馬學(xué)艷徐云濤聞海波金 武徐 跑華 丹顧若波

(1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院, 無錫 214081; 2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心, 農(nóng)業(yè)部淡水魚類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室, 無錫 214081; 3. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心, 中美淡水貝類種質(zhì)資源保護(hù)及利用國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室, 無錫 214081)

褶紋冠蚌鉤介幼蟲非寄生變態(tài)發(fā)育觀察及早期稚蚌的生長

馬學(xué)艷1,2,3徐云濤1,3聞海波1,2,3金 武1,2,3徐 跑1,2,3華 丹3顧若波1, 2, 3

(1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院, 無錫 214081; 2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心, 農(nóng)業(yè)部淡水魚類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室, 無錫 214081; 3. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心, 中美淡水貝類種質(zhì)資源保護(hù)及利用國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室, 無錫 214081)

為揭示褶紋冠蚌鉤介幼蟲變態(tài)發(fā)育特征及過程, 采用體外培養(yǎng)方法實(shí)現(xiàn)了褶紋冠蚌鉤介幼蟲的非寄生變態(tài)發(fā)育。運(yùn)用光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡對(duì)變態(tài)發(fā)育過程中幼蟲外部形態(tài)、內(nèi)部器官發(fā)育進(jìn)行了系列觀察, 對(duì)非寄生變態(tài)發(fā)育的稚蚌后期生長發(fā)育進(jìn)行跟蹤研究, 并分析了底泥和光照兩種環(huán)境因子對(duì)稚蚌存活及生長的影響。結(jié)果顯示: 在整個(gè)培養(yǎng)過程中, 鉤介幼蟲的外部形態(tài)及大小未出現(xiàn)顯著性變化, 而斧足、鰓絲、外套膜及內(nèi)臟團(tuán)等組織器官逐步形成; 在培養(yǎng)第3天, 幼蟲可見斧足雛形, 鰓絲、外套膜纖毛尚未發(fā)現(xiàn); 在培養(yǎng)第6天, 斧足成形, 可見斧足側(cè)溝, 外套膜纖毛稀疏, 鰓絲出現(xiàn); 培養(yǎng)第9天, 斧足纖毛、外套膜纖毛增多, 鰓絲密集。稚蚌投喂30d后, 鰓絲基本成形。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)果表明: 底泥對(duì)稚蚌存活和生長具有顯著影響(P＜0.01),而光照無顯著性影響(P＞0.05)。該結(jié)果為蚌科鉤介幼蟲變態(tài)發(fā)育生物學(xué)研究積累了基礎(chǔ)資料, 也通過對(duì)稚蚌生長的評(píng)估證實(shí)了體外培養(yǎng)是蚌類人工繁育及保護(hù)的有效技術(shù)途徑。

褶紋冠蚌; 鉤介幼蟲; 稚蚌; 非寄生變態(tài); 發(fā)育

褶紋冠蚌隸屬軟體動(dòng)物門(Mollusca)、瓣鰓綱(Lamellibranchia)、真瓣鰓目(Eulamellibranchia)、蚌科(Unionidae)、冠蚌屬(Cristaria), 廣泛分布于我國各地, 是我國重要的淡水優(yōu)質(zhì)育珠蚌品種, 具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值, 由于特殊的濾水特性, 褶紋冠蚌在池塘水體凈化、水產(chǎn)生態(tài)健康養(yǎng)殖也有著廣泛的應(yīng)用[1,2]。在自然界, 絕大多數(shù)蚌類的生活史有一個(gè)寄生的過程[3,4], 它們需要寄生在魚體上才能完成從鉤介幼蟲到稚蚌的變態(tài)過程, 寄主魚在蚌類的生活史中扮演著重要的角色。隨著水環(huán)境污染的日趨嚴(yán)重, 不同魚類種群出現(xiàn)不同程度的下降,合適寄主魚的存在和種群大小對(duì)蚌科物種, 特別是對(duì)蚌科瀕危種的繁衍生息具有決定性影響[5]。

