劉 寧 楊 玲 楊維仁 張桂國 姜淑貞 牛群升 楊在賓

（山東農業(yè)大學動物科技學院1，泰安 271018）

（山東省畜牧總站2，濟南 250022）

自然霉變飼糧添加酵母細胞壁對仔豬養(yǎng)分消化率和消化酶活性的影響

劉 寧1楊 玲2楊維仁1張桂國1姜淑貞1牛群升1楊在賓1

（山東農業(yè)大學動物科技學院1，泰安 271018）

（山東省畜牧總站2，濟南 250022）

本試驗旨在研究自然霉變飼糧添加酵母細胞壁（YCW）對仔豬養(yǎng)分消化率、腸道消化酶活性的影響。選取40頭體重相近（8.32±0.49）kg健康的三元（杜×長×大）雜交仔豬，隨機分為4個處理，每個處理10個重復。對照組用優(yōu)質玉米和玉米蛋白粉配制基礎飼糧，50%M組（玉米赤霉烯酮849.4 μg／kg；伏馬毒素5 661.55 μg／kg；嘔吐毒素1 576.80 μg／kg）為霉變玉米和玉米蛋白粉替代對照組中50%的玉米和玉米蛋白粉，0.10%YCW和0.25%YCW組為50%M組基礎上添加0.10%和0.25%的YCW。結果表明：自然霉變飼糧顯著降低仔豬養(yǎng)分消化率及十二指腸和空腸淀粉酶（AMS）、胰蛋白酶（TRS）和脂肪酶活性（LPS）（P＜0.05）；YCW顯著改善仔豬養(yǎng)分消化率以及消化酶活性（P＜0.05），并具有劑量效應。由此可知，自然霉變飼糧降低了仔豬養(yǎng)分消化率及AMS、TRS和LPS活性，酵母細胞壁具有一定的改善和脫毒效果。

自然霉變飼糧 養(yǎng)分消化率 淀粉酶 胰蛋白酶 脂肪酶

鐮刀菌毒素是由鐮刀菌產生的，在谷物及其副產品中廣泛存在，其主要包括玉米赤霉烯酮（ZEA）、嘔吐毒素（DON）和伏馬毒素（FUM）。鐮刀菌毒素的含量取決于氣候條件及飼糧的儲存和生產條件［1，2］。霉變飼糧的研究主要集中在高劑量下的肝毒性［3］、免疫毒性［4］、遺傳毒性［5］及玉米赤霉烯酮的雌激素效應［6-7］，而對養(yǎng)分消化率及腸道消化酶活性影響的研究較少。本試驗室曾系統(tǒng)研究了純品ZEA對仔豬養(yǎng)分消化率的影響［8-9］，發(fā)現(xiàn)其對養(yǎng)分消化率無顯著影響。另外，多數(shù)相關研究均采用高劑量鐮刀菌毒素，單一純品以及高劑量鐮刀菌毒素在實際生產中不常見，為貼近實際，研究自然霉變飼糧對仔豬養(yǎng)分消化率及腸道消化酶活性的影響，同時研究酵母細胞壁對自然霉變飼糧的脫毒效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

自然霉變飼糧50%自然霉變處理［10］。

酵母細胞壁（YCW，yeast cell wall）：商品名Detoxza（毒清素），為英聯(lián)公司（Harbin，China）的產品。

1.2 試驗設計及飼糧

選取40頭體重相近（8.32±0.49）kg健康杜×長×大三元雜交仔豬，按照體重隨機分為4個處理，每個處理10個重復。對照組用優(yōu)質玉米和玉米蛋白粉配制基礎飼糧，50%M組為霉變玉米和玉米蛋白粉替代對照組中50%的玉米和玉米蛋白粉，0.10%YCW和0.25%YCW組在50%M組的基礎上分別添加0.10%和0.25%的酵母細胞壁。飼糧營養(yǎng)水平參考NRC（1998）進行配制，組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

續(xù)表1

1.3 飼養(yǎng)管理

仔豬采用代謝籠（0.6 m×0.8 m）單飼（可隨時進行代謝試驗），自由采食和飲水。第1周溫度維持在30℃，第2周溫度維持在26～28℃左右；豬舍相對濕度控制在65%左右。仔豬管理和免疫按常規(guī)程序進行。

1.4 消化代謝試驗

試驗第15～21天，所有仔豬采用全收糞尿法進行消化代謝試驗，每天09：00和17：00左右收集糞尿，連續(xù)7 d。記錄每天糞和尿的總量，混勻后按照糞和尿的1／4取樣。然后每個重復取混勻后的糞樣100 g和尿樣100 mL加10%的鹽酸10 mL固氮，用于測定鮮樣粗蛋白；剩余糞樣置于65℃的恒溫鼓風干燥箱中烘干并粉碎，過40目篩，制備待測樣品，待測總能（GE，gross energy）、有機物質（OM，organic matter）、干物質（DM，dry matter）、粗蛋白（CP，crude protein）、粗脂肪（EE，ether extract）。

