蕫 晗， 國 琦， 郭志恒， 王 哲， 劉松巖

內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病的meta分析

蕫 晗1， 國 琦2， 郭志恒3， 王 哲1， 劉松巖2

目的 分析內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風險之間的相關性。 方法 本研究檢索時間從建庫至2016年10月。納入評估eNOS多態(tài)性(+894G/T)與偏頭痛發(fā)病風險之間相關性的病例對照研究。初篩得到365篇全文，經(jīng)篩選后最終5篇納入meta分析。異質(zhì)性分析采用I2檢驗，文獻質(zhì)量評估采用英國牛津循證醫(yī)學中心文獻嚴格評價項目。結果 與GG+GT基因型相比，TT基因型增加有先兆偏頭痛(migraine with aura，MA)的發(fā)生風險(OR=1.56，95%CI1.11～2.20；I2= 0%，P=0.01)。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛發(fā)病風險(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2= 0%，P=0.02)。結論 本研究提示內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風險之間有一定的關系，并且可能因人群遺傳背景的不同與偏頭痛亞型有一定關聯(lián)。

內(nèi)皮型一氧化氮合酶； 基因多態(tài)性； 偏頭痛； 易感性

偏頭痛(migraine)是一種常見的慢性神經(jīng)血管性疾病，可伴有惡心、嘔吐、畏聲、畏光等先兆癥狀。根據(jù)2004年國際頭痛協(xié)會(International Headache Society，IHS)分類標準，偏頭痛分為有先兆偏頭痛(migraine with aura，MA)和無先兆偏頭痛(migraine without aura，MO)。研究表明一氧化氮(nitric oxide，NO)與偏頭痛發(fā)病有關[1，2]，而一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是催化L-精氨酸生成NO的催化酶，其與偏頭痛發(fā)病的相關性也受到越來越多學者的重視[3，4]。NOS包括三種同工酶，即內(nèi)皮型NOS(endothelial，eNOS)、誘導型NOS(inducible NOS，iNOS)與神經(jīng)元型NOS(neuronal NOS，nNOS)。人類eNOS基因位于第7號染色體長臂(7q36)，全長約21 kb，含26個外顯子和25個內(nèi)含子，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)eNOS基因存在多個多態(tài)性位點，其中第7號外顯子核苷酸894處G被T所代替，導致編碼產(chǎn)物第298位氨酸酸由Glu變?yōu)锳sp(Glu298Asp)，后者可導致NO生成減少[3]。目前有關eNOS基因894G/T多態(tài)性與偏頭痛關系的研究結論不一[3～7]。本研究通過meta分析探究eNOS基因894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病的相關性。

1 材料與方法

1.1 文獻檢索 本研究以“偏頭痛、一氧化氮合酶、多態(tài)性”為主題詞，計算機檢索中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫(CBM)、維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(VIP)、萬方數(shù)據(jù)庫；以“migraine，endothelial nitiric oxide synthase，eNOS，NOS3，polymorphism，migraine disorder”為主題詞檢索Pubmed、Embase、Cochrane、Web of Science等英文數(shù)據(jù)庫，并手工檢索納入研究的參考文獻。檢索時間從建庫至2016年10月。

1.2 文獻納入和排除標準 納入標準包括：(1)公開發(fā)表的一氧化氮合酶基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)熱相關性的病例對照研究(文種不限)；(2)研究對象均為偏頭痛患者及對照人群，民族不限；(3)研究方法均為聚合酶鏈式反應(PCR)或PCR-限制性片段長度多態(tài)性(PCT-RFLP)技術；(4)對照組基因型分布經(jīng)Hardy-Weinberg(H-W)定律檢驗。排除標準為統(tǒng)計學方法不恰當，數(shù)據(jù)不全文，基礎性研究、綜述、病例報道、單臂研究。

1.3 文獻質(zhì)量評價 參考英國牛津循證醫(yī)學中心文獻嚴格評價項目(Oxford critical appraisal skill program，Oxford CASP，2004)評價納入病例對照研究的文獻質(zhì)量[8]。包括：(1)樣本量是否充足；(2)診斷標準是否清楚；(3)分組情況是否匹配；(4)對照組與病例組是否可比；(5)基因檢測方法是否合理；(6)數(shù)據(jù)是否充分。由2名研究者采用統(tǒng)一數(shù)據(jù)表獨立提取數(shù)據(jù)，而后交叉核對，必要時聯(lián)系原文獻作者，以確定試驗的具體實施過程。在數(shù)據(jù)提取過程中如有爭議，有第三位研究者一起參考原文討論后上協(xié)商解決。

1.4 統(tǒng)計學方法 對納入研究的基因型分布進行H-W定律檢驗，并應用Stata軟件(12.0版本)分析敏感性。采用RevMan 5.2軟件進行Meta分析。采用卡方檢驗對研究結果的異質(zhì)性進行檢驗，用I2評價異質(zhì)性大小(I2=0%～25%，無異質(zhì)性；I2=0%～25%，中度異質(zhì)性；I2=50%～75%，高異質(zhì)性；I2=75%～100%，超高異質(zhì)性)。若I2<50%采用固定效應模型，I2≥ 50%采用隨機效應模型進行數(shù)據(jù)合并，并計算OR值及95%CI。采用Stata分析發(fā)表偏移。P<0.05認為有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

