楊 娜，邢蒙恩，王大為，李紅魁，李德臣，吳元華*

(1.沈陽農業(yè)大學，遼寧沈陽 110866；2.遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧沈陽 110164；3.本溪市動物疫病預防控制中心，遼寧本溪 117000)

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遼寧省豬弓形蟲血清抗體檢測與分析

楊 娜1，邢蒙恩1，王大為1，李紅魁2，李德臣3，吳元華1*

(1.沈陽農業(yè)大學，遼寧沈陽 110866；2.遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧沈陽 110164；3.本溪市動物疫病預防控制中心，遼寧本溪 117000)

弓形蟲病是一種呈世界性流行的人獸共患寄生蟲病，可在人和動物中相互傳播，全球約有50%的人感染，不僅給畜牧業(yè)生產帶來嚴重危害和重大經濟損失，而且對食品安全構成巨大威脅。采用改良凝集試驗(MAT)定性檢測從遼寧省沈陽、遼陽、大連等14市采集的共計2 152份血清，結果共有368份陽性血清，總陽性率為17.1%(368/2 152)，遼陽市和本溪市陽性率最高和最低，分別為26.3%和6.12%；其中繁殖母豬為33.9%，普遍高于育肥豬的13.4%；成年豬為20.9%，普遍高于仔豬的7.59%。結果表明，遼寧省14市豬均有不同程度的弓形蟲感染，且各市感染率有差異。

弓形蟲；豬；血清抗體；檢測

弓形蟲病(Toxoplasmosis) 是由剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii) 感染引起的一種重要的人獸共患寄生蟲病， 對孕婦和免疫力低下的人造成嚴重危害[1-2]。已經確定弓形蟲的終末宿主是貓，所有的恒溫動物都是其中間宿主。食用被貓糞便中卵囊污染的食物或者飲水會引起中間宿主的感染，食用含弓形蟲包囊的生肉或者未煮熟的肉類也會引起感染。弓形蟲病會給人類的健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來很大危害[3-5]。因此，本試驗采用改良凝集試驗(MAT)對采集遼寧省14市的豬血清樣品進行檢測，得到其相應的弓形蟲感染率，并結合飼養(yǎng)管理水平和地理環(huán)境、氣候等因素分析其感染原因，為動物弓形蟲病的防控提供一定的理論依據(jù)，同時也對降低人類感染弓形蟲的風險具有一定意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 MAT檢測試劑和器械 弓形蟲全蟲抗原(貨號EH2001)，美國Kera FAST公司產品;96孔U型板，北京華康同創(chuàng)生物技術有限公司產品。

1.1.2 待檢血清 從遼寧省各市采集豬血清樣本2 152份，其中沈陽市1 036份，遼陽市76份，丹東市102份，葫蘆島市56份，錦州市266份，盤錦市95份，阜新市50份，鐵嶺市85份，撫順市40份，鞍山市82份，大連市120份，本溪市49份，營口市25份，朝陽市70份。2 000 r/min離心10 min分離血清，置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

①血清稀釋液38 μL/孔，待檢血清2 μL/孔，充分混勻，并設置陰性對照和陽性對照。②第1孔加入血清稀釋液48 μL，第2～8孔分別加入血清稀釋液25 μL，吸取待檢血清2 μL至第1孔，充分混勻后吸出25 μL加到第2孔并混勻，依次加到第8孔，效價為1∶25～1∶3 200[6]。③吸取抗原稀釋液2.5 mL、 β巰基乙醇35 μL、臺盼藍50 μL和抗原液150 μL， 充分混勻后立即加到96孔U型板中，25 μL/孔，再吸取稀釋好的血清25 μL加到對應的孔中，輕輕吹打混勻。④用封口膜封好96孔U型板，37℃過夜。⑤鏡下觀察，若底部透明，則為陽性；若底部出現(xiàn)藍色沉淀，則為陰性[7]。

