李 婷，許艷秋，安萬霞，王廣成，高立明，陳丙坤，吳春先

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

◆農(nóng)藥分析◆

蛇床子素的高效液相色譜分析

李 婷，許艷秋，安萬霞，王廣成，高立明，陳丙坤，吳春先

（四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041）

采用高效液相色譜法，以乙腈＋水為流動相，使用ZORBAX SB-C18不銹鋼柱和二極管陣列檢測器，在321 nm波長下對蛇床子素水乳劑中有效成分進行定量檢測。結(jié)果表明，方法的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8，標準偏差為0.002 3，變異系數(shù)為0.24%，平均回收率為101.11%。

蛇床子素；高效液相色譜；分析

蛇床子素（cnidiadin）CAS登錄號為[484-12-8]，分子式為C15H16O3，化學(xué)名稱為7-甲氧基-8-異戊烯基香豆素。其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 蛇床子素結(jié)構(gòu)圖

蛇床子素是從傘形科植物中提取分離出的天然香豆素類化合物，外觀為黃綠色至白色結(jié)晶粉末，不溶于水，易溶于丙酮、甲醇、乙醇等多種常用溶劑[1]。蛇床子素作為植物源殺蟲劑，以觸殺為主，胃毒為輔，藥劑進入昆蟲體內(nèi)后，作用于神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致害蟲肌肉非功能性收縮，最終衰竭死亡。其對多種害蟲，如菜青蟲、茶尺蠖、棉鈴蟲、甜菜夜蛾以及各種蚜蟲等有效[2]。作為植物源殺菌劑，其通過抑制病原菌對葡萄糖和鈣的吸收，阻礙病原菌細胞壁中幾丁質(zhì)的沉淀，從而造成菌絲斷裂，孢子產(chǎn)生、萌發(fā)、粘附、入侵及芽管伸長受阻[3-4]。

本文建立反相高效液相色譜法對蛇床子素水乳劑進行定量分析。方法操作簡便、快速、準確，適用于企業(yè)生產(chǎn)過程產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 試驗部分

1.1 試劑與儀器

乙腈（色譜純）、水（蒸餾水）；98%蛇床子素標樣，北京百靈威科技有限公司；1%蛇床子素水乳劑。

Waters 2695高效液相色譜儀，具有二極管陣列檢測器（2996）和自動進樣器；Empower I色譜工作站；色譜柱：不銹鋼柱（150 mm×4.6 mm），內(nèi)裝ZORBAX SB-C18填充物（5 μm）；過濾器：濾膜孔徑約0.45 μm。

1.2 液相色譜操作條件

流動相：V（乙腈）∶V（水）=60∶40；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：321 nm；進樣體積：10μL。在此條件下，蛇床子素保留時間約為6.36min。

蛇床子素標樣和水乳劑的高效液相色譜圖見圖2、圖3。

圖2 蛇床子素標樣高效液相色譜圖（321nm）

圖3 蛇床子素水乳劑高效液相色譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 溶液的配制

稱取蛇床子素標樣約0.03 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲10 min。移取上述標樣母液10 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，制得標樣溶液。

稱取含蛇床子素0.006 g（精確至0.000 2 g）左右的試樣于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲10 min，過濾、待測。

1.3.2 測定與計算

在1.2液相色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，至相鄰2針的響應(yīng)值相對變化＜1.5%。按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進樣測定。

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中蛇床子素的峰面積分別進行平均，然后按下式計算試樣中蛇床子素的質(zhì)量分數(shù)w（%）。

式中：A標、A樣分別為標樣溶液、試樣溶液中蛇床子素峰面積的平均值；m標、m樣分別為標樣和試樣的質(zhì)量，g；P標為標樣中蛇床子素的質(zhì)量分數(shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

通過Waters二極管陣列檢測器2996的數(shù)據(jù)采集功能，得到蛇床子素200～400 nm紫外波長掃描圖（圖4）。從圖4中看出，蛇床子素的最大吸收波長為321 nm，其在257 nm處也有相對較好的吸收。當檢測波長為321 nm時，基線噪音小，雜質(zhì)峰干擾少，故將方法檢測波長定為321 nm。

圖4 蛇床子素紫外吸收光譜圖

2.2 流動相的選擇

依據(jù)蛇床子素的理化性質(zhì)，選用乙腈溶解樣品。流動相的選擇則根據(jù)蛇床子素的特點，對不同體積比的乙腈＋水在色譜柱上進行選擇比較。當乙腈＋水（體積比60∶40）為流動相，流速為1.0 mL/min時，有效成分與雜質(zhì)能很好分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，且分析時間適中。

2.3 線性相關(guān)性試驗

稱取蛇床子素標樣配制質(zhì)量濃度分別為0.059 3, 0.095 7,0.120 5,0.143 8,0.180 0,0.236 3 g/L的標樣溶液。在1.2色譜操作條件下進行分析，以蛇床子素質(zhì)量濃度為橫坐標，相應(yīng)峰面積為縱坐標，繪制標準曲線（見圖5）。方法線性方程為y=35134163x-41499，線性相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999 8。

圖5 蛇床子素線性關(guān)系圖

2.4 精密度試驗

從同一水乳劑中準確稱取5份試樣，在1.2反相高效液相色譜操作條件下進行測定。測得蛇床子素的標準偏差為0.002 3，變異系數(shù)為0.24%（表1）。

2.5 準確度試驗

稱取6份試樣，分別準確加入不同體積的標樣溶液，在1.2色譜操作條件下進行分析。測得蛇床子素的平均回收率為101.11%（表2）。

表1 蛇床子素精密度試驗結(jié)果

表2 方法準確度試驗結(jié)果

3 結(jié)論

通過對高效液相色譜分析條件進行選擇與優(yōu)化，建立了蛇床子素水乳劑的高效液相色譜分析方法。本方法的準確度和精密度較高，線性關(guān)系良好，是蛇床子素水乳劑的一種可行分析方法。

[1]孫小兵,葉吉琴.蛇床子素研究進展[J].大眾科技,2009(2): 132-133.

[2]石志琦,陳浩.新型植物源創(chuàng)制農(nóng)藥蛇床子素 [J].世界農(nóng)藥, 2010,32(6):52-54.

[3]Shi Z Q,Shen S G,Zhou W,et al.Fusarium graminearum Growth Inhibition Due to Glucose Starvation Caused by Osthol[J].International Journal of Molecular Sciences,2008,9(3):371-382.

[4]石志琦.蛇床子素作為殺菌劑的活性研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

（責(zé)任編輯：顧林玲）

Analysis of Cnidiadin by HPLC

LI Ting,XU Yan-qiu,AN Wan-xia,WANG Guang-cheng,GAO Li-ming,CHEN Bing-kun,WU Chun-xian
(Sichuan Province Institute for the Control of Agricultural,Chengdu 610041,China)

A method for quantitative analysis of cnidiadin was described by HPLC,using acetonitrile and water as mobile phase,on ZORBAX SB-C18column and DAD,at 321 nm wavelength.The results showed that the linear correlation coefficient of the method was 0.999 8,the standard deviation was 0.002 3,the variation coefficient was 0.24%,the average recovery was 101.11%.

cnidiadin;HPLC;analysis

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.02.011

2016-09-01

李婷（1985—），女，四川省遂寧市人，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)藥管理和農(nóng)藥檢測工作。E-mail：liting5114@163.com