mycoplasmabovis)感染情況及流行趨勢(shì)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)2013年—2015年采集自寧夏地區(qū)肉牛主要養(yǎng)殖區(qū)的57個(gè)肉牛場(chǎng)886份血清和奶牛主要養(yǎng)殖區(qū)的39個(gè)奶牛場(chǎng)1 088份血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2013年抽檢的16個(gè)奶牛場(chǎng)陽(yáng)性率為32.17%(148/460)，場(chǎng)群陽(yáng)性率100%(16/16)；2014年抽檢的銀川地區(qū)12個(gè)奶牛場(chǎng)，陽(yáng)性率為26.52%(61/230)，場(chǎng)群陽(yáng)性率100%(12/12)；2015年抽檢的11個(gè)奶牛場(chǎng)，陽(yáng)性率為44.97%(179/398)，場(chǎng)群陽(yáng)性率100%(11/11)；2014年陽(yáng)性率較2013年和2015年低，2015年最高，2013年與2014年陽(yáng)性率差異不顯著(P>0.05),2015年與2013年和2014年的陽(yáng)性率差異極顯著(P<0.01)。2013年抽檢的19個(gè)肉牛場(chǎng)，陽(yáng)性率為7.26%(18/248)，場(chǎng)群陽(yáng)性率為26.32%(5/19)；2014年抽檢的38個(gè)肉牛場(chǎng)，陽(yáng)性率為5.02%(32/638)，場(chǎng)群陽(yáng)性率為50%(19/38)； 2014年較2013年的陽(yáng)性率低，但差異不顯著(P>0.05)，而且部分地區(qū)和肉牛場(chǎng)未檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清。上述結(jié)果表明，寧夏地區(qū)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)牛支原體感染狀況較為嚴(yán)重，應(yīng)引起養(yǎng)殖場(chǎng)的高度重視。

牛支原體；血清；調(diào)查

牛支原體(Mycoplasmabovis)能夠引起牛的肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳房炎、結(jié)膜炎、懷孕母牛流產(chǎn)、生殖器感染等多種疾病[1-2]。1961年，美國(guó)首次從患乳房炎的病牛乳中分離到牛支原體[3]，1976年被確定為引起牛呼吸系統(tǒng)疾病的病原之一。目前，牛支原體已經(jīng)在多個(gè)國(guó)家和地區(qū)流行，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[4]。我國(guó)于1983年由黎濟(jì)申[5]首次報(bào)道從乳房炎牛乳中分離到了牛支原體， 2008年湖北省相繼報(bào)道從肉牛和犢牛肺臟中分離到牛支原體[6-7]。2010年李新民等[8]首次報(bào)道寧夏地區(qū)從肉牛肺臟分離到了牛支原體，隨后寧夏地區(qū)多次報(bào)道從奶牛和肉牛肺臟、鼻拭子、奶樣、關(guān)節(jié)液中分離到了支原體，在分離到病原的帶毒牛中，犢牛起初以關(guān)節(jié)腫大為主要癥狀，后期發(fā)展為氣喘、咳嗽、高熱等癥狀，成年牛主要以乳房炎、肺炎為主要癥狀，雖然使用多種抗菌藥物進(jìn)行治療，但是治療效果不明顯。隨著寧夏地區(qū)奶牛、肉牛業(yè)的快速發(fā)展，奶牛肉牛的引購(gòu)和區(qū)內(nèi)的流動(dòng)頻率也越來(lái)越大，致使外地病原的引入和區(qū)內(nèi)不同地區(qū)間病原的傳播。寧夏地區(qū)是我國(guó)的養(yǎng)牛大省，奶牛養(yǎng)殖主要分布在銀川、吳忠和中衛(wèi)地區(qū)，肉牛養(yǎng)殖主要分布在銀川、吳忠、中衛(wèi)、固原、石嘴山地區(qū)。