2 結果

2.1 各市豬血清抗體陽性率檢測結果

遼寧省采集的2 152份豬血清總陽性率為17.1%(368/2 152)，其中遼陽市陽性率最高為26.3%，本溪市陽性率最低為6.12%(表1)。

2.2 繁殖母豬與育肥豬血清抗體陽性率檢測結果

繁殖母豬檢測陽性率為33.9%(131/386)，育肥豬陽性率為13.4%(237/1 766)；其中育肥豬陽性率最高的出現(xiàn)在撫順市為21.9%，本溪市最低為0.23%；朝陽市繁殖母豬陽性率最高為58.3%，錦州市最低為15.3%(表2)。

表1 遼寧省各市豬弓形蟲血清總體陽性率

2.3 仔豬與成年豬血清抗體陽性率檢測結果

仔豬陽性率為7.59%(47/619)，成年豬陽性率為20.9%(321/1 533)；其中仔豬陽性率最高，出現(xiàn)在撫順市為22.2%，葫蘆島、阜新、鞍山、本溪、營口則未檢出仔豬抗體陽性；遼陽市成年豬陽性率最高(31.4%)，本溪市最低(7.69%)(表3)。

3 討論

3.1 繁殖母豬與育肥豬的比較

檢測結果顯示，遼寧省內各市感染率差異明顯，其中朝陽繁殖母豬感染率最高，錦州感染率最低；撫順育肥豬感染率最高，本溪感染率僅為0.23%，且各市繁殖母豬感染率都明顯高于育肥豬。

與育肥豬相比，繁殖母豬飼養(yǎng)周期更長，導致其與弓形蟲卵囊的接觸幾率增加。氣候原因也會產生影響，遼寧省內各市氣溫不同，若氣溫偏低，氣候干燥，則不利于弓形蟲的發(fā)育，其感染率也隨之降低。放養(yǎng)豬接觸野貓或卵囊的幾率要遠高于圈養(yǎng)豬，其感染率也相對較高。另外，若場區(qū)周邊有流浪貓等流竄動物頻繁活動，則該養(yǎng)殖場的感染率會明顯高于其他場。同時，豬舍內的環(huán)境衛(wèi)生，日常消毒工作、飼料存放環(huán)境等，都可能是影響其感染的原因[8]。

表2 遼寧省育肥豬和繁殖母豬弓形蟲血清抗體檢測結果

表3 遼寧省仔豬和成年豬血清抗體檢測結果

3.2 成年豬與仔豬的比較

檢測結果顯示，遼陽成年豬感染率最高(31.4%)，本溪最低(7.69%)；撫順仔豬感染率最高(22.2%)，而本溪、葫蘆島、鞍山等地仔豬均未檢出陽性。且各市成年豬感染率都明顯高于仔豬，其中葫蘆島市差異最大，鐵嶺市相差最小；飼養(yǎng)周期和飼養(yǎng)環(huán)境是影響其感染率的重要原因。此外，仔豬到成年豬的成長過程中要多次換圈可能也是影響感染率的一個原因。

3.3 遼寧省各市間的比較

檢測結果顯示遼寧省各市豬弓形蟲感染率有明顯的差別，遼陽市感染率最高(26.3%)，本溪市感染率最低(6.12%)。另外，本試驗測得的遼寧省豬弓形蟲感染率與崔平等[9]所報道的河北省豬平均感染率35.69%相比較，要明顯低于其平均值；同時低于徐斌等[10]報道的重慶地區(qū)對豬血清檢測的陽性率71.85%。但是卻遠高于董永森[11]所報道的青海省豬弓形蟲感染率6.64%。綜合本試驗中遼寧省各市豬弓形蟲感染率的高低，可推測影響弓形蟲感染率的因素中，氣候因素是極其重要的。青海省和遼寧省都屬于氣溫偏低、空氣干燥的氣候特點，顯然不利于弓形蟲的發(fā)育和傳播，其弓形蟲感染率也就遠低于氣候適宜弓形蟲發(fā)育的河北、重慶等地。當然也可能與檢測方法有關，崔平和徐斌等采用的是間接血凝試驗(IHA)，而本研究采用的是改良凝集試驗(MAT)，已有學者報道在檢測血清弓形蟲陽性抗體時，MAT的敏感性要高于IHA，但由于MAT成本高，操作復雜，應用受到一定限制[12]。