體外培養(yǎng)是指在沒有寄主魚的情況下完成鉤介幼蟲非寄生變態(tài)發(fā)育成為稚蚌的過程, 鉤介幼蟲體外培養(yǎng)逐漸成為貝類種質(zhì)資源恢復(fù)較為先進(jìn)的手段之一。近年來, 已對(duì)42個(gè)物種培養(yǎng)成功且獲得較高的變態(tài)率[6]。在國內(nèi), 僅見聞海波等[5]首次對(duì)三角帆蚌(Hyriopsis cumingiii)鉤介幼蟲進(jìn)行體外培養(yǎng)試驗(yàn), 已取得了一定的進(jìn)展。在體外培養(yǎng)條件下,便于對(duì)鉤介幼蟲發(fā)育過程進(jìn)行系統(tǒng)觀察。我國水生生物資源豐富, 已報(bào)到的蚌科物種約60多種, 目前, 實(shí)驗(yàn)研究多集中于對(duì)蚌科鉤介幼蟲寄生過程中外部形態(tài)特征的觀察[3,7—9], 而關(guān)于非寄生變態(tài)發(fā)育的基礎(chǔ)研究未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡比較觀察了鉤介幼蟲非寄生變態(tài)及稚蚌形態(tài)變化特征, 比較了鉤介幼蟲、稚蚌殼、外套膜、鰓絲及斧足等生長發(fā)育, 并測(cè)試了底泥和光照對(duì)非寄生變態(tài)稚蚌成活及生長影響。以期揭示褶紋冠蚌變態(tài)發(fā)育特征及過程, 有助于從更高層面上掌握蚌科幼蟲變態(tài)發(fā)育的基礎(chǔ)理論。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

褶紋冠蚌親本采集及成熟鉤介幼蟲獲得實(shí)驗(yàn)用褶紋冠蚌采自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心南泉養(yǎng)殖基地, 均為4齡成熟母蚌; 從10月中旬開始, 檢查雌蚌外鰓絲是否有成熟鉤介幼蟲, 鉤介幼蟲的成熟判斷標(biāo)準(zhǔn)可根據(jù)聞海波等[5]采用的方法。

將有成熟鉤介幼蟲的雌蚌外殼洗凈, 使用開殼器于雌蚌后端輕輕打開, 用5 mL注射器吸入滅菌純水, 穿刺雌蚌外鰓, 將純水注入, 成熟的鉤介幼蟲隨水流出至事先準(zhǔn)備好的滅菌燒杯中; 向燒杯中加入無菌純水200 mL, 洗去殘留的組織、黏液以及鉤介幼蟲的碎殼, 重復(fù)3—4次; 然后, 向燒杯中加入配置的抗生素混合液100 mL, 清洗鉤介幼蟲, 重復(fù)3—4次。鉤介幼蟲清洗完成后, 應(yīng)盡快移入培養(yǎng)基中,避免因放置過久對(duì)其活性產(chǎn)生影響。

血清準(zhǔn)備選取體格健壯、外表無傷鯉魚作為血清采集實(shí)驗(yàn)魚, 規(guī)格為(147±25) g, 采血前,實(shí)驗(yàn)魚用200 mg/L的喹那啶麻醉, 采用尾靜脈采血方法[10], 注射器用肝素鈉潤洗; 血液采集后3000 r/min離心10min, 取上清液; 用0.22 μm無菌過濾器過濾, -80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 鉤介幼蟲的體外培養(yǎng)方法

培養(yǎng)配方及鉤介幼蟲變態(tài)標(biāo)準(zhǔn)參照Uthaiwan等[11]標(biāo)準(zhǔn), 培養(yǎng)液體積為3.5 mL, 其中選用鯉魚的血清作為幼蟲體外培養(yǎng)配方的重要營養(yǎng)源, L-15培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液, 每個(gè)培養(yǎng)皿(60 mm×15 mm)幼蟲數(shù)量為(300±10)只, 每3天換液一次, 設(shè)置5個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)皿置于生化培養(yǎng)箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠SPX-100B-Z), 溫度控制在(24±0.5)℃,其中L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)液購自生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.3 鉤介幼蟲變態(tài)及稚蚌生長發(fā)育觀察

光學(xué)顯微觀察分別取培養(yǎng)前鉤介幼蟲、培養(yǎng)3d、6d、9d時(shí)鉤介幼蟲及投喂15d、30d稚蚌,在CX41型光學(xué)顯微鏡(Olympus)下觀察并用Scope-Tek軟件拍照。然后用0.02 mol/L的磷酸緩沖液(pH=7.2)清洗3次, 用2.5%的戊二醛浸泡24h固定。