為了調(diào)查寧夏地區(qū)牛支原體的流行狀況，本研究根據(jù)寧夏地區(qū)肉牛和奶牛分布情況進(jìn)行血清采集，2013年—2015年對(duì)奶牛進(jìn)行了3年的牛支原體血清學(xué)調(diào)查，共計(jì)奶牛場(chǎng)39個(gè)，血清樣本1 088份，2013年—2014年對(duì)肉牛進(jìn)行了2年的牛支原體血清學(xué)調(diào)查，共計(jì)肉牛場(chǎng)57個(gè)，血清樣本886份。通過(guò)本次血清學(xué)調(diào)查，初步了解牛支原體在寧夏的流行狀況，為寧夏地區(qū)牛支原體感染的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院臨床獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作人員，根據(jù)寧夏地區(qū)肉牛和奶牛分布情況采集的奶牛血清樣品1 088份；肉牛血清886份。

1.1.2 主要試劑 牛支原體EILSA抗體檢測(cè)試劑盒(Bio-XMycoplasmabovisElisa Kit，SMYC16C18)，比利時(shí)Bio-X公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 移液器，德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品；ST70-2微孔板恒溫振蕩器，上海安亭科學(xué)儀器公司產(chǎn)品； Wellwash 4MK2洗板機(jī)，杭州米歐儀器有限公司產(chǎn)品；Multiskan MK3酶標(biāo)儀，上海賽默飛世爾儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法及結(jié)果判定 按照比利時(shí)牛支原體ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書，對(duì)采集的血清進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)，所得數(shù)據(jù)參考說(shuō)明書陰陽(yáng)性判定方法。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)分析 利用EXCEL軟件和SAS 8.2統(tǒng)計(jì)分析軟件中的t檢驗(yàn)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 2013年—2015年奶牛血清樣品檢出結(jié)果

由表1 可知，2013年共抽檢銀川、吳忠、中衛(wèi)16個(gè)奶牛場(chǎng)，采集奶牛血清460份，檢出陽(yáng)性血清148份，陽(yáng)性率為32.17%。16個(gè)奶牛場(chǎng)均檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率達(dá)100%，最高陽(yáng)性率為64.29%，最低陽(yáng)性率為8.7%，其中銀川地區(qū)116份血清中，檢出陽(yáng)性血清40份，陽(yáng)性率為34.48%；吳忠地區(qū)255份血清中，檢出陽(yáng)性血清80份，陽(yáng)性率為31.37%；中衛(wèi)地區(qū)89份血清中，檢出陽(yáng)性血清28份，陽(yáng)性率為31.46%。

表1 2013年寧夏奶牛主要養(yǎng)殖地區(qū)牛支原體血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

由表2 可知，2014年共抽檢寧夏銀川地區(qū)12個(gè)奶牛場(chǎng)，采集奶牛血清230份，檢出陽(yáng)性血清61份，陽(yáng)性率為26.52%。12個(gè)奶牛場(chǎng)均檢出牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率達(dá)100%，最高陽(yáng)性率為57.14%，最低陽(yáng)性率為8.7%。

表2 2014年寧夏奶牛主要養(yǎng)殖區(qū)銀川地區(qū)奶牛牛支原體血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

由表3 可知，2015年共抽檢銀川、吳忠11個(gè)奶牛場(chǎng)，采集奶牛血清398份，檢出陽(yáng)性血清179份，陽(yáng)性率為44.97%。11個(gè)奶牛場(chǎng)均檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率達(dá)100%，最高陽(yáng)性率為59.18%，最低陽(yáng)性率為20.00%，其中銀川地區(qū)283份血清中，檢出陽(yáng)性血清139份，陽(yáng)性率為49.12%；吳忠地區(qū)115份血清中，檢出陽(yáng)性血清40份，陽(yáng)性率為34.78%。

表3 2015年寧夏奶牛主要養(yǎng)殖地區(qū)牛支原體血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