本研究對遼寧省14市豬弓形蟲感染的調查結果提示，豬感染弓形蟲情況十分嚴重，特別是繁殖母豬，弓形蟲病已對養(yǎng)豬業(yè)構成了嚴重的威脅，這不僅造成了巨大的經濟損失，還可能進一步威脅到人類的健康，應引起廣大市民和相關部門的高度重視，加強對弓形蟲病的防控。

[1] 張居作,陳漢忠,徐君飛.我國弓形蟲的感染現(xiàn)狀[J].動物醫(yī)學進展,2008,29(7):101-104.

[2] 劉 俠,闞松鶴,林 青.弓形蟲病研究進展[J].動物醫(yī)學進展,2015,36(1):101-105.

[3] 劉建枝,陳裕祥,夏晨陽,等.弓形蟲病危害性及其診斷與防治研究進展[J].西藏科技,2010(11):52-55.

[4] 王大為,韓小虎,慕名揚,等.中國東北地區(qū)部分動物弓形蟲病的流行病學調查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2014(23):129-131.

[5] 張焰峰,馬超鋒,孫何云,等.豬弓形蟲病的危害及綜合防制[J].山東畜牧獸醫(yī),2013(4):37-38.

[6] 王貝貝,劉 帥,崔麗麗,等.改良凝集試驗(MAT)檢測動物弓形蟲血清抗體[J].中國獸醫(yī)雜志,2012,48(6):25-27.

[7] 王鳳陽.弓形蟲改良凝集試驗的建立及我國部分地區(qū)犬、雞弓形蟲病流行病學調查[D].吉林長春:吉林農業(yè)大學,2012.

[8] Wang M,Meng P,Ye Q,et al.Detection ofToxoplasmagondiioocysts in soils in Northwestern China using a new semi-nested PCR assay[J].BMC Vet Res,2014,10:238.

[9] 崔 平,方素芳,武治云,等.河北省家畜弓形蟲病的流行病學調查[J].中國獸醫(yī)科技,2004(11)35-36.

[10] 徐 斌.重慶地區(qū)豬弓形蟲病流行病學調查研究[J].動物醫(yī)學進展,2013,34(3):37-40.

[11] 董永森.青海省豬弓形蟲病血清流行病學調查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2010(12):83.

[12] Gerald W,Esch.Toxoplasmosis of animals and humans[J].J Parasitol,2010,96(5):940.

Detection and Analysis ofToxoplasmagondiiAntibody from Pig Sera in Liaoning Province

YANG Na1，XING Meng-en1，WANG Da-wei1，LI Hong-kui2，LI De-chen3，WU Yuan-hua1

(1.ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang,Liaoning,110866，China；2.LiaoningCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Shenyang,Liaoning,110164，China；3.BenxiCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Benxi,Liaoning,117000，China)

Toxoplasmosis is a popular worldwide zoonotic parasitic disease.It is reported that about half of the world's population infected withT.gondiiand the disease can spread between human and animals.This disease brings serious harm and great economic losses not only for human and animals as well as livestock production,but also for a great threaten to food safety.2 152 serum samples collected from Shenyang,Liaoyang,Dalian and other 14 cities in Liaoning province were detected by modified agglutination test (MAT),and results showed that 368 serum samples are positive.Total positive rate is 17.1% (368/2 152),the highest rate is 26.3% in Liaoyang,and the lowest rate is 6.12% in Benxi.The positive rate of breeding sows is 33.9%,which is higher than 13.4% of fattening pigs.The positive rate of adult pigs(20.9%) is higher than that of piglets(7.59%).The results showed that all the 14 cities have positive sera againstToxoplasmagondiiand the positive rates are different in different cities of Liaoning province.

Toxoplasmagondii;pig;serum antibody;detection

2016-07-06

國家自然科學基金青年基金項目(31201894)；中國博士后科學基金面上項目(2014M561252)

楊 娜(1981-)，女，山東煙臺人，博士，主要從事弓形蟲病研究。

S852.729

B

1007-5038(2017)04-0125-04

*通訊作者