電鏡樣品制備及觀察電鏡樣品制備步驟為: (1)脫水: 分別用50%、70%、90%的乙醇梯度脫水各15min, 用100%乙醇脫水3次, 每次30min; (2)置換: 叔丁醇置換3次, 每次30min, 叔丁醇溶點(diǎn)為25.69℃; (3)干燥: ES-2030型冷凍干燥儀(Hitachi)冷凍干燥,約5h; (4)噴金: E-1010/E離子濺射儀(Hitachi)噴金,厚度10 nm; 用S-3000N型掃描電鏡(Hitachi)觀察并拍照。

1.4 底泥和光照對(duì)稚蚌早期生長影響

鉤介幼蟲在體外培養(yǎng)10d后, 向培養(yǎng)皿中逐漸加入曝氣自來水, 喚醒稚蚌。取成功變態(tài)稚蚌, 分為加底泥光照組(A)、不加底泥光照組(B)、加底泥無光照組(C)、無底泥無光照組(D)、取樣組(E)5組,每組設(shè)置3個(gè)重復(fù), 每個(gè)重復(fù)30只。光照組為室內(nèi)自然光照(約1000 lx), 無光照組置于同一室內(nèi)并用黑紗遮擋, 取樣組加底泥自然光照, 分別放在塑料箱子(32 cm×21 cm×10 cm)中培育, 養(yǎng)殖水體為5 L。用充分曝氣自來水養(yǎng)殖, 水溫控制在(24±1)℃, 氣泵增氧。每天添加少量底泥, 其中底泥為未施肥的花園土, 加入水后過200目篩網(wǎng), 微波爐高溫處理10min, 冷卻后使用。投喂?jié)饪s藻類[12], 使水體藻密度保持在2×106個(gè)/mL, 每天換水1/2, 換水時(shí)用200目篩網(wǎng)過濾, 確保稚蚌不丟失。培育15d、30d后在取樣組(E)取30只拍照固定; 養(yǎng)殖30d后, 取A、B、C、D組稚蚌, 在光學(xué)顯微鏡(Olympus CX41)下拍照、測(cè)量幼蚌殼長(0.01 mm), 并統(tǒng)計(jì)成活率。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。采用One-way ANOVA單因素方差分析法。在Excel 2007繪制相關(guān)圖表。圖片用Photoshop 7.0處理。

2 結(jié)果

2.1 成熟鉤介幼蟲形態(tài)特征

光學(xué)顯微鏡下, 排放的成熟鉤介幼蟲做周期性開閉合運(yùn)動(dòng)(圖版Ⅰ-1); 鉤介幼蟲受刺激后雙殼閉合, 呈半透明狀(圖版Ⅰ-2); 對(duì)鉤介幼蟲掃描電鏡觀察, 鉤介幼蟲殼表面存在一些凹陷(圖版Ⅰ-4); 外套膜較平滑(M)(圖版Ⅰ-5); 外套膜邊緣沒有纖毛(Mc), 存在一些突起(P)(圖版Ⅰ-6); 為有鉤型(H), 且鉤上有大棘刺(圖版Ⅰ-7); 絞合線中央有凹陷(圖版Ⅰ-8)。

2.2 體外培養(yǎng)階段鉤介幼蟲形態(tài)及器官發(fā)育

對(duì)培養(yǎng)階段鉤介幼蟲掃面電鏡觀察, 在培養(yǎng)第9天時(shí)殼表面凹陷與未培養(yǎng)鉤介幼蟲無差異(圖版Ⅱ-1), 且培養(yǎng)期間鉤介幼蟲外殼沒有生長(Se)(圖版Ⅱ-2); 外套膜覆蓋殼內(nèi)部(圖版Ⅱ-3), 表面褶皺比未培養(yǎng)的鉤介幼蟲外套膜褶皺明顯增多(圖版Ⅱ-4);培養(yǎng)第3天時(shí)未出現(xiàn)外套膜纖毛(圖版Ⅱ-5), 6d較稀疏(圖版Ⅱ-6), 9d時(shí)外套膜纖毛明顯增多(圖版Ⅱ-7); 培養(yǎng)3d時(shí)斧足(F)和內(nèi)臟團(tuán)(Vm)尚未成形(圖版Ⅱ-8), 6d時(shí)可觀察到斧足及斧足溝, 且斧足纖毛出現(xiàn)(圖版Ⅱ-9), 9d時(shí)斧足纖毛密集(圖版Ⅱ-10); 在培養(yǎng)第6天時(shí)可見鰓絲(圖版Ⅱ-11), 9d時(shí)鰓絲密集, 但未連接(圖版Ⅱ-12); 不添加魚血清培養(yǎng)的鉤介幼蟲斧足較短, 發(fā)育不完全, 不能爬動(dòng)(圖版Ⅱ-13); 添加血清組鉤介幼蟲具有發(fā)達(dá)的斧足, 能伸縮進(jìn)行自由爬行(圖版Ⅱ-14)。