圖1 年寧夏地區(qū)奶牛牛支原體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

由圖1可知，2013年—2015年寧夏地區(qū)奶牛支原體血清陽(yáng)性率處于26.52%～44.97%，具有較高的陽(yáng)性率，對(duì)比3年的陽(yáng)性率，2014年陽(yáng)性率較2013年和2015年低，2015年最高。2013年與2014年相比陽(yáng)性率差異不顯著(P>0.05)，2013年與2015年相比陽(yáng)性率差異極顯著(P<0.01)，2014年與2015年相比陽(yáng)性率差異極顯著(P<0.01)。

2.2 2013年—2015年肉牛血清樣品檢出結(jié)果

由表4 可知，2013年共抽檢銀川、固原19個(gè)肉牛場(chǎng)，采集肉牛血清248份，檢出陽(yáng)性血清18份，陽(yáng)性率為7.26%。19個(gè)肉牛場(chǎng)中共5個(gè)牛場(chǎng)檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率達(dá)26.32%，最高陽(yáng)性率為41.67%，其中銀川地區(qū)98份血清中，檢出陽(yáng)性血清4份，陽(yáng)性率為4.08%；固原地區(qū)150份血清中，檢出陽(yáng)性血清15份，陽(yáng)性率為10.00%。

由表5 可知，2014年共抽檢銀川、吳忠、石嘴山、中衛(wèi)、固原38個(gè)肉牛場(chǎng)，采集肉牛血清638份，檢出陽(yáng)性血清32份，陽(yáng)性率為5.02%。38個(gè)肉牛場(chǎng)中共19個(gè)牛場(chǎng)檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率達(dá)50%，最高陽(yáng)性率為20.00%，其中銀川地區(qū)464份血清中，檢出陽(yáng)性血清23份，陽(yáng)性率為4.96%；吳忠地區(qū)40血清中，檢出陽(yáng)性血清2份，陽(yáng)性率為5.00%；石嘴山地區(qū)未檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清；中衛(wèi)地區(qū)20血清中，檢出陽(yáng)性血清1份，陽(yáng)性率為5.00%；固原地區(qū)100血清中，檢出陽(yáng)性血清6份，陽(yáng)性率為6.00%。

由圖2可知，寧夏地區(qū)肉牛支原體血清檢測(cè)陽(yáng)性率處于8%以下，對(duì)比2013年和2014年陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，2014年較2013年的陽(yáng)性率低，但差異不顯著(P>0.05)。

表4 2013年寧夏肉牛主要養(yǎng)殖地區(qū)牛支原體血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

3 討論

本研究采用比利時(shí)牛支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，每一份血清均有陰性對(duì)照，減少了在操作過(guò)程中因各種因素所造成的誤差，檢測(cè)數(shù)據(jù)更具有科學(xué)性和準(zhǔn)確性。因國(guó)內(nèi)尚未有牛支原體相關(guān)疫苗的使用，因此可以通過(guò)檢測(cè)牛支原體血清抗體的陰陽(yáng)性結(jié)果判斷牛是否被牛支原體感染，但是要判斷陽(yáng)性牛是否為患牛需進(jìn)一步的病原學(xué)分析。2013年—2015年采集的肉牛和奶牛血清樣品覆蓋了寧夏地區(qū)肉牛和奶牛的主要養(yǎng)殖區(qū)。對(duì)寧夏地區(qū)牛支原體感染情況進(jìn)行調(diào)查，為寧夏地區(qū)牛場(chǎng)牛支原體凈化工作的開展提供了科學(xué)的依據(jù)。