1.5 屠宰試驗

試驗結束后，40頭仔豬全部屠宰，取十二指腸、空腸食糜30～50 g，保存于液氮中，用于測定其中的淀粉酶（AMS，amylase）、胰蛋白酶（TRS，trypsin）和脂肪酶（LPS，lipase）活性。

1.6 測定指標與方法

1.6.1 毒素的測定

試驗飼糧于試驗開始前一周配合完成，抽取樣品送往青島飼料質量檢驗所進行霉菌毒素含量的檢測，方法參考Jiang等［11］。測定其中的AFB1（黃曲霉毒素）、ZEA、FUM、DON含量，DON的測定采用高效液相色譜法（HPLC），AFB1、ZEA和FUM的測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和熒光技術。檢測限分別為AFB11 μg／kg，ZEA 0.1 mg／kg，DON 0.1 mg／kg，F(xiàn)UM 0.25 mg／kg。最低檢測質量濃度分別為1、100、250、100 μg／kg。

1.6.2 養(yǎng)分表觀消化率的測定

飼料和糞尿樣中營養(yǎng)物質含量的測定方法：總能采用氧彈燃燒法測定；粗灰分參照GB 6438—1986的方法；干物質參照GB 6435—1986的方法；粗蛋白質采用半自動凱氏定氮儀測定；粗脂肪采用索氏提取法測定。營養(yǎng)物質GE、DM、CP和EE的表觀消化率（AD）按下式計算：

AD＝［（E1-E2）／E1］×100%

式中：E1為營養(yǎng)成分（DM、CP、EE，g）和GE（MJ）進食量；E2為相應營養(yǎng)成分（DM、CP、EE，g）和GE（MJ）糞中排出量。

蛋白質生物學價值（BV）按公式計算：

蛋白質生物學價值（BV）＝（食入氮-糞氮-尿氮）／可消化氮

1.6.3 腸道食糜消化酶活性測定

淀粉酶（AMS，amylase）、胰蛋白酶（TRS，trypsin）和脂肪酶（LPS，lipase）活性，按試劑盒（南京建成生物工程研究）說明書進行測定。

2 結果與分析

2.1 霉菌毒素的含量

飼糧中霉菌毒素含量的分析結果見表2，ZEA，F(xiàn)UM和DON在所有的飼糧中均被檢測出，但對照組與50%M組、0.10%YCW和0.25%YCW相比毒素含量很低，可以設定不受其中霉菌毒素的影響，黃曲霉毒素均在檢測限度以內。

表2 飼糧霉菌毒素含量／μg／kg

2.2 仔豬養(yǎng)分消化率

自然霉變飼糧添加酵母細胞壁對仔豬養(yǎng)分消化率的影響見表3。分析結果可知：50%M組與對照組相比、干物質（DM）、粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）、總能（GE）的表觀消化率顯著降低（P＜0.05），蛋白質生物學利用價值（BV）顯著降低（P＜0.01），霉變飼糧中添加酵母細胞壁可以顯著改善仔豬DM、CP、EE、GE的表觀消化率以及蛋白質BV（P＜0.01），0.25%酵母細胞壁對仔豬養(yǎng)分消化率的改善效果更明顯（P＜0.05）。

表3 自然霉變飼糧添加酵母細胞壁對仔豬養(yǎng)分表觀消化率的影響（n＝10）

2.3 仔豬腸道消化酶活性

自然霉變飼糧添加酵母細胞壁對仔豬小腸消化酶活性的影響見表4。從表4中可以看出，與對照組相比，霉變飼糧顯著降低仔豬十二指腸和空腸淀粉酶（AMS）、胰蛋白酶（TRS）及脂肪酶（LPS）活性（P＜0.01）。酵母細胞壁能夠顯著提高十二指腸和空腸AMS、TRS及LPS活性（P＜0.01）。0.25%酵母細胞壁對十二指腸和空腸AMS、TRS以及LPS活性的改善效果更加明顯（P＜0.01）。

表4 自然霉變飼糧添加酵母細胞壁對仔豬腸道消化酶活性的影響（n＝10）

3 討論

3.1 自然霉變飼糧對仔豬養(yǎng)分消化率的影響

本研究發(fā)現(xiàn)，自然霉變飼糧能夠降低仔豬養(yǎng)分消化率，這與Kubean等［11］研究霉菌毒素降低肉雞養(yǎng)分消化率和Yang等［12］研究自然霉變玉米降低了肉鴨干物質、有機物消化率的結論一致。另外玉米人工污染Pencillium spp.和A．ochraceus，降低肉雞對干物質、氨基酸和能量的消化率［14］，究其原因可能是霉變飼糧中的霉菌毒素導致小腸對葡萄糖、5-甲基四氫葉酸的吸收不良以及腸細胞中SGLT1轉運蛋白和L-脯氨酸轉運蛋白活性的抑制［15-16］，抑制消化酶活性以及消化道正常腸絨毛長度及隱窩深度的影響，其中對消化酶活性的影響在本試驗中得到了證實。與此相反，Hauschild等［17］曾報道含有ZEA（2 mg／kg）的日糧沒有影響干物質、總能和粗蛋白的消化率，這說明單一霉菌毒素對養(yǎng)分消化率的影響不能夠準確反映多種霉菌毒素協(xié)同對養(yǎng)分表觀消化率的影響。