2.3 稚蚌的生長發(fā)育

對(duì)養(yǎng)殖15d、30d的稚蚌掃面電鏡觀察, 稚蚌殼表越靠近原始?xì)さ牡胤皆狡交?圖版Ⅲ-2)靠近邊緣的地方凹凸不平(圖版Ⅲ-4), 殼表面比鉤介幼蟲凹陷明顯; 稚蚌長出新殼是由原來殼內(nèi)長出, 且殼鉤仍存在(圖版Ⅲ-5); 稚蚌新殼可見生長線(圖版Ⅲ-6); 稚蚌外套膜褶皺狀(圖版Ⅲ-7); 外套膜邊緣纖毛密集(Mc), 新殼邊緣不整齊(圖版Ⅲ-8); 斧足纖毛密集(圖版Ⅲ-10); 稚蚌鰓絲和絲間隔縱形排列, 在鰓絲表面分布3種不同類型纖毛, 包括前纖毛(Fc)、前側(cè)纖毛(Lfc)、側(cè)纖毛(Lc)(圖版Ⅲ-12)。前纖毛主要密集分布于鰓絲表面的中央部位; 前側(cè)纖毛主要分布在鰓絲表面, 成排位于前纖毛區(qū)的兩側(cè), 前側(cè)纖毛較前纖毛粗大; 側(cè)纖毛基部著生于鰓絲的兩側(cè)底部, 兩鰓絲間隔的表面邊緣處, 直徑較前纖毛更細(xì)。

2.4 底泥和光照對(duì)稚蚌存活與生長的影響

褶紋冠蚌稚蚌在4種條件下成活率及殼長如表1所示。添加底泥且正常光照條件下成活率為(93.33± 0.27)%, 成活稚蚌平均殼長為(1.06±0.13) mm, 添加底泥無光照組成活率為(92.22±0.58)%, 成活稚蚌平均殼長為(1.03±0.17) mm, 不添加底泥組在第15天時(shí)的存活率為(76.67±6.37)%, 30d時(shí)成活率為0。單因素方差分析表明: A、C組稚蚌存活及生長無顯著性差異(P＞0.05), A、C組與B、D組存活呈極顯著差異(P＜0.01)。

表 1 投喂30d后稚蚌成活率及大小Tab. 1 Survival rate and shell length of 30-days-juvenile mussel (N=5; X±SD)

3 討論

3.1 褶紋冠蚌鉤介幼蟲的外部形態(tài)

由于蚌科鉤介幼蟲需要寄生到寄主魚上進(jìn)行變態(tài)發(fā)育, 因此在發(fā)育過程中取樣比較困難, 其變態(tài)發(fā)育過程的相關(guān)研究相對(duì)較少。對(duì)背瘤麗蚌[8]、三角帆蚌[9,14]、背角無齒蚌[13]、刻裂麗蚌[15]的研究表明: 幼蟲附著于宿主魚鰓后, 殼長、殼高和鉸合部增加不顯著; 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)剛變態(tài)成功稚蚌的外部形態(tài)未發(fā)生顯著變化, 與上述研究相符。

目前對(duì)褶紋冠蚌鉤介幼蟲的報(bào)道主要集中于對(duì)外部形態(tài)的研究, 魏青山等[16]報(bào)道的褶紋冠蚌幼蟲大棘刺排列不規(guī)則。吳小平等[3]報(bào)道的褶紋冠蚌幼蟲嵴上有2列大棘刺, 殼表面有小孔; 舒月鳳等[14]研究的褶紋冠蚌幼蟲3列大棘刺, 殼表面沒有小孔,而是凹窩; 本實(shí)驗(yàn)利用掃描電鏡觀察了褶紋冠蚌鉤介幼蟲殼表及稚蚌殼表, 褶紋冠蚌鉤介幼蟲殼表具凹窩且大棘刺排列不規(guī)則, 這種不同的原因可能是地理位置不同引起的種群間的差異。