2013年共抽檢16個(gè)奶牛場(chǎng)，采集奶牛血清460份，檢出陽(yáng)性血清148份，陽(yáng)性率為32.17%。最高陽(yáng)性率為64.29%，最低陽(yáng)性率為8.7%，銀川地區(qū)陽(yáng)性率為34.48%(40/116)，吳忠地區(qū)陽(yáng)性率為31.37%(80/255)，中衛(wèi)地區(qū)陽(yáng)性率為31.46%(28/89)。2014年共抽檢銀川地區(qū)12個(gè)奶牛場(chǎng)，采集奶牛血清230份，檢出陽(yáng)性血清61份，陽(yáng)性率為26.52%。最高陽(yáng)性率為57.14%，最低陽(yáng)性率為8.7%。2015年共抽檢11個(gè)奶牛場(chǎng)，采集奶牛血清398份，檢出陽(yáng)性血清179份，陽(yáng)性率為44.97%。最高陽(yáng)性率為59.18%，最低陽(yáng)性率為20.00%，銀川地區(qū)陽(yáng)性率為49.12%(139/283)，吳忠地區(qū)陽(yáng)性率為34.78%(40/115)。對(duì)比2013年—2015年寧夏地區(qū)奶牛支原體血清檢測(cè)陽(yáng)性率， 2014年陽(yáng)性率較2013年和2015年低，2015年最高，2013年與2014年相比陽(yáng)性率差異不顯著(P>0.05)，2013年與2015年相比陽(yáng)性率差異極顯著(P<0.01)，2014年與2015年相比陽(yáng)性率差異極顯著(P<0.01)，而且在抽檢的所有奶牛場(chǎng)中均檢測(cè)出牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率高達(dá)100%。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明寧夏地區(qū)牛支原體在奶牛主要養(yǎng)殖區(qū)普遍存在，而且較為嚴(yán)重，呈上升的趨勢(shì)。究其原因可能是因?yàn)椋耗膛?chǎng)為了擴(kuò)大養(yǎng)殖規(guī)模，從外地或其他已被牛支原體感染的牛場(chǎng)購(gòu)買奶牛，沒(méi)有進(jìn)行牛支原體等相關(guān)疾病的檢查，致使病原引入寧夏地區(qū)和寧夏不同地區(qū)，最終造成寧夏不同地區(qū)不同場(chǎng)區(qū)均有牛支原體病原的存在；奶牛飼養(yǎng)成本較高，牛場(chǎng)在發(fā)現(xiàn)牛支原體感染后，患病牛不淘汰、不隔離，致使該疾病在牛場(chǎng)之中橫向傳播，其他牛也被感染。

表5 2014年寧夏肉牛主要養(yǎng)殖地區(qū)牛支原體血清學(xué)調(diào)查結(jié)果

圖2 2013年—2014年寧夏地區(qū)肉牛牛支原體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

2013年共抽檢19個(gè)肉牛場(chǎng)，采集肉牛血清248份，檢出陽(yáng)性血清18份，陽(yáng)性率為7.26%，其中5個(gè)牛場(chǎng)檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率為26.32%(5/19)，最高陽(yáng)性率為41.67%，其中銀川地區(qū)陽(yáng)性率為4.08%(4/98)，固原地區(qū)陽(yáng)性率為10.00%(15/150)。2014年共抽檢38個(gè)肉牛場(chǎng)，采集肉牛血清638份，檢出陽(yáng)性血清32份，陽(yáng)性率為5.02%，其中19個(gè)牛場(chǎng)檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清，場(chǎng)群感染率為50%(19/38)，最高陽(yáng)性率為20.00%。銀川地區(qū)陽(yáng)性率為4.96%(23/464)，吳忠地區(qū)陽(yáng)性率為5.00%(2/40)，石嘴山地區(qū)未檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清；中衛(wèi)地區(qū)陽(yáng)性率為5.00%(1/20)；固原地區(qū)陽(yáng)性率為6.00%(6/100)。對(duì)比2013年和2014年陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，2014年較2013年的陽(yáng)性率低但差異不顯著(P>0.05)，而且部分地區(qū)和肉牛場(chǎng)未檢測(cè)到牛支原體陽(yáng)性血清。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明，寧夏地區(qū)肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)中牛支原體陽(yáng)性血清率較低，不同地區(qū)及部分場(chǎng)區(qū)存在牛支原體病原，但對(duì)其他牛場(chǎng)也有一定的威脅。其原因可能是由于肉牛養(yǎng)殖周期較短，牛支原體對(duì)犢牛的感染癥狀前期主要表現(xiàn)在關(guān)節(jié)腫大后期發(fā)展為呼吸道癥狀，最終影響犢牛的生長(zhǎng)發(fā)育，因此肉牛場(chǎng)在發(fā)現(xiàn)犢牛牛支原體感染后立即將其淘汰，致使牛支原體病原在肉牛場(chǎng)中得到一定的凈化。