3.2 自然霉變飼糧對仔豬消化酶活性的影響

霉菌毒素中毒會導致營養(yǎng)物質吸收障礙綜合癥、降低消化酶活性［18-19］。但很多研究結論不一致，例如，Applegate等［20］研究發(fā)現(xiàn)腸道麥芽糖酶活性在飼糧霉變比例增加時二次線性升高，而在進一步增加時卻降低。母雞（427～457日齡）采食霉菌毒素污染的飼糧，胰淀粉酶和胰凝乳蛋白酶活性升高，胰脂肪酶、十二指腸脂肪酶活性降低，不影響十二指腸和空腸胰蛋白酶、淀粉酶和糜蛋白酶以及空腸脂肪酶活性［21］。Osborne等［22］報道，肉雞采食自然霉變飼糧雖然不影響生長性能，但能夠造成消化吸收不良，胰脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶和核糖核酸酶含量降低。本研究發(fā)現(xiàn)，仔豬飼喂自然霉變飼糧降低了十二指腸和空腸淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的活性，原因可能是霉變飼糧對仔豬的毒性作用，對腸黏膜的破壞以及抑制DNA、RNA和蛋白質的合成［23］。

3.3 酵母細胞壁脫毒效果

酵母細胞壁（YCW）是有機吸附劑中的典型代表，它主要由葡聚糖、甘露寡糖和糖蛋白等組成。近年的研究發(fā)現(xiàn)，酵母細胞壁中的功能型碳水化合物（主要為甘露聚糖）可結合黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬毒素等霉菌毒素［24］。酵母細胞壁提高仔豬養(yǎng)分消化率和消化酶活性的機理存在以下三方面：①甘露寡聚糖肽能有效吸附腸道有害菌，促進有益菌增殖，改善動物消化道微生態(tài)區(qū)系而降低動物胃腸道疾病發(fā)生率［25］；②提高小腸絨毛高度和絨毛高度與隱窩深度比，降低隱窩深度［26］，改善腸黏膜形態(tài)結構［27］，提高營養(yǎng)物質消化、吸收；③酵母細胞壁改善腸黏膜組織結構來增加營養(yǎng)物質吸收面積，增強絨毛頂端分泌酶的活性［28］。

4 結論

在本試驗條件下，自然霉變飼糧降低了仔豬養(yǎng)分消化率及十二指腸和空腸淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶活性，酵母細胞壁能夠降低自然霉變飼糧的毒害作用，改善仔豬養(yǎng)分消化率以及腸道食糜消化酶活性。

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Effects of Feeding Naturally Contaminated Diet with or Without Yeast Cell Wall on Nutrient Availability and Activities of Digestive Enzyme of Piglets

Liu Ning1Yang Ling2Yang Weiren1Zhang Guiguo1Jiang Shuzhen1Niu Qunsheng1Yang Zaibin1

（College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University1，Taian 271018）
（Shandong Province Animal Husbandry Station2，Jinan 250022）

This experiment was conducted to study the effects of feeding naturally contaminated diet with or without the yeast cell wall adsorbent（YCW）on nutrient availability and activities of digestive enzyme of piglets.A total of 40 healthy hybrid piglets［initial weight of（8.32±0.49）kg］were fed four treatment diets with 10 repetition for each treatment.Basic diet of the control group was prepared by high qualiy corn and corn gluten meal，50%M diet group（zearalenone，849.4 μg／kg；fumonisin，5 661.55 μg／kg；deoxynivalenol，1 576.80 μg／kg）was given the diets in which normal corn and corn gluten meal was 50%replaced by naturally contaminated corn and corn gluten meal，0.10%YCW diet and 0.25%YCW diet（0.10%or 0.25%YCW was supplemented to the 50%M diet）.The results showed as follows：naturally contaminated diet decreases nutrient availability，activities of amylase，trypsin，lipase in duodenum and jejunum compared with controls.Naturally contaminated diet with YCW significantly improvd nutrient availability and activities of digestive enzymes of piglets along with dosage effects.In conclusion，naturally contaminated diet decreased nutrient availability and activities of amylase，trypsin，lipase，and addition of YCW to diet was effective in counteracting the toxic effects of naturally contaminated diet.

naturally contaminated diet，nutrient availability，amylase，trypsin，lipase

S815

A

1003-0174（2017）01-0099-05

山東省現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系生豬創(chuàng)新團隊建設（SDAIT-06-022-04）

2015-06-01

劉寧，男，1989年出生，碩士，動物營養(yǎng)與飼料科學

楊在賓，男，1961年出生，教授，動物營養(yǎng)與飼料科學