2.1 入選文獻基本情況 初檢共獲得到395篇文獻，排除綜述、系統(tǒng)評價、研究位點非一氧化氮合酶基因G894T、重復發(fā)表及數(shù)據(jù)不全文獻，最終納入5篇文獻[3～7]，文獻篩選過程(見圖1)。文獻質(zhì)量評價結果顯示納入研究的診斷標準明確，樣本量充足，病例組與對照組匹配具有可比性，采用的基因檢測方法合理，實驗結果數(shù)據(jù)明確。納入研究的對照組基因型分布均符合H-W定律。納入文獻的基本特征(見表1)。本研究共納入偏頭痛患者997例，對照組805例，基因型分布及基因頻率(見表2)。

2.2 Meta分析 894G/T基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病相關性(見表3)。GG/GT+TT、TT/GT+GG基因型及G/T等位基因與偏頭痛發(fā)病無明顯相關。亞組分析發(fā)現(xiàn)：與GT+GG基因型相比，TT基因型增加MA的發(fā)生風險(見圖2)，而GT+TT基因型與偏頭痛及其亞型的發(fā)病風險無關(見表3)。T等位基因亦與偏頭痛及其亞型的發(fā)病風險無關(見表3)。

對人群進行分析發(fā)現(xiàn)，在高加索(OR=1.32，95%CI0.93～1.86；I2=0%，P=0.12)及非高加索人群(OR=1.98，95%CI0.91～4.31；I2=0%，P=0.91)中，TT基因型與GT+GG基因型相比，并不增加偏頭痛發(fā)病風險。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛發(fā)病風險(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2=0%，P=0.02)。

2.3 異質(zhì)性分析 由于本研究初始文獻合并過程中異質(zhì)性較大，因而需進行異質(zhì)性分析。通過Galbraith圖確定異質(zhì)性來源(見圖3)，發(fā)現(xiàn)文獻[7]存在異質(zhì)性，進一步發(fā)現(xiàn)該研究患者與對照組性別構成有差異。分析T與G等位基因及GT+TT與GG基因型與偏頭痛發(fā)病關系時，發(fā)現(xiàn)文獻[7]剔除后，剩余文獻合并時異質(zhì)性很小。T與G等位基因相比偏頭痛發(fā)病風險并不增加(OR=1.03，95%CI0.89～1.20；I2=0%，P=0.68)。GT+TT基因型與GG型者相比偏頭痛發(fā)病風險相當(OR=1.21，95%CI0.98～1.50；I2=3%，P=0.38)。進一步分析發(fā)現(xiàn)GT+TT基因型與MO發(fā)作風險高有關(OR=1.31，95%CI1.03～1.68；I2=0%，P=0.03)。

2.4 發(fā)表偏移 Begg’s及Egger’s檢驗均未發(fā)現(xiàn)明顯發(fā)表偏移存在，P分別為1.000與0.198。Begg’s檢驗漏斗圖(見圖4)。

圖1 文獻篩選流程圖

圖2 內(nèi)皮型一氧化氮合酶多態(tài)性與偏頭痛亞型的相關性

圖3 Galbraith圖評估納入研究的異質(zhì)性

圖4 Begg’s漏斗圖評估發(fā)表偏移

文獻年份地域例數(shù)偏頭痛對照組年齡(歲)偏頭痛對照組女性比例偏頭痛對照組1234520062008201120122014意大利西班牙巴西巴西土耳其1563371781501761253411179912331．4±7．6037．8±15．1##37．5±9．0532．7±9．2037．2±14．135．9±1．1036．0±1．2336．0±10．178．80%73．90%100%100%84．70%58．40%73．40%100%100%61．80%

#該研究分別給出MA與MO患者年齡，與對照比均無顯著性差異

3 討 論

雖然有關偏頭痛的發(fā)病機制目前尚未完全明了，但NO在偏頭痛發(fā)病中的作用受到國內(nèi)外學者的公認。應用NO供體可誘導偏頭痛患者出現(xiàn)偏頭痛樣頭痛發(fā)作，提示NO與偏頭痛發(fā)作有關[9]。有研究也證實偏頭痛患者頭痛發(fā)作時其腦脊液及血中NO濃度明顯升高，間歇期偏頭痛患者腦脊液及血中NO濃度也高于對照組[2]。NO是由NOS催化L-精氨酸生成，而eNOS基因第7號外顯子核苷酸894處G被T所代替，導致編碼產(chǎn)物第298位氨酸酸由Glu變?yōu)锳sp(Glu298Asp)，后者可導致NO生成減少。因此，理論上推測T等位基因或TT基因型可能與患者偏頭痛發(fā)病風險降低有關，而G等位基因或GG基因型可能與偏頭痛發(fā)病風險高有關。