由于牛支原體可通過(guò)ON/OFF開關(guān)變異機(jī)制形成多樣化的支原體表面結(jié)構(gòu)，逃避宿主的免疫，而且牛支原體還可以通過(guò)抑制淋巴細(xì)胞增殖來(lái)降低牛機(jī)體的免疫水平，激活宿主炎癥細(xì)胞引發(fā)炎癥反應(yīng)，損傷宿主，致使牛體免疫功能降低和造成繼發(fā)感染[9-11]。因此，牛支原體病原可在牛體持續(xù)存在和條件性致病，其引起的疾病在臨床上一直缺乏有效的防控手段，國(guó)內(nèi)既無(wú)商品疫苗，也無(wú)針對(duì)牛支原體進(jìn)行治療的特效藥物，因此針對(duì)牛支原體應(yīng)以預(yù)防為主，通過(guò)提高飼養(yǎng)管理技術(shù)、定期檢查進(jìn)行防控，發(fā)現(xiàn)血清陽(yáng)性牛時(shí)及時(shí)隔離并進(jìn)行病原分離鑒定，確診后立即淘汰，最終達(dá)到無(wú)免無(wú)疫的凈化目的。

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Serological Investigation and Analysis ofMycoplasmabovisInfection in Ningxia Area during 2013 to 2015

GUO Ya-nan,CAO Si-ting,HE Sheng-hu,WANG Shuang,ZHANG Xin,SUN Peng

(CollegeofAgronomy,NingxiaUniversity,Yinchuan,Ningxia,750021,China)

To investigate the infection and epidemic trend ofMycoplasmabovisand provide scientific basis for prevention and control ofMycoplasmabovisinfection in Ningxia,Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect 886 sera of 39 dairy farms and 1 088 sera of 57 beef cattle farms in the main breeding area,which was collected from 2013 to 2015 in Ningxia.The results showed that in the sera of 16 dairy farms in 2013,the positive rate was 32.17%(148/460),and the positive rate of positive famers was 100% (16/16);in the sera of 12 dairy farms in 2014,the positive rate was 26.52%(61/230),and the positive rate of positive famers was 100% (12/12);in the sera of 11 dairy farms in 2015,the positive rate was 44.97%(179/398),and the positive rate of positive famers was 100% (11/11);the positive rate in 2014 compared with 2013 and 2015 was the lowest,the positive rate was the highest in 2015.In 2013 and 2014,the positive rate was not significantly different (P>0.05),and the difference was very significant (P<0.01) between 2015 and 2013.in the sera of 19 beef cattle farms in 2013,the positive rate was 7.26%(18/248), and the positive rate of positive famers was 26.32% (5/19 );in the sera of 38 beef cattle farms in 2014, the positive rate was 5.02% (32/638),and the positive rate of positive famers was 50% (19/38);The positive rate was lower in 2014 than in 2013,but the difference was not significant (P>0.05),and the positive serum could not be detected in some areas and some beef cattle famers.The result above indicated thatMycoplasmabovisinfection was more serious in dairy farms in Ningxia,which should be highly valued by every dairy farm.

Mycoplasmabovis;serum;survey

2016-07-11

寧夏科技攻關(guān)重點(diǎn)專項(xiàng)項(xiàng)目(312-0164)

郭亞男(1991- )，男，河南南陽(yáng)人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)臨床診斷基礎(chǔ)研究。

S852.62;S858.23

B

1007-5038(2017)04-0129-05

*通訊作者