3.2 鉤介幼蟲及變態(tài)稚蚌的內(nèi)部器官發(fā)育與其功能的關(guān)系

在整個(gè)培養(yǎng)過程中, 鉤介幼蟲的外部形態(tài)及大小未出現(xiàn)顯著性變化, 而斧足、鰓絲、外套膜及內(nèi)臟團(tuán)等組織器官逐步形成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示: 培養(yǎng)期間, 鉤介幼蟲外套膜褶皺顯著增多; 培育第3至第6天, 可觀察到斧足、鰓絲、外套膜纖毛; 9d時(shí)斧足纖毛、外套膜纖毛增多, 鰓絲密集; 養(yǎng)殖15d時(shí), 鰓絲未成形, 30d時(shí), 前纖毛、前側(cè)纖毛、側(cè)纖毛明顯可見。斧足是稚蚌攝取食物的主要器官[17,18]。成蚌是靠鰓濾食, 稚蚌的攝食方式與成蚌不同, 稚蚌的鰓處于發(fā)育的初始階段, 濾食功能不夠完善, 會(huì)通過外套膜纖毛擺動(dòng)使水流流動(dòng), 食物進(jìn)入鰓部進(jìn)行簡(jiǎn)單濾食, 斧足上纖毛密集, 可以刮食底部食物,滿足稚蚌生長需要。養(yǎng)殖30d后, 鰓絲結(jié)構(gòu)與成蚌相似[19], 鰓的形成可能是稚蚌從“足板”攝食(Pedalfeeders)轉(zhuǎn)向鰓絲濾食(Filter-feeding)的重要標(biāo)志。

3.3 非寄生變態(tài)發(fā)育稚蚌的生長發(fā)育

Uthaiwan等[11]用4種魚血清和馬血清對(duì)Hyriopsis myersiana鉤介幼蟲進(jìn)行體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn), 用鯉魚血清培養(yǎng)的鉤介幼蟲成活率及變態(tài)率顯著高于用其他4種血清, 并證實(shí)只有鯉魚血清培養(yǎng)的稚蚌可以存活2個(gè)月以上, 而尼羅羅非魚(Oreochromis nilo-ticus)和雜交鯰魚(Clarias macrocephalus×C. garienus)血清培養(yǎng)鉤介幼蟲只存活1個(gè)月, 馬血清培養(yǎng)的鉤介幼蟲只存活2—3個(gè)星期, 條紋鯰魚(Pangasius pangasius)血清培養(yǎng)的稚蚌只存活了1個(gè)星期。Reece[20]比較了魚體寄生和利用馬血清體外培養(yǎng)兩種方法獲得Lampsilis fasciola稚蚌的變態(tài)率、后期生長及存活差異, 結(jié)果顯示: 添加馬血清體外培養(yǎng)幼蟲變態(tài)率為92%, 顯著高于魚體寄生的69%, 但魚體寄生變態(tài)稚蚌生長比體外培養(yǎng)快, 1周后魚體寄生稚蚌的成活率為82%, 而體外培養(yǎng)僅為45%。從已開展的42種鉤介幼蟲的體外培養(yǎng)配方可以看出,不同蚌科鉤介幼蟲變態(tài)發(fā)育對(duì)營養(yǎng)的需求不盡相同[6]。理論上, 無論是體外培養(yǎng)還是魚體寄生方式,只有當(dāng)滿足了鉤介幼蟲的營養(yǎng)需求才能正常變態(tài)發(fā)育。因此, 通過稚蚌的后期生長發(fā)育評(píng)估將有利于篩選出更加科學(xué)的鉤介幼蟲體外培養(yǎng)方法及配方。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 鯉魚血清培養(yǎng)獲得稚蚌在培養(yǎng)30d成活率高達(dá)92%以上, 這表明該體外培養(yǎng)配方是能滿足褶紋冠蚌的變發(fā)育的營養(yǎng)需求。

合適的底質(zhì)對(duì)稚蚌存活及生長具有重要作用[21—25]。Gatenby等[25,26]研究表明: Villosa iris稚蚌在底泥中生長明顯快于無底質(zhì)條件。華丹等[12]比較了在底泥(于河中采集, 過200 μm篩網(wǎng)并高溫滅菌)、細(xì)沙、石灰石及無底質(zhì)條件下V. iris稚蚌的存活及生長, 結(jié)果表明: 底泥組的稚蚌成活率顯著高于其他三組, 而無底泥條件下全部死亡。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與已有研究一致, 光照對(duì)稚蚌生長無顯著影響,而底泥對(duì)稚蚌的成活與生長具有顯著影響, 且筆者在馴養(yǎng)過程中觀察發(fā)現(xiàn): 剛變態(tài)發(fā)育的稚蚌爬動(dòng)較少, 隨著稚蚌生長爬動(dòng)變多, 后期減少, 這可能是由于剛完成變態(tài)發(fā)育的稚蚌鰓絲等攝食器官未發(fā)育完全, 不能像成蚌濾食水中藻類, 主要靠斧足攝食底泥中有機(jī)質(zhì)、細(xì)菌等滿足生長需要。隨著生長活動(dòng)能力增強(qiáng), 隨著鰓絲及其他器官逐漸發(fā)育完全,濾食能力增強(qiáng), 后期爬動(dòng)減少。同時(shí), 在自然條件下, 蚌類主要營底棲生活。在人工養(yǎng)殖條件下, 添加底泥可以給稚蚌提供更加穩(wěn)定的庇護(hù)場(chǎng)所, 同時(shí)抑制有害微生物如纖毛蟲等的影響。

已有的研究表明: 蚌類的餌料一般包括微型藻類、細(xì)菌以及底泥等[27], 藻類是被認(rèn)為是稚蚌的最重要食物[25,27]。Gatenby等[25]用3.0×105—5.0×105/mL濃度的藻類對(duì)V. iris進(jìn)行投喂, 45d后獲得成活率為66.5%。華丹等[12]測(cè)試了3.5×104、8.75×104、1.75×105個(gè)/mL藻類濃度對(duì)稚蚌成活率及生長的影響, 結(jié)果表明在3種藻類濃度下稚蚌成活率及生長無顯著性差異, 且稚蚌30d后成活率為40%。實(shí)驗(yàn)投喂?jié)舛葹?×106個(gè)/mL, 成活率達(dá)92%以上, 顯著高于上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。引起稚蚌成活率不同的原因可能是稚蚌養(yǎng)殖方式不同, 也可能是投喂藻類濃度過低, 已有實(shí)驗(yàn)研究表明: 投喂?jié)舛冗^低, 會(huì)使稚蚌不斷消耗能量攝食而不能夠獲得足夠營養(yǎng)而死亡[28], 是否是因?yàn)樵孱悵舛葐栴}還有待于進(jìn)一步研究。

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STUDIES ON THE NON-PARASITIC METAMORPHOSIS OF CRISTARIA PLICATA GLOCHIDIA AND THE DEVELOPMENT OF EARLY JUVENILES

MA Xue-Yan1,2,3, XU Yun-Tao1,3, WEN Hai-Bo1,2,3, JIN Wu1,2,3, XU Pao1,2,3, HUA Dan3and GU Ruo-Bo1,2,3
(1. Wuxi Fisheries College, Nanjing Agricultural University, Wuxi 214081, China; 2. Key Laboratory of Genetic Breeding and Aquaculture Biology of Freshwater Fishes, Ministry of Agriculture, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuxi 214081, China; 3. Sino-US Cooperative Laboratory for Germplasm Conservation and Utilization of Freshwater Mollusks, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuxi 214081, China)

In nature, the glochidia of Cristaria plicata must successfully parasitize a suitable host fish to metamorphose into juveniles. The current study investigated non-parasitic metamorphosis of the glochidia mainly focusing on the development of glochidia in external morphology and internal organs using microscope and scanning electron microscope, and analyzed the effects of sediment and light on the survival and growth rate of newly metamorphosed juveniles. The results showed that the glochidia remained similar in external morphology and size during the transformation process, while the feet, gill filaments, mantles, visceral mass and other inner organs were gradually formed. On the 3rdday of the in vitro culture, the rudiment of foot was firstly observed; on the 6thday, the feet had generally took shape with cilia showing on the surface of foot and the edge of mantle, and gill filaments began to show; on the 9thday, the cilia on feet and mantles increased and gill filaments became more dense; and after 30 days of tank culture, the morphology of juvenile mussel gills was clearly evident and was similar with adult mussels, and three typical different cilia were observed on the surface of branchial filament. The results demonstrated that the sediment has significant effects on the survival and growth of juveniles (P＜0.01), whereas the nature light has no effect (P＞0.05). These results provide basic insight for researches on the non-parasitic metamorphosis of glochidia of Unionidae species, and confirme that in vitro culture is an effective method for the artificial breeding and conservation of freshwater mussels.

Cristaria plicata; Glochidia; Juveniles; Non parasitic metamorphosis; Development

Q954.4

A

1000-3207(2017)02-0391-08

圖版Ⅰ 鉤介幼蟲形態(tài)
PlateⅠ Glochidium morphology
1. 成熟鉤介幼蟲; 2. 褶紋冠蚌鉤介幼蟲受刺激閉合后形態(tài); 3. 鉤介幼蟲整體形態(tài); 4. 鉤介幼蟲殼表; 5. 鉤介幼蟲外套膜表面; 6. 鉤介幼蟲殼邊緣; 7. 鉤介幼蟲殼鉤; 8. 鉤介幼蟲絞合線
1. Glochidium of C. plicata; 2. Valves closed glochidium of C. plicata; 3. Magnified glochidium; 4. Glochidium shells; 5. Glochidium mantle surface; 6. Glochidium shells edge; 7. Glochidium hook; 8. Glochidium hinge line

圖版Ⅱ 培養(yǎng)階段鉤介幼蟲形態(tài)及器官發(fā)育
PlateⅡ Glochidium morphology during the transformation process
1. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲殼; 2. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲殼緣; 3. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲外套膜(a); 4. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲外套膜(b); 5. 培養(yǎng)3d外套膜邊緣; 6.培養(yǎng)6d外套膜邊緣; 7. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲外套膜邊緣; 8. 培養(yǎng)3d鉤介幼蟲斧足及內(nèi)臟團(tuán); 9. 培養(yǎng)6d鉤介幼蟲斧足; 10. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲斧足; 11. 培養(yǎng)6d鉤介幼蟲鰓絲; 12. 培養(yǎng)9d鉤介幼蟲鰓絲; 13. 未變態(tài)成功的稚蚌; 14. 變態(tài)成功的稚蚌
1. Shell surface of 9d glochidium; 2. Shell edge of 9d glochidium; 3. Mantle of 9d glochidium (a); 4. Mantle of 9d glochidium (b); 5. Mantle edge of 3d glochidium; 6. Mantle edge of 6d glochidium; 7. Mantle edge of 9d glochidium; 8. Foot and visceral mass of 3d glochidium; 9. Foot of 6d glochidium; 10. Foot of 9d glochidium; 11. Gills of 6d glochidium; 12. Gills of 9d glochidium; 13. Unsuccessfully metamorphosed juvenile mussels of C. plicata; 14. Newly metamorphosed juvenile mussels of C. plicata

圖版Ⅲ 稚蚌形態(tài)及器官發(fā)育PlateⅢ Juvenile morphology
1. 30d稚蚌形態(tài); 2. 30d稚蚌殼; 3. 30d稚蚌殼-新老生長殼; 4. 30d稚蚌殼-新生長殼; 5. 30d稚蚌殼鉤; 6. 30d稚蚌生長線; 7. 30d稚蚌外套膜; 8. 30d稚蚌殼邊緣; 9. 15d稚蚌斧足; 10. 30d稚蚌斧足; 11.15d稚蚌鰓絲; 12.30d稚蚌鰓絲
1. Juvenile mussel of C. plicata (30d); 2. Shell surface of 30d juvenile; 3. Old and new grown shell surface of 30d juvenile; 4. New grown shell surface of 30d juvenile; 5. Hook of 30d juvenile; 6. Growth line of 30d juvenile; 7. Mantle of 30d juvenile; 8. Shell edge of 30d juvenile; 9. Foot of 15d juvenile; 10. Foot of 15d juvenile; 11. Gills of 15d juvenile; 12. Gills of 30d juvenile

10.7541/2017.48

2016-01-13;

2016-07-25

江蘇省水產(chǎn)三新工程(Y2014-38); 中央基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2015JBFM02)資助 [Supported by Project to Promote New Species, New Technology and New Modes in Fishery Science in Jiangsu Province (Y2014-38); National Nonprofit Institute Research Grant of Freshwater Fisheries Research Center (2015JBFM02)]

馬學(xué)艷(1989—), 女, 山東濟(jì)南人; 研究實(shí)習(xí)員; 研究方向?yàn)榈愵惙N質(zhì)資源保護(hù)及利用。E-mail: 247255164@qq.com

聞海波, E-mail: wenhb@ffrc.cn; 顧若波, E-mail: gurb@ffrc.cn