然而，Borroni等研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照相比，eNOS基因TT型可使MA發(fā)病風險增加約2倍。對于偏頭痛患者，與MO患者相比，eNOS基因GG型可使MA發(fā)病風險增加約3倍，這與上述推論并不一致[3]。Eroz等也報道TT基因型與偏頭痛發(fā)病風險增加有關[7]。上述結果提示偏頭痛發(fā)病機制的復雜性。但Toriello等并未發(fā)現(xiàn)eNOS的894G/T基因多態(tài)性與偏頭痛及其亞型存在相關性[4]。Goncalves進行的兩項研究亦發(fā)現(xiàn)894G/T基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風險有關[5，6]。

表2 納入研究的基因型分布及基因頻率

MA：有先兆偏頭痛，MO無先兆偏頭痛

表3 內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風險

本研究發(fā)現(xiàn)，在全部人群中，TT純合子突變體增加MA的發(fā)病風險約1.5倍，而GT+TT基因型增加偏頭痛發(fā)病風險約1.3倍。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛的發(fā)病風險約1.5倍。由于本研究部分文獻合并過程中存在一定的異質(zhì)性，因此，我們采用了Galbraith分析潛在異質(zhì)性較大文獻。剔除該文獻后，后續(xù)合并文獻過程中，異質(zhì)性均較小。Egger’s與Begg’s檢驗均提示本研究不存在發(fā)表偏移。

綜上，本研究提示內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風險之間有一定的關系，并且可能與人群遺傳背景的不同及偏頭痛亞型有一定關聯(lián)。

[1]Olesen J，Iversen HK，Thomsen LL. Nitric oxide supersensitivity：a possible molecular mechanism of migraine pain[J]. Neuroreport，1993，4(8)：1027-1030.

[2]Zhao YL，Wang YL，Ying G. Effect of nitric oxide on migraine attack[J]. Chinese Journal of Clinical Rehabilitation，2006，10(7)：138-139.

[3]Borroni B，Rao R，Liberini P，et al. Endothelial nitric oxide synthase(Glu298Asp)polymorphism is an independent risk factor for migraine with aura [J]. Headache，2006，46(10)：1575-1579.

[4]Toriello M，Oterino A，Pascual J，et al. Lack of association of endothelial nitric oxide synthase polymorphisms and migraine[J]. Headache，2008，48(7)：1115-1119.

[5]Gon?alves FM，Martins-Oliveira A，Speciali JG，et al. Endothelial nitric oxide synthase haplotypes associated with aura in patients with migraine[J]. DNA Cell Biol，2011，30(6)：363-369.

[6]Gon?alves FM，Luizon MR，Speciali JG，et al. Interaction among nitric oxide(NO)-related genes in migraine susceptibility[J]. Mol Cell Biochem，2012，370(1-2)：183-189.

[7]Er?z R，Bahadir A，Dikici S，et al. Association of endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms(894G/T，-786T/C，G10T)and clinical findings in patients with migraine [J]. Neuromolecular Med，2014，16(3)：587-593.

[8]Katrak P，Bialocerkowski AE，Massy-Westropp N，et al. A systematic review of the content of critical appraisal tools[J]. Bmc Medical Research Methodology，2004，4(4)：255-258.

[9]Bednarczyk EM，Wack DS，Kassab MY，et al. Brain blood flow in the nitroglycerin(GTN)model of migraine：measurement using positron emission tomography and transcranial Doppler [J]. Cephalalgia，2002，22(9)：749-757.

Endothelial nitric oxide synthase(+894G/T)polymorphism and migraine susceptibility：a meta-analysis

DONGHan，GUOQi，GUOZhiheng，etal.

(DepartmentofGeriaficMedicine，theFirstHospitalofJilinUniversity，Changchun130021，China)

Objective Aims：To evaluate the correlations between endothelial nitric oxide synthase(eNOS)polymorphism(+894G/T)and the risk of migraine. Methods A literature search was performed for case-control studies focusing on eNOS polymorphism(+894G/T)and risk of migraine through October 2016.From 395 full-text articles，5 were included in this study. Heterogeneity was assessed with theI2index and quality assessment was performed using Oxford critical appraisal skill program. Results Compared with GG+GT genotypes，TT genotype was associated with migraine with aura(OR=1.56，95%CI1.11～2.20；I2=0%，P=0.01). In non-Caucasian population，GT+TT genotypes increased migraine susceptibility compared with GG genotype(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2=0%，P=0.75). Conclusion This meta-analysis indicated a linkage between eNOS polymorphism(+894G/T)and the risk of migraine，which may be associated with enthicity and migraine subtypes.

Endothelial nitric oxide synthase； Polymorphism； Migraine； Susceptibility

2017-01-10；

2017-03-05

(1.吉林大學第一醫(yī)院老年病科，吉林 長春 130021；2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，吉林 長春 130033；3.吉林大學第一醫(yī)院產(chǎn)科，吉林 長春 130021)

劉松巖，E-mail：yan1966@163.com；王 哲，E-mail：wangzhe1989@me.com

1003-2754(2017)03-0254-04

R747